Кровь у рыбы на анализ

Кровь у рыбы на анализ thumbnail
Подробности

Просмотров: 4059

По изменениям, происходящим в крови, можно судить о патологических процессах, протекающих в организме рыб. Результаты исследований крови с учетом клинических, эпизоотологических и патологоанатомических данных позволяют уточнить диагноз болезни (табл. 12, 13, 14, 15).

Таблица 12. Значение клинических показателей крови рыб

ПоказательНизкие значенияВысокие значения
ЭритроцытыАнемия, гемолиз, нарушение осморегуляции, ровреждение жабрСтрессовая пилицитамия, дегидрадация, сгущение крови.
лейкоцитыСтрессовая лейкоперияЛейкоцитоз — реакция на бактериальную инфекцию
ТромбоцитыСлабая свертываемость кровиТромбоцитоз из-за хронического стресса
ХлоридыНарушение осморегуляцииСгущение крови
ХолестеринНарушение жирового обменаХронический стресс, жировая перегрузка при кормлении
Время свертывания кровиОстрый стресс, тромбоцитопенияВоздействие антибиотиков или сульфамидов
ГлюкозаКрайнее истощениеОстрый или хронический стресс
гликогенХронический стресс, истощениеНесбалансированная диета, повреждение печени
ГематокритАнемия, гемолиз, повреждение жабрСгущение крови, стресс, полицитемия
ГемоглобинАнемия, гемолиз, повреждение жабрСгущение крови, стресс, полицитемия
МетгемоглобинНормаВоздейтвие нитритов и некоторых других токсикантов, пересыщение воды кислородом
БелокИстощение, инфекционные болезни, повреждение почек, неправильное кормлениеСгущение крови, нарушение водного баланса, гемолиз, интенсивный рост гонад
Таблица 13. Показатели красной крови у пресноводных рыб

РыбаМасса, гГематокрит, %Гемоглобин, г%Эритроциты млн/мклПримечание
Щука24-441-2Озеро, разновыростные группы
Белый толстолобик16,04311,42,2Пруд, весна — лето
Белый толстолобик14042112,1Пруд, осень
Пестрый толстолобик30-377,5-8,51,14-2,0Корм — сухие сине-зеленые + комбикорм
Белый амур27328,61,8Пруд, весна
 320349,61,9Пруд, осень
Карп178,91,8Лето, естественные условия
Карп10-227,5-8,81,4-1,7Зимовка, ноябрь — декабрь
Карп10-228,2-8,71,3-1,6Зимовка, февраль — март
Карп200-3508,6-9,91,4-1,7Лето, июнь — июль
Карп400-500388,6-10,41,14-1,44Осень
Таблица 14. Количество лейкоцитов в крови у рыб, тыс/мкл

РыбаВозрастКоличество лейкоцитовПримечание
Лещ45-120Сезонные колебания
Угорь90
Щука28-110Сезонные колебания
Судак35-95Сезонные колебания
Голавль40Сезонные колебания
Карась51
Линь52
Карп0+14-17Пруд
Карп, 20-26 г9-23Пруд
Карп, 300-700 г22-23Пруд
Карп, 1400 г43-59Пруд
Карп23Самец-производитель
Карп16Самка-производитель
Белый толстолоб1+98±14Пруд
Пестрый толстолобик1+62±8Пруд
Радужная форель34Пруд
Ручьевая форель26Пруд
Таблица 15. Состав и свойства крови рыб

ПоказателиБелугаСтерлядьОсетрСеврюгаЛососьФорельЩукаЛиньЛещКарасьСазанОкуньСом
Эритроциты, млн/мкл0,81,50,81,61,31,21,41,81,71,62,61,51,4
Гемоглобин, г%8,710,311,511,39,810,07,98,99,68,99,79,17,0
Гематокрит, %36,043,047,040,036,030,020,022,024,023,027,029,020,0
Общее количество крови к массе тела, %2,83,22,53,02,32,42,01,93,94,22,51,21,6
Количество лейкоцитов, тыс/мкл40,432,025,537,552,049,051,043,040,038,0
Лейкоцитарная формула, %             
эозинофилы
нейтрофилы12,018,09,04,018,015,06,09,011,0
полиморфоядные15,02,04,01,02,06,03,04,02,0
лимфоцыты71,064,084,093,077,076,088,085,076,0
моноциты2,016,03,02,03,03,03,02,01,0
Белок общий, %5,15,96,35,86,73,64,75,17,18,56,8

Кровь для исследования берут пастеровской пипеткой из сосудов гемального канала хвостового стебля. Место взятия обрабатывают 70%-ным спиртом, просушивают ватным тампоном.

