Разведение сыворотки крови для анализа

15.11.2014

Исследования крови следует проводить при одинаковых условиях. Таковые обеспечиваются при взятии крови утором, за 2-3 часа до кормления животных. У крупных сельскохозяйственных животных кровь берут в стоячем положении, в специальном станке или в стойле. Беспокойных животных фиксируют на месте с помощью закруток и носовых зажимов, а пугливым животным завязывают глаза. У мелких животных взятие крови лучше производить, привязав их к столу или специальному станку. Для фиксации птиц разработаны специальные приспособления и столики. Для фиксации кур и уток предназначено устройство УФКУ-1. Оно состоит из металлического корпуса, в дне которого имеются пазы для фиксации крыльев, а на бортах вырезаны полукруглые желоба для фиксации ног с помощью планок и крючков. Птицу кладут на дно корпуса в спинном положении. Аналогичное устройство (СРФ-1) несколько больших размеров применяют для фиксации гусей и индеек. Оно выполнено в виде переносного стола на раздвижных опорах, который легко можно использовать в полевых условиях. При взятии крови из сердца птицу фиксируют на столе в спинном положении. В одну руку забирают обе ноги и оба крыла, а второй рукой берут голову и опускают ее ниже края стола. В таком положении птица находиться неподвижно, а зоб не мешает взятию крови.
На участке кожи, где предполагается произвести взятие крови, обязательно выстригают шерсть, кожу очищают спиртом или эфиром и насухо вытирают.
Следует всегда обращать внимание на то, чтобы кровь для исследования употреблялась только жидкая, свежевыпущенная, При взятии крови место укола нельзя сжимать и сдавливать, в противном случае в вытекающую кровь попадает тканевая жидкость, влияющая на показания исследования.
Повторное взятие крови для исследования из тех мест, где ранее уже бралась кровь, не рекомендуется. В случаях, когда получение крови из укола или разреза кожи затруднено вследствие плохого её вытекания, следует новое место разреза натереть эфиром или ксилолом и высушить ватой. После указанной манипуляции почти всегда удаётся получить кровь.
Небольшое количество крови у лошадей и крупного рогатого скота берут из вены угла глаза. Для этого нажатием пальца кровь задерживают в вене, которую прокалывают иглой. Обычно же кровь у крупного рогатого скота, свиней, коз, овец, собак, кошек берут из сосудов внутренней или наружной поверхности уха при помощи небольшого разреза скальпелем. Получение крови возможно также путём надреза края уха. У кроликов кровь получают из ушной вены, у морских свинок — из сердца, иглами соответствующего диаметра и длины. У крупного рогатого скота кровь можно взять также из разреза ножницами хвостовой складки. У верблюдов кровь берут из разреза или прокола кожи на горбе. У крыс и мышей кровь получают из хвоста, отрезая кончик его, после предварительного очищения и нагревания компрессом до 37- 40°С.
У птиц кровь получают из кожного разреза на гребне или берут из V. cutanea ulnaris или a. brachialis. Для этого на внутренней стороне крыла, над локтевым сочленением удаляют несколько перьев и слегка надрезают сосуд скальпелем или маленькими ножницами. Кровь у гусей берут из крыловой вены. Она расположена с внутренней стороны крыла и идет вдоль плечевой кости. Она хорошо заметна, так как является самым крупным сосудом в этой области. При фиксации птицу держат жестко за ноги, заворачивая голову за одно крыло и оттягивают другое крыло. Место взятия крови ближе к локтевому суставу, очищается от пуха, кожу дезинфицируют спиртом, и прокалывают вену, направляя иглу вдоль вены срезом вверх. Кровь легко стекает. Место укола тампонируется. Недостатком этого метода может является обильное кровотечение, которое бывает трудно остановить, особенно при высокой окружающей температуре. В области плеча, в месте расположения вены, подкожная клетчатка довольно рыхлая, что способствует легкому развитию гематом.
Для получения больших количеств крови прибегают к пункции вен. У лошадей, крупного рогатого скота, коз, овец и верблюдов кровь берут из яремной вены. На месте, где предполагается произвести прокол, выстригают шерсть и кожу дезинфицируют спиртом или 5%-ным раствором йода. Кровопускательную иглу предварительно кипятят в течение 5-10 минут. Для взятия крови большим пальцем левой руки нажимают на вену у основания, с левой стороны шеи. Задержка оттока крови вызывает набухание вены. Набухшая вена видна в виде толстого шнура. Кровопускательную иглу берут в правую руку, вводят под острым углом по направлению к голове и продвигают в полость сосуда. В случае, если кровь не будет вытекать, рекомендуется повернуть иглу вокруг её продольной оси и слегка продвинуть вперёд или назад. Во избежание образования гематомы при извлечении иглы из вены одновременно прекращают ее сдавливание.
У свиней в больших количествах кровь получают из хвоста, отрезая его кончик.
У птицы кровь в больших объемах берется из сердца. Получить кровь из сердца несколько сложнее, чем из гребня и из вены, и для этого необходим определенный навык. Кровь из сердца берут шприцем на 10 или 20 см3 с помощью толстой или тонкой иглы. Большим пальцем левой руки нащупывают углубление около краниальной части грудной кости, под углом 45° прокалывают иглой кожу и лежащие под ней ткани, попадая в грудобрюшную область. Затем иглу со шприцем переводят в горизонтальное положение, продвигают внутрь полости на несколько сантиметров. При попадании иглы в сердце ощущается сердцебиение, и кровь, пульсируя, попадает в шприц.
Порядок взятия крови для исследования должен быть следующим: стирают первую каплю, затем набирают кровь в капилляр для определения гемоглобина; далее берут кровь в смеситель для подсчёта лейкоцитов, потому что требуется сравнительно большое количество крови, затем в смеситель для подсчёта эритроцитов и, наконец, на предметных стёклах делают мазки и толстую каплю. После каждой манипуляции остатки крови стирают ватой.
Если взятие крови происходит одновременно у нескольких животных, то удобно пользоваться фотографическими ванночками или фанерой с укреплением меланжеров и стёкол, разложенных на каждое животное.
Цельная кровь, вышедшая из кровеносных сосудов, обладает способностью быстро сворачиваться, поэтому её необходимо стабилизировать антикоагулянтам. В настоящее время один из лучших антикоагулянтов — гепарин, так как использование других антикоагулянтов приводит к некоторому разбавлению крови, что в дальнейшем приходиться учитывать при проведении исследований. Гепарина, в отличие от других антикоагулянтов, достаточно 1 капли на 5 мл крови. Практически намного удобнее наливать в пробирку немного гепарина, смачивать им стенки пробирки и переливать в другую пробирку. Обработав необходимое число пробирок, остаток гепарина сливают.
Работая с цельной кровью, следует учитывать, что это живая ткань и в ней обязательно происходят — пусть и не столь интенсивно, как в организме, процессы обмена. Поэтому все гематологические исследования, проводимые с использованием цельной крови, должны проводиться в минимально короткие сроки. Стабилизированная кровь после длительного отстаивания или центрифугирования разделяется на форменные элементы (внизу пробирки) и плазму (вверху).
Сыворотка — жидкая часть крови, остающаяся после удаления из нее форменных элементов и белка фибрина. Она используется в биохимических и серологических исследованиях. Для получения сыворотки кровь берут в стерильные пробирки, вымытые в растворе мыла и промытые дистиллированной водой. Сыворотка лучше отделяется, если перед взятием крови стенки пробирок смочить теплым физиологическим раствором. Пробирки должны иметь комнатную температуру, так как кровь плотно пристает к стенкам пробирок и наступает частичный гемолиз эритроцитов. Кровь ставят в термостат при температуре 35°С на 1 час. Затем переносят ее на холод. Через 4 часа сыворотка в виде прозрачной жидкости отделяется от кровяного сгустка. Для лучшего выделения сыворотки образовавшийся сгусток фибрина отделяют от стенок пробирок, обводя стеклянной палочкой или проволокой. С целью быстрого получения сыворотки свернувшуюся кровь центрифугируют при 2000-2500 об/мин. в течение 15-20 минут. Готовую сыворотку сливают в чистую сухую пробирку.
Для взятия крови на сыворотку у птицы используются узкие пробирки, так как в отличие от других млекопитающих, у них ретракция кровяного сгустка относительно мала, и сыворотка отделяется в небольших количествах. После взятия крови пробирки наклоняют под углом 60 градусов. При вертикальном положении пробирок сыворотка отделяется значительно хуже. Вскоре после образования кровяного сгустка его обводят тонкой металлической иглой для лучшего отделения сыворотки. Пробирки на час помещают в термостат. Сыворотку сливают. Если попали эритроциты, ее центрифугируют на 1000-1500 оборотах в течение 10-15 минут.
В сыворотке содержится много различных органических соединений, поэтому ее, так же, как и цельную кровь, желательно исследовать сразу после получения. При необходимости более длительного хранения сыворотки ее можно консервировать. В качестве консервантов применяют мартиолят, тимол, борную кислоту и другие вещества. Консервант добавляется в очень малых количествах. Сыворотка также хорошо сохраняется при глубоком замораживании. В этом случае сыворотку разливают малыми порциями (по 1 мл), замораживают и хранят при — 20°С, по мере необходимости используя в работе.
Для получения плазмы крови в пробирку предварительно насыпают лимоннокислый натрий (из расчета 15-20 мг на 10 мл), щавелевокислые натрий, калий или аммоний (из расчета 30-15 мг на 10 мл). Можно использовать гепарин в виде порошка в количестве 2 мг на 10 мл крови. Взятую в пробирку кровь быстро и хорошо смешивают с порошком. Плазму отделяют от форменных элементов отстаиванием или центрифугированием в течение 15-20 минут при 2000-2500 об/мин.
Для того, чтобы путем гематологических исследований выявить разнообразные изменения, необходимо соблюдать ряд общих правил, иначе полученные результаты будут не верны.
Прежде всего, инструментарий и посуда для взятия крови и проведения исследований, должны быть безукоризненно чистыми, хорошо обезжиренными и простерилизованными. Для мытья пробирок и прочей стеклянной посуды лучше всего использовать раствор двухромовокислого калия в концентрированной серной кислоте (около 1%). Следует иметь в лаборатории заготовленный заранее насыщенный водный раствор двухромовокислого калия, который разводится концентрированной серной кислотой в соотношении 1:3 (разводить следует очень осторожно, так как жидкость сильно нагревается). В дальнейшем ей можно пользоваться в остывшем виде, пока она не изменит коричневато-красного цвета на зеленоватый.
Резиновые пробки идут с тальковым покрытием, поэтому их необходимо промывать в воде для удаления порошка. Затем пробки кипятят 5 минут в растворе разбавленной щелочи (0,5 н раствор), которую затем отмывают водой. Снова кипятят 5 минут в разбавленной соляной кислоте (1:25) и промывают в проточной воде до нейтральной реакции стекающей жидкости. После удаления покрывающего порошка резиновые пробки очень быстро портятся, поэтому их нельзя готовить много, а очистка производится по мере необходимости, для непосредственного применения. Хранить пробки лучше всего в прохладном месте, в плотно закрытой банке. Это особенно важно в летний период.
Следует также учитывать, что при исследовании крови приходиться работать с очень малыми количествами материала. Поэтому приступая к новым исследованиям, необходимо предварительно получить навык в соответствующем методе, причем обучение проводиться на чистых растворах, с известной концентрацией. Только после этого можно приступать к практическим исследованиям. Опыт и навык в микрометодике имеют еще большее значение, чем при обычных химических исследованиях.
Все исследования следует проводить посредством двух параллельных определений, из которых затем выводится средняя величина. Если расхождение между определениями велико, исследование следует считать неудавшимся и провести повторное.

• История развития учения о крови
• Обработка результатов опытов по кормлению
• План и порядок проведения опытов
• Планирование производства и расходования кормов
• Детализация нормирования кормления птицы
• Принципы нормирования кормления птицы
• Кормление овец
• Кормление лошадей
• Кормление и откорм свиней
• Откорм крупного рогатого скота