Анализа крови на интерфероновый статус

Метод определения
Иммуноферментный анализ

Исследуемый материал
Цельная кровь (гепарин)

Уровень циркулирующего интерферона (сывороточный интерферон).
Спонтанная продукция интерферона in vitro.
Индуцированный синтез альфа-интерферона in vitro.
Индуцированный синтез гамма-интерферона in vitro.

Дополнительные тесты:

Определение чувствительности к препаратам интерферона (№ 1044 — Ингарон, № 1045 — Интрон, № 1047 — Реаферон, № 1048 — Реальдирон, № 1049 — Роферон).
Определение чувствительности к индукторам интерферона (№ 1050 — Амиксин, № 1051 — Кагоцел, № 1052 — Неовир, № 1054 — Циклоферон).
Определение чувствительности к иммуномодуляторам (№ 1055 — Галавит, № 1056 — Гепон, № 1057 — Иммунал, № 1058 — Имунофан, № 1059 — Иммуномакс, № 1060 — Ликопид, № 1061 — Полиоксидоний, № 1062 — Тактивин, № 1063 — Тимоген, № 1066 — Имунорикс, № 1148 — Панавир, № 1064 — Изопринозин).

Интерфероны (ИФН) – важнейший компонент врождённой неспецифической защиты организма от инфекций (название интерфероны произошло от их свойства интерферировать с вирусной инфекцией клеток). Это семейство белков местной (аутокринной и паракринной) регуляции, которые способны активировать внутриклеточные процессы и межклеточные взаимодействия, обеспечивающие устойчивость к вирусным инфекциям, усиливающие врождённый и приобретённый иммунные ответы, модулирующие процессы развития и гибели нормальных и опухолевых клеток. Резистентность организма к вирусным инфекциям и ряду других заболеваний во многом зависит от активности группы генов системы интерферонов.

Препараты интерферона широко используют в медицине. Эффекты интерферонов непрямые – активация интерферонами специфических рецепторов вызывает каскад клеточных процессов, приводящих к индукции специфических стимулируемых интерферонами генов, кодирующих синтез множества белков, которые и обеспечивают противовирусные эффекты, противоопухолевое и антипролиферативное действие интерферонов. Индуцируемые интерферонами белки включают: ферменты, транскрипционные факторы, клеточные поверхностные гликопротеиды, цитокины, хемокины и другие факторы, действие которых продолжают исследовать. Продукция интерферонов клетками является преходящей, временной — «молчащие» в норме гены интерферонов индуцируются под действием продуктов вирусного и микробного происхождения и химических индукторов.

Интерфероны делят на три типа (α, β и γ), которые ассоциируют с определёнными функциями и определёнными клетками-продуцентами. Интерфероны α и β , несмотря на значительные структурные различия, имеют общие рецепторы и сходные функции. Вместе их называют также интерфероны I типа, или кислотно-стабильные интерфероны, в отличие от интерферона-γ, который имеет свои рецепторы и частично отличающиеся функции (он известен также как интерферон II, или кислотно-лабильный интерферон).

Интерферон α (выявлено более 20 его субтипов) — основной интерферон, который синтезируется в культуре лейкоцитов, индуцированной вирусом. Главными продуцентами ИФН-α являются плазмацитоидные дендритные клетки, существенный вклад в ИФН-α-продуцирующую способность крови вносят моноциты. Основные его функции – противовирусная активность и активация естественных киллеров.

Интерферон β — основной интерферон, продуцирующийся культурой фибробластов, индуцированной двухспиральной РНК. Его основные продуценты – фибробласты, эпителиальные клетки и макрофаги, основная функция – противовирусная активность.