Определение количества эритроцитов и лейкоцитов. Кровь набирают в смеситель меланжера, используемого для подсчета эритроцитов млекопитающих, до метки 0,5 или 1 и насасывают жидкость для окрашивания и разведения крови до метки 101 (раствор А: нейтральрот — 25 мг; натрий хлористый — 0,6 г, вода дистиллированная-100 мл; раствор Б: кристаллвиолет — 12 мг, натрий лимоннокислый — 3,8 мг, формалин — 0,4 мл, вода дистиллированная — 100 мл). Раствор А набирают до половины расширения смесителя, раствор Б — до метки 101. (Готовят эти растворы непосредственно перед исследованием, хранить можно в холодильнике не более недели.) Под действием растворов ядра лейкоцитов окрашиваются в фиолетово-красный цвет, а цитоплазма — в розовый. В эритроцитах ядра окрашиваются в синий цвет.

После наполнения снимают резиновую трубку со смесителя, захватывают его между большим и средним пальцами и сильно встряхивают 2-5 мин, после чего выпускают из капилляра 3 капли жидкости, а 4-й каплей заряжают счетную камеру.

Принцип метода сводится к подсчету форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов) в камере Горяева. Сначала под малым увеличением микроскопа находят сетку и устанавливают равномерность распределения клеток, а затем подсчитывают их. Эритроциты считают в 5 квадратах (80 малых), расположенных по диагонали камеры Горяева. В каждом малом квадрате учитывают эритроциты, находящиеся внутри него, и те, которые касаются или лежат на его верхней и левой линиях.

Читайте также:  Показывает анализ крови из пальца спид

Количество эритроцитов определяют по формуле

где m — общее количество клеток в 80 квадратах; γ — степень разведения крови; Х — число эритроцитов в 1 мкл.

Лейкоциты подсчитывают в 25 больших квадратах, разделенных на малые (400 малых), и определяют по формуле

где m — общее количество лейкоцитов; γ — степень разведения крови; Х — число лейкоцитов в 1 мкл; 400 — число просмотренных малых квадратов.

Выведение лейкоцитарной формулы. У рыб различают следующие виды лейкоцитов: лимфоциты, моноциты, базофилы, нейтрофилы, эозинофилы (цв. табл. II). Некоторые авторы выделяют группу полиморфноядерных лейкоцитов.

Лимфоциты — небольшие клетки, немного меньше эритроцитов. Почти вся клетка заполнена ядром, цитоплазма видна в виде узкого ободка вокруг ядра. По Романовскому ядро окрашивается в фиолетово-розоватый цвет, цитоплазма — в голубоватый.

Моноциты — самые крупные клетки, ядро бобовидное, расположено эксцентрично, цитоплазма вакуолизирована, зернистость отсутствует.

Нейтрофилы — круглые клетки, имеют овальное, палочковидное или сегментированное ядро, расположенное у края клетки. В зависимости от возраста и формы ядра клетки разделяют на миелоциты, юные, палочкоядерные и сегментоядерные. Зернистость в цитоплазме окрашивается по Романовскому — Гимзе в фиолетово-розовый цвет.

Эозинофилы — по морфологии сходны с нейтрофилами. В цитоплазме находятся крупные многочисленные зернышки розового цвета.

Базофилы отличаются наличием в цитоплазме зерен фиолетового цвета.

