Пцр и анализ крови разные результаты



Высокотехнологичные лабораторные методы диагностики дают возможность выявить множество заболеваний на самых ранних стадиях. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) — один из самых новых и точных способов диагностики. За его разработку ученый Кэри Муллис получил в 1993 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод хотя и считается экспериментальным, но уже широко и успешно применяется в медицине.

ПЦР-диагностика: суть подхода

Метод ПЦР использует принципы молекулярной биологии. Его суть заключается в применении особых ферментов, которые многократно копируют фрагменты РНК и ДНК возбудителей болезни, которые находятся в пробах биоматериала, например в крови.

После этого работники лаборатории сверяют полученные фрагменты с базой данных, выявляют тип возбудителя болезни и его концентрацию.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, охлаждающем и нагревающем пробирки с пробами биоматериала. Нагрев и охлаждение необходимы для проведения репликации. Точность температурного режима влияет на точность результата.

Сферы применения метода

Диагностические возможности метода ПЦР огромны, с его помощью можно выявить самые разные инфекции. Чаще всего ПЦР-метод применяют для диагностики:

  • ВИЧ;
  • герпеса;
  • различных половых инфекций, в частности хламидиоза, уреаплазмоза, гарднереллеза, микоплазмоза и трихомониаза;
  • кандидоза;
  • гепатитов;
  • мононуклеоза;
  • листериоза;
  • цитомегаловируса;
  • туберкулеза;
  • вируса папилломы человека;
  • клещевого энцефалита.

Это далеко не полный список, метод ПЦР-анализа используется в разных областях медицины.



Кстати




Метод ПЦР применяется не только в медицинских целях. В наши дни он используется и в иных сферах, например в криминалистике, в тех случаях, когда требуется определить, кому принадлежит найденный на месте преступления биоматериал. ПЦР иногда используется также при установлении отцовства.

Преимущества и недостатки подхода

У диагностики методом ПЦР много плюсов:


Высокая чувствительность.

Метод позволяет выявить возбудителя болезни даже при наличии нескольких молекул его ДНК, то есть на очень ранних стадиях, при хронической форме заболевания, а так же в случаях, когда болезнь никак себя не проявляет, протекая латентно.


Универсальность.

Для проведения ПЦР анализа подходит почти любой биоматериал — от крови и слюны до клеток кожи.


Широкий охват.

Исследование одного образца может выявить сразу нескольких возбудителей болезни.


Оперативность.

Результат, как правило, готов через 5–7 часов, то есть получить заключение можно уже на следующий день после забора биоматериала.


Точность.

Метод ПЦР практически никогда не дает ложноположительных или ложноотрицательных результатов, если была соблюдена технология проведения этого анализа.


Невысокая стоимость.

По цене ПЦР-анализ сравним с любыми другими лабораторными анализами крови.

Однако следует понимать, что совершенных методов анализа не бывает. У ПЦР есть и минус — высокие требования к соблюдению технологии и к профессионализму лаборантов. Если образец был загрязнен, анализ может дать ложный результат. Поэтому проводить ПЦР-диагностику лучше только в самых лучших лабораториях, где внедрены системы контроля качества работы.

Исследуемый биоматериал

Для ПЦР-диагностики заболеваний на анализ берут разные виды биоматериала. Выбор зависит от типа инфекции. При анализе на ЗППП методом ПЦР берут соскоб или мазок из шейки матки или уретры, а также мочу. Для выявления герпеса, цитомегаловируса, гепатита, токсоплазмоза и ВИЧ на анализ берут кровь. При анализе на мононуклеоз и цитомегаловирус берут мазок из зева. Спинномозговая жидкость используется для анализа при поражениях нервной системы, для диагностики внутриутробных инфекций исследуются ткани плаценты, для выявления легочных инфекций — мокрота или плевральная жидкость.

