Что выявляет анализ крови пцр

Что выявляет анализ крови пцр thumbnail

ПЦР на ВИЧ – один из самых информативных методов молекулярно-генетического диагностирования. Этот способ помогает выявить у пациента разного рода инфекционные недуги и заболевания, которые передаются по наследству. Этот же метод диагностики применим в случае проверки биоматериала на присутствие ВИЧ – тяжелого заболевания, развивающегося на протяжении всей жизни пациента. С медицинской помощью ПЦР оказалась в числе рекомендуемых анализов, проводимых на платной основе при подозрении на вирус иммунодефицита человека. Однако достоверность исследования оправдывает себя только в 80 из 100 случаев.

Содержание

Полимеразная цепная реакция

ПЦР диагностика на ВИЧ расшифровывается как полимеразная цепная реакция. Для исследования данного вида применяются различные типы биологических материалов. Среди них кровь, кроме этого может использоваться секреция из влагалища пациентки или семенная жидкость у мужчин.

Внимание! Слюна для ПЦР при диагностике ВИЧ не используется. Подобный подход признан неэффективным, поскольку в этом материале антитела к ВИЧ находятся в минимальной концентрации. Это же касается мочи, пота и слез.

Показанием к проведению описываемого исследования, является дважды положительный ИФА (иммуноферментный анализ). Об альтернативных назначениях речь пойдет позже.

Подробно о сути анализа

В основе анализа на ВИЧ методом ПЦР лежит возможность нуклеиновой кислоты самостоятельно репродуцироваться. Живые клетки состоят из белка и этих самых кислот, иначе говоря, из РНК и ДНК. Молекулы выступают в роли хранителей генетического кода.
При низкой концентрации вирусных частиц (ВИЧ) в биоматериале, проба включает не целые цепочки ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты), а только их составляющие, называемые нуклеотидами. Анализ позволяет выявить даже незначительные остатки клеток вируса. Именно этим фактом объясняется способность ПЦР демонстрировать результат на ранних сроках –  спустя несколько недель после заражения ВИЧ.

Наиболее качественных результатов от проведения полимеразной цепной реакции стоит ждать при исследовании венозной крови. Пробу расщепляют с помощью оборудования. Затем фракции подвергаются ферментной обработке. Реактивные вещества, объединившись с частицами вирусной ДНК, дублируют ее. Число таких элементов возрастает по принципу цепочки, пока их наличие (не антител) в крови пациента не станет заметно лаборантам. По точно такому же принципу не работает ни один из существующих способов диагностики.

Компоненты реакции

С помощью метода ПЦР можно заблаговременно узнать о развитии вируса в организме. Почему же его нельзя назвать популярным в области бесплатной медицины и делать повсеместно? Дело в том, что такой тест на ВИЧ весьма затратный и требует наличия следующих компонентов:

  • матрица дезоксирибонуклеиновой кислоты, включающая отрезок ДНК, предназначенный для амплификации;
  • два праймера (для каждого цепного отрезка);
  • химически активный компонент полимераза для ускорения полимеризации вирусных частиц;
  • дезоксирибонуклеозидтрифосфаты;
  • частицы двухвалентного магния (заряженные);
  • специальный раствор для создания благоприятных условий, обеспечивающий должный уровень кислотности, солевой концентрации, количества частиц магния в жидкости.

Внимание! Чтобы защитить образец от перегрева, в материал добавляют небольшое количество вазелина, который содержит жиры и, соответственно, высокую температуру кипения.

Относительно высокий показатель точности анализа объясняется его повышенной чувствительностью, которая стимулирует реакцию на антитела к прочим вирусам.