Интерферон γ — основной интерферон, продуцирующийся иммунологически стимулированной (митогенами или антигенами) культурой лимфоцитов. Основные клетки-продуценты ИФН -γ — Т-лимфоциты. Основная функция гамма-интерферона – иммунорегуляция (включая активацию макрофагов, усиление Th1-ответа, индукцию экспрессии антигенов главного комплекса гистосовместимости типа II на антигенпрезентирующих клетках и др.); также как и другие интерфероны, он проявляет противовирусную и антипролиферативную активность. Все клетки животных способны продуцировать интерфероны, определенные клетки (лейкоциты и фибробласты) могут продуцировать более одного типа — как ИФН-α таки ИФН-β.

Исследование параметров интерферонового статуса позволяет выявить недостаточность системы интерферона. Оценка выявляемых изменений может служить ориентиром при диагностике, лечении и прогнозе заболеваний как вирусной, так и невирусной этиологии. Здоровые люди характеризуются низким уровнем сывороточного интерферона и высокими значениями индуцированного синтеза интерферонов. Стрессы и острые вирусные инфекции, аллергические состояния сопровождаются повышением уровня циркулирующего интерферона и снижением уровня индуцируемой продукции альфа- и гамма-интерферонов лейкоцитами. При бронхиальной астме, крапивнице уровень циркулирующего интерферона коррелирует с тяжестью заболевания.

Хронические вирусные инфекции (герпес, гепатит), рассеянный склероз сопровождаются подавлением всех показателей интерферонового статуса. Аутоиммунные заболевания (системная красная волчанка, ревматоидный артрит) характеризуются подавлением индуцируемой продукции альфа-интерферона. Острый лимфолейкоз, злокачественные образования сопровождаются подавлением индуцируемой продукции гамма-интерферона. Результаты исследования интерферонового статуса следует рассматривать в комплексе с остальными лабораторными и клинико-анамнестическими данными. Снижение продукции альфа- и гамма- интерферона, которое может быть и причиной, и следствием острых и хронических вирусных заболеваний, свидетельствует о врождённом или приобретённом дефиците системы интерферонов и может рассматриваться как показание для интерферон-стимулирующей терапии. Нормализация показателей интерферонового статуса обычно совпадает с процессами выздоровления. У людей старше 50 лет относительно чаще выявляется недостаточность системы интерферонов. Исследование параметров интерферонового статуса с определением чувствительности к лекарственным препаратам используют для подбора эффективной терапии при использовании препаратов экзогенного интерферона, индукторов интерферона и иммуномодуляторов.

Препараты интерферона

Ингарон — рекомбинантный человеческий интерферон-γ.
Интрон — рекомбинантный человеческий интерферон-α-2b.
Реаферон — рекомбинантный человеческий интерферон-α-2.
Реальдирон — рекомбинантный человеческий интерферон-α-2b.
Роферон — рекомбинантный человеческий интерферон-α-2a.

Индукторы интерферона

Амиксин (межд. непатент. название — тилорон): дигидрохлорид 2,7-бис-[2(диэтиламино)-этокси]-флуорен-9-ОН-дигидрохлорид.
Кагоцел: активное вещество — натриевая соль сополимера (1-4)- 6- 0- карбоксиметил -b-D-глюкозы, (1- 4)-b-D-глюкозы, (21-24) -2,3,14,15,21,24,29,32-октагидрокси -23-(карбокси-метоксиметил) -7,10-диметил- 4,13 -ди(2-пропил)-19,22,26,30,31-пентаоксагептацикло [23.3.2.216.05.28.08.27.09.1В.012.17] дотриаконта-1,3,5(28),6,8(27),9(18),10,12(17),13,1-декаена.
Неовир – 2-(9-оксо-9,10-дигидроакридин-10-ил) ацетат натрия.
Ридостин — смесь натриевых солей двухцепочечной и одноцепочечной РНК.
Циклоферон – меглумина акридонацетат.

