Биохимический анализ крови у рыб

ТОП 10:

Таблица 2

Лейкограмма прудовых рыб

Биохимический метод

При биохимическом исследовании определяют такие показатели крови рыб как: уровень глюкозы, кальция, фосфора, общего белка, билирубина, ЩФ, ЛДГ, АлАт, АсАт и др.

Иммунологический метод

Позволяет определять в сыворотке крови фракции белков: альбуминов, α, β, γ-глобулинов, иммуноглобулинов и т.д.

Серологический метод

Позволяет в сыворотке крови рыб выявить специфические антитела, либо антиген и установить напряженность иммунитета к возбудителям заразных болезней.

В ихтиопатологии применяют прямые (РА – реакция агглютинации, РП – реакция преципитации) и непрямые (РН – реакция нейтрализации, РИГА – реакция иммунной гемагглютинации, РПГ – реакция пассивной гемагглютинации, ОФР – опсорно-фагоцитарная реакция, РНИФ – реакция непрямой иммунофлуоресценции) серологические реакции.

Способы взятия крови у рыб

Кровь для исследования у рыб берется из сердца, хвостовой артерии, культи хвоста или жаберных вен. Выбор способа взятия крови зависит от размера рыбы и объема, необходимого для анализа.

Взятие крови проводят, предварительно сняв чешую, удалив слизь и, обработав кожу 70 %-м спиртом.

1. При взятии крови из сердца, место укола находится в середине отрезка, соединяющего основание грудных плавников (у форели) и чуть выше этой точки – у карповых рыб. Иглу вводят в место укола, под углом 45°, относительно фронтальной плоскости.

2. При взятии крови из хвостовой артерии место укола находится в точке, образованной при условном пересечении средней линии и линии, идущей перпендикулярно от анального отверстия у сеголетков, и от заднего края анального плавника – у карповых рыб старшего возраста.

3. При взятии крови из культи хвоста, срезают спинной и анальный плавники, удаляют чешую, слизь, протирают кожу спиртом, затем отсекают хвостовой стебель по медиальной линии позади анального плавника и собирают кровь в стерильную посуду.

4. Взятие крови возможно из жаберных вен. Предварительно удаляют жаберную крышку и вводят инъекционную иглу в вену, у основания одной из жаберных дуг.

Из полученной крови сразу же готовят тонкие мазки, которые окрашивают по Паппенгейму. Для этого высушенные мазки погружают в кювету с раствором Май-Грюнвальда (0,3–0,5 г эозинметиленового синего + 100 мл метилового спирта) на 5 минут, затем промывают дистиллированной водой (рН = 6,81) в течение 2-х минут и докрашивают в растворе Романовского 25–30 минут. Окрашенные мазки промывают водопроводной водой и высушивают на воздухе. В каждом мазке подсчитывают 100 клеток и выводят лейкограмму.

Специальные лабораторные методы исследований:

1. Паразитологический

2. Микологический

3. Микробиологический

4. Вирусологический

5. Биологическая проба.

Паразитологическое исследование

Это последовательное вскрытие органов и тканей с целью обнаружения паразитов. Для исследования берется не менее 15 живых или только что уснувших рыб каждого вида и возраста и не менее 25-ти экземпляров личинок рыб.

Для обнаружения паразитов используют компрессионный способ, когда ткань или орган помещают между стеклами, сдавливают до прозрачности, а потом исследуют под микроскопом. Для определения интенсивности инвазии гельминтов и ракообразных учитывают в абсолютных величинах, а простейших – в 25-ти полях зрения микроскопа (7 х 10, 7 х 40 в зависимости от величины паразита).

Порядок проведения работы следующий:

1. Осмотр рыбы (крустацеозы, бделлозы, постодиплостомоз, филометроидоз). Соскоб скальпелем слизи с поверхности тела и исследование ее под микроскопом в капле воды или изотонического раствора натрия хлорида под покровным стеклом (простейшие).

