Helicobacter pylori анализ крови инвитро
Метод определения
Иммуноанализ
Исследуемый материал
Сыворотка крови
Маркёр, подтверждающий инфицированность Хеликобактер пилори.
Эти антитела начинают вырабатываться через 3 — 4 недели после инфицирования. Высокие титры антител к H.pylori сохраняются до и некоторое время после ликвидации микроорганизма.
Особенности инфекции. Инфекция Helicobacter pylori. H. pylori на сегодняшний день — одна из широко распространённых инфекций на земле. К H.pylori-ассоциированным болезням относятся хронический гастрит, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки. Поражение слизистой оболочки желудка обусловлено прямым повреждением её микроорганизмом, а также вторичным повреждением слизистой оболочки желудка, двенадцатиперстной кишки и кардиальной части пищевода под действием факторов агрессии H.pylori. Хеликобактер представляет собой грамотрицательную бактерию спиралевидной формы со жгутиками. Бактериальная клетка окружена слоем геля — гликокаликса, который защищает её от воздействия соляной кислоты желудочного сока. Хеликобактер чувствителен к действию высоких температур, но длительно сохраняется во влажной среде.
Заражение происходит пищевым, фекально-оральным, бытовым путями. H.pylori обладает способностью к колонизации и персистированию в слизистой оболочке желудка. К патогенным факторам относятся ферменты (уреаза, фосфолипаза, протеаза и гамма-ГТ), жгутики, цитотоксин А (VacA), гемолизин (RibA), белки теплового шока и липополисахарид. Бактериальная фосфолипаза повреждает мембрану эпителиоцитов, микроорганизм прикрепляется к поверхности эпителия и проникает в клетки. Под действием уреазы и других факторов патогенности повреждается слизистая оболочка, усиливаются воспалительные реакции и образование цитокинов, радикалов кислорода, окиси азота. Липополисахаридный антиген обладает структурным сходством с антигенами групп крови (по системе Lewis) и клетками желудочного эпителия человека, в результате возможна продукция аутоантител к эпителию слизистой оболочки желудка и развитие атрофического аутоиммунного гастрита. Поверхностное расположение уреазы позволяет ускользать от действия антител: комплекс уреаза-антитело сразу же отделяется с поверхности. Усиление перекисного окисления липидов и повышение концентрации свободных радикалов увеличивает вероятность канцерогенеза.
Обсеменение слизистой оболочки желудка H.pylori сопровождается развитием поверхностного антрального гастрита и дуоденита, ведёт к повышению уровня гастрина и снижению выработки соматостатина с последующим усилением секреции соляной кислоты. Избыточное количество соляной кислоты, попадая в просвет двенадцатиперстной кишки, ведёт к прогрессированию дуоденита и развитию желудочной метаплазии, что создает условия для заселения H.pylori.
В дальнейшем, особенно при наличии дополнительных факторов риска (наследственная предрасположенность, I группа крови, курение, приём ульцерогенных лекарственных препаратов, частые стрессы, алиментарные погрешности), в участках мета-плазированной слизистой оболочки формируется язвенный дефект.
В 1995 г. Международной ассоциацией по изучению рака (IARC) H.pylori признан абсолютным канцерогеном и определён как важнейшая причина злокачественных новообразований желудка у человека (MALToma — Mucosa Associated Lymphoid Tissue lymphoma, аденокарцинома). При проведении эпидемиологических исследований выявлена более частая инфицированность H.pylori у пациентов с неязвенной диспепсией и гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью (ГЭРБ), чем без них.
Факторами, ответственными за развитие неязвенной диспепсии или ГЭРБ у H.pylori-инфицированных пациентов, считают нарушение желудочной моторики, секреции, повышение висцеральной чувствительности и проницаемости клеточного барьера слизистой оболочки, а также высвобождение цитокинов в результате её воспалительных изменений.
Ликвидация H. pylori у пациентов с язвенной болезнью позволяет прекратить приём антисекреторных препаратов.
