Иммуноферментный анализ крови на спид

Метод определения
Иммуноферментный анализ (ИФА).

Исследуемый материал
Сыворотка крови

Комбинированное выявление антител к ВИЧ типов 1 и 2 и антигена р24 ВИЧ, качественный тест.

Внимание. При положительных и сомнительных реакциях, срок выдачи результата может быть увеличен до 10-ти рабочих дней. ВИЧ (вирус иммунодефицита человека), вызывающий СПИД (синдром приобретенного иммунодефицита) — принадлежит к семейству ретровирусов. Передается от человека к человеку при использовании загрязненных игл и шприцев для внутривенного введения наркотиков или терапевтических процедур, при сексуальных контактах, как гетеро, так и гомосексуальных. Передача вируса может произойти при переливании инфицированной крови и ее продуктов, донорстве органов или семенной жидкости, у медицинских работников — при ранении инфицированными иглами или инструментами. Заражение ВИЧ возможно путем его передачи от инфицированной матери ребенку (вертикальный путь), хотя современные методы профилактики с применением антиретровирусной терапии, при выполнении всех рекомендаций, позволяют снизить такой риск до минимума.

В патогенезе заболевания основное значение имеет поражение CD4+ лимфоцитов (субпопуляция лимфоцитов, выполняющих важнейшие функции в регуляции и осуществлении иммунного ответа). Попадая в организм человека, ВИЧ поражает CD4+ лимфоциты, макрофаги и некоторые другие типы клеток. Присутствие ВИЧ со временем вызывает нарушение иммунной системы из-за избирательного уничтожения им иммунокомпетентных клеток. Это приводит к снижению иммунитета против вирусных, бактериальных, грибковых, протозойных, паразитарных, опухолевых заболеваний — развитию синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД). В соответствии со статистикой, раннее выявление инфекции и применение современной терапии значительно улучшают показатели выживаемости.

Процесс взаимодействия вируса с клеткой включает ряд стадий: связывание вируса с клеткой, освобождение его от оболочки, проникновение в цитоплазму, синтез ДНК по вирусной РНК, встраивание вирусной ДНК в геном клетки-хозяина. После этого начинается латентная стадия инфекции. В таком состоянии провирусная ДНК может существовать некоторое время, не проявляя активности и не влияя на жизнедеятельность клетки-хозяина. Пока нет экспрессии вирусных белков, нет и иммунного ответа на вирус. Антитела к ВИЧ, характеризующие иммунный ответ организма, появляются после активации вирусной ДНК и начала активного размножения вируса. Длительность латентного периода зависит от ряда факторов, включая и индивидуальные генетические особенности организма.

Антитела к ВИЧ могут появиться, начиная со второй недели после инфицирования; их содержание увеличивается в течение 2-4-х недель и сохраняется на протяжении многих лет. У 90-95% инфицированных они появляются в первые три месяца после заражения, у 5-9% – в период от трех до шести месяцев, у 0,5-1% – в более поздние сроки.

В первые недели инфекции, еще до появления антител к вирусу (т.е. до сероконверсии), в образцах сыворотки или плазмы можно выявить присутствие антигенов ВИЧ, в том числе его капсидного белка р24. Позже, после сероконверсии, он обычно становится недетектируемым.

Комбинированные тест-системы 4-го поколения, к которым относится тест HIV Ag/Ab Combo (Architect, Abbott), выявляют как антитела к ВИЧ 1 и 2 типов, так и антиген р24 ВИЧ, что позволяет проводить раннее обнаружение инфекции. К особым характеристикам применяемого в лаборатории ИНВИТРО скринингового теста для выявления ВИЧ-инфекции стоит отнести высокую специфичность исследования (> 99,5%); 100% чувствительность анализа к антителам, характерным для периода сероконверсии, и чувствительность теста к антигену р24 порядка 18 пг/мл.

Порядок проведения лабораторного обследования на ВИЧ строго регламентирован приказами МЗ РФ и включает в себя этап скринингового (отборочного) исследования наличия антител к ВИЧ иммуноферментными (ИФА) методами, разрешенными к использованию, и этап верификационного (подтверждающего) более развернутого исследования в лаборатории городского центра СПИД. Следует отметить, что даже лучшие скрининговые ИФА-системы не гарантируют 100% специфичности, то есть существует некоторая вероятность получения неспецифических, ложноположительных результатов, связанных с особенностями сыворотки крови пациента. Поэтому положительный результат скринингового ИФА обследования может не подтвердиться в подтверждающих тестах, после чего пациенту выдадут отрицательный или неопределенный результат. При неопределенном результате подтверждающего исследования тестирование следует повторить в динамике через 2-3 недели.

Лабораторная диагностика ВИЧ инфекции у детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, имеет свои особенности. В их крови до 18-ти месяцев с момента рождения могут циркулировать материнские антитела к ВИЧ (класса IgG). Отсутствие антител к ВИЧ у новорожденных не означает, что вирус не проник через плацентарный барьер. Дети ВИЧ-инфицированных матерей подлежат лабораторно-диагностическому обследованию в течение 36-ти месяцев после рождения.

Источник

ВИЧ – бич нашего поколения. Какие существуют методы для диагностики ВИЧ, углубленная информация о ИФА-тесте на ВИЧ. Как сдавать, как трактовать результаты анализа.

ВИЧ. Причины и последствия

Вирус иммунодефицита человека – одна из самых страшных инфекций для нашего поколения.

ВИЧ деструктивно влияет на нашу иммунную систему, и если вовремя не остановить прогресс заболевания, он может трансформироваться в синдром приобретенного иммунодефицита. ВИЧ распространяется через непосредственный контакт партнеров при сексуальном акте через мужские и женские половые органы. Еще одной причиной заражения может стать попадание вируса через кровь. Это происходит вследствие использования нестерильных инструментов, переливанием зараженной крови и даже через поколения: ребенку от инфицированной матери при кормление грудью.

До сих пор ученые по всему миру ломают голову над созданием лекарства нового поколения, способного излечить от СПИДа, однако, несмотря на большие темпы научного прогресса, вирус иммунодефицита человека продолжает распространяться по планете.

ИФА – метод диагностики ВИЧ

Учеными поколения 20-го века разработано несколько методов диагностики ВИЧ, важнейшим из которых считают иммуноферментный анализ. ИФА на ВИЧ стали проводить относительно недавно – в начале девяностых годов. С течением времени метод оттачивался, приобретал новые детали. Теперь достоверность метода ИФА одна из самых высоких – около 98%. Соответственно, такой метод проводится все чаще.

ИФА – первый анализ, с которым сталкивается пациент при обследовании на ВИЧ. Метод ИФА определяет наличие в крови антител. Если тест находит присутствие антител в крови, значит, и вирус присутствует. Однако, информацию по этому тесту необходимо подкреплять и другими анализами, такими как иммунный блоттинг (ИБ) и метод последнего поколения – полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Антитела – специальные белковые соединения, которые продуцируют плазматические клетки после как реакцию на попадание в организм инфекции (антитела начинают образовываться через 1-2 месяца с момента заражения).

Причины возникновения ВИЧ

Врач выпишет вам направление на анализ, если вы контактировали с человеком, зараженным ВИЧ либо существует опасность инфицирования. К группе опасности заражения ВИЧ относят поколения людей:

проходящих в течение месяца курс инъекционного лечения;
имеющих сексуальные отношения без специальных средств предохранения;
переносчиков инфекций, передающихся во время сексуального контакта;
пациентам после прохождения процедуры переливания крови либо укола обнаружения причины свертывания крови в восьмидесятые годы.

Если у вас есть сомнения относительно вашего ВИЧ-статуса и опасения, связанные с возможностью заражения, рекомендуется незамедлительно обратиться за помощью в любое медицинское учреждение нашей страны для проведения комплексного обследования на ВИЧ. Результат на анализы получают в течение месяца. Людям в группе риска по ВИЧ рекомендуется проходить обследование через каждые 4 месяца.

Как сдать анализ

Какой-то особенной подготовки к сдаче анализа крови на ВИЧ не требуется, однако лучше придерживаться простейших правил:

лучше не кушать с вечера, а сдавать анализ натощак утром;
не советуют загружать организм физической работой;
употреблять здоровую пищу, воздержаться на некоторое время от сигарет и алкоголя;
для исключения ложных показателей теста не стоит сдавать анализ после лечения серьезных заболеваний.

Сама процедура сдачи анализа осуществляется довольно быстро, а вот исследование образца и определение показателей проходит от нескольких дней до половины месяца. В случае, если у вас есть боязнь уколов или вы склонны к головокружениям от вида крови, стоит заблаговременно известить об этом медперсонал.

Суть проведения анализа

Обычно перед сдачей анализа медицинский работник просит заполнить анкету, в которой вы подписываете пункт о согласии на проведение процедуры. Специалист предлагает брошюры для ознакомления, объясняет основные принципы проведения теста:

Кожный покров локтевого сустава пациента обрабатывается обеззараживающей жидкостью;
Пережимают локтевую вену специальной повязкой, ограничивая отток крови;
С помощью шприца производят забор материала из вены пациента, обычно 5 мл;
Использованный шприц выбрасывают, пациенту обрабатывают место инъекции и просят согнуть руку в локте, чтобы уменьшить кровотечение;

Вы, возможно, будете ощущать некоторый дискомфорт при проведении анализа и даже болезненные ощущения при использовании шприца. Дрожь в руке после забора крови – нормальное явление. Дышите ровно, не стоит волноваться – дискомфорт быстро исчезнет.

Проба материала подвергается тщательному лабораторному исследованию: в специальном медицинском приборе – чашке Петри находится жидкость с антигеном. Антиген – чужеродный микроорганизм, провоцирующий защитную реакцию организма. Испытуемую пробу крови смешивают с жидкостью в чашке Петри. Антитела, содержащиеся в крови, образуют соединения с антигеном, а специалист визуально фиксирует изменение окраски вещества. То есть результат теста положительный, антитела найдены, значит, инфекция есть в организме. Результат анализа действителен 4 месяца.

Осложнения при анализах

Как правило, проведение анализов не представляет опасности для здоровья, тем не менее, редкие случаи осложнений имеют место быть:

Обморочное состояние, если пациент слишком эмоционально переживает процедуру;
Образование гематомы на месте инъекции;
Попадание инфекции при инъекции;
Плохая свертываемость крови.

Если пациент подвержен этим рискам, болен гемофилией или испытывает другие проблемы, препятствующие нормальному проведению анализа, необходимо в первую очередь сообщить об этом врачу.

Расшифровка результатов ИФА

Как правило, положительный результат теста ИФА указывает на присутствие инфекции ВИЧ в организме. Реже случается, что тест дал ложноположительный результат, то есть при показаниях теста о наличии вируса, на самом деле вируса в организме нет. В таких случаях требуется пройти другие анализы, чтобы подтвердить достоверность анализа. Исходя из практики, ложноположительный результат на заражение ВИЧ может показать тест ИФА при болезни волчанки, сифилиса, болезни Лайма или других серьезных заболеваний нашего поколения.

Достоверность теста ИБ довольно высока – около 98%. Положительный результат на иммунный блоттинг в совокупности с положительным результатом теста ИФА с минимальной долей погрешности свидетельствует об инфицировании ВИЧ.

На начальном этапе инфицирования, когда антитела к вирусу еще не выработались или выработались в недостаточном для идентификации количестве (в так называемый период окна), результат анализа может быть ложноотрицательным. Как и при ложноположительном результате, анализ необходимо подтвердить другими тестами на ВИЧ. Медицинские исследования фиксируют стандартную длительность периода окна около месяца – от 14 до 56 дней. Очень редкими бывают случаи, когда антитела начинают продуцироваться через пол года с момента инфицирования.

Источник

Инфекция, вызванная вирусом иммунодефицита человека, – серьезный диагноз. Ошибки при диагностике могут привести к плачевным последствиям. Анализ ИФА на ВИЧ – наиболее доступный метод исследования, но не во всех случаях он информативен.

Что такое ИФА

ИФА – иммуноферментный анализ. Задача метода ИФА – выявление антител к вирусу иммунодефицита в биологическом материале. С помощью метода можно отследить присутствие в жидкости не самих вирусов, но только антител, вырабатывающихся в ответ на их присутствие. Иммуноферментный анализ широко используется при диагностике ЗППП. Он помогает выявить ВИЧ и другие инфекции, передающиеся половым путем.

Существует несколько видов ИФА: прямой вариант, косвенный вариант, метод «сэндвича». В любом случае методика основана на определении наличия антител, которые служат индикатором проникновения чужеродного агента. Чтобы выявить эти «метки», биологический компонент обрабатывают ферментами.

Иммуноферментный анализ определяет антитела с точностью 96 – 98%, погрешность незначительна. Она составляет 2 – 4%.

ИФА – метод диагностики ВИЧ

ИФА анализ на ВИЧ – это первый этап диагностики. Антигенами вируса иммунодефицита являются протеины p24, p15, p17, p31 и гликопротеины gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160.

Чтобы обнаружить вирусный белок, берут порцию крови из вены. Образец, направленный на исследование крови ИФА, обрабатывают иммуноферментными реагентами. Из крови выделяют сыворотку. Если в ходе исследования обнаруживаются антитела к ВИЧ, значит, в крови уже присутствует вирус.

Кровь сдают строго натощак. За 2 дня до анализа не рекомендуется есть жирную пищу и употреблять алкоголь. Следует за 14 дней прекратить прием противовирусных препаратов.

Преимущества метода:

сравнительно небольшая стоимость;
высокая стабильность реагентов;
высокая чувствительность;
короткий срок проведения;
минимальное влияние человеческого фактора.

Современные тест-системы для ИФА производят по мировым стандартам. Это повышает точность метода.

Иммуноферментный анализ не всегда дает достоверные результаты. После попадания вируса в кровь начинается латентная (скрытая) стадия развития. Период, пока вирусы не начали размножаться, и антитела еще не сформированы, называется «время серонегативного окна». Делать ИФА на этом этапе бессмысленно. Если заражение произошло, результат будет ложноотрицательным. Как быстро вирус себя обнаружит, зависит от того, какое количество опасных клеток попало в организм. При незащищенном половом акте или переливании зараженной крови этот срок будет минимальным.

Для высокой достоверности ИФА на ВИЧ исследование проводят трижды. Сроки сдачи ИФА на вирус иммунодефицита человека:

через 6 недель после вероятного контакта,
через 3 месяца,
спустя полгода.

ИФА 4 поколения на ВИЧ – метод, наиболее информативный на ранних сроках заражения. Его можно проводить уже через 1 месяц после предполагаемого инфицирования. Тест на ВИЧ 4 поколения является дорогостоящим по сравнению с аналогом 3-го поколения. Поэтому в государственных медучреждениях он используется как дополнительный метод диагностики. Бесплатно проводится тест 3. Если по его итогам однозначного ответа дать нельзя, пациента направляют на ИФА 4 поколения.

Важно! Сразу после инфицирования человек становится заразным. Он опасен для окружающих, даже когда еще не знает о своем диагнозе!

Если при ИФА выявлены антитела к антигенам ВИЧ, необходимо проводить дополнительные исследования. К таким относится полимеразная цепная реакция (ПЦР). Достоверность этого метода – 80%. С помощью ПЦР исследуют кровь, сперму и влагалищные выделения. Биологическую жидкость расщепляют в медицинском реакторе, затем подвергают обработке ферментами. В итоге получают данные о том, какова концентрация клеток ВИЧ в жидкой среде. Из-за большой погрешности (20%) при положительном результате дополнительно проводят иммунный блоттинг.

Следующий этап диагностики – тест Комбо (или иммунный блоттинг). Это высокочувствительное исследование (98% достоверности), которое проводят, если через 6 месяцев результаты ИФА неоднозначны.

Расшифровка результатов ИФА

Время расшифровки составляет от 24 до 48 часов. Если необходимо получить информацию срочно (требуется хирургическое вмешательство), расшифровку проводят за 2 часа. В провинциальных медицинских пунктах не всегда есть необходимые реагенты. Пробу берут по месту обращения, затем ее передают в областной центр. При таких обстоятельствах итог можно узнать через 1- 2 недели.

Результат иммуноферментного анализа может быть либо положительным, либо отрицательным; других вариантов нет.

Даже если при первичном и повторных ИФА итог был положительным, пациента нельзя признать ВИЧ-инфицированным. Возможна погрешность. Причины ложноположительного результата:

хронические заболевания;
длительные инфекционные заболевания;
беременность.

Поэтому результат анализа должен быть уточнен дополнительными исследованиями.

Если при проведении иммуноблоттинга на ВИЧ результат положительный (реактивный), человек считается ВИЧ-инфицированным, а отрицательный тест значит, что он здоров.

Проводится еще тест на вирусную нагрузку. Этот показатель при ВИЧ характеризуется количеством вирусных частиц в единице крови (анализ определяет РНК-частицы вируса). Нормой считается количество от 5000 до 15000 клеток вируса в единице крови.

Если цифра находится в этих пределах, либо меньше, вирус неактивен. Даже в случае дальнейшего подтверждения позитивного ВИЧ-статуса человек не заметит перемен в состоянии здоровья долгое время (10 – 15 лет). Если нагрузка менее 20000 клеток, это близко к норме. Когда число вирусных клеток увеличивается, следует незамедлительно начинать противовирусную терапию.

Что делать при положительном ИФА

Отрицательный иммуноферментный анализ 3-го и 4-го поколения показывает с высокой достоверностью (98%), что человек здоров. Для подтверждения положительного ВИЧ-статуса проведения ИФА недостаточно.

Если при первом и повторных тестах в крови обнаружены антигены ВИЧ, человек получает направление на иммуноблоттинг. Когда в ходе исследований выясняется, что человек имеет ВИЧ-позитивный статус, ему следует обратиться к врачу. Он определит вирусную нагрузку и назначит терапию.

Клетки вируса со временем адаптируются к назначенным препаратам. Чтобы контролировать эффективность лечения, тест ИФА периодически повторяют.

Иногда иммуноблоттинг показывает ложноотрицательный результат. Крайне редко вирус иммунодефицита 6 месяцев (и более) не проявляет себя. Это возможно, если в кровь попало незначительное количество клеток вируса. В 0,5% от общего числа случаев диагностировать заражение удается лишь через год. В 99,5% в течение полугода после инфицирования при проведении ИФА получится достоверный результат.

Даже при проведении высокоточных исследований остается вероятность ошибки, составляющая 2%. Не следует забывать о человеческом факторе. Чтобы исключить вероятность ошибки, тест можно провести в 2-х разных учреждениях.

Источник