Преимущества и недостатки методики ПЦР при ВИЧ

Для объективной оценки метода в таблице ниже приведем ряд преимуществ и недостатков исследования:

ПлюсыМинусы
– достаточно высокий показатель точности (выявляет вирус в 80% случаев)

– универсальность (для проведения исследования используют не только кровь, но и влагалищные выделения, сперму)

– обширный спектр методики (одну пробу биологического материала можно проверить на несколько болезней)

– скорость получения результата (пациент получает ответ на следующие сутки – более оперативны в этом плане экспресс-методы)

– высокая чувствительность (возможна диагностика на ранних этапах развития ВИЧ, чего не скажешь об ИФА или общем анализе крови на инфекцию)

–  отсутствие возрастных ограничений (такой анализ крови на ВИЧ можно брать и у ребенка с момента его рождения)

– высокая цена

– необходимость использования высокотехнологичного оборудования

– 20 % получения ложноположительных результатов (по причине высокой чувствительности метода)

Очевидно, преимуществ методики больше. Если оценивать тип диагностики с точки зрения продуктивности дальнейшего лечения и возможности продления жизни пациенту, ПЦР – самый верный путь к успеху.

Особенности анализа

Основная особенность описываемого анализа состоит в его способности к ранней диагностики ВИЧ, на что не способны другие методы исследований. Через сколько дней после предполагаемого инфицирования можно сдавать кровь на ПЦР? Обычно этот временной промежуток составляет 10-14 дней. В течение следующих 24 часов пациент получает результат. Возможные отклонения в сроках объясняются индивидуальными условиями работы диагностических центров, клиник.

Назначение исследования

ПЦР в большинстве своем проводится в целях выявления ВИЧ (синдрома иммунодефицита человека). Однако анализ можно сдать и при подозрении на развитие заболеваний, которые передаются половым путем. Этот же метод применим и в случае диагностики наследственных болезней.

ПДР-диагностика: причины для проведения

Когда следует сдавать кровь на ПЦР? Биологический материал в большинстве случаев сдается, когда вирус иммунодефицита человека приспособился к условиям организма, простимулировал выработку антител и вызвал первые симптомы ВИЧ. Однако подобное оправдано лишь в случае истечения достаточного количества времени после заражения и предполагает проведение ИФА.

Необходимость же в ПЦР возникает по инициативе пациента, который желает оперативно диагностировать заболевание (если таковое имеет место быть). Причиной тому может быть: незащищенный половой акт, контакт с биологическим материалом инфицированного, недавнее переливание крови и пр.

Читайте также:  Энтеробиоз или анализ крови на гельминты

Кому назначается ПЦР?

Определение инфекции ВИЧ при помощи ПЦР по рекомендации специалиста производят в следующих случаях:

  • предварительное диагностирование. ПЦР безошибочно подтверждает или опровергает результат ИФА;
  • иммуноблоттинг подтвердил диагноз. Иммунный блоттинг является дополнительным способом исследования СПИДа. Оба метода применяются совместно, что позволяет исключить вероятность постановки ошибочного диагноза;
  • при подтвержденном ВИЧ-статусе с помощью ПЦР отслеживают эффект от проведения выбранного лечения;
  • для анализа крови доноров на присутствие ВИЧ-антител;
  • для определения ВИЧ-статуса у новорожденного, когда мать имеет положительный результат. ПЦР в первые дни жизни позволяет определить внутриутробное инфицирование или заражение младенца при прохождении по родовым путям. Тест проводится на 2 – 3 неделе после рождения.

Сколько времени делается анализ ПЦР, и где его можно сдать?

Анализ ПЦР на ВИЧ проводится в специальной лаборатории. Сам тест и трактовка результата не требует много времени: месяца и даже недели. Для взятия крови необходимо до 6 минут. В обычном случае специалисту, чтобы поставить диагноз и выдать заключение, потребуется не больше суток. Первые 8 часов происходит изучение крови, оставшееся время уходит на оформление. Результат можно будет забрать уже на следующий день после взятия пробы. Срок проведения экспресс-тестирования – 2 часа.

Внимание! Полис ОМС дает возможность прохождения теста бесплатно в государственном учреждении здравоохранения.

Почти любая коммерческая лаборатория способна провести исследование, причем, на анонимной основе. Человеку присваивают специальный номер, к которому затем привязывают результаты. Данная информация заливается на сайт учреждения в личный кабинет пользователя.

