Правила забора крови при сепсисе для анализа на микрофлору

Материалы медицинских конференций

Главная / Материалы медицинских конференций / 2003 / VΙΙ Российская онкологическая конференция

Н.С. Багирова. РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Сепсис – это системная воспалительная реакция в ответ на инфекцию. Благоприятный исход при сепсисе зависит от своевременной диагностики, а также от адекватной и во время начатой антимикробной терапии.

Микробиологическая диагностика сепсиса основана на исследовании крови, то есть на установлении бактериемии. Бактериемия – присутствие микроорганизмов в системном кровотоке – является важнейшей предпосылкой для развития сепсиса. Посев крови, при котором удается получить рост микроорганизма – это единственный способ, который позволяет получить данные о возбудителе сепсиса, о его чувствительности к антимикробным препаратам.

Таким образом, своевременная микробиологическая диагностика бактериемии способствует ранним и адекватным лечебным действиям, которые могут предотвратить развитие сепсиса и его последующих этапов, связанных с высокой летальностью.

В то же время, оценка клинической значимости полученных результатов посева крови является весьма сложным этапом микробиологической диагностики бактериемии. Причиной этих трудностей в первую очередь является возможная контаминация (загрязнение) образца исследуемой крови вследствие попадания микроорганизмов с рук медперсонала во время венопункции, с кожи пациента, из воздушной среды помещения. Нельзя исключить и внутри лабораторное загрязнение при контрольном высеве.

Помимо возможной контаминации образца, на результаты посева крови влияют и другие факторы. Существуют следующие показания для посева крови: гипотермия (температура тела менее 36С0) или лихорадка (температура тела более 38С0), лейкоцитоз (общее количество лейкоцитов в периферической крови более 10х109/л), фебрильная нейтропения. Очевидно, что на практике кровь для посева часто получают после начала лихорадки или озноба. Бактерии быстро удаляются из крови, поэтому кровь для посева необходимо получать так быстро при развитии лихорадки или озноба, как это только возможно, и совершенно недопустимо «привязывать» время посева крови к процедуре взятия крови для биохимических и иных исследований только по той причине, что это технически удобно медперсоналу. Микробиологическое исследование крови требует индивидуального подхода к каждому больному, а также строжайшего соблюдения правил асептики и антисептики при проведении процедуры.

Объем засеваемой крови — один из наиболее важных моментов при микробиологической диагностике бактериемии. Концентрация микроорганизмов в крови взрослых обычно меньше 10 КОЕ/мл, а чаще всего даже меньше 1 КОЕ/мл, поэтому каждый дополнительный миллилитр крови увеличивает вероятность получения роста. Одномоментный посев 10-20 мл крови следует считать наиболее оптимальным объемом у взрослых пациентов. Кровь для посева необходимо брать не менее 2-х раз в течение суток с интервалом 5-10 мин. при каждом эпизоде лихорадки. При подозрении на катетер ассоциированную инфекцию кровь следует получить сначала из вены, затем из внутрисосудистого катетера с интервалом не более 5 мин. У детей концентрация микроорганизмов в крови выше, чем у взрослых, обычно более 100 КОЕ/мл, и чаще даже более 1000 КОЕ/мл, поэтому объем засеваемой крови может быть небольшой, но не менее 1 мл. Обычно берется 1-5 мл крови, хотя при посеве менее 1 мл вероятность получения роста невелика.

Соотношение крови и питательной среды во флаконе – это также немаловажный фактор. Оптимальное соотношение кровь/среда должно быть от 1:5 до 1:10. При разведении крови средой менее чем в 5 раз снижается возможный рост микробов, что вероятно можно объяснить бактерицидными свойствами крови.

Флаконы с засеянной в них кровью (гемокультура) следует доставлять в лабораторию немедленно, а до этого они могут находиться при комнатной температуре очень короткий период времени без влияния на микробную выживаемость. Гемокультура определяется как забор определенного объема крови при разовой венопункции для посева в один или несколько флаконов из одного шприца. Получение роста – положительная гемокультура, отсутствие роста в течение 5-7 суток инкубирования – отрицательная гемокультура. Хранение гемокультур в холодильнике не допускается. Несоблюдение правил транспортировки может быть причиной неудач с выявлением роста.

