Сделать анализ крови на агрегацию тромбоцитов
Повышение агрегации – маркер гиперагреационного синдрома и тромбофилий. Наиболее часто используются турбидиметрический метод Борна, основанный на регистрации изменений светопропускания обогащенной тромбоцитами плазмы и метод исследования агрегации тромбоцитов, основанный на анализе флуктуаций светопропускания, вызванных случайным изменением числа частиц в оптическом канале.
Материал для исследования. Цитратная богатая тромбоцитами плазма
Метод исследования определяется порядком работы на том или ином типе агрегометра.
В качестве индукторов наиболее часто используют растворы АДФ, ристоцетина, коллагена, адреналина, арахидоновой кислоты. Также могут использоваться растворы тромбина, серотонина и др.
Агрегация тромбоцитов с АДФ
Воздействие малых доз АДФ (обычно 1*10-7 моль) приводит к формированию двойной волны агрегации. Первая фаза (первичная волна) зависит от добавленного экзогенного АДФ, а вторая фаза (вторичная волна агрегации) возникает за счет реакции высвобождения собственных агонистов, содержащихся в гранулах тромбоцитов. Большие дозы АДФ (обычно 1*10-5 моль) приводят к слиянию первой и второй волн агрегации.
При анализе агрегатограмм обращают внимание на общий характер агрегации (одноволновая, двухволновая; полная, неполная; обратимая, необратимая) и скорость агрегации. Появление двухволновой агрегации при стимуляции АДФ в концентрациях, вызывающих в норме обратимую агрегацию (обычно 1-5 мкмоль), указывает на повышение чувствительности тромбоцитов, а развитие одноволновой неполной (а часто и обратимой) агрегации при стимуляции АДФ в концентрациях 10 мкмоль и больше – на нарушение реакции высвобождения тромбоцитов.
Агрегация тромбоцитов с ристоцетином
Определение агрегации тромбоцитов с ристоцетином в плазме применяют для количественной оценки фактора Виллебранда. В основе метода лежит способность ристоцетина стимулировать in vitro взаимодействие фактора Виллебранда с тромбоцитарным гликопротеидом Ib. В большинстве случаев болезни Виллебранда отмечается нарушение ристоцетин-агрегации при нормальном ответе на воздействие АДФ, коллагена и адреналина. Нарушение ристоцетин-агрегации выявляют и при болезни Бернара-Сулье. Для дифференциации применяют тест с добавлением нормальной плазмы: при болезни Виллебранда после добавления нормальной плазмы ристоцетин-агрегация нормализуется, в то время как при синдроме Бернара-Сулье этого не происходит. Индуцированная ристоцетином агглютинация тромбоцитов снижена при большинстве случаев болезни Виллебранда, кроме типа IIВ.
Агрегация тромбоцитов с коллагеном
Агрегация тромбоцитов с коллагеном имеет достаточно выраженную латентную фазу, во время которой происходит активация фосфолипазы С. В зависимости от концентрации используемого реагента продолжительность этой фазы может составлять 5-7 минут. После завершения этого периода в тромбоцитах происходят процессы, приводящие к образованию вторичных посредников, вследствие чего развивается секреция тромбоцитарных гранул и синтез тромбоксана А2, что сопровождается резким усилением межтромбоцитарного взаимодействия.
В лабораторно-клинической практике коллаген чаще всего используют в конечной концентрации 50 мкг/мл, однако коллагены разных фирм могут обладать различной активностью, что необходимо учитывать при их применении.
Агрегация тромбоцитов с адреналином
Адреналин при контакте с тромбоцитами взаимодействует с α2-адренорецепторами, что вызывает ингибирование аденилатциклазы. Не исключено, что механизм, лежащий в основе реализации эффекта адреналина и развития первой волны агрегации, не зависит от образования тромбоксана А2, реакции высвобождения или синтеза фактора агрегации тромбоцитов, а связан со способностью адреналина прямо изменять проницаемость клеточной мембраны для ионов кальция. Вторая волна агрегация возникает как результат реакции высвобождения и продукции тромбоксана А2.
Агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой
Арахидоновая кислота – природный агонист агрегации, причем ее действие опосредовано эффектами простагландинов G2 и H2, тромбоксана А2, и включает активацию как фосфолипазы C с последующим образованием вторичных посредников, мобилизацией внутриклеточного кальция и расширением процесса активации клеток, так и фосфолипазы А2, что непосредственно приводит к освобождению эндогенной арахидоновой кислоты. Агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой происходит достаточно быстро, поэтому кривая, характеризующая этот процесс, чаще носит одноволновый характер.
Для индукции агрегации кровяных пластинок арахидоновую кислоту используют в концентрациях 10-3-10-4моль. При работе с арахидоновой кислотой следует учитывать, что на воздухе это вещество очень быстро окисляется.
Пробу на агрегацию с арахидоновой кислотой рекомендуют проводить в случаях использования лекарственных средств, влияющих на реакцию агрегации (например, ацетилсалициловая кислота, пенициллин, индометацин, делагил, диуретики), что нужно учитывать при оценке результатов исследований.
Источник
Агрегация тромбоцитов — показатель нарушений в сосудисто-тромбоцитарной фазе гемостаза.
Для оценки функции тромбоцитов проводится анализ на агрегацию тромбоцитов. Исследование позволяет диагностировать и предотвратить риск развития кровоточивости, тромбофилии, оценить эффективность антиагрегантной терапии и подобрать оптимальную дозу антиагрегантов.
Когда повреждаются сосуды, тромбоциты скапливаются в месте повреждения, активируются и прилипают друг к другу, образуя тромбоцитарный тромб, происходит образование первичной гемостатической пробки, которая способствует остановке кровотечения и заживлению раны. При активации тромбоцитов возникает реакция, завершающаяся активацией фосфолипазы. В результате мембрана клетки изменяет свойства и может вступать в контакт с соседними клетками. Вследствие этого тромбоциты могут агрегировать друг с другом и образовывать тромбоцитарный тромб.
Агрегация — свойство тромбоцитов соединятся друг с другом.
Адгезия — способность тромбоцитов прилипать к поврежденной интиме сосуда.
Таким образом, адгезия и агрегация — процессы необходимые для формирования так называемой «пробки», чтобы закрыть место поражения в сосудистой стенке. Усиленная активация тромбоцитов при патологии может приводить к избыточному тромбообразованию и, наоборот, при замедлении агрегации могут возникать геморрагии (кровотечения).
Активация тромбоцитов — необходимый элемент для нормального гемостаза. В нормальных условиях циркулирующие тромбоциты не взаимодействуют с внутренней поверхностью и эндотелиальными клетками сосудов. Но при повреждении стенки сосудов в просвет сосуда выходит коллаген и тромбоциты при участии фактора Виллебранда прилипают (адгезия) к поврежденному участку сосуда.
Повышенная агрегация тромбоцитов сопровождается ишемической болезнью сердца и развитием инфаркта миокарда.
Показания:
- для определения причин тромбозов при невынашивании беременности, при бесплодии;
- при неудачных попытках ЭКО;
- при сердечно-сосудистых заболеваниях — инфарктах, инсультах;
- во время использования оральных контрацептивов;
- во время планирования беременности и при беременности;
- для выяснения причин повышенной кровоточивости и прогноза риска развития кровоточивости;
- во время приема антиагрегантов;
- для выявления чувствительности или резистентности к антиагрегантам;
- для диагностики приобретенных и врожденных тромбоцитопатий.
Подготовка
Специальная подготовка не требуется. Взятие крови рекомендуется проводить не ранее, чем через 6–8 часов после последнего приема пищи. Накануне исследования следует исключить приём алкоголя и курение, физические и эмоциональные нагрузки.
Если пациент принимает лекарственные препараты, следует проконсультироваться с врачом по поводу целесообразности проведения исследования на фоне приёма препаратов или возможности его отмены перед исследованием, длительность отмены определяется периодом выведения препарата из крови.
