Серологический анализ крови спинномозговой жидкости
Что такое серологическое исследование крови?
Объект серологии — антигены и антитела
Серологическое исследование (СИ) основано на способности антигенов и антител связываться друг с другом. СИ позволяет с точностью выявить наличие у пациента определённого вируса либо бактерии, группу крови и резус, реактивность организма к антибиотикам, аутоиммунные заболевания, гормональные нарушения, индивидуальную специфичность белков, определить эффективность терапии.
Система иммунитета борется с проникающими в организм болезнетворными микробами (антигенами) при помощи антител, при этом создавая к каждому из вирусов, паразитов либо бактерий свой определённый тип защиты.
Антиген и антитело подходят друг другу как замочная скважина и ключ, при встрече они непременно связываются. Эта серологическая реакция позволяет выявлять различные виды антител либо антигенов.
Способность иммунитета вырабатывать особые вещества, нейтрализующие вредоносные частицы, была известна учёным давно. Но увидеть реакцию антиген-антитело в лабораторных условиях удалось только в конце XIX века. Было обнаружено, что в результате образования связки, комплексы выпадают в осадок, образуя хлопья либо помутнение. Такие реакции получили названия агглютинации и преципитации. В XX веке серология — наука о свойствах сыворотки, стремительно развивалась, обнаруживались новые методы диагностирования на основе реакций антиген-антитело. На сегодняшний день существует множество способов выявления иммунных комплексов, а СИ являются незаменимым звеном в диагностике, лечении, создании новых медицинских препаратов и вакцин.
Показания к проведению анализа.
Серологические исследования широко применяется в акушерстве
Серологические исследования сопровождают современного человека на протяжении всей жизни. Первые анализы на выявление определённых антител проводятся, когда малыш находится ещё в утробе. Беременная женщина сдаёт кровь на различные СИ для определения возможного резус-конфликта либо инфекций, способных навредить вынашиваемому плоду. Когда ребёнок появляется на свет, его ожидают серологические исследования, позволяющие диагностировать врождённые заболевания. Впоследствии анализы сдаются по следующим причинам:
- вирусные, бактериальные, паразитарные инфекции;
- выявление активности, стадии развития болезни;
- гормональные патологии;
- бесплодие;
- аутоиммунные заболевания;
- нарушение обмена веществ;
- аллергии;
- онкологические заболевания;
- планирование беременности, период вынашивания, патологии беременных;
- выявление ревматоидного фактора;
- определение группы крови и резус-фактора;
- эффективность терапии при различных болезнях;
- эффективность вакцинации;
- предоперационный и постоперационный период при необходимости оценки уровня некоторых антител;
- изучение иммунного состояния организма.
Подготовка к исследованию.
Прием препаратов желательно отменить накануне теста
Так как серологические исследования охватывают широкий спектр анализов, в каждом конкретном случае может понадобиться определённая подготовка, но существуют общие правила сдачи серологического теста:
- За сутки до исследования следует ограничить в рационе жирное и жареное, исключить алкоголь.
- Последний приём пищи должен завершиться за 10 — 12 часов до анализа.
- В день сдачи крови не следует употреблять кофе, чай либо иные напитки. Можно в небольшом количестве пить чистую воду.
- Лекарственные средства перед анализом исключаются. Если приём отменить невозможно, необходимо предоставить врачу полный перечень препаратов, в том числе витаминов, пероральных контрацептивов.
- Все другие исследования либо медицинские манипуляции проводятся после СИ.
- Курение рекомендуется прекратить за 12 часов до взятия образца крови.
- В предыдущий день следует избегать физических и эмоциональных нагрузок, а перед исследованием желательно 15 минут посидеть в полном покое.
- СИ назначаются на утреннее время и сдаются натощак.
Методы проведения серологического исследования.
В серологии может применяться большое число методов
Все методики определения комплексов антиген-антитело (Аг-Ат) основываются на использовании известного Аг либо Ат в поиске неизвестного. Если необходимо обнаружить Аг, необходимы диагностические иммунные сыворотки с содержанием специфических Ат. Если целью СИ является выявление Ат, используются диагностикумы — взвеси, содержащие определённые Аг.
Серологические анализы могут отражать качественный либо количественный результат. При качественном исследовании итог может быть отрицательный или положительный, то есть искомый элемент либо обнаружен, либо нет. Количественный итог выражается в виде числового значения либо знаками «+» (обычно от одного до четырёх).