Подготовка к исследованию

Подготовка к ПЦР-диагностике напрямую зависит от типа биоматериала. Кровь сдается натощак утром. Моча также сдается утром, в лабораторных условиях, в стерильный контейнер. Перед сдачей мазка или соскоба из урогенитальной области нельзя вступать в половые контакты за несколько дней до исследования, не следует проводить спринцевания. Мазок или соскоб нельзя сдавать во время менструации и в течение 2-х дней после ее окончания.

Методы ПЦР-диагностики заболеваний

Существует немало различных методик ПЦР-диагностики: ПЦР в реальном времени, секвенирование, пиросеквенирование, микрофлюидные технологии. Сейчас наиболее распространенным способом проведения анализа является ПЦР в реальном времени — этот метод практически не допускает ложноположительных результатов, к тому же срок обработки образцов при исследовании таким способом сокращается — результат можно получить уже через час.

Расшифровка результатов

Для пациента результат ПЦР-анализа может быть либо положительным, либо отрицательным. Отрицательный означает, что следов враждебной ДНК не обнаружено и человек здоров. Положительный подразумевает наличие фрагментов ДНК возбудителя болезни — это значит, что человек заражен и ему требуется лечение.

Читайте также:  Как расшифровать анализ крови общий для детей

Нередко ПЦР-диагностика дает положительный результат, но пациент не чувствует никакого недомогания, а признаки болезни отсутствуют. Однако это означает не ошибку, а очень раннюю стадию заболевания. В этом случае необходимы дополнительные исследования и лечение. Если заболевание было диагностировано на столь ранней стадии, следует начинать терапию как можно скорее, ведь чем дальше зайдет болезнь, тем сложнее будет ее вылечить.


ПЦР-диагностика инфекций невероятно точна — она позволяет обнаружить возбудителя болезни, даже если в пробе находится всего одна-единственная молекула его ДНК. Именно это качество сделало ПЦР-анализ одним из эффективнейших диагностических инструментов как для определения наличия инфекции, так и для контроля за ходом лечения.

Источник

Результаты ПЦР позволяют в большинстве случаев точно определить, имеются ли у человека венерические заболевания.

Это исследование обладает высокой чувствительностью и специфичностью.

Его чувствительность достигает 100% и превышает по этому показателю любые другие существующие диагностические тесты.

По специфичности ПЦР уступает только бактериологическому посеву.

Исследование может быть количественным или качественным.

Соответственно, результаты выдаются разные.

При большинстве половых инфекций проводятся качественные исследования.

Они позволяют получить ответ: да или нет.

То есть, присутствует ли возбудитель в урогенитальном тракте или его там нет.

При этом количественные показатели не определяются.

Это связано с тем, что при многих заболеваниях количество микроорганизма не имеет никакого значения в плане выбора терапевтической тактике.

Лечение проводится при выявлении даже единичных микроорганизмов.

Потому что целью терапии является полное уничтожение представителей данной микрофлоры в урогенитальной системе пациента.

На схему лечения количество бактерий или вирусов тоже не влияет.

Дозы антибиотиков назначаются одинаковые.

Длительность курса и дозировки определяются не количеством бактерий, а распространенностью и давностью инфекционного процесса, опытом предыдущих терапевтических курсов.

Примеры таких инфекций:

  • хламидиоз;
  • гонорея;
  • сифилис.

Для некоторых заболеваний нужны количественные показатели.

Потому что они влияют на врачебную тактику.

В частности, исходя из количества бактерий или вирусов, могут приниматься такие решения:

  • нужно ли пациенту лечение или достаточно динамического наблюдения;
  • какие схемы терапии должны использоваться;
  • стоит ли прекращать проводимое лечение или его нужно продолжать дальше.

Некоторые возбудители в небольших количествах не представляют большой угрозы.

В то время как при высокой концентрации способны вызывать значительные воспалительные процессы или осложнения.

Примеры заболеваний, для которых количественные результаты ПЦР имеют немаловажное значение:

  • папилломавирусная инфекция;
  • кандидоз;
  • ВИЧ.

Цели получения результатов ПЦР

Исследование выполняется с различными целями.

В основном они следующие:

1. Первичная этиологическая диагностика.