2. Берут кровь из сердца или хвостовой артерии и готовят мазок, который фиксируют 5 минут в метиловом спирте и окрашивают по методу Романовского.

Сразу, после взятия крови, вскрывают полость сердца, выпускают кровь на стекло и под микроскопом исследуют на наличие сангвиникол.

3. Микроскопируют плавники (простейшие, моногенеи, рачки).

4. Исследуют жабры. Удаляют жаберные крышки, с двух сторон отсекают жаберные дуги и исследуют их на наличие крупных паразитов, затем делают соскоб и просматривают его под малым и большим увеличении. Скальпелем отделяют жаберные лепестки от дуг и компрессионным способом просматривают под микроскопом (простейшие, моногенеи, личинки трематод, цисты микроспоридий).

5. Проводят исследование глаз. Отделяют глазное яблоко, извлекают хрусталик. Компрессионным способом исследуют под микроскопом (диплостомоз, миксоспоридии).

6. Вскрывают полость тела, осматривают и извлекают внутренние органы: кишечник и, связанные с ним, органы (печень, желчный пузырь, селезенку), кишечник отсекают у ротовой полости и анального отверстия; гонады, плавательный пузырь, почки, мочевой пузырь. Отпрепарированные органы помещают в бактериологические чашки, следя за тем, чтобы они не соприкасались друг с другом и были постоянно влажными.

Осматривают брюшную полость (личинки цестод, нематод, трематод). Затем исследуют желчный и мочевой пузыри, их разрезают и изучают содержимое под микроскопом (амебоиды, миксоспоридии, трематоды, инфузории). Исследуют печень, селезенку, гонады, почки, жировую ткань. Небольшой кусочек от каждого органа исследуют под микроскопом под микроскопом на наличие спор миксоспоридий. Затем компрессионным способом под МБС (трематоды, цестоды, нематоды).

Кишечник разделяют на небольшие части и каждую разрезают вдоль, производя осмотр содержимого (микро- и макроосмотр). Затем под микроскопом исследуют соскоб со слизистой оболочки кишечника и компрессионно изучают кишечник (простейшие, трематоды, цестоды, нематоды).

Плавательный пузырь осматривают внешне, а затем делают соскоб и компрессионно исследуют под микроскопом.

Мускулатуру освобождают от кожи, делают через 0,5 мм поперечные разрезы, визуально осматривают, раздвигая их препаровальной иглой. Компрессионно исследуют 1 см мускулатуры, (цестоды, нематоды, трематоды).

Микологическое исследование

Для микологического исследования берут пробы от только что погибших или живых рыб. В замороженном виде их можно хранить до 3-х суток, а в консерванте до 2-х суток.

Подтверждение или исключение микозной природы болезни осуществляется с помощью следующих методов:

— микроскопическое исследование – наиболее важный метод обнаружения и исследования грибов, позволяющий установить наличие гриба, его локализацию, а иногда и вид;

— гистологическое исследование – метод исследования пораженной ткани при микозах, является основным методом диагностики, так как многие грибы невозможно культивировать на искусственных питательных средах;

— постановка биопробы.

Культивирование грибов позволяет изучить морфологию колоний, типичные формы спороношения, сохранить культуры и получить заразный агент для биопробы.

Бактериологическое исследование

Исследование основано на бактериоскопическом и серологическом методах исследования.

Бактериоскопический метод исследования позволяет обнаружить в патматериале бактерии и ориентировочно диагностировать заболевание (микобактериоз, вибриоз). Бактериологический метод исследования имеет наиболее важное значение, так как позволяет получить чистую культуру микробов, изучить их морфо-культуральные свойства, биохимические свойства, определить вирулентность и чувствительность к антибиотикам, что особенно важно при выборе лечебных препаратов.

Серологический метод применяют при иммунологических исследованиях: дополнительном типировании возбудителя, выявлении специфических антител в сыворотке крови больных рыб.