Хемилюминесцентный анализ крови для чего
ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕ́НТНЫЙ АНА́ЛИЗ, метод химич. анализа, основанный на измерении светового потока хемилюминесценции; вариант люминесцентного анализа. Позволяет изучать элементарные акты химич. превращений, измерять скорость реакций, определять концентрации реагентов. Количественные определения в Х. а. основаны на корреляции между скоростью реакции, по которой проводят определение (индикаторная реакция), и интенсивностью хемилюминесценции. Таким образом, метод Х. а. относится к кинетическим методам анализа и его удобно применять в проточных системах (напр., в системах проточно-инжекционного химического анализа).
Скорость индикаторной реакции зависит от концентрации реагентов, концентрации катализатора или ингибитора, ионов водорода, поэтому с помощью Х. а. определяют широкий круг соединений. Кроме часто используемых в индикаторной реакции люминесцирующих органич. соединений (люминол, люцигенин, лофин и т. п.), можно определять: окислители (пероксид водорода, озон, молекулярный кислород, гипохлориты, персульфаты и т. п.); мн. металлы – катализаторы индикаторных реакций; ингибиторы индикаторных реакций (ароматич. соединения с фенольными и аминогруппами, галогенпроизводные органич. соединений и т. п.); соединения, изменяющие кислотность среды; различные по природе вещества – тушители люминесценции.
Разновидность Х. а. – биолюминесцентный анализ, основанный на ферментативных окислит. процессах с участием люциферинов и люцифераз. Биолюминесцентный анализ широко применяют для изучения биохимич. процессов с участием оксидаз, которые генерируют пероксид водорода, далее реагирующий с люминолом; биолюминесценцию живых клеток, тканей, суспензий крови и др. биологич. объектов используют в диагностике ряда заболеваний (рак, диабет).
Х. а. можно проводить как в гомогенных средах, так и в разл. гетерофазных системах, включая системы с иммобилизованными ферментами. В проточных вариантах методы Х. а. позволяют изучать кинетику индикаторных реакций при остановке потока восстановителя или/и окислителя. Прямое окисление газообразных, жидких или порошковых проб электрогенерированной смесью озона с воздухом позволяет использовать Х. а. для создания не нуждающихся в заправке реагентами анализаторов оксидов азота в атмосфере, анализаторов суммарного содержания и устойчивости к окислению органич. вещества пресных и морских вод, почв и донных осадков, что важно в экспресс-контроле объектов окружающей среды.
Аппаратура Х. а. обычно состоит из ячейки с прозрачным окном, которая служит источником излучения, и фотоприёмника со светофильтром, иногда – с монохроматором. Для проведения Х. а. не нужен источник возбуждения излучения, поэтому не возникает рассеянного света; это обеспечивает низкий абсолютный предел обнаружения аналита – до 10–14 г в пробе.
Источник
Иммуноферментный анализ (ИФА) — метод лабораторной диагностики, позволяющий обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях.
Где можно сдать анализ?
ИФА — один из самых распространенных и точных методов для выявления инфекций, передающихся половым путем, в частности ВИЧ, ВПЧ, гепатита В.
Узнать больше…
Для того чтобы результаты анализов были максимально достоверными, необходимо правильно подготовиться к их сдаче.
Как подготовиться?
Современная диагностика в медицине немыслима без высокочувствительных лабораторных анализов. Прежде для установления причин тех или иных симптомов врачи были вынуждены ориентироваться на косвенные признаки болезни, а также проводить многоступенчатые микроскопические исследования в попытке обнаружить возбудителя инфекции. Сегодня достаточно одного-единственного теста — такого как иммуноферментный анализ — чтобы подтвердить или опровергнуть первоначальный диагноз.
Основные понятия и принцип метода иммуноферментного анализа
Иммуноферментный анализ (ИФА) — это метод лабораторной диагностики, основанный на реакции «антиген-антитело», который позволяет выявить вещества белковой природы (в том числе ферменты, вирусы, фрагменты бактерий и другие компоненты биологических жидкостей).
Чтобы понять, как устроен иммуноферментный анализ, попробуем разобраться в сути реакции «антиген-антитело». Антиген — это чужеродная для организма молекула, как правило, белкового происхождения, которая может попасть в тело человека вместе с инфекционным агентом. Частицы чужой крови (если она не совпадает с нашей по группе) также являются антигенами. В организме антигены способны вызывать иммунную реакцию, направленную на защиту целостности внутренней среды от чужеродных веществ. Поэтому наше тело синтезирует особые вещества — антитела (иммуноглобулины), способные по принципу «ключ к замку» соединяться с антигенами, связывая их в иммунный комплекс (этот процесс как раз называется реакцией «антиген-антитело»). Такие иммунные комплексы легче распознаются и уничтожаются клетками иммунитета.