ПЦР назначается для установления вида возбудителей.

Или видов нескольких возбудителей – ведь инфекция вполне может оказаться сочетанной.

ПЦР хороша тем, что позволяет однократно взять мазок и провести исследование сразу не все возможные ЗППП.

Благодаря этому исследованию удается выявить любых микроорганизмов в урогенитальном тракте или других участках организма человека.

Но для эффективной этиотропной диагностики важно взять биоматериал именно из той зоны, где могут присутствовать микроорганизмы.

Например, при гонорее наиболее информативным будет проведение исследования уретрального соскоба.

В то время как хламидии чаще всего обнаруживаются у женщин в цервикальных образцах.

Некоторые инфекции поражают ротовую полость или прямую кишку.

Соответственно, для их обнаружения оттуда берутся мазки.

Для выявления ВИЧ и вирусных гепатитов требуются результаты ПЦР крови.

2. Установление типа или вида возбудителя.

ПЦР может проводиться как уточняющее исследование.

В том числе при уже установленном диагнозе.

Например, аногенитальные бородавки могут быть диагностированы клинически.

Для этого достаточно визуального осмотра и дерматоскопии.

После обнаружения кондилом становится очевидным, что человек заражен папилломавирусом.

Казалось бы, этиотропная диагностика не нужна.

Но в действительности нужно получить результаты ПЦР в такой ситуации.

Потому что типов папилломавируса существуют десятки.

Необходимо выяснить, какой конкретно тип спровоцировал инфекционное заболевания у данного пациента.

Потому что типы бывают различными по степени онкологического риска.

Он может быть низким, средним или высоким.

Соответственно, совершенно отличается тактика ведения пациента.

Если выявляются низко- или среднеонкогенные типы ВПЧ, то дальнейшее наблюдение за человеком не требуется.

Он повторно возвращается в клинику разве что в случае рецидива аногенитальных бородавок для их удаления.

Но в случае обнаружения ВПЧ высокого онкогенного риска терапевтическая тактика становится совершенно другой.

Читайте также:  Как сдать анализ крови на торч

За человеком устанавливается наблюдение.

Особенно если это женщина, ведь у неё значительно возрастает риск цервикального рака.

Пациента каждые полгода обследуется.

Она сдает:

  • мазки на онкоцитологию;
  • ПЦР на ВПЧ с вирусной нагрузкой;
  • по показаниям – проходит кольпоскопию, а по её результатам может быть выполнена биопсия.

Оценивается иммунный статус.

Проводится иммунокоррекция.

А в случае необходимости выполняются деструктивные процедуры для удаления очагов патологически измененного эпителия шейки матки.

То же самое касается кандидоза.

Диагноз может быть установлен с помощью одной только микроскопии, а то и клинически.

Но выявление вида грибка помогает подобрать более эффективное лечение.

Потому что только Кандида альбиканс хорошо восприимчива к традиционно используемому флуконазолу.

Другие виды грибков могут не реагировать на такое лечение.

В результате кандидоз может стать рецидивирующим.

Чтобы этого не произошло, делают ПЦР на 8 видов грибков.

Определяется точный вид кандиды и проводится целенаправленная терапия.

3. Определение количества микроорганизмов.

Может потребоваться даже при установленном этиологическом диагнозе.

К примеру, если выявлено, что у человека в репродуктивной системе присутствует папилломавирус, это ещё не означает, что ему необходимо лечение.

Потому что при низкой вирусной нагрузке даже онкогенные типы относительно безопасны.

Исследование проводится через каждые несколько месяцев.

Если количественная ПЦР показывает увеличение вирусной нагрузки, назначается лечение.

Данное исследование является одним из основных методов контроля течения ВИЧ-инфекции.

Наряду с показателями работы иммунной системы результаты ПЦР определяют:

  • когда нужно назначить антиретровирусную терапию;
  • какие дозировки препаратов необходимы;
  • сколько должно быть препаратов и какие;
  • реагирует ли человек на лечение;
  • какой у него риск осложнений и т.д.