Высушенный и фиксированный метанолом или спирт-эфиром (1:1) мазок крови окрашивают краской Романовского — Гимза. Раствор краски предварительно разводят нейтральной дистиллированной водой (1-2 капли на 1 мл воды). Разведенную краску подслаивают под предметное стекло, положенное мазком вниз, или красят мазки в контейнерах. В зависимости от температуры воздуха и качества краски мазок окрашивают 30-60 мин. После окраски препарат быстро ополаскивают водой, высушивают на воздухе, просматривают под микроскопом с иммерсионным объективом. Обычно просчитывают 200 лейкоцитов общепринятым методом.

Определение содержания гемоглобина.

Метод Сали. В градуированную пробирку гемометра Сали до метки 2 пипеткой наливают децинормальный раствор соляной кислоты. Капиллярной пипеткой набирают кровь до метки 20 мкл и вносят в пробирку с соляной кислотой. Затем перемешивают стеклянной палочкой и оставляют на 5 мин. После чего в пробирку по каплям доливают дистиллированную воду, перемешивают и подбирают цвет рабочего раствора до совпадения с цветом жидкости в стандартных пробирках.

Количество гемоглобина крови отсчитывают по нижнему мениску на градуированной пробирке. Выражают в г%.

Фотометрический метод. Мерной пипеткой в пробирку осторожно наливают 5 мл трансформирующего раствора (бикарбонат натрия — 1 г, красная кровяная соль — 0,2, цианистый калий или натрий — 0,05 г, дистиллированная вода — до 1 л). Пипеткой от гемометра Сали добавляют 20 мкл крови, промывая ее раствором путем попеременного вдувания и выдувания. Содержимое пробирки перемешивают и оставляют на 20 мин в холодильнике. Затем раствор из пробирки наливают в кюветы ФЭК и, используя зеленый светофильтр, проводят измерения. Расчет гемоглобина (г/л) производят по формуле Х=D540 ·367,1 г/л, где D540 — показания ФЭК; 367,1 — коэффициент перерасчета.

Источник

Кровь у рыбы на анализ

ТОП 10:

Наименование
показателей
Лосось Форель Щука Линь Лещ Карась Сазан,
Карп
Окунь Сом
Эритроциты
млн/мкл
1,3 1,2 1,4 1,8 1,7 1,6 2,6 1,5 1,4
Гемоглобин
г%
9,8 10,0 7,9 8,9 9,6 8,9 9,7 9,1 7,0
Гематокрит % 36,0 30,0 20,0 22,0 24,0 23,0 27,0 29,0 20,0
Кол-во лейкоцитов
тыс/мкл
 
32,0
 
25,5
 
37,7
 
52,0
 
49,0
 
51,0
 
43,0
 
40,0
 
38,0

Таблица 2

Лейкограмма прудовых рыб

Виды клеток Л е й к о г р а м м а (%)
Наименование
показателей
Лосось Форель Щука Линь Лещ Карась Сазан,
Карп
Окунь Сом
Эозинофилы
Нейтрофилы 12,0 18,0 9,0 4,0 18,0 15,0 6,0 9,0 11,0
Полиморфноя-дерные 15,0 2,0 4,0 1,0 2,0 6,0 3,0 4,0 2,0
Лимфоциты 71,0 64,0 84,0 93,0 77,0 76,0 88,0 85,0 76,0
Моноциты 2,0 16,0 3,0 2,0 3,0 3,0 3,0 2,0 1,0

Биохимический метод

При биохимическом исследовании определяют такие показатели крови рыб как: уровень глюкозы, кальция, фосфора, общего белка, билирубина, ЩФ, ЛДГ, АлАт, АсАт и др.

Иммунологический метод

Позволяет определять в сыворотке крови фракции белков: альбуминов, α, β, γ-глобулинов, иммуноглобулинов и т.д.

Серологический метод

Позволяет в сыворотке крови рыб выявить специфические антитела, либо антиген и установить напряженность иммунитета к возбудителям заразных болезней.

В ихтиопатологии применяют прямые (РА – реакция агглютинации, РП – реакция преципитации) и непрямые (РН – реакция нейтрализации, РИГА – реакция иммунной гемагглютинации, РПГ – реакция пассивной гемагглютинации, ОФР – опсорно-фагоцитарная реакция, РНИФ – реакция непрямой иммунофлуоресценции) серологические реакции.

