Экспресс анализ крови на грипп

Определение РНК вируса гриппа в соскобе эпителиальных клеток ротоглотки и носоглотки методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени.

Грипп – острая респираторная вирусная инфекция, передаваемая воздушно-капельным путем. 

Возбудители гриппа – РНК-содержащие вирусы, относящиеся к семейству Orthomyxoviridae, в котором выделяют три рода: Influenza A virus, Influenza B virus, Influenza C virus. 

Вирусы гриппа А и В ежегодно вызывают эпидемии большей или меньшей интенсивности практически во всех странах мира. Вирусы гриппа А широко распространены в природе, их выделяют у большинства зверей и птиц, в связи с чем они имеют высокий пандемический потенциал, так как способны преодолевать межвидовый барьер. Основной причиной возникновения эпидемий и пандемий гриппа является высокая вариабельность вируса вследствие изменений в его геноме. Это касается фрагментов, кодирующих поверхностные антигены вирусов типов А и В и определяющих их специфичность. 

Вирусы Influenza А и B поражают преимущественно верхние отделы дыхательных путей: нос, горло, трахею и реже бронхи. Однако симптомы общей интоксикации при гриппе доминируют над умеренными катаральными проявлениями. Обычно заболевание сопровождается резким повышением температуры, мышечными и головной болями, сильным недомоганием, сухим кашлем, болью в горле и слизистыми выделениями из носа. Для гриппа, обусловленного новым или значительно измененным вирусом (например, для гриппа птиц типа А(H5N1) и А(H7N9), реже А (H1N1) pdm 2009), характерно острейшее, молниеносное начало, развитие различных вариантов токсикоза (нейротоксикоза, инфекционно-токсического шока в сочетании с гемодинамическими расстройствами) и III степени ДВС-синдрома (гемокоагуляционного шока). 

Диагностика инфекции осуществляется комплексно, на основании анамнестических данных о контакте с больными гриппом и характерной клинической картины. Подтверждение диагноза возможно с помощью лабораторных исследований, что целесообразно при наличии клинических проявлений гриппа, в эпидемический сезон роста заболеваемости острыми респираторными инфекциями, при тяжелом течении респираторных болезней. 

В качестве базовых тестов могут быть использованы следующие лабораторные исследования: определение антигенов вируса гриппа в мазках слизистой носа и ротоглотки методом непрямой иммунофлуоресценции или иммунохроматографии; определение антител к антигенам вируса гриппа А/B в сыворотке крови методом ИФА. Результаты ИФА, как правило, оцениваются ретроспективно. Вследствие поздней диагностики они не влияют на коррекцию терапии, но применимы в научных целях и для эпидемиологического надзора и контроля за гриппом. Наиболее современным методом лабораторной диагностики гриппа является выявление РНК вируса методом ПЦР. 

Максимального уровня специфичности и чувствительности достигают тесты на основе ПЦР-ОТ (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени, позволяющие обнаруживать в биологическом материале РНК возбудителя инфекции.

Аналитические показатели: 

определяемый фрагмент – специфический участок нуклеиновой кислоты вирусов гриппа А (Influenza virus A) и гриппа В (Influenza virus B); 

специфичность обнаружения – отсутствие неспецифических реакций в отношении других вирусных и бактериальных возбудителей ОРЗ. 

Аналитическая чувствительность: 

вирус гриппа А (Influenza virus A) – 1х10^3 ГЭ/мл пробы; 

вирус гриппа В (Influenza virus В) – 1х10^3 ГЭ/мл пробы. 