Особое значение лабораторная диагностика H. pylori имеет в следующих ситуациях:
| Ситуация | Причина |
| Случаи инфекции в семье или среди совместно проживающих лиц | Контактно-бытовая передача в семье. Инфекция H. pylori увеличивает риск развития рака желудка. |
| Язвенная болезнь | Ликвидация H. pylori позволяет прекратить приём антисекреторных препаратов; снизить риск развития рака желудка. |
Источник
Метод определения
- гистологическое исследование с окрашиванием гематоксилином-эозином;
- гистохимическое исследование с окрашиванием по Гимзе.
Исследуемый материал
Смотрите в описании
Helicobacter pylori (H. pylori) – бактерия, обитающая в слизи, покрывающей слизистую оболочку желудка. Инфицирование человека H. pylori широко распространено. По оценкам эпидемиологов, присутствие этой бактерии в желудке можно обнаружить примерно у половины населения планеты, а в некоторых регионах у 80–100% популяции. Заражение обычно происходит в детстве и сохраняется пожизненно. В большинстве случаев наличие H. pylori не вызывает проблем, но у некоторых людей в ответ на инфекцию развивается локальное воспаление, которое проявляется как гастрит или дуоденит.
Примерно у 15% людей, инфицированных H. pylori, развивается язвенная болезнь желудка или двенадцатиперстной кишки. Реже хроническое воспаление, связанное с инфекцией H. pylori, приводит к атрофии слизистой оболочки (атрофическому гастриту) – состоянию, связанному с риском развития рака желудка. Вероятность развития таких угрожающих состояний зависит от штамма H. pylori и факторов его вирулентности, индивидуальных особенностей организма и характера реакций на присутствие H. pylori, влияния условий жизни, в частности, диеты. Данную инфекцию успешно элиминируют (эрадикация H. pylori), но это не исключает вероятность повторного инфицирования в будущем. Вопрос о необходимости эрадикации H. pylori решается индивидуально. Тактика врача во многом зависит от клинических проявлений инфекции и, что особенно важно, наличия патологических изменений в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки.
Существуют различные способы диагностики инфекции H. pylori и разные способы оценки состояния слизистой оболочки желудка.
Методы выявления инфекции H. pylori можно разделить на прямые и непрямые, инвазивные (требующие проведения биопсии) и неинвазивные.
Прямые – непосредственное микробиологическое выявление возбудителя в культуре (в рутинной практике не используется), выявление H. pylori и оценка степени обсемененности H. рylori в желудочной слизи при гистохимическом исследовании биопсийного материала (№
516
), выявление ДНК возбудителя в исследуемом материале методом ПЦР, выявление антигенов возбудителя в кале (№
484
).
Непрямые – диагностика инфекции H. pylori по наличию специфических иммунных антител к этому возбудителю в крови (№№
133
,
176
,
177
,
258
,
259
), по продуктам метаболизма H. pylori в уреазном дыхательном тесте.
Инвазивные – гистологическое (№
511
) и гистохимическое (№
516
) исследование.
Неинвазивные – дыхательный тест на продукты метаболизма H. pylori*, анализ кала на антиген H. pylori (№
484
), анализ крови на антитела к H. pylori (№№
133
,
176
,
177
,
258
,
259
).
Способы оценки состояния слизистой оболочки желудка также делятся на инвазивные (требующие биопсии) и неинвазивные, прямые и непрямые.
Инвазивные – гистологическое исследование (№
511
).
Неинвазивные – например, анализ крови (профиль «Гастропанель», пепсиногены I/II с расчетом соотношения №
2111
).
Прямые – гистологическое исследование морфологии слизистой оболочки желудка в биопсийных препаратах (№
511
).
Непрямые – оценка состояния слизистой оболочки желудка по косвенным показателям, связанным с ее функциями (профиль «Гастропанель», пепсиногены с расчетом соотношения в тесте №2111).
Все эти методы имеют свои преимущества и недостатки и используются врачом в комплексе обследований согласно имеющимся рекомендациям и индивидуальным показаниям. В предлагаемом комплексном исследовании гистологическая оценка состояния слизистой оболочки желудка по биопсийным препаратам относится к прямым методам оценки состояния слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки и является «золотым стандартом» диагностики атрофического гастрита и рака желудка. Гистохимическое выявление H. pylori, которое можно провести в том же гистологическом материале, является прямым методом выявления данной инфекции.