Непрямая гемагглютинация — один из методов диагностики
Методы серологических исследований:
- Агглютинация. Связывание Ат с Аг с последующим формированием хлопьев либо осадка. Применяются прямые, непрямые, развёрнутые, ориентировочные реакции, позволяющие выявить антитела в сыворотке.
- Гемагглютинация. Используются эритроциты с адсорбированными на них Аг либо Ат, которые склеиваются с соответствующими Ат и Аг. Образуемые комплексы выпадают в виде фестонного осадка.
- Преципитация. Образование комплекса Аг-Ат с последующим осаждением в виде помутнения, именуемого преципитатом.
- Коагглютинация. Выявление Аг при помощи Ат, адсорбированных на белке клеток стафилококка.
- Торможение гемагглютинации. Ат иммунной сыворотки подавляют вирусные Аг, в итоге вирусы теряют способность склеиваться с эритроцитами.
- Непрямая реакция Кумбса. Определяются Ат к поверхностным Аг эритроцитов.
- Кольцепреципитация. Проводится на основе иммунной сыворотки с наслоением растворимого Аг.
- Двойная радиальная иммунодиффузия. Реакция основана на диффундировании компонентов антисыворотки и Аг в лунках агара либо агарозы.
- Реакция связывания комплемента. Связь Аг и Ат сопровождается адсорбцией комплемента, в качестве индикатора используются эритроциты барана и Ат к ним в составе гемолитической сыворотки.
- Нейтрализация. Основана на нейтрализации вирусного агента антителами.
- Реакции, основанные на маркировании Ат и Аг флуоресцентным либо ферментным составом — иммунофлюорисцентный (РИФ) и иммуноферментный (ИФА) методы.
Иммунофлюорисцентный метод.
«Свечение» в темнопольном микроскопе
Данный метод основан на использовании Ат, меченных флуоресцентным веществом. Чаще всего в качестве метки используется флуоресцеинизотиоционат, обладающий зелёным свечением в лучах ультрафиолета. Результат анализа оценивается по степени яркости свечения. Может быть использован ручной метод определения при помощи люминесцентного микроскопа, оптического микроскопа с люминесцентной насадкой, а также автоматический способ с применением микрочипового цитомера, проточного цитомера либо роботизированного флуоресцентного микроскопа.
РИФ проводится прямым и непрямым методом. Прямой способ означает непосредственное связывание сорбированного Аг с меченым Ат. Непрямой метод подразумевает использование немаркированных Ат для связки с Аг, а затем добавление меченых Ат, что позволяет избежать неспецифических реакций.
Иммуноферментный анализ.
Иммуноферментный анализ как метод серологической диагностики
ИФА основан на выявлении комплексов Аг-Ат при помощи маркирования одного из компонентов. В качестве метки используются различные ферменты, которые в результате ферментативной реакции образуют окрашивание. Существуют разнообразные методы ИФА, их можно классифицировать как гомогенные и гетерогенные методы.
Гомогенные означают, что все этапы реакции происходят в растворе.
Гетерогенные методы включают разделение на фазы с использованием твёрдого носителя.
Гомогенно-гетерогенные способы основываются на том, что комплексы Аг-Ат формируются в растворе, а затем для разделения используется твёрдая фаза.
Принцип «сэндвич»-метода
Существует множество вариаций методов ИФА, некоторые из них представлены ниже.
- Сэндвич-метод. К иммобилизованным Ат добавляется раствор с Аг, после образования комплексов носитель отмывают от лишних компонентов и добавляют маркированные Ат. В результате, Аг оказываются зажатыми иммобилизованными и мечеными Ат, откуда и произошло название метода.
- Неконкурентный непрямой ИФА. К иммобилизованным Аг присоединяют исследуемую сыворотку с Ат. Когда образуются комплексы, лишние Ат смывают и добавляют маркированные Ат, способные связаться с прикреплёнными к поверхностям лунок иммунными комплексами.
- Конкурентный прямой ИФА. К иммобилизованным Аг вносят исследуемую сыворотку и конъюгат, содержащий маркированные Ат. Формируются комплексы Аг-Ат нескольких видов: с мечеными Ат и с немаркированными Ат, которые вступают между собой в конкуренцию за связь с Аг.
Какие инфекции помогает выявить серологическое исследование.
Серологическая диагностика позволяет выявить возбудителя
СИ позволяют выявить определённое заболевание при наличии на него подозрения, то есть в основе анализа лежит знание того, какой именно элемент необходимо искать.
Если у пациента присутствует определённая симптоматика либо иные исследования указывают на заболевание, назначается серологический анализ.