Существует несколько разновидностей антител, каждая из которых вступает в действие на определенном этапе иммунного ответа. Так, первыми в ответ на проникновение антигена в организм синтезируются иммуноглобулины класса М (IgM). Содержание этих антител наиболее высоко в первые дни инфекционного процесса.
Следом за ними иммунная система выбрасывает в кровь иммуноглобулины класса G (IgG), которые помогают уничтожать антигены до полной победы над инфекцией, а также продолжают циркулировать по сосудам в дальнейшем, обеспечивая иммунитет к повторному заражению. На этом явлении основана вакцинация: благодаря прививкам, содержащим ослабленные антигены микробов и вирусов, в нашей крови появляется большое количество IgG, которые при контакте с реальной угрозой быстро подавляют инфекцию — до того, как она нанесет вред здоровью.
Также существуют иммуноглобулины класса А (они в большом количестве содержатся в слизистых оболочках, защищая «подступы» к организму), Е (борются с паразитарными инфекциями) и другие. В лабораторной диагностике объектами интереса чаще всего являются IgM, IgG и IgA: по их концентрации можно оценить, на какой стадии находится инфекционный процесс, а также узнать, болел ли когда-либо человек тем или иным недугом (например, краснухой или ветряной оспой).
Как узнать, какие именно антигены или антитела присутствуют в организме человека? Когда врач предполагает, что причиной заболевания является определенная инфекция, или желает измерить концентрацию определенного гормона, он назначает пациенту иммуноферментный анализ.
Реакцию «антиген-антитело» можно воспроизвести в лабораторных условиях: использовать уже готовые антитела или антигены, чтобы определить, есть ли в исследуемом образце соответствующее им соединение.
Для начала необходимо получить образец биологической жидкости — обычно, это сыворотка крови. Лаборатория использует пластиковые планшеты с лунками, в которых уже содержатся очищенные антигены предполагаемого возбудителя (или — антитела, в случае если задачей является поиск антигена). Образцы вносятся в лунки, где происходит — или не происходит — образование иммунных комплексов. Если «встреча» состоялась, особое красящее вещество вступает в ферментную реакцию с объединенной молекулой, что позволяет с помощью инструментальной оценки оптической плотности сделать выводе о результатах анализа.
ИФА бывает качественным и количественным. В первом случае подразумевается однозначный ответ: искомое вещество или найдено, или не найдено в образце. В случае с количественным анализом более сложная цепь реакций дает возможность оценить концентрацию антител в крови человека, что в сравнении с результатами предыдущих тестов даст ответ на вопрос о том, как развивается инфекционный процесс.
Это интересно
Предшественником иммуноферментного анализа был радиоиммунный анализ, в котором для идентификации успешной реакции использовались меченые антитела и антигены. Поскольку проведение такой диагностики представляло потенциальную угрозу для здоровья сотрудников лаборатории, ученые озаботились поиском безопасной альтернативы по «окраске» образцов. Так в 1971 году был изобретен ИФА.
Преимущества метода
Бесспорные преимущества ИФА — высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность — это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.
ИФА во многом заменил «золотой стандарт» микробиологии — бактериологический метод диагностики, в ходе которого для идентификации возбудителя требовалось выделить его из организма, а затем в течение нескольких дней выращивать культуру на питательной среде в пробирке. Все то время, пока производился анализ, врачи были вынуждены лечить пациента «вслепую», догадываясь о происхождении микроорганизма по симптомам болезни. Определение IgM с помощью ИФА позволяет поставить точный диагноз уже в первые дни болезни.
Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.
Недостатки метода
К сожалению, для проведения ИФА нужно знать, что именно искать: методика анализа подразумевает, что врач заранее имеет предположение о природе заболевания. Поэтому нет смысла назначать такой тест в надежде случайно «угадать» диагноз.
В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека.
ИФА — крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.
Показания к назначению и выявляемые заболевания
Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА. Вот наиболее распространенные цели анализа:
- Диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний:
- IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С;
- IgG к ВИЧ;
- Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции;
- Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр;
- Ig M и IgG к герпетическим инфекциям;
- Ig M и IgG к токсоплазмозу;
- Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям;
- IgG к паразитарным заболеваниям;
- Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем;
- IgG к хеликобактерной инфекции.
Анализируемый биоматериал и особенности его забора
Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.
Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.
Сроки готовности результатов ИФА
При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.
Расшифровка иммуноферментного анализа
Результатом качественного ИФА будет однозначный вердикт: искомое вещество либо найдено, либо не найдено в образце. Если же речь о количественном анализе, то концентрация может выражаться числовым значением или определенным количеством знаков «+» (от одного до нескольких).
Анализируемые показатели
- IgM — наличие этого класса иммуноглобулинов говорит об остром инфекционном процессе в организме. Отсутствие IgM может говорить как об отсутствии конкретного возбудителя в организме, так и о переходе инфекции в хроническую стадию.
- IgA при отрицательном результате теста на IgM чаще всего свидетельствует о хронической или скрыто протекающей инфекции.