Способы взятия крови у рыб

Кровь для исследования у рыб берется из сердца, хвостовой артерии, культи хвоста или жаберных вен. Выбор способа взятия крови зависит от размера рыбы и объема, необходимого для анализа.

Читайте также:  Биохимического анализа крови поджелудочная железа

Взятие крови проводят, предварительно сняв чешую, удалив слизь и, обработав кожу 70 %-м спиртом.

1. При взятии крови из сердца, место укола находится в середине отрезка, соединяющего основание грудных плавников (у форели) и чуть выше этой точки – у карповых рыб. Иглу вводят в место укола, под углом 45°, относительно фронтальной плоскости.

2. При взятии крови из хвостовой артерии место укола находится в точке, образованной при условном пересечении средней линии и линии, идущей перпендикулярно от анального отверстия у сеголетков, и от заднего края анального плавника – у карповых рыб старшего возраста.

3. При взятии крови из культи хвоста, срезают спинной и анальный плавники, удаляют чешую, слизь, протирают кожу спиртом, затем отсекают хвостовой стебель по медиальной линии позади анального плавника и собирают кровь в стерильную посуду.

4. Взятие крови возможно из жаберных вен. Предварительно удаляют жаберную крышку и вводят инъекционную иглу в вену, у основания одной из жаберных дуг.

Из полученной крови сразу же готовят тонкие мазки, которые окрашивают по Паппенгейму. Для этого высушенные мазки погружают в кювету с раствором Май-Грюнвальда (0,3–0,5 г эозинметиленового синего + 100 мл метилового спирта) на 5 минут, затем промывают дистиллированной водой (рН = 6,81) в течение 2-х минут и докрашивают в растворе Романовского 25–30 минут. Окрашенные мазки промывают водопроводной водой и высушивают на воздухе. В каждом мазке подсчитывают 100 клеток и выводят лейкограмму.

Специальные лабораторные методы исследований:

1. Паразитологический

2. Микологический

3. Микробиологический

4. Вирусологический

5. Биологическая проба.

Паразитологическое исследование

Это последовательное вскрытие органов и тканей с целью обнаружения паразитов. Для исследования берется не менее 15 живых или только что уснувших рыб каждого вида и возраста и не менее 25-ти экземпляров личинок рыб.

Для обнаружения паразитов используют компрессионный способ, когда ткань или орган помещают между стеклами, сдавливают до прозрачности, а потом исследуют под микроскопом. Для определения интенсивности инвазии гельминтов и ракообразных учитывают в абсолютных величинах, а простейших – в 25-ти полях зрения микроскопа (7 х 10, 7 х 40 в зависимости от величины паразита).

Порядок проведения работы следующий:

1. Осмотр рыбы (крустацеозы, бделлозы, постодиплостомоз, филометроидоз). Соскоб скальпелем слизи с поверхности тела и исследование ее под микроскопом в капле воды или изотонического раствора натрия хлорида под покровным стеклом (простейшие).

2. Берут кровь из сердца или хвостовой артерии и готовят мазок, который фиксируют 5 минут в метиловом спирте и окрашивают по методу Романовского.

Сразу, после взятия крови, вскрывают полость сердца, выпускают кровь на стекло и под микроскопом исследуют на наличие сангвиникол.

3. Микроскопируют плавники (простейшие, моногенеи, рачки).

4. Исследуют жабры. Удаляют жаберные крышки, с двух сторон отсекают жаберные дуги и исследуют их на наличие крупных паразитов, затем делают соскоб и просматривают его под малым и большим увеличении. Скальпелем отделяют жаберные лепестки от дуг и компрессионным способом просматривают под микроскопом (простейшие, моногенеи, личинки трематод, цисты микроспоридий).

5. Проводят исследование глаз. Отделяют глазное яблоко, извлекают хрусталик. Компрессионным способом исследуют под микроскопом (диплостомоз, миксоспоридии).