Серологические исследования используют для диагностики следующих инфекций:
- вирус гепатита А, В, С, D, Е;
- сифилис;
- ВИЧ;
- герпес;
- цитомегаловирус;
- краснуха;
- корь;
- паротит;
- Эпштейн-Барр;
- хеликобактер;
- хламидии;
- микоплазмы;
- токсоплазмы;
- лямблии;
- гельминты;
- уреаплазмы;
- парвовирус;
- вирус ветряной оспы;
- вирус клещевого энцефалита;
- вирус Денге;
- коклюш;
- боррелии;
- легионеллы.
Серологические исследования способны выявить любые инфекции в лабораторных условиях, если в наличии есть Аг возбудителя инфекции.
Преимущества серологического метода исследования в диагностике инфекций.
Серологическая диагностика — быстро и доступно
- Высокая чувствительность и специфичность.
- Широкий спектр определяемых инфекций.
- Ранняя диагностика инфицирования.
- Возможность мониторинга развития заболевания.
- Быстрота и удобство в исполнении.
- Возможность использования минимального объёма исследуемого материала.
- Безопасность исследования.
Источник
Серология – наука, изучающая сыворотку крови человека и её свойства. В современной медицине так называют один из разделов иммунологии, уделяющий основное внимание взаимодействию антител и антигенов в сыворотке крови пациента. Сами серологические реакции по своему механизму действия могут быть двух видов:
- Двухкомпонентная или прямая реакция. Сюда относят реакцию агглютинации и пассивной гемагглютинации.
- Трёхкомпонентная или косвенная реакция. В этом случае речь идёт о реакции нейтрализации или торможения гемагглютинации.
Серологический анализ крови – прекрасный метод диагностики
При их комбинации могут возникать бактериолиз, реакция связывания комплимента и т.д. Серологические реакции широко используются как в диагностической, так и в научной практике.
Определение группы крови, переливание крови и плазмы, определение специфичности белка, контроль эффективности вакцинации и выявление агента инфицирования – всё это стало возможно только благодаря серологическим реакциям.
Также к задачам серологии можно отнести изготовление различных диагностических и лечебных сывороток с постоянным контролем их воздействия на организм пациента.
Типы серологических исследований
Серологическое исследование крови
Образование иммунных комплексов или соединение антител с антигенами носит название серологической реакции и может использоваться в диагностике заболеваний двумя путями:
- Введение в сыворотку крови человека точно известного антигена возбудителя и по происходящей химической реакции определение антител для содержащихся в организме патологических клеток.
- Добавление к сыворотке крови пациента определённых антител с целью выявления антигена, соответствующего конкретному микроорганизму или вирусу, вызвавшему патологический процесс в организме.
Серологический анализ крови показан больным в определённых случаях. Его применяют при возникновении затруднений при проведении дифференциальной диагностики инфекционного заболевания, когда только выявление конкретного возбудителя позволит поставить правильный диагноз пациенту. Также большая польза от этого метода сказывается при назначении медикаментозного лечения, так как возбудители различных заболеваний резко отличаются своей восприимчивостью к современным антибиотикам, сульфаниламидам и другим лекарственным препаратам.
Иммуноферментный анализ крови
Иммуноферментный анализ
Одним из основных видов серологического исследования является иммуноферментный анализ крови. Он проводится с целью контроля качественного или количественного содержания антигенов и антител в сыворотке крови пациента. Кроме этого данный метод даёт возможность определить количество гормонов, иммунологических комплексов и других биологических веществ в сыворотке.
Как было указано выше, при попадании в органы и ткани антигенов иммунная система блокирует их воздействие на организм с помощью собственных специальных белков – антител или иммуноглобулинов. Под их воздействием происходит образование комплекса антиген – антитело.
Именно его количественный и качественный анализ и является основой иммуноферментного метода.
Основным биологическим материалом этого лабораторного метода является кровь пациента, хотя исследования спинномозговой жидкости, околоплодных вод, лёгочного пунктата тоже представляют большую ценность в диагностике и лечении многих заболеваний.
Иммуноферментный анализ крови как составляющая серологического анализа основной упор делает на исследование иммунных молекул крови или иммуноглобулинов. Их специфическая особенность обнаруживать и уничтожать определённые возбудители инфекционных болезней, кооперируясь с конкретным антигеном, широко используется для проведения данного исследования.