Сколько стоит сдать ПЦР-исследование?

Данный способ проведения исследований является достаточно дорогим. Связано это с тем, что проводить ПЦР необходимо на новейшем медицинском аппарате, манипуляция требует от специалистов достаточного багажа знаний.

Насущный вопрос: сколько же стоит человеку сдать анализ ПЦР на ВИЧ? Для этого потребуется в районе 56-60 долларов.

Проведение анализа

Проведение анализа ПЦР на ВИЧ предусматривает:

  • забор крови на проведение исследование;
  • дополнительный забор спермы у мужчины и половых выделений у женщины.

Внимание! В результате тест позволяет медикам определить высокую вирусную нагрузку для того, чтобы осуществлять контроль над состоянием больного.

Прочие особенности проведения этого анализа на ВИЧ, которые стоит принять во внимание:

  • пару дней до теста пациенту следует снизить количество жирной пищи в рационе;
  • забор крови производится на голодный желудок;
  • к расщепленным биологическим материалам в особом реакторе добавляются ферменты, синтезирующие различные инфекции;
  • анализ проводят в несколько этапов, т. к. деление молекул происходит в арифметической прогрессии. Специальная программа осуществляет сравнение большого количества клеточных структур для выявления ВИЧ.

Методы точной диагностики, к которым относится ПЦР, отличаются высокой стоимостью, но способны на ранних сроках выявить ВИЧ. В лечении подобных патологий самое главное – правильно и своевременно поставленный диагноз, который может улучшить качество жизни человека и ее продолжительность.

Источник

Анализ пцр — это инновационная лабораторная диагностическая методика, конечной целью которой выступает обнаружение патогенных микроорганизмов, вирусов и инфекций. Полимеразная цепная реакция понятна далеко не каждому, ведь в ее сути способен разобраться только специалист. Главное, что данная методика дает хорошие результаты и позволяет выявить труднодоступные и скрытые патологии.

Пцр-диагностика: что это такое

Анализ пцр относительно молодой, ему около 30-ти лет. Данная методика исследования прошла все этапы эволюции и сегодня является одной из самых информативных. Смысл заключается в многократном увеличении ДНК искусственным образом. Осуществляется повторение той части, которая имеется лишь у определенной разновидности патогенного возбудителя.

Время воздействия составляет три минуты. Достаточно около тридцати таких этапов, чтобы вышло нужное число молекул для четкого выявления агента способом электрофореза.

Кроме этого медики сращивают части ДНК, выполняют различные мутации, что позволяет применять анализ пцр диагностику не только с целью выявления инфекционных и генетических нарушений, но и для подтверждения или опровержения родственных связей, клонирования и прочее.

Проведение пцр анализа осуществляется в специальных медицинских учреждениях с применением специализированной техники.

Расшифровка

Значения могут носить отрицательный либо положительный характер. В первом случае можно говорить о том, что никаких инфекций и патологий не выявлено, во втором, они обнаружены и человек заражен.

Часто позитивный результат наблюдается у носителей инфекций, но при этом люди себя абсолютно нормально чувствуют, ни на что не жалуются. Нужно отметить, что это ранняя стадия болезни, которая пока себя не проявила, нужна консультация доктора. Когда недуг был обнаружен, нужно обязательно предпринять терапевтические меры.

Пцр диагностика инфекций выступает на сегодняшний день самым точным исследованием и позволяет безошибочно определить наличие вредителя.

Подготовка к исследованию

Все зависит от разновидности изучаемого материала. Анализ крови пцр сдается в утреннее время на голодный желудок. Анализ кала на пцр и мочи сдается аналогично, материал берут чистыми приспособлениями и кладут в стерильный контейнер. Если нужно исследовать мазок либо соскоб, тогда следует исключить половую связь за несколько суток до мероприятия, в том числе и спринцевания. Воздержитесь от сдачи анализа в период месячных и еще на протяжении двух дней после их окончания.