Иммуномодуляторы

Галавит — производное фталгидразида.
Гепон (Hepon) — синтетический пептид, состоящий из 14 аминокислотных остатков.
Иммунал – препарат сока эхинацеи пурпурной.
Иммунофан — гексапептид (аргинил-альфа-аспартил-лизил-валил-тирозил-аргинин).
Иммуномакс — кислый пептидогликан с молекулярной массой 1 000 — 40 000 кД.
Ликопид – активное вещество – глюкозаминилмурамилдипептид — 4-О-( 2-ацетиламино-2-дезокси-бета-D-глюкопиранозил )-N-ацетилмурамил]-L-аланил-D-альфа-глутамиламид.
Полиоксидоний — международное непатентуемое название /состав: Azoximer (Азоксимер) — N-оксидированное производное полиэтиленпиперазина.
Тактивин — комплекс полипептидов из вилочковой железы крупного рогатого скота.
Тимоген — полипептид из вилочковой железы крупного рогатого скота.
Панавир (Panavir) — очищенный экстракт побегов растения Solanum tuberosum, основное действующее вещество — гексозный гликозид, состоящий из глюкозы, рамнозы, арабинозы, маннозы, ксилозы, галактозы, уроновых кислот.

Литература

Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. 4 ed. Ed. Burtis C.A., Ashwood E.R., Bruns D.E. Elsevier. New Delhi.2006. 2412 p.
Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и при патологии. М., Медицина, 1996, 239 с.
Методические материалы ГУ НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН.

Источник

Интерфероновый статус (ИФН–статус) – cовокупность ряда показателей (параметров), характеризующих состояние основной системы врожденного (неспецифического) иммунитета – системы ИФН, её реактивность и функциональную активность, которая обеспечивает первую линию защиты организма от различных инфекционных (и неинфекционных) агентов, распознаваемых клетками как сигнал тревоги.

Инфицирование различными патогенами вызывает в клетках ответную защитную реакцию синтеза универсальных защитных белков – ИФНов, которые предотвращают и/или прерывают распространение инфекционного процесса, стимулируют врожденный и адоптивный иммунные ответы и сохраняют гомеостаз организма в целом. Универсальный феномен образования ИФН присущ клеткам практически всех позвоночных от рыб до человека, естественными индукторами ИФН являются вирусы.

Распознавание вирусных и микробных структур, известных под названием патогенассоциированные молекулярные паттерны (РАМР), осуществляется так называемыми паттернраспознающими рецепторами (PRR), к которым относятся наиболее изученные Toll-like рецепторы (TLR), выполняющие ключевую роль во включении системы ИФН при вирусных или бактериальных инфекциях и в связанной с ней индукции других звеньев врожденного иммунного ответа.

TLR чувствительны к широкому спектру вирусов, бактерий, грибов и простейших. Взаимодействие различных патогенов с соответствующими TLR активирует сигнальные пути экспрессии генов ИФН, которые опосредуют индукцию врожденного иммунного ответа системы ИФН, способствующего продукции других Th1 провоспалительных цитокинов ( ФНО-α , ИФН-γ), развитию клеточного иммунного ответа и адаптивного иммунитета.

Многообразие обнаруженных к настоящему времени физиологических функций ИФН и универсальная способность различных клеток продуцировать различные типы ИФН указывают на существование в каждой клетке системы ИФН, которая направлена на защиту от чужеродной генетической информации и обеспечивает нуклеиновый гомеостаз организма в целом.

Реализуясь на молекулярном и клеточном уровнях, система ИФН формирует защитный барьер на пути инфекционных агентов намного раньше специфичных защитных реакций иммунитета. От скорости и эффективности включения системы ИФН при различных формах патологии зависят течение и исход заболевания. Своевременный адекватный ответ системы ИФН может обеспечить элиминацию патогенов из организма без участия более медленно реагирующей адаптивной иммунной системы, связанной с необходимостью накопления клона антигенспецифичных иммунных клеток и антител. Отсроченная или сниженная продукция эндогенных ИФНов может привести к прогрессированию или хронизации заболевания вплоть до летального исхода.