Ответственным этапом получения гемокультуры, безусловно, является обработка кожи и венопункция. Основная трудность в интерпретации результатов исследования образца крови – возможная его контаминация микрофлорой кожи. Одной из мер, направленных на решение этой проблемы, является тщательная обработка кожи антисептиками. Схема необходимых процедур при получении образца крови для микробиологического исследования представлена ниже.

Инструкции для процедурной медсестры по забору крови для микробиологического исследования:

Для обработки кожи пациента и флаконов с питательной средой допускается применение следующих веществ: 70% этиловый спирт, 1-2% настойка йода, 10% раствор повидон-йода.

Вымыть руки перед забором крови.

Подготовить флаконы: удалить пластиковую защитную пластинку с крышки флакона; поверхность резиновой пробки флакона протереть тампоном, смоченным 70% этиловым спиртом или раствором йода, и оставить тампон на пробке на 60 сек. (1 мин.).

Обработать кожу пациента в месте предполагаемой венопункции тампоном с 70% этиловым спиртом (экспозиция 30 сек.), затем тампоном нанести 1-2% настойку йода или 10% раствор повидон-йода в виде круга диаметром 1,5-2 см (экспозиция 30 сек.). При использовании только 70% этилового спирта экспозиция 60 сек.

Надеть на руки стерильные водонепроницаемые перчатки.

Убрать тампон с дезинфектантом с кожи пациента и при венопункции набрать в шприц не менее 10 мл крови для взрослых пациентов и не менее 1-5 мл – для детей.

Убрать тампон с дезинфектантом с поверхности пробки флакона и внести равный объем крови в каждый флакон (обычно посев крови производится в 2 флакона).

Внимание! Объем питательной среды во флаконах может быть разный. Оптимальное соотношение кровь/среда=1:5–1:10. Пример: объем питательной среды (указан на этикетке флакона) 25 мл. При внесении во флакон 5 мл крови соотношение кровь/среда=5:25, то есть 1:5.

При необходимости одновременного посева крови и из вены, и из внутрисосудистого катетера кровь следует брать сначала из вены, а потом из катетера, с интервалом не более 5 мин.

Флаконы с кровью следует доставить в лабораторию немедленно. Транспортировка флаконов должна осуществляться только в контейнерах.

Флаконы с кровью следует доставлять в лабораторию с сопроводительным направлением стандартного образца, которое заполняется лечащим врачом. Процедурная медсестра дополнительно вносит следующие данные: а) время забора крови, б) температура тела пациента непосредственно перед забором крови, в) объем крови, внесенный в каждый из пронумерованных флаконов.

Несоблюдение медицинским персоналом элементарных правил гигиены влечет за собой развитие целой цепочки событий, которые могут стоить больному жизни: исследуемый образец крови контаминирован → неверно определен микроорганизм, являющийся причиной тяжелой локальной инфекции или сепсиса → неверно определены антимикробные препараты для терапии → неэффективность терапии → ухудшение состояния больного → смерть.

Кровь – уникальный источник информации о состоянии здоровья человека. Её используют при диагностировании практически всех заболеваний. Анализ на стерильность помогает узнать о наличии бактерий в крови, норм содержания различных веществ.

Что такое анализ крови на стерильность

В том случае, если назначили кровь на стерильность, что это такое помогает разобраться врач. Он должен объяснить своему пациенту о плане диагностики и необходимости каждого исследования.

При заражении организма, бактерии могут попадать в кровь и свободно передвигаться по организму, заражая органы и ткани. В крови патогенная микрофлора появляется при нарушении целостности кожи, тканей и сосудов. Это происходит при травмах: порезах, ожогах, царапинах, укусах, открытых переломах и т.д.

Частой причиной заражения крови становится хирургическая операция, некоторые косметические процедуры.

Любая бактерия при определенных благоприятных условиях начинает активно размножаться и образовывает колонию. Воспользовавшись этой особенностью микроорганизмов, ученые используют чашку Петри с питательной средой, в которой из раствора крови вырастают колонии бактерий.

Это позволяет исследовать их вид, особенности и определить метод лечения больного. Если бактерий нет – колония не образовывается, кровь считается стерильной.