Проведение анализа пцр

Выполняется данное исследование в лабораторных условиях. Мероприятие состоит из нескольких этапов:

  1. Забор материала выполняется в кабинете медицинского учреждения. Все оборудование и принадлежности должны быть стерильными.
  2. Материал хранится под определенной температурой, не дольше двух часов по времени. При более продолжительном сбережении пробирка помещается в холодильник. Если нужно сохранить материал на две недели, тогда его замораживают. Перевозится в специально отведенных для этой цели контейнерах.
  3. Выделение ДНК. Все зависит от типа интересующего представителя патогенной флоры. Применяются методики твердофазной сорбции и др.
  4. Материал помещают в специальную центрифугу. Автоматически делается амплификация. Длится манипуляция от двух до трех часов. Число циклов колеблется от 30 до 40-ка.
  5. Фиксирование полученных данных. Фрагменты выделяются способом электрофореза. Образцы изучаются в ультрафиолетовом свечении. Появление оранжевой полосы говорит о позитивном результате.
  6. Трактовка полученных данных. Бывает положительной и отрицательной, количество интерпретирует доктор. На его основании делают выводы о прогрессировании болезни, и определяется тактика лечения.
Читайте также:  Поставить диагноз по общему анализу крови

Где и для чего используется

Анализ днк методом пцр применяется в самых разных сферах. Сегодня это один из самых популярных диагностических способов, который является приоритетным:

  • в гинекологии. Позволяет определить ряд инфекций: ВПЧ, хламидиоз, гарднереллы и многое другое. Обнаружение вирусов и инфекций позволяет предпринять своевременно меры по предотвращению рака шейки матки;
  • в неонатологии. Известно множество патологий, которые способны вредить плоду еще в материнской утробе;
  • в службе крови. Пациенты с тяжелыми диагнозами типа сифилиса, ВИЧ и др., проходят пцр диагностику. Она определяет даже скрытые инфекции, которые невозможно выявить с помощью обычных серологических методов;
  • при подозрении инфекций, также делается пцр анализ на зппп. С помощью него удается выявить вирусы гепатита, нередко назначают делать анализ пцр на вич и другие инфекции;
  • в пульмонологии назначается при подозрении на воспаление легких, наличие бронхитов. Делается также анализ крови пцр на туберкулез, что позволяет определить недуг на начальном этапе развития.

В мед учреждениях обычно предлагается комплексный пцр анализ для определения целых групп инфекций.

Пцр анализ при беременности

В период вынашивания любой недуг может негативно повлиять на внутриутробное развитие плода. Чем быстрее врачу удастся определить возбудителя, тем быстрее можно будет назначить эффективную тактику терапии. Нельзя ждать и использовать малоинформативные методы, так как это может привести к прогрессированию заболевания и даже гибели ребенка.

Анализ пцр у мужчин

Мазок у мужчин чаще всего берут из мочеиспускательного канала. Необходимо его сдать в случае подозрения на наличие инфекций, заболеваний с вялотекущей клиникой, а также в случае обнаружения патологий у партнерши.

Предпосылками для назначения данного исследования служат:

  • наличие выделений;
  • болезненные ощущения при мочеиспускании;
  • покраснения и отеки;
  • сыпь;
  • постоянные позывы в туалет;
  • воспаления мочеполовой сферы;
  • подозрения на любые зппп;
  • проблемы с репродуктивной функцией;
  • профилактика.

Сдают такой анализ по рекомендации доктора.

Пцр анализ: цена

Стоимость зависит от того, на какой именно тип инфекции человек желает провериться. Также есть два способа проведения исследования: качественная и количественная методика. К тому же в разных клиниках действует своя ценовая политика, которую необходимо уточнять.

Источник

По какому принципу работают тесты на коронавирус COVID-19, которые проводят в российских лабораториях? Чем они отличаются друг от друга и какой тест более точный? Что нужно знать о тест-системах каждому, кто собирается сдавать анализ?