Отражением реактивности и функциональной активности системы ИФН является ИФН-статус, включающий определение 4-х основных показателей:

1. уровень продукции лейкоцитами крови ИФН-α при его индукции in vitro эталонным индуктором ИФН-α – вирусом болезни Ньюкасла (ВБН). Нагрузочный тест, характеризующий ИФН-αпродуцирующую способность лейкоцитов крови пациента, при котором в условиях in vitro моделируется инфицирование лейкоцитов его крови ВБН и определяется количество продуцируемого ими при этом защитного белка – ИФН-α;

2. уровень продукции лейкоцитами крови ИФН-γ при его индукции in vitro эталонным индуктором ИФН-γ – фитогемагглютинином (ФГА). Нагрузочный тест, характеризующий ИФН-γ продуцирующую способность лейкоцитов крови пациента, при котором в условиях in vitro моделируется взаимодействие лейкоцитов крови с митогеном – ФГА и определяется количество продуцируемого ими при этом защитного белка – ИФН-γ;

3. уровень продукции лейкоцитами крови спонтанного ИФН in vitro при отсутствии какой-либо дополнительной индукции;

4. количественное содержание циркулирующего в сыворотке крови ИФН.

Совокупность перечисленных показателей характеризует состояние системы ИФН и иммунореактивность пациента in situ. Нарушения в различных звеньях системы ИФН определяются при:

острых и хронических вирусных и других внутриклеточных инфекциях;
аллергических, аутоиммунных, онкологических заболеваниях;
рецидивирующих ОРВИ и тонзилитах у часто болеющих детей;
вторичных иммунодефицитах, ассоцированных с другими формами патологии.

Все вышеперечисленные заболевания являются показаниями для исследования ИФН-статуса.

Исследование показателей ИФН-статуса позволяют выявить следующие нарушения в системе ИФН исследуемых пациентов:

повышение титров сывороточного ИФН, сопряженное со снижением показателей продукции ИФН-α и/или ИФН-γ лейкоцитами крови, свидетельствующие об острой стадии заболевания;
снижение α- и γ-ИФН продуцирующей способности лейкоцитов крови в сочетании с отсутствием циркулирующего в крови сывороточного ИФН, свидетельствующее о дефектности системы ИФН;
снижение α- и γ-ИФН продуцирующей способности лейкоцитов крови в сочетании с наличием продукции спонтанного ИФН и отсутствием циркулирующего в крови ИФН, свидетельствующее о персистирующей вирусной или другой внутриклеточной инфекции.

В зависимости от степени снижения 2-х наиболее значимых показателей ИФН-статуса – уровня продукции лейкоцитами крови ИФН-α и ИФН-γ in vitro относительно физиологической нормы, различают 4 степени недостаточности системы ИФН по α- и/или γ-звеньям системы ИФН соответственно:

1 степень – 2–4 кратное снижение продукции ИФН-α и ИФН-γ по сравнению с нижней границей физиологической нормы;
2 степень – 4–8 кратное снижение;
3 степень – 8–16 кратное снижение;
4 степень – 16 и более кратное снижение.

При недостаточности системы ИФН сопутствующей различным формам патологии детей и взрослых, необходимо проводить корригирующую ИФН–стимулирующую терапию, направленную на коррекцию сниженных показателей продукции α — и γ -ИФН, модуляцию функциональной активности системы ИФН и врожденного иммунитета, связанного с ними адаптивного иммунитета и реабилитацию больного организма в целом.

Для выбора адекватного иммунотропного препарата и последующей эффективной иммунокорригирующей терапии требуются дополнительные исследования по определению индивидуальной чувствительности лейкоцитов крови пациента к препаратам ИФН, индукторов ИФН или иммуномодуляторам. Исследования индивидуальной чувствительности проводятся, как правило, параллельно с исследованием ИФН- статуса in situ.