Количественная ПЦР позволяет оценить динамику заболевания.

При возрастании вирусной нагрузки прогноз болезни оценивается как неблагоприятный.

Если же количество ДНК ВИЧ снижается, это говорит о том, что лечение проходит успешно.

4. Оценка успешности терапии.

Как качественные, так и количественные исследования ПЦР применяются для контроля результативности терапии.

Мы только что приводили пример с ВИЧ-инфекцией.

Снижение вирусной нагрузки, особенно до неопределяемой, говорит о том, что терапия проходит удачно.

Схему в этом случае не меняют.

ПЦР проводится снова и снова.

Если вирусная нагрузка начинает увеличиваться, это может означать развитие резистентности к некоторым лекарствам.

В таком случае их заменяют другими.

После коррекции схему её работоспособность снова оценивается по ряду показателей, включая вирусную нагрузку.

Результаты качественной ПЦР используются для подтверждения излеченности большинства венерических заболеваний.

Исключение составляет только сифилис – его излеченность подтверждается с помощью серологических исследований (анализов крови на антитела).

Для остальных инфекций ПЦР остается предпочтительным методом контроля.

Этот анализ сдают после терапии гонореи, хламидиоза, уреаплазмоза и других ЗППП.

Показания к ПЦР

ПЦР на половые инфекции выполняются пациентам, которые:

  • жалуются на симптомы со стороны урогенитального тракта;
  • вступали в половые контакты с потенциальным или установленным источником венерических инфекций;
  • желают обследоваться с профилактической целью (для раннего выявления и лечения венерических заболеваний до возникновения осложнений);
  • обследуются по поводу бесплодия;
  • планируют лечение бесплодия, в частности с использованием вспомогательных репродуктивных технологий;
  • планируют операции на репродуктивных органах (все венерические болезни должны быть выявлены и пролечены для снижения риска инфекционных осложнений).

Как мы уже выяснили, ПЦР выполняется не только для первичной диагностики.

Поэтому показаниями для получения результатов этого исследования также являются:

  • прохождение курса терапии по поводу венерического заболевания;
  • ВИЧ-позитивный статус (исследования проводятся регулярно для оценки последствий заболевания, особенностей его течения, назначения и коррекции антиретровирусной терапии);
  • наличие папиллом на половых органах (для оценки риска рака);
  • выявление ЗППП другими методами, например с помощью микроскопии или бак посева (показано обследование методом ПЦР на сопутствующие инфекции).

Нередко ПЦР делают пациентам в случае неудач в лечении тех или иных заболеваний.

Например, если терапия кандидоза не приносит успеха, необходимо исследование для определения вида грибка.

Исходя из этой информации, врач сможет подобрать более эффективную схему медикаментозной терапии.

Положительный анализ ПЦР – что это значит?

В большинстве случаев интерпретация ПЦР не представляет затруднений.

Особенно если выдаются качественные результаты ПЦР диагностики.

Но всё же некоторые пациенты путаются в понятиях.

Когда врач им говорит, что результат исследования ПЦР положительный, они воспринимают эту новость с радостью.

Читайте также:  Расшифровка анализа крови сделан на анализаторе

Потому что слово «положительный» ассоциируется с чем-то хорошим, благоприятным.

Но на самом деле всё обстоит совсем наоборот.

Позитивность означает присутствие в организме определенного возбудителя.

Поэтому после положительный результат означает, что вам будет назначено лечение.

Если же он отрицательный, это действительно повод для того, чтобы обрадоваться.

Потому что такой результат значит, что инфекции, на которую проводилось исследование, у вас нет.

Когда сдаются ПЦР анализы

Чтобы результаты ПЦР были максимально достоверными, сдавать их нужно не раньше, чем начнется интенсивное выделение возбудителя во внешнюю среду.

Обычно на обследование идут либо после появления симптомов, либо через 2 недели после незащищенного полового акта.

ПЦР может дать положительный результат и раньше: часто его получают уже через несколько дней после заражения.