РИА Новости/Reuters

С развитием эпидемии коронавируса все больше людей задумываются о прохождении теста, определяющего наличие в организме инфекции. Лаборатории предлагают разные тест-системы, отличающиеся принципами работы. Anews подготовил простой и понятный путеводитель, который поможет разобраться в тест-системах и не стать жертвой уловок маркетологов.

Метод ПЦР

ПЦР — это метод полимеразной цепной реакции. О нем наслышаны многие, хотя до эпидемии значение аббревиатуры ПЦР было знакомо лишь криминалистам, генетикам, а также лабораторным работникам, определяющим ВИЧ, сифилис, гепатиты, туберкулез и еще ряд заболеваний.

Как работает ПЦР и какие бывают вирусы

Вирусы делятся на РНК-содержащие и ДНК-содержащие. РНК — это одна цепочка нуклеотидов (сложных соединений), кодирующих генетическую информацию вируса. К РНК-содержащим относятся все вирусы гриппа, клещевого энцефалита, бешенства, кори.

ДНК — это двойная спираль, кодирующая генетическую информацию, в том числе, вирусов. Обе части ДНК соединены по принципу комплементарности. То есть, один элемент может соединяться только с соответствующим ему. Например, гуанин (G) только с цитозином(C). ДНК-содержащие вирусы — это вирус герпеса, оспы, гепатита В. Коронавирус относится к РНК-содержащим вирусам.

Для исследования методом ПЦР берется мазок из ротоглотки. Если в материал для анализа попала вирусная частица, то в лаборатории одна нить ее РНК достраивается до двойной спирали ДНК.

РИА Новости/Сергей Пивоваров

В чем суть метода ПЦР?

Вместо того, чтобы искать иголку в стоге сена (одну нить вирусной частицы), можно сделать целый «клубок» нитей, найти которые не составит труда. Нуклеотидная последовательность («буквы») РНК вируса уже расшифрована. И к этим «буквам» по принципу комплиментарности присоединяются в результате химической реакции другие. В итоге получается молекула ДНК. Она служит матрицей. Затем ее многократно размножают примерно по той же технологии. ДНК помещают в раствор со специальным набором химических веществ в устройство-амплификатор, в котором периодически меняется температура от 50 до 92 градусов. В нем, как в ксероксе, ДНК копируется.

Читайте также:  Биохимический анализ крови железо расшифровка

Финальный этап исследования – электрофорез, на нем можно увидеть размноженные копии ДНК. ДНК заряжена отрицательно, и в электрическом поле ее притягивает положительный заряд. Притягиваясь к нему, размноженная ДНК проходит через краситель. Чем больше фрагмент ДНК, тем медленнее он двигается и тем ярче окрашивается.

Если в биоматериале пациента не было вирусной частицы, то и первая цепочка ДНК не выстроится – химическим веществам, подобранным для строительства, не за что будет «зацепиться». Соответственно, форез ничего не покажет.

Достоинства и недостатки метода ПЦР

Современные методы позволяют точно подобрать набор веществ, нужных для реакции, а значит, «достроить» именно ДНК SARS-Cov-2, а не другого похожего.

Теперь о недостатках. Первое — относительно высокая цена. Она обусловлена высокой себестоимостью как праймеров, так и оборудования – амплификаторов. Второе — время. Ждать, пока размножится ДНК, нужно несколько часов, а с учетом транспортировки до лаборатории результаты теста пациент может узнать через сутки и более.

Также эффективность теста не превышает 80%. Праймеры для реакции подбираются на основе информации об РНК вируса. Но фрагмент с теми же «буквами» может оказаться и в других микроорганизмах пробы – отсюда ложноположительный результат. Ложноотрицательный результат получится, если вирусные частицы ушли из ротоглотки, спустились дальше по дыхательному пути. Тогда в пробе просто не окажется РНК вируса.

Сдавать тест ПЦР есть смысл в том случае, если человек контактировал с пациентом с подтвержденным коронавирусом.

Метод петлевой изотермической амплификации, LAMP

Метод петлевой изотермической амплификации, LAMP (от англ.Loop-mediated isothermal amplification) считается упрощенной ПЦР. Производители тест-систем обещают точность метода до 94%.