В каких случаях назначают

Анализ крови на стерильность помогает узнать о наличии и особенностях бактерий в организме. Это такая процедура, что проводится не только для диагностирования, но и при подготовке к некоторым медицинским манипуляциям.

В каких случаях назначают анализ крови на стерильность:

1. При заболеваниях, связанных с иммунодефицитом организма, например, при ВИЧ. В этом случае пациент должен знать – кровь на стерильность: что это такое периодическое обследование, которое поможет вовремя диагностировать болезнь, с которой организм самостоятельно справиться не в силах.
2. При отсутствии эффекта от лечения антибиотиками. С помощью анализа на стерильность удается узнать о чувствительности бактерий к тому или иному антибиотику, подобрать правильное лекарство. Диагностика, как правило, повторяется после приема курса препарата.
3. Перед и после хирургических вмешательств. Любая операция является риском заражения крови. Особенно это опасно, если в крови уже есть болезнетворные микроорганизмы. После хирургического вмешательства определение стерильности помогает установить отсутствие или наличие бактерий в организме, при необходимости определить стратегию лечения.
4. После аварий или серьезных травм. Обязательно кровь на стерильность необходимо сдавать при обширных ранах, множественных открытых переломах. Это позволяет определить количество и виды бактерий, а также грибков, которые могут попасть в кровь и привести к заражению.
5. При разрыве абсцессов, перфорации гнойных образований, некрозах и перитонитах. В этих случаях в полость тела и кровь попадает большое количество гноя с бактериями и грибками.
6. После сложных абортов и других акушерских манипуляций, при которых возможно заражение стафилококком.
7. При гнойных заболеваниях ЛОР-органов: тонзиллитах, синуситах и отитах.
8. При онкологических заболеваниях. В этом случае анализ на стерильность проводится после лазерной или химической терапии. Эти методы лечения снижают иммунную защиту до 0.
9. При сильной лихорадке, которая держится больше 3 дней.

Какие заболевания можно выявить

С помощью анализа крови на стерильность могут быть диагностированы следующие заболевания:

1. Сепсис. Это общее заражение организма, при котором в кровь попадает огромное количество бактерий или грибков. Опасность болезни в том, что с кровью инфекция распространяется по всем органам и приводит к быстрой смерти без лечения.
2. Менингит. Инфекционное поражение оболочек спинного и головного мозга. Одним из путей заражения бактериальной формой менингита является гематогенной. Кровь переносит инфекцию от воспалительного очага в тканях или органах в мозг.
3. Пиодермия. Тяжелое инфекционное поражение кожи, которое вызывают бактерии кокки. Заражение может возникать из-за маленькой царапины, после чего возбудители распространяются через кровь на другие участки тела.
4. Эндокардит. Воспалительный очаг во внутренней оболочке сердца. Основной возбудитель стрептококки. Появляется при наличии первичного инфекционного заболевания.
5. Остеомиелит. Инфекционное заболевание костей и костного мозга, которое сопровождается некрозом и гнойными выделениями. Возбудитель попадает к кости через кровь от инфекционного очага. Реже бактериальное заражение происходит через открытую рану при ее загрязнении.
6. Туберкулез. Заболевание органов дыхания (реже других систем), которое возникает из-за инфицирования палочками Коха. При посеве на стерильность удается не только определить наличие возбудителя, но и его устойчивость к лекарствам.

Как подготовиться к анализу

От подготовки к анализу во многом зависит результат исследования. Методы подготовки отличаются от того, как проводится исследование: в плановом режиме или экстренно. Плановый забор крови на стерильность проводится при заболеваниях, связанных с иммунодефицитом, при диагностике гнойных заболеваний кожи и туберкулезе. Подготовка к исследованию обычно начинается за несколько дней.

В это время необходимо руководствоваться следующими правилами:

1. В зависимости от формы лечения болезни антибиотики или иные препараты против инфекции необходимо закончить принимать за 2-5 дней до забора крови. Если лекарства не принимаются, начинать лечение нельзя, в том числе и гомеопатическими препаратами.
2. За два дня необходимо отказаться от приема жирной, жареной и острой пищи, полностью исключить из рациона алкоголь.
3. В день сдачи анализа запрещено курить, употреблять любые лекарственные препараты.
4. Некоторые врачи рекомендуют увеличить потребление жидкости и пищи в день сдачи крови.