В гистологической дифференциальной диагностике заболеваний слизистой оболочки желудка принято использовать новую международную морфологическую классификацию – OLGA (Operative Link for Gastritis Assessment) – оперативную систему оценки гастритов. Международной группой исследователей и экспертов предложена система стадийной оценки для описания желудочной патологии. Эта классификация позволяет оценивать хронические гастриты в зависимости от риска развития предопухолевых изменений и рака желудка. Согласно классификации OLGA гастриты подразделяются на 4 стадии (от 0 до IV) – по степени риска развития рака желудка, а также на 4 степени (от 0 до IV) – по степени выраженности воспалительных изменений и/или наличию инфильтратов. Данная классификация учитывает стадию гастрита в сочетании с Н.pylori-статусом, диагноз должен быть подтвержден общеклинической информацией (жалобы, анамнез, дополнительные исследования: КТ, МРТ, ПЭТ, УЗИ).
*Тест пока недоступен к заказу в ИНВИТРО; в настоящее время инициирован процесс регистрации в Министерстве Здравоохранения РФ.
Материал для исследования:
Биоптат/биоптаты слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки, помещённые в специализированный гистологический контейнер/контейнеры с фиксирующим раствором (10% забуференным раствором формалина). Количество биоптатов определяет врач-эндоскопист. Если биоптаты взяты из нескольких анатомических локализаций, фиксация должна проводиться в разных контейнерах, которые должны быть соответствующим образом маркированы, с указанием локализации биоптата.
Литература
- Ильчишина Т.А. Особенности лабораторной диагностики Helicobacter pylori и клинического течения хронического гастрита и язвенной болезни при бациллярно-кокковом дисморфизме бактерии // Дис.канд.мед.наук: 14.00.46, 14.00.47. – СПб., 2008. – 136 с.
- Исаков В.А., Домарадский И.В. Хеликобактериоз. – М. Медпрактика,2003. – 411с.
- Щербаков П.Л., Исаков В.А., Корсунский А.А. Эндоскопическая и морфологическая картина слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки при инвазии Helicobacter pylori // В кн. Корсунский А.А., Щербаков П.Л., Исаков В.А. Хеликобактериоз и болезни органов пищеварения у детей. –М. Медпрактика. – 2002, с. 76-101.
- Bermejo San Jose F., Boixedade Miguel D., Gisbert J. etal. Efficacy of four widely used techniques of the diagnosis of Helicobacter pylori infection in gastric ulcer disease – Rev. Clin. Esp., 2000, Vol. 200,P. 475-479.
- Cutler A.F., and Prasad. Long term follow-up of Helicobacter pylori serology after successful eradication. – Am.J. Gastroenterol, 1996, 31, P. 85-88.
- Fox J.G. The non-H. pylori helicobacters: their expanding role in gastrointestinal and systemic diseases. – Gut, 2002; Vol. 50 (2), P. 273-83.
- Fox J.D., Schauer D.B., Madstrom T. Enterohepatic Helicobacter spp. – Current Opinion in Gastroenterology. – 2001, 17, P. S28-S31.
- Hirschi A.M., Makristathis A. Methods to detect Helicobacter pylori: from culture to molecular biology. – Helicobacter, 2007, Vol.12, suppl.2, P.6-11.
- Kullavanijaya P., Thong-Ngam D., Hanvivatvong O. et al. Analysis of eight different methods for detection of Helicobacter pylori infection in patients with dyspepsia. – J. Gastroenterol. Hepatol., 2004, Vol.19, P. 1392-1396.
- Maastricht-3 Guidelines for Helicobacter pylori infection. – 13 United European Gastroenterology Week, Copenhagen, 2005.
- Wabinga H.R. Comparison of immunogistochemical and modified Giemsastains for demonstration of Helicobacter pylori infection in an African population. – Afr. Health Sci., 2002, Vol.2, №2,P.52-55.