Во многом метод LAMP схож с ПЦР, за исключением ряда нюансов: праймеров требуется больше, амплификаторов (приборов, периодически изменяющих температуру) не требуется вовсе, как не требуется и электрофореза. РНК вируса также достраивается до ДНК, а дальше копирование идет при постоянной температуре и занимает всего 20-30 минут.

Чтобы увидеть результат, не требуется электрофорез, достаточно просто взглянуть на пробирку. Мутный осадок говорит о том, что в образце обнаружен вирус. Осадок частично состоит из ионов, освобождающихся из «букв»-нуклеотидов во время синтеза ДНК. Если он появляется, значит, ДНК вируса удалось размножить. Многие производители добавляют в свои тест-системы флуоресцентные красители ДНК, чтобы наличие или отсутствие вирусной частицы не вызывало сомнений.

Reuters

Достоинства и недостатки метода

Метод более специфичен, чем ПЦР, он лучше выявляет нужный вирус. Его не собьет присутствие ДНК с похожим фрагментом другого микроорганизма. Анализ занимает не больше 40 минут.

Однако найти лабораторию, работающую с такой системой, сейчас трудно. Пока на рынке всего две компании, предлагающие свои тесты на коронавирус на основе петлевой изотермической амплификации. Тест, также как и ПЦР, может лишь подтвердить или опровергнуть присутствие вируса в организме. Давать прогноз, как будет протекать болезнь, понадобится ли конкретному пациенту экстренная помощь, на его основе нельзя.

Сдавать такой тест есть смысл, если человек контактировал с пациентом с подтвержденным коронавирусом. Если пациент входит в группу риска: пожилой, с ослабленным иммунитетом, с хроническими заболеваниями.

Метод определения иммуноглобулинов

Другое название — тест на антитела. В качестве материала для исследования берется кровь. В ней стандартным способом определяют иммуноглобулины: IgG и IgM. Подобный анализ назначают для диагностики аутоиммунных заболеваний, заболеваний системы кроветворения, пищеварительной системы и во многих других ситуациях.

Иммуноглобулины М (IgM) первыми вырабатываются в ответ на вирусную атаку, это так называемые «иммуноглобулины тревоги». Их наличие в крови говорит об острой фазе заболевания.

Иммуноглобулины G (IgG) появляются в крови в среднем спустя 5 дней после иммуноглобулинов М. Если они обнаруживаются в крови, то это может говорить о том, что заболевание прошло острую фазу либо уже перенесено, организм справился с инфекцией и даже выработал иммунитет.

Как обстоят дела с доступностью теста

Партию тестов на антитела передал России Китай. Главным отечественным разработчиком массовых тестов, похоже, станет Казанский федеральный университет, именно там первыми провели испытания новой тест-системы. В Роспотребнадзоре уже зарегистрирована тест-система государственного научного центра «Вектор», но пока она недоступна для широкого применения. Клиника в Сколково также стала предлагать свои тесты.

Reuters

Достоинства и недостатки метода

Тест на антитела позволяет узнать стадию заболевания, а также предположить тяжесть его течения. В ряде случаев он помогает выявить людей, перенесших коронавирус бессимптомно и выработавших иммунитет. Тест дает результаты за 10-15 минут.

Тесты могут давать ложноотрицательный результат, так как известны еще не все антитела к коронавирусу. Кроме того, антитела появляются в крови не сразу, и тест, проведенный на следующий день после инфицирования, может не дать результатов. Не исключен и ложноположительный результат — тест может среагировать на антигены вирусов, вызывающих обычную простуду.

Сдавать тест на антитела имеет смысл, если появились первые симптомы заболевания. Если человек контактировал с пациентом с подтвержденным коронавирусом. Также если есть подозрение, что заболевание перенесено бессимптомно, и пациент хочет быть уверенным, что у него выработан иммунитет.

Смотрите далее: Лечения нет. Что не так в борьбе медиков с COVID-19

Источник