Если забор крови происходит в экстренном порядке, при лихорадке, подозрении на сепсис, после сильной травмы или аварии, необходимо придерживаться следующих правил:

1. У больного кровь необходимо брать в период пика температуры тела– 39-40 градуса. Препараты, которые снижают температуру можно давать только после анализа.
2. Если больной принимает противомикробные лекарства, их прием нужно приостановить минимум за 12 часов до анализа.
3. При открытых травмах и авариях сначала берется кровь на стерильность, только потом вводятся антибиотики широкого спектра.

Правила забора крови

От правильности выполнения анализа крови на стерильность напрямую зависит результат исследования.

Что такое анализ на стерильность и как правильно производится забор крови.

Забор крови осуществляется по следующим этапам:

1. Анализ берет медсестра, которая должна рассказать про метод забора крови.
2. Чаще всего для забора крови используется вена в локтевом сгибе или на тыльной стороне ладони. В редких случаях материал берется из пальцев.
3. Для манипуляции медицинский работник использует только стерильные инструменты. Перчатки и шприц должны быть новыми и утилизироваться сразу же после анализа.
4. Перед введением иглы кожа тщательно обрабатывается дезинфицирующим раствором в квадрате 5 на 5 см в месте укола.
5. Объем крови должен быть не менее 10 мл. Чем меньше материала, тем выше риск ложноотрицательного или ложноположительного результата.
6. При заборе крови нельзя использовать катетер. Он является источником инфекции и может загрязнить материал.
7. Для точности результата кровь берется с обеих рук с интервалом в полчаса.
8. Медсестра над пламенем горелки снимает со шприца иголку, а содержимое впрыскивает в пробирку с жидкой питательной средой. Края пробирки обжигаются и закрываются стерильной резиновой пробкой.
9. Пробирка помещается в термостат с благоприятной для жизнедеятельности бактерий температурой (38-39 градусов) и перемещается в лабораторию.

В некоторых случаях за полчаса до забора крови больному могут вводить небольшую дозу адреналина. Это приводит к сокращению селезенки и ускорению тока крови. Используется при инфицировании внутренних органов.

Осуществление процедуры у новорожденных детей

Некоторым новорожденным требуется сдать кровь на стерильность. Что это такое, должна знать каждая будущая мама и не пугаться, если врач проводит дополнительные диагностические процедуры сразу же после рождения малыша.

Проведение анализа крови на стерильность может понадобиться в следующих случаях:

• сразу же после рождения у ребенка поднимается температура выше 39, отсутствуют рефлексы, он постоянно срыгивает и т.д.;
• роды были преждевременными;
• во время беременности будущая мама перенесла тяжелые заболевания, которые вызываются стафилококками или стрептококками;
• присутствует риск внутриутробного заражения;
• у ребенка есть аномалии развития внутренних органов;
• при подозрении на омфолит новорождённых – гнойное воспаление пупочной ранки.

Особенность проведения анализа для ребенка заключается в методе забора крови. Пальцы ребенка малы, чтобы взять достаточное количество материала. Поэтому для проведения исследования крови на стерильность применяется венозная кровь или капиллярная кровь из пятки.

Вены ребенка в локтевом сгибе, где проводится процедура забора у взрослых, достаточно малы, их трудно нащупать.

Могут использоваться сосуды других участков тела:

1. Вены головы.
2. Вены тыльной стороны ладони.
3. Вены предплечья.
4. Вены икр.

Существуют правила при анализе, которые должны знать родители:

• ребенок должен быть спокоен, не плакать и не истерить. Поэтому лучше взять с собой на анализ погремушку или музыкальную игрушку;
• в день забора крови рекомендуется при кормлении дать ребенку жидкости немного больше обычного;
• кожа и конечности малыша должны быть теплыми перед анализом. Поэтому нельзя идти в лабораторию сразу же после улицы. Ребенка нужно разбудить, раздеть и посидеть с ним в помещении 10-15 минут;
• не рекомендуется делать забор крови спящему или сонному малышу, это может его сильно испугать.

Процесс бактериологического посева

Во время бактериального посева, кровь помещают на питательную культуру, благодаря которой бактерии начинают активно размножаться и «строить» колонии.