Источник
Метод определения
Вестерн-блот (Western blot).
Исследуемый материал
Сыворотка крови
Высокоспецифичный тест, выявляющий факт инфицирования H. pylori.
Метод Вестерн-блота для определения антител к H. Pylori, в отличие от обычного ИФА, даёт дифференцированные сведения о наличии антител к целому спектру антигенов возбудителя. Это достигается электрофоретическим разделением белков экстракта H. Pylori. В результате выявляется порядка 15 антигенов (полный антиген), что значительно повышает информативность исследования.
Использующиеся в анализе антигены разделяют на три категории:
- 1 категория — перекрёстнореагирующие и неопределённые антигены;
- 2 категория — уреаза В (антиген с м.в. 66 кДа);
- 3 категория — видоспецифичные и высокоспецифичные антигены.
Данная диагностическая система прямо отличает специфические антигены от неспецифических. Поэтому вестерн-блот метод гарантирует высокую специфичность исследования.
Клинические изоляты H. Pylori можно разделить на 2 типа. Штаммы H. pylori I типа могут экспрессировать специфический вакуолизирующий цитотоксин (VacA) и цитотоксин-ассоциированный белок (CagA). Штаммы, не способные синтезировать этот белок, относят к типу II. Инфекции, вызванные агентом I типа, оказываются более патогенными, клинические симптомы включают гастрит и образование язв, возможны отдалённые последствия в виде злокачественной лимфомы и аденокарциномы желудка. Указанные белки входят в состав специфических антигенов, используемых для тестирования антител к H. Pylori методом иммуноблота, что также даёт дополнительную информацию для специалистов.
Состав используемых для выявления антител к H. Pylori специфических антигенов:
| АНТИГЕН | СПЕЦИФИЧНОСТЬ |
| CagA p120 | белок, ассоциированный с цитотоксином А, высокоспецифичен |
| VacA p95 | вакуолизирующий цитотоксин А, высокоспецифичен |
| p75 | неспецифичен |
| FSH p57 | белок жгутиковых, неспецифичен, обуславливает перекрёстную реактивность с другими бактериями, содержащими уреазу |
| Ure B p66 | тяжёлая субъединица уреазы, обуславливает перекрёстную реактивность с другими бактериями, содержащими уреазу |
| гомолог HSP p57 | гомолог белка теплового шока, неспецифичен |
| флагеллин p54 | неспецифичен, обуславливает перекрёстную реактивность с другими бактериями, содержащими флагеллин |
| p50 | неспецифичен |
| p41 | неспецифичен |
| p33 | предположительно специфичен |
| CMP p30 | Белок наружной мембраны, видоспецифичен |
| UreA p29 | лёгкая субъединица уреазы, высокоспецифичен |
| p26 | высокоспецифичен |
| CMP p19 | белок наружной мембраны, видоспецифичен |
| p17 | предположительно специфичен |
Антитела класса IgG появляются в крови вслед за IgM антителами (которые впоследствии исчезают через несколько недель после первого контакта с возбудителем инфекции). Инфекция H. Pylori обычно не проходит сама по себе, патологический агент может присутствовать в течение всей жизни человека. IgG выявляются в сыворотке крови многие годы, являясь индикатором инфицирования. Отсутствие специфических IgG позволяет с высокой степенью достоверности отвергнуть диагноз H. pylori-ассоциированного гастрита или язвы, хотя их присутствие не является абсолютным доказательством данного заболевания.
Литература
- Жебрун А.Б., Лазебник Л.В., Щербаков П.Л. и соавт. Диагностика и лечение заболеваний желудочно-кишечного тракта, ассоциированных с инфекцией Helicobacter pylori (практическое руководство для врачей). – Санкт-Петербург – Биоград, 2006.
- D. Vaira, J. Holton, M. Menegatti, et al. New immunological assays for the diagnosis of Helicobacter pylori infection. Gut . 1999; 45 (Suppl 1): pp. I23 — I27
- Материалы фирмы – производителя реагентов.
Источник