6. Вскрывают полость тела, осматривают и извлекают внутренние органы: кишечник и, связанные с ним, органы (печень, желчный пузырь, селезенку), кишечник отсекают у ротовой полости и анального отверстия; гонады, плавательный пузырь, почки, мочевой пузырь. Отпрепарированные органы помещают в бактериологические чашки, следя за тем, чтобы они не соприкасались друг с другом и были постоянно влажными.

Осматривают брюшную полость (личинки цестод, нематод, трематод). Затем исследуют желчный и мочевой пузыри, их разрезают и изучают содержимое под микроскопом (амебоиды, миксоспоридии, трематоды, инфузории). Исследуют печень, селезенку, гонады, почки, жировую ткань. Небольшой кусочек от каждого органа исследуют под микроскопом под микроскопом на наличие спор миксоспоридий. Затем компрессионным способом под МБС (трематоды, цестоды, нематоды).

Кишечник разделяют на небольшие части и каждую разрезают вдоль, производя осмотр содержимого (микро- и макроосмотр). Затем под микроскопом исследуют соскоб со слизистой оболочки кишечника и компрессионно изучают кишечник (простейшие, трематоды, цестоды, нематоды).

Плавательный пузырь осматривают внешне, а затем делают соскоб и компрессионно исследуют под микроскопом.

Мускулатуру освобождают от кожи, делают через 0,5 мм поперечные разрезы, визуально осматривают, раздвигая их препаровальной иглой. Компрессионно исследуют 1 см мускулатуры, (цестоды, нематоды, трематоды).

Микологическое исследование

Для микологического исследования берут пробы от только что погибших или живых рыб. В замороженном виде их можно хранить до 3-х суток, а в консерванте до 2-х суток.

Подтверждение или исключение микозной природы болезни осуществляется с помощью следующих методов:

микроскопическое исследование – наиболее важный метод обнаружения и исследования грибов, позволяющий установить наличие гриба, его локализацию, а иногда и вид;

гистологическое исследование – метод исследования пораженной ткани при микозах, является основным методом диагностики, так как многие грибы невозможно культивировать на искусственных питательных средах;

Читайте также:  Что можно есть перед сдачей общего анализа крови из вены

постановка биопробы.

Культивирование грибов позволяет изучить морфологию колоний, типичные формы спороношения, сохранить культуры и получить заразный агент для биопробы.

Бактериологическое исследование

Исследование основано на бактериоскопическом и серологическом методах исследования.

Бактериоскопический метод исследования позволяет обнаружить в патматериале бактерии и ориентировочно диагностировать заболевание (микобактериоз, вибриоз). Бактериологический метод исследования имеет наиболее важное значение, так как позволяет получить чистую культуру микробов, изучить их морфо-культуральные свойства, биохимические свойства, определить вирулентность и чувствительность к антибиотикам, что особенно важно при выборе лечебных препаратов.

Серологический метод применяют при иммунологических исследованиях: дополнительном типировании возбудителя, выявлении специфических антител в сыворотке крови больных рыб.



Источник

Изобретение относится к рыбоводству, а именно к способу забора крови у рыб небольшой массы для последующего проведения физиолого-биохимических анализов. Для этого применяют дополнительные меры, основанные на стимулирующем воздействии на систему кровотока рыбы. Увеличение объема крови достигается за счет того, что перед отсечением хвостового стебля у рыбы проводят стимуляцию ее сердечной деятельности. Стимуляцию осуществляют путем регулярных массирующих и сдавливающих движений пальцев исследователя в области сердца изучаемой особи. Рыбу удерживают на весу головой вверх, покачивают вверх и вниз, вправо и влево. Это оказывает воздействие на движение крови к хвостовой артерии и объем забираемой крови увеличивается в 2 раза. Изобретение позволяет получить достаточное количество биологического материала для проведения обширного перечня физиолого-биохимических анализов крови рыб. 2 з.п. ф-лы, 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к рыбоводству, в частности к физиологии, а именно к забору у рыб крови, последующее отделение сыворотки для дальнейшего их физиолого-биохимического анализа.

Известен способ получения крови у рыб путем отсечения хвостового стебля (см. «Инструкция по физиолого-биохимическим анализам рыбы». М. — 1986, 52 с. / ВНПО по рыбоводству ВНИИПРХ. Составители: В.В. Лиманский, А.А. Яржомбек, Е.Н. Бекина, С.Б. Андронников; стр. 23).

Недостаток данного способа заключается в малых количествах забираемой крови, если анализируемая особь небольшой массы и размера.

Целесообразно разработать способ, который увеличит количество крови, забираемой для анализа в месте среза хвостового стебля.

Цель изобретения — увеличение количества забираемой крови, а также получаемой из нее сыворотки.

Цель достигается за счет дополнительных мер, основанных на стимулирующем воздействии на систему кровотока рыбы.

Сущность изобретения заключается в следующем.

При заборе крови у рыб методом отсечения хвостового стебля используют дополнительные меры: разминание, покачивания особи, которые воздействуют на систему кровотока рыб.

Увеличение собираемой крови и получаемой в дальнейшем из нее сыворотки достигается тем, что перед отсечением хвостового стебля у рыбы, которую удерживают на весу головой вверх, проводят стимуляцию сердечной деятельности. Стимуляцию осуществляют путем регулярных массирующих и сдавливающих движений пальцев исследователя в области сердца изучаемой особи, покачиванием ее вверх и вниз, вправо и влево, что оказывает воздействие на движение крови к хвостовой артерии. После отсечения хвостового стебля в момент забора крови манипуляции с особью продолжают.

Способ осуществляют следующим образом

У особи тщательно обрабатывают поверхность, удаляя слизь марлей, держат рыбу головой вверх и проводят стимуляцию сердечной деятельности путем регулярных массирующих и сдавливающих движений пальцев экспериментатора в области сердца рыбы, покачиванием ее вверх и вниз, вправо и влево. Отрезают хвостовой стебель, осуществляют забор крови, продолжая стимулирующие манипуляции.

При сворачивании крови быстро обрабатывают досуха место забора крови, обильно и интенсивно обрабатывают антикоагулянтом (гепарином) срез хвостового стебля. Повторяют вышеописанные движения, необходимые для увеличения эффективности кровотока.

Примеры конкретного выполнения.

1. Забор крови у каспийской воблы (Rutilus rutilus caspicus) массой 100-150 г.

Традиционным способом забирают крови 2-3 мл. Сыворотка крови из такого количества крови либо не отбирается, либо ее количество составляет 0,5-0,9 мл.

Предлагаемый способ позволяет забрать 4-6 мл крови, количество получаемой в дальнейшем сыворотки составляет при этом 1,5-2 мл.

2. Забор крови у молоди русского осетра (Acipenser gueldenstaedtii) массой 90-120 г.

Традиционным способом забирают 1,5-2, 5 мл крови, из которой в последующем получают 0, 8-1, 0 мл сыворотки.

При использовании предлагаемого способа показатели следующие. Забор крови — 4-5 мл, из которой получают 1,5-2,0 мл сыворотки.

Результаты забора крови у рыб различного вида массой до 150 г сведены в таблицу.

Кровь у рыбы на анализ

Таким образом, количество забираемой крови увеличивается в 2 раза, собирают достаточное количество биологического материала для проведения обширного перечня физиолого-биохимических анализов крови.

Заявляемый способ значительно расширяет возможности проведения физиолого-биохимических анализов рыб.

1. Способ забора крови у рыб небольшой массы, включающий забор крови путем отсечения хвостового стебля, отличающийся тем, что используют стимулирующее воздействие на систему кровотока рыбы.

2. Способ забора крови у рыб небольшой массы по п. 1, отличающийся тем, что стимулирующее воздействие осуществляют путем регулярных массирующих и сдавливающих движений пальцев исследователя в области сердца изучаемой особи, покачиванием ее вверх и вниз, вправо и влево.

3. Способ забора крови у рыб небольшой массы по п. 1, отличающийся тем, что стимулирующее воздействие осуществляют до отсечения хвостового стебля и после его отсечения в момент забора крови.

Источник