Из известных в медицинском мире пяти типов иммуноглобулинов широкий клинический эффект получил контроль за наличием в сыворотке крови иммуноглобулинов A, M, и G. Особенно важен иммуноглобулин A, который за счёт своего присутствия на поверхности слизистых оболочек препятствует проникновению чужеродного агента в организм. Важно и то, что возможность определения типа иммуноглобулина при этом исследовании позволяет не только ставить правильный диагноз, но и прогнозировать течение болезни с большим процентом вероятности.
Анализ на ВИЧ (форма 50) призван выявить наличие антител, которые образовались в организме инфицированного — ответ на заражение вирусом иммунодефицита человека: https://krasnayakrov.ru/analizy-krovi/analiz-krovi-na-vich.html
Преимущества и недостатки
К главным достоинствам иммуноферментного анализа крови относятся:
- Возможность выявления наличия в организме пациента патологии на ранних стадиях.
- Постоянный контроль за развития болезни.
- Быстрота и точность получаемого результата.
- Отсутствие необходимой подготовки больного к исследованию и финансовая доступность метода.
К недостаткам данного метода лабораторной диагностики можно отнести получаемый в редких случаях ложноотрицательный анализ, что влечёт за собой необходимость периодического контрольного тестирования.
Взятие крови для диагностики
Широкое применение иммуноферментный анализ крови получил при диагностике вирусных заболеваний, урогенитальных инфекций, патологии эндокринной системы, онкологии, аллергологии и многих других заболеваний. Этот метод также востребован при проведении анонимного исследования на наличие ВИЧ, сифилиса и гепатита С. Это особенно важно при наличии явно неблагоприятной эпидемиологической обстановки с этими заболеваниями в стране и в мире.
Серологический или иммуноферментный анализ на сегодняшний день является мощным и важным методом диагностики многих тяжёлых заболеваний, в том числе и социальных.
Хотелось бы надеяться, что наши медики продолжат широко использовать и усовершенствовать такой необходимый для широкого круга больных метод лабораторной диагностики.
Расшифровка серологического анализа
Серологический анализ крови позволяет выявить у пациента наличие заболевания, вызванного проникновением в организм инфекции. После его проведения врачами-лаборантами производится расшифровка полученных данных, которые позволяют клиницистам более полно судить о патологическом процессе. Опуская всю профессиональную терминологию, можно сказать, что отсутствие в крови проверяемого антител является положительным результатом и отрицает наличие у него инфекционного заболевания. Но это единичные случаи. Обычно при наличии соответствующей симптоматики серологический анализ крови является последним доводом о присутствии серьёзной патологии.
В этом случае процедура повторяется дважды. Сначала диагностируют наличие возбудителя заболевания, а потом по росту антител определяют степень прогрессивности процесса. Наличие возрастания образования комплексов «антиген-антитело» характеризует скорость заражения человека.
Нормой при проведении серологического анализа крови является нулевое содержание антител. Любой повышенный результат свидетельствует о наличии патологического процесса в организме пациента и требует в большинстве случаев различных дополнительных методов исследования.
- Автор: Анастасия
- Распечатать
Шел последний год учебы в школе, а я до сих пор не могла определиться с будущей специализацией. Мне безумно нравилась профессия врача. Бабушка — тоже медик, считала, что из меня получился бы хороший доктор скорой помощи.
Оцените статью:
Источник
Лайм-боррелиоз (ЛБ), болезнь Лайма или иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ) – трансмиссивное полисистемное заболевание, приводящее к поражению опорно-двигательного аппарата, нервной и сердечно-сосудистой систем, кожи, занимающее по широте распространения и уровню заболеваемости одно из ведущих мест среди природно-очаговых заболеваний. Заболевание регистрируется на значительной территории Российской Федерации.
Возбудители ЛБ – боррелии комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato, переносчики – иксодовые клещи. В диагностике ЛБ необходимо учитывать эпидемиологический анамнез (посещение леса, присасывание клеща) и клинические проявления, главным из которых, является мигрирующая эритема на ранних стадиях заболевания. Однако до 50% случаев ЛБ могут протекать со стертыми клиническими признаками, в частности, в безэритемной форме, что осложняет постановку диагноза. Использование в клинической практике современных высокочувствительных и специфичных методов серологической диагностики ЛБ позволяет своевременно выявить ранний боррелиоз и начать курс лечения, сократить риск развития тяжелых хронических форм болезни Лайма, а также провести дифференциальную диагностику боррелиоза от других инфекций, передающихся иксодовыми клещами.
Серологическая диагностика клещевого боррелиоза (300049, 300051) – это уникальные исследования, выполняемые с помощью диагностической тест-системы в формате иммуночипа, разработанной в ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора!
Иммуночип повышает эффективность проведения серологического анализа ЛБ и информативность результата, т.к. позволяет одновременно определять в исследуемом образце антитела к 8 группам диагностически значимых антигенов боррелий видов Borrelia afzelii и Borrelia garinii, наиболее распространенных в РФ, и одновременно дифференцировать их по классам: IgM и IgG. Показано, что использование комбинации из нескольких рекомбинантных белков разных видов боррелий позволяет повысить чувствительность и специфичность теста. Иммуночип – высокочувствителен и специфичен (сравнительная оценка проводилась с коммерческими тест-системами в формате ИФА и иммунного блоттинга, зарегистрированными на территории РФ), исключает субъективность оценки благодаря автоматизированной интерпретации результатов.
На I (острой, первые три месяца) стадии заболевания антитела IgM и IgG обнаруживаются у 50-70% пациентов; уровень антител IgM достигает пика в первые 3-6 недель заболевания, пик синтеза антител IgG приходится на 6–8-ю неделю после начала инфекции. На ранней стадии острой формы заболевания с целью установления сероконверсии важно исследовать парные сыворотки, полученные от пациентов с интервалом в 20–30 дней. На II (подострой, длящейся 3-6 месяцев) стадии заболевания в зависимости от сроков развития диссеминации и органной патологии антитела IgM обнаруживаются у 30-80% пациентов, антитела IgG – у 65-100%. ВАЖНО: наличие антител IgМ к антигенам боррелий в сыворотке крови больных Лайм-боррелиозом, как правило, указывает на раннюю стадию инфекции. В некоторых случаях антитела IgM могут выявляться в течение 1–2 лет и более. На III (хронической, длящейся более 6 месяцев) стадии заболевания антитела IgM выявляются у 5-50 % больных, антитела IgG – практически в 100% случаев. ВАЖНО: специфические иммуноглобулины класса G могут детектироваться в течение длительного периода времени (несколько лет). Долго они сохраняются также и после успешно проведенной антибиотикотерапии.
Для подтверждения диагноза рекомендуется использовать двухшаговую схему лабораторной диагностики: определение специфических антител методом ИФА, при положительном результате — подтверждение их специфичности методом иммунного блоттинга или иммуночипа.
Список антигенов, к которым определяется наличие антител в иммуночипе: p100 В.garinii, p100 B.afzelii, VlsE B.garinii, VlsE B.afzelii, p39 B.afzelii, p41 B.garinii, p41 B.afzelii, p58 B.afzelii, BBK32 B.garinii, BBK32 B.afzelii, OspC B.garinii, OspC B.afzelii, p17 B.garinii, p17 B.afzelii.
Критерии результата при тестировании IgM антител
| Отрицательный | Положительный | Неопределенный |
|---|---|---|
|
|
|
Критерии результата при тестировании IgG антител
| Отрицательный | Положительный | Неопределенный |
|---|---|---|
|
| Выявлены антитела только к одному антигену из группы: p100, p58, p41, p39, BBK32, OspC |
Комплекс антител, выявляемый на разных стадиях ЛБ
| Стадия заболевания | IgM антитела | IgG антитела |
|---|---|---|
| Острая (I) | OspC, p41, p17, VlsE | P41, BBK32, p17, OspC, VlsE |
| Подострая (II) | OspC, p41, p17, BBK32, VlsE | p17, p41, VlsE, OspC, BBK32, p58 |
| Хроническая (III) | OspC, p41, VlsE, P39, p58 | p17, BBK32, p41, p58, VlsE, p100, OspC, p39 |
Внимание!
- При наличии признаков поражения центральной нервной системы рекомендуется проводить анализ специфических антител в спинномозговой жидкости (интратекальный синтез антител), так как отрицательный результат анализа сыворотки крови у больного нейроборрелиозом не свидетельствует об отсутствии у него инфекции. Исследование спинномозговой жидкости (СМЖ) обязательно проводится одновременно с исследованием сыворотки крови.
- Отрицательный результат серологических тестов на ранних стадиях заболевания не является доказательством отсутствия инфекции.
- В исследовании 300051 (кровь + спинномозговая жидкость) отдельно описываются антигены для каждого вида биоматериала.
Показания к назначению исследования: диагностика иксодового клещевого боррелиоза (болезни Лайма).
Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21 ноября 2011 года, должны производиться врачом соответствующей специализации.
Источник