- IgM и IgA (совместное присутствие) — два положительных результата говорят о разгаре острой фазы заболевания.
- IgG говорит либо о хронизации заболевания, либо о выздоровлении и выработке иммунитета к инфекционному агенту.
Возможные результаты ИФА
В зависимости от содержания анализа в бланке могут быть представлены данные в виде таблицы с перечислением всех антител или антигенов с пометками об отрицательной или положительной реакции, либо будет указано количественное значение результата (отрицательный, слабоположительный, положительный или резко положительный). Последний вариант определяет, сколько антител содержится в анализируемом образце.
Еще один количественный показатель — индекс авидности антител, выраженный в процентах. Он указывает, сколько времени прошло от начала инфекционного процесса (чем выше индекс — тем больше).
Сегодня выпускаются тысячи видов тест-систем ИФА, позволяющих обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях. Поэтому этот анализ используется практически во всех медицинских отраслях. Диагноз, поставленный с помощью ИФА, — это гарантия назначения адекватной терапии и эффективного лечения заболевания.
Источник
Иммуноферментный (ИФА) и Иммунохемилюминесцентный (ИХЛА) анализы – это лабораторные исследования, в основе которых лежат иммунные реакции антигена с антителом. Метод обладает высокой чувствительностью и специфичностью, которая составляет 90%. Материалом для исследования служит сыворотка венозной крови, взятой натощак или моча.
Метод используют в следующих случаях:
- Для диагностики урогенитальных инфекций. В этом случае применяется для выявления наличия в сыворотке крови специфических иммуноглобулинов (Ig) или антител – белков, вырабатываемых клетками иммунной системы, направленных на борьбу с внедрившимся в организм инфекционным агентом. Связываясь с микробной клеткой или продуктами её жизнедеятельности иммуноглобулины (антитела) нейтрализуют их и способствуют выведению из организма (проще говоря, иммуноглобулины это наш гуморальный иммунитет).
- Для диагностики состояния щитовидной железы. Известно, что гормоны щитовидной железы регулируют обмен веществ в организме, стимулируют рост и психическое развитие, влияют на работу сердца и желудочно-кишечного тракта, участвуют в регуляции половой сферы. Нарушение функции щитовидной железы может проявляться в виде раздражительности или, наоборот, депрессии, повышенной утомляемости, изменении веса, повышении кровяного давления, учащенном сердцебиении, нарушении менструального цикла у женщин и т.д. Лабораторная диагностика гормонов щитовидной железы поможет вовремя обнаружить отклонения и предпринять меры профилактики.
- Для определения гормонального уровня в крови у женщин с различными женскими проблемами. Это актуально при различных нарушениях менструального цикла, гирсутизме (избыточном росте волос) и акне (угревой сыпи), а также при планировании беременности.
- Для диагностики гепатитов В, С.
- Для проведения тестов пренатального скрининга у беременных женщин.
Бета-ХГЧ (хорионический гонадотропин) синтезируется клетками плода. Его роль состоит в обеспечении благоприятного гормонального фона и сохранения жизнеспособности эмбриона. Характерная динамика его содержания в крови во время беременности говорит о её нормальном течении. АФП (альфа-фетопротеин) – белок, вырабатывающийся печенью эмбриона и составляющий около 30% плазменных белков плода. Изменение уровня АФП может указывать на те или иные дефекты внутриутробного развития плода. Данные тесты помогают выявить беременных, которым необходимо более углубленное обследование. - Для диагностики TORCH-инфекций. Этот комплекс позволяет выявить зараженность несколькими инфекциями, опасными для нормального внутриутробного развития ребенка. В этот комплекс входят токсоплазмоз, краснуха, цитомегаловирус и герпес, объединенных в группу TORCH-инфекций. Название образовано начальными буквами данных инфекций в латинских наименованиях- Toxoplasma, Rubella, Cytomegalovirus, Herpes. Данные инфекции могут вызвать нарушения развития плода.
В идеальном случае проконсультироваться с врачом и пройти лабораторное обследование на TORCH-инфекции женщине нужно за 2-3 месяца до планируемой беременности. В этом случае будет возможность предпринять соответствующие лечебные или профилактические меры, а также при необходимости в будущем сравнить полученные результаты исследований до беременности с результатами обследований во время беременности. Необходимо подчеркнуть, что интерпретация результатов исследования осуществляется врачом, который сопоставляет данные анамнеза, клинического осмотра и лабораторного обследования. - Для диагностики онкологических заболеваний. Опухолевые маркеры – важная составляющая диагностического комплекса в онкологии. Однако, их использование для раннего обнаружения онкологических заболеваний имеет определенные ограничения, поскольку ни один из этих тестов не обладает 100% специфичностью и чувствительностью. Поэтому данный метод исследований в диагностических целях должен использоваться в комплексе остальных клинических исследований.
Лаборатория ООО МФО «Авиценна»
Источник