Индивидуальная чувствительность к препаратам исследуется по эффективности корригирующего действия препарата (коэффициент коррекции) на исходно сниженную продукцию ИФН-γ лейкоцитами крови пациента – ключевого цитокина, определяющего направленность, напряженность и эффективность интерферонового и иммунного ответа организма на инфекционные агенты ( патент РФ № 2423705, 2009 г.).

В зависимости от значений коэффициента коррекции различают 5 вариантов индивидуальной чувствительности к иммуноактивным препаратам:

2 – слабая; увеличение продукции ИФН-γ лейкоцитами крови пациента в присутствии препарата относительно исходной в 2 раза;
4 – выраженная; увеличение продукции ИФН-γ лейкоцитами крови пациента в присутствии препарата относительно исходной в 4 раза;
больше 4 – сильно выраженная; увеличение продукции ИФН-γ лейкоцитами крови пациента в присутствии препарата относительно исходной более, чем в 4 раза;
1 – отсутствие чувствительности;, увеличение продукции ИФН-γ лейкоцитами крови пациента в присутствии препарата относительно исходной не тестируется;
менее 1 – иммунотоксичность; подавление продукции ИФН-γ лейкоцитами крови пациента в присутствии препарата относительно исходной.

Исследование ИФН статуса с определением индивидуальной чувствительности лейкоцитов крови пациента к иммуноактивным препаратам позволяет лечащему врачу получить опережающую информацию об эффективности последующей иммунокорригирующей терапии и сделать правильный научно-обоснованный выбор препарата или комбинации препаратов адекватных для данного конкретного пациента.

Применение препаратов ИФН, индукторов ИФН или иммуномодуляторов хорошо сочетается с антибиотиками, противовирусными и другими препаратами базисной терапии, повышает эффективность и сокращает сроки лечения больного.

Источник

[20-086]
Интерфероновый статус

ИФН статус – методология, отражающая in vitro процессы, индивидуальные для каждого человека, его резервные возможности, потенциал его врождённой иммунной системы.

Синонимы русские

ИФН статус.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Детям в возрасте до 1 года не принимать пищу в течение 30-40 минут до исследования.
Не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Исторически исследование многофункциональных белков ИФН началось с 50-х годов прошлого столетия, с открытия ИФН Isaacs A. и Lindenmann J. в 1957 году.

Оценка интерферонового (ИФН) статуса в конкретном случае позволяет судить о резервных возможностях организма, потенциале его врождённой иммунной системы, при острых процессах и напряжённости иммунитета при хронической патологии.

Эта методика (ИФН статус с тремя основными показателями) позволяет оценить функциональное состояние системы ИФН, которые определяют потенциальные резервные возможности неспецифической резистентности и биологическую активность при острых и хронических заболеваниях человека.

Оценка ИФН статуса важна также потому, что препараты ИФН и их индукторы используются в терапии ряда заболеваний.

Метод «ИФН статус» позволяет in vitro проводить диагностику и контроль состояния врожденного иммунитета. Кроме того, оценка ИФН статуса с определением чувствительности к иммуноактивным препаратам может быть использована в специализированных лечебных заведениях для повышения эффективности лечения (при обоснованной тактике) персонифицированного применения в клинической практике иммуноактивных препаратов интерферонов, их индукторов, иммуномодуляторов, вакцин.

В понятие «ИФН статус» входит определение биологической функциональной активности ИФН I (α/β) и II (γ) типов лейкоцитами крови при их стимуляции и уровень биологически активного ИФН в сыворотке крови. На основании полученных результатов показано, что состояния с полным или частичным «выпадением» различных звеньев системы ИФН-α/β- или γ-ИФН являются причиной или следствием острых и хронически рецидивирующих вирусных инфекций. При этом прослеживалась четкая взаимосвязь между показателями ИФН статуса и тяжестью заболевания.

За единицу биологической (функциональной) активности ИФН (