Интерпретация результатов
Единицы измерения: %
В процентах норма соответствует 25–75%.
Факторы, повышающие результат:
- гепарин;
- гемолиз пробы крови;
- липемия;
- никотин.
Факторы, понижающие результат:
- избыточное потребление чеснока (угнетает агрегацию тромбоцитов);
- аспирин (ацетилсалициловая кислота ингибирует агрегацию тромбоцитов, блокируя синтез тромбоксана А2);
- азлоцидин, каптоприл, карбамат, карбенциллин, хлорохин, хлорпромазин, клофибрат, ципрогептадин, декстран, дипиридамол, мочегонные, флюменавая кислота, гидроксихлорин, изосорбид динитрат, мезлоциллин, моксалактам, нифедипин, нитрофурантоин, пенициллин, фентоламин, пиперациллин, прометазин, пропранолол, простогландин Е1, пириндол, сульфинпиразон, тикарциллин, трициклические антидепрессанты;
- тромбоцитопения.
Отклонения от нормы
Аномальная агрегация тромбоцитов сочетается со следующими состояниями:
- нарушения тромбоцитов, вызванные дефицитом гликопротеиновых рецепторов мембраны, дефицитом мест хранения, дефицитом высвобождения АДФ;
- недостаток белков плазмы, обеспечивающих взаимодействие тромбоцитов со стенками сосудов, в том числе фактора фон Виллебранда, фибриногена, фибронектина;
- присутствие аномальных метаболитов и компонентов плазмы при уремии, диспротеинемии, синдроме диссеменированного внутрисосудистого свёртывания;
- коллаген-сосудистые расстройства (синдром Марфана, osteogenesis imperfecta);
- миелопролиферативные расстройства (эссенциальная тромбоцитемия, истинная полицитемия, хроническая миелоидная лейкемия);
- тромбастения Glanzmann’s (Гланцманна): недостаток гликопротеина IIb/IIIa, отсутствие агрегации при действии АДФ, коллагена, адреналина, тромбина, но нормальная агрегация при действии ристомицина;
- синдром Bernard-Soulier (Бернара-Сулье): недостаток Ib; нормальная агрегация под действием АДФ, коллагена, адреналина; недостаточная агглютинация под действием ристоцетина. В отличие от болезни фон Виллебранда агглютинация при действии ристомицина не корригируется при добавлении нормальной плазмы;
- дефицит мест/пулов хранения (синдром Chediak- Higashi, гликогеноз типа I, синдром серых тромбоцитов, синдром Hermansky-Pudlak, синдром TAR тромбоцитопения —Trombocytopenia/pathia with Aplasia of the Radius. Этот синдром относится к группе врожденной патологии мегакариоцитарно-тромбоцитарного аппарата, сочетающийся с аномалиями костного аппарата — двустороннее отсутствие лучевой кости с укорочением предплечий, иногда с деформацией позвоночника, лопаток, дисплазией тазобедренных суставов, незаращением нёба, мышечными дефектами, косоглазием, гипоплазией легких, врожденными пороками сердца), синдром Wiskott-Aldrich: агрегация тромбоцитов может быть аномальной, часто вследствие отсутствия или снижения вторичного высвобождения АДФ;
- дефицит циклооксигеназы: аномальная агрегация тромбоцитов в связи с неспособностью активировать путь простагландина; аспирино-подобный дефект;
- болезнь фон Виллебранда: нормальная агрегация при действии АДФ, коллагена, адреналина; отсутствие или снижение агглютинации при действии ристоцетина (за исключением типа IIВ, где агглютинация при субнормальной концентрации ристоцетина происходит).
Снижение агрегации тромбоцитов
- прием ацетилсалициловой кислоты, индометацина, больших доз фуросемида.
Ограничения по приему биоматериала
офис
понедельник
вторник
среда
четверг
пятница
суббота
воскресенье
Куркино, Химки,
ПН-ПТ
11:00 — 12:00, 15:00 — 16:00
МЦК Ростокино,
ПН-ВС
11:00 — 12:00, 15:00 — 16.00
г. Реутов, м. Новокосино,
ПН-ВС
11:00 — 12:00, 15:00 — 16.00
м. Беляево,
ПН-ВС
11:00 — 12:00, 15:00 — 16.00
м. Братиславская, м. Марьино,
ПН-ВС
09:00-10:00, 11:00-12:00, 15:00-16:00
м. Верхние Лихоборы,
ПН-ВС
09:00-10:00, 11:00-12:00, 15:00-16:00
м. Войковская,
ПН-ВС
11:00 — 12:00, 15:00 — 16.00
м. Добрынинская, м. Серпуховская,
м. Домодедовская,
ПН-ВС
11:00 — 12:00, 15:00 — 16.00
м. Крылатское,
ПН-ВС
11:00-12:00 , 15:00-16:00
м. Ленинский пр-т, МЦК Площадь Гагарина,
ПН-ПТ
09:00 — 10:00, 16:00 — 17:00
СБ-ВС
11:00 — 12:00, 14:30 — 15:30
м. Медведково,
ПН-ВС
09:00-10:00, 12:00-13:00, 15:00-16:00
м. Октябрьское поле, МЦК Зорге,
ПН-ПТ
9:00-11:00, 12:00-13:30, 15:00-16:30
м. Сходненская,
ПН-ВС
11:00 — 12:00, 15:00 — 16.00
м. Тверская, м. Охотный Ряд,
Источник
Исследуемый материал
цельная кровь (с цитратом)
Уважаемые пациенты! Обращаем Ваше внимание, что приём биоматериала на данное исследование производится в медицинских офисах г. Челябинска по адресам: ул. Воровского, д. 62, пр-т Свердловский, д. 86, ул. Машиностроителей, 32, пр-т Комсомольский, д. 43-в, пр-т Победы, д. 388-б, строго по записи.
Основной функцией тромбоцитов в обеспечении гемостаза является остановка кровотечения путем формирования «белого» (тромбоцитарного) тромба в месте повреждения сосуда и участие в процессе свертывания крови путем образования «красного» (фибринового) тромба.
В отсутствии нарушения целостности сосудистой стенки тромбоциты находятся в неактивном состоянии. При воздействии определенных стимулов, наиболее значимым из которых является повреждение стенки кровеносного сосуда, они способны быстро активироваться.
Активация тромбоцитов – важный этап нормального гемостаза, при котором тромбоциты проявляют способность к адгезии (способность прилипать к поверхности, например, к интиме поврежденного сосуда) и агрегации (способность склеиваться друг с другом), что лежит в основе формирования тромбоцитарной пробки в месте повреждения. Инициированные тромбоциты секретируют биологически активные вещества, которые запускают каскадную реакцию с увеличением количества вовлеченных в процесс гемостаза тромбоцитов, сокращением стенки сосуда и свертыванием крови. Врожденные или приобретенные нарушения механизма активации тромбоцитов связаны с риском кровотечений. Тромбоциты обеспечивают не только нормальный гемостаз, но и участвуют в патогенетических механизмах некоторых заболеваний. Например, постоянное избыточное активирование тромбоцитов играет важную роль в патогенезе атеросклеротического поражения сосудов и возникновении тромботических осложнений атеросклероза. Применение аспирина и клопидогрела в лечении пациентов с высоким риском атеротромботических событий направлено на снижение способности тромбоцитов к агрегации.
Основными физиологическими индукторами активации тромбоцитов являются коллаген (главный белок внеклеточного матрикса тканей, обнажающийся при повреждении эндотелия сосудов), тромбин (белок плазменной системы свертывания), АДФ (аденозиндифосфат, выделяемый при разрушении клеток и вырабатываемый инициированными тромбоцитами), тромбоксан А2 (вторичный катализатор, секретируемый самими тромбоцитами при активации, его дополнительной функцией является стимуляция сужения сосудов). Стимулировать активацию тромбоцитов также способны арахидоновая кислота (предшественник тромбоксана А2), адреналин (содержится в гранулах тромбоцитов), серотонин (высвобождается с содержимым гранултромбоцитовна первых стадиях их активации).
Метод исследования агрегации тромбоцитов в системе in vitro основан на оценке светопропускающей способности обогащенной тромбоцитами плазмы пациента после добавления в нее индукторов агрегации (наиболее часто используются АДФ, коллаген, адреналин), под воздействием которых могут запускаться разные механизмы активации тромбоцитов. Комплексное их применение дает более полную информацию о реактивности тромбоцитов и позволяет предположить причину выявленных изменений.
Отдельное значение имеет применение в качестве индуктора антибиотика ристоцетина (ристомицина). Он вызывает агглютинацию с последующей агрегацией тромбоцитов, что наблюдается только при наличии в плазме кофактора процесса – фактора Виллебранда, а в тромбоцитах – рецепторов к нему. Эта реакция нарушена при болезни Виллебранда и синдроме Бернара-Сулье при сохранении способности к активации под действием других индукторов.
Исследование агрегации тромбоцитов обычно применяют при подозрении на наследственные нарушения их функции (при повышенной склонности к кровотечениям), оценке рисков кровотечения перед сложными оперативными вмешательствами или при беременности высокого риска.
Исследование остаточной реактивности тромбоцитов может давать информацию об эффективности или вариабельности терапии антиагрегантными препаратами. Однако эта область применения данного теста все еще нуждается в дальнейших исследованиях и стандартизации. По заключению профильной рабочей группы комитета по научным программам и стандартизации Международного общества по тромбозам и гемостазу (SSC/ISTH, 2013), убедительные данные в пользу того, чтобы рекомендовать лабораторные исследования функции тромбоцитов для мониторинга антиагрегантной терапии, пока отсутствуют. Метод оптической агрегометрии считается клинически адекватным при использовании в целях оценки функций тромбоцитов у пациентов с геморрагическими расстройствами, но пока не рекомендован к применению для идентификации пациентов с риском тромбозов или для мониторинга антитромбоцитарной терапии (кроме исследовательских целей).
Предмет исследования:
- Агрегация тромбоцитов с АДФ (5,0 мкмоль/мл).
- Агрегация тромбоцитов с АДФ (0,5 мкмоль/мл).
- Агрегация тромбоцитов с адреналином.
- Агрегация тромбоцитов с коллагеном.
Литература
- Клиническая лабораторная диагностика: Национальное руководство. Т. 1. — М. 2012:761-765.
- Методы клинических лабораторных исследований: Справочное пособие. Т. 1. Под ред. В.В. Меньшикова. — М. 2008:154-166.
- Bray P.F. Platelet hyperreactivity: predictive and intrinsic properties. Hematology, Oncology Clinics of North America. 2007; 21(4):633-645.
- Cattaneo M., Cerletti C., Harrison P., Hayward C.P.M., Kenny D., Nugent D., Nurden P., Rao A.K., Schmaier A.H., Watson S.P., Lussana F., Pugliano M.T., Michelson A.D. Recommendations for the standardization of light transmission aggregometry: a consensus of the working party from the platelet physiology subcommittee of SSC/ISTH. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2013;11:1183-1189.
- Dretzke J. et al. The prognostic utility of tests of platelet function for the detection of ‘aspirin resistance’ in patients with established cardiovascular or cerebrovascular disease: a systematic review and economic evaluation. Health Technology Assessment. 2015;19(37):1-366.
- Guidelines for the Laboratory Investigation of Heritable Disorders of Platelet Function. British Committee for Standards in Haematology. 2011.
- Harrison P. Platelet function analysis. BloodReviews. 2005;19:111-123.
- Kottke-Marchant K., Corcoran G. The laboratory diagnosis of platelet disorders. Archives оf Pathology and Laboratory Medicine. 2002:126:133-146.
- Paniccia R. et al. Platelet function tests: a comparative review. Vascular Health and Risk Management. 2015;11:133-148.
- Rollini F. et al. Platelet function profiles in patient with diabetes mellitus. Journal of Cardiovascular Translational Research. 2013;6(3):329-345.
Источник