Литература

1. Грипп у взрослых. Клинические рекомендации. МЗ РФ. 2017:57. https://cr.rosminzdrav.ru/#!/schema/909  
2. Грипп у детей. Клинические рекомендации. МЗ РФ. 2017:43. https://cr.rosminzdrav.ru/#!/schema/172  
3. Грипп у взрослых: методические рекомендации по диагностике, лечению, специфической и неспецифической профилактике. Под ред. академика, профессора А.Г. Чучалина, главного внештатного инфекциониста СЗФО проф. Т.В. Сологуб. — СПб.: Издательско-полиграфический комплекс «НП-Принт». 2014:192.  
4. Яцышина С.Б., Творогова М.Г., Шипулин Г.А., Малеев В.В. Лабораторная диагностика гриппа и других ОРВИ методом полимеразной цепной реакции. Лабораторная служба. 2017;6(3):238-267. https://doi: 10.17116/labs201763238-267.

ОБРАЗЕЦ (ПРОБА) ДЛЯ АНАЛИЗА

В качестве образцов для анализа используются мазки из носа.

1. Вынуть стерильный тампон из индивидуальной упаковки. Откинуть голову назад, высоко подняв подбородок. Ввести тампон в одну ноздрю и вращать его, мягко проводя по стенкам ноздри, с целью отбора большего количество клеток, а не только слизи. Вынуть тампон с пробой из ноздри.

2. Открутить колпачок флакона для разведения пробы и временно отложить. Ввести тампон с отобранной пробой внутрь флакона. Перемешать жидкость, энергично вращая внутри флакона тампон и периодически прижимая тампон к стенке флакона минимум 10 раз.

3. Приподнять тампон до середины флакона. Надавить на стенки флакона, активно сжимая впитывающую часть тампона внутри, и выжать наибольшее количество жидкости. Закрыть флакон отвинченным ранее колпачком. Выбросить тампон.
(См. рис. 1)

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

1. Вынуть тест-кассету из упаковки (запечатанного пакетика из алюминиевой фольги) непосредственно перед использованием. Выкинуть осушитель (силикагель), который находится внутри пакетика.

2. Положить тест-кассету на ровную горизонтальную поверхность так, чтобы окошко результатов было вверху. (См. рис. 2)

3. Встряхнуть флакон с растворенной пробой. Отломить (отрезать) кончик с колпачка. (См. рис. 3)

4. Ввести 4 капли из флакона в круглое окошко тест-кассеты, помеченное стрелочкой или S. (См. рис. 4) Прочитать результат через 10 минут.

Подождать, когда появятся цветные линии. В зависимости от количества вируса, положительный результат можно увидеть через 5 минут после введения пробы. Чтобы быть уверенными в результате, необходимо подождать 10 минут. Для получения результата не следует ждать более 10 минут.

ТРАКТОВКА РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА

class=»padd-t-1″>

	Отрицательный Появляется одна ЗЕЛЕНАЯ линия в центральной части окошка результатов, напротив буквы С – линия контроля Вы не заражены вирусами гриппа типа А и В. Если по прошествии двух дней все еще будут проявляться симптомы гриппа, следует повторить анализ с новым тестом. Если результат снова отрицательный, обратитесь к врачу.
	ГРИПП А – положительный результат Кроме контрольной ЗЕЛЕНОЙ линии также появляется КРАСНАЯ линия в зоне, помеченной буквой Т – линия положительного результата для гриппа А. Вы заражены вирусом гриппа типа А. Немедленно обратитесь к врачу.
	ГРИПП В – положительный результат Кроме контрольной ЗЕЛЕНОЙ линии, также появляется СИНЯЯ линия в зоне, обозначенной буквой Т – линия положительного результата для гриппа В. Вы заражены вирусом гриппа типа В. Обратитесь к врачу.
	Недействительный Когда не появляется ЗЕЛЕНАЯ линия контроля, несмотря на то появились или нет одна или обе линии результата (КРАСНАЯ / СИНЯЯ). Проверьте правильность проведения анализа и повторите его с новым тестом.

ЗАМЕЧАНИЯ

Интенсивность линий в зоне результата (КРАСНАЯ / СИНЯЯ) может быть различной, в зависимости от количества вируса в пробе. Однако данный тест не определяет количество вируса в пробе.