Но если слишком поторопиться, возрастает вероятность ложноотрицательного результата.

Потому что бактериальных клеток или вирусных частиц в структурах урогенитального тракта ещё мало.

Они могут не попасть в соскоб в достаточном для определения количестве.

В случае появления симптоматики делать ПЦР можно сразу.

С высокой вероятностью исследование даст положительный результат.

Как выглядит бланк результатов ПЦР анализов

Бланк результатов в основном выглядит как таблица.

В ней указаны строки с наименованиями инфекций, на которые проводится обследование.

Указаны не названия заболеваний, а конкретные виды микроорганизмов.

Например:

  • Хламидия трахоматис;
  • Гарднерелла вагиналис;
  • Кандида альбиканс и т.д.

В столбцах напротив соответствующих видов указаны:

  • результаты анализа (обнаружено, не обнаружено, либо количественные значения);
  • единицы измерения (обычно копии ДНК на мл);
  • референсные значения (то есть, норма – какие показатели должны быть у здоровых людей).

Указание референсных значений необходимо, так как некоторые микроорганизмы, определяемые в ходе ПЦР, могут присутствовать в урогенитальном тракте в норме.

К примеру, может проводиться исследование на лактобактерии, которые составляют основу биоценоза здоровой женщины.

Если же диагностируется кандидоз, то нормальным считается наличие грибков в количестве 10 в 3 степени копий ДНК и меньше.

Противоречия результатов ПЦР и ИФА

Бывают случаи, когда разные исследования дают противоречивые результаты.

Например, ПЦР отрицательный, антитела – положительный.

Наиболее частая причина такого явления состоит в том, что бактерии действительно нет в урогенитальном тракте.

Антитела обнаруживаются из-за перенесенной в прошлом инфекции.

В целом ИФА не обладает высокой специфичностью.

Ложноположительные результаты не являются редкостью для этого теста.

Но возможна и обратная ситуация.

Отрицательный ПЦР может оказаться ложным.

Например, если мазок взят не из того участка тела, где обитают бактерии.

К примеру, пациент страдает орофарингеальной гонореей.

У него гонококки обитают во рту, а мазок для ПЦР взяли из уретры.

Естественно, результаты покажут, что никаких гонококков нет.

Но в крови появятся антитела, поэтому ИФА будет положительным.

Теперь рассмотрим обратную ситуацию.

ПЦР показывает наличие инфекции, но антител нет.

Причин может быть несколько:

  • исследование проведено слишком рано, антитела ещё не успели синтезироваться;
  • патоген обладает низкой иммуногенностью (например, при кандидозе иммуноглобулины появляются лишь в случае осложнений);
  • произошло загрязнение исследуемого материала, в него попали бактерии, которые были обнаружены в ходе ПЦР (такое случается очень редко).

Если ПЦР и ИФА вступают в противоречие, то доверять нужно скорее ПЦР.

Потому что эта методика более точная.

Ложноположительные и ложноотрицательные результаты встречаются очень редко.

Ложноотрицательный тест возможен, если инфекция была недавно пролечена.

Потому что в ходе ПЦР определяется ДНК не только живых, но и погибших микроорганизмов.

Но в этом случае противоречия с ИФА обычно не наблюдается.

Потому что антитела в крови сохраняются длительное время после завершения курса терапии ЗППП.

Какой врач проводит расшифровку ПЦР исследований

При необходимости сделать ПЦР и расшифровать результаты, обращайтесь в нашу клинику.

Здесь работают опытные венерологи.

ПЦР – один из наиболее часто используемых тестов в нашем медицинском учреждении.

Наши преимущества:

  • безболезненное взятие мазков для ПЦР по авторской методике;
  • материал отправляется в лучшие лаборатории города, что обеспечивает высокую точность и достоверность проводимых исследований;
  • возможность анонимной диагностики.

После интерпретации полученных результатов доктор либо констатирует отсутствие инфекций, либо подберет необходимое лечение в случае их наличия.

Для консультации по результатам ПЦР обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

Источник