В качестве питательных сред могут использоваться следующие вещества:

• агар из казеина или сыворотки;
• яичная среда;
• бульон из агара и крови животных.

Питательная среда может быть двух видов:

1. Жидкая среда. Используется при небольшом количестве бактерий. В качестве инструмента используются пробирки.
2. Плотная среда. Используется при большом количестве бактерий и грибков. В качестве инструмента используется чашка Петри. Она представляет собой тщательно стерилизованную стеклянную или пластиковую круглую плоскую чашу.

В питательную среду исследуемый материал помещается с помощью стеклянных или металлических игл, а также специальных приборов, которые называются бактериальной петлей. Для подсчета количества бактерий в крови используется обозначение КОЕ – количество единиц (микроорганизмов) в миллилитре крови, которые способны образовать колонию.

Существуют следующие степени роста:

1. Первая степень. В плотной структуре колонии отсутствуют полностью, наблюдается их мизерное количество в жидкой среде.
2. Вторая степень. В плотной среде появляется 5-8 колоний.
3. Третья степень. В плотной среде можно сосчитать до 100 колоний.
4. Четвертая степень. В среде насчитывается более 100 колоний микроорганизмов.

При первой и второй степени незначительное количество бактерий может говорить о нарушении правила забора крови и недостаточной стерильности. Приметой загрязнения материала и оборудования может стать и смешенный результат, когда вырастают колонии разных видов бактерий.

Достоинством бактериального посева является возможность проведения антибиотикограммы. Это метод изучения устойчивости бактерий к тем или иным антибиотикам.

Для этого могут применяться следующие методы:

1. Метод смешенных дисков. В среду с бактериями помещаются диски, пропитанные разными антибиотиками. По зонам задержки роста и уменьшению колонии можно судить о чувствительности микроорганизмов к лекарству.
2. Е-тест. Методика такая же, как и выше, но вместо дисков используются бумажки с разной концентрацией одного и того же антибиотика.

Точность тестирования

Анализ крови на стерильность оказывается точным в 90-95% случаев. Это зависит от квалификации клиники и работников, соблюдения всех правил забора материала. Если в крови не обнаружены бактерии – она стерильна. Это значит, что заболевания нет. В таких случаях повторного анализа не требуется, так как риска неточности исследования нет.

О неточном анализе приходится говорить, если КОЕ очень низкий, или в анализе обнаружены разные типы бактерий.

Неточный результат анализа крови на стерильность может возникнуть по следующим причинам:

• недостаточная стерильность при заборе крови и работе с материалом в дальнейшем;
• низкая квалификация медицинского персонала и работников лаборатории;
• ошибки при расшифровке результата;
• употребление медикаментов перед забором крови;
• нарушение правил транспортировки биологического материала: неправильная температура в термостате или длительная перевозка.

Через сколько времени готов результат

Примерно через 3 дня исследуемый человек может узнать о стерильности своей крови. Уже через несколько суток врачи могут сказать о наличии бактерий и их примерном количестве.

Точный окончательный результат готов примерно через 10 дней. За это время специалисты «выращивают» инфекционных возбудителей в специальных чашках. Также в течение этого срока изучается устойчивость бактерий и грибков к различным антибиотикам.

Где можно сдать кровь на стерильность и стоимость

Анализ крови на стерильность можно сдать практически в любой клинике. Это такое исследование, что должно проводиться в каждом лечебном учреждении при наличии диагностической лаборатории. В бесплатной городской поликлинике проверить кровь на стерильность можно только по направлению от лечащего врача.

Платно без направления можно провести исследование в частных клиника в любое удобное время. Цена в Москве составляет в среднем 1500 рублей за один анализ. Самая минимальная стоимость – 300 рублей.

Она зависит от составляющих анализа:

• определение количества бактерий и грибков;
• определение видов инфекционных возбудителей;
• определение лекарств, к которым устойчивы бактерии и грибки.

Анализ крови на стерильность указывает, что именно находится в организме человека. Это такие исследования, как бак посев мочи, мазок из половых или ЛОР-органов – это возможность более детально изучить заболевание.

Видео об анализе крови на стерильность и правилах забора

Правила забора крови:

Что можно узнать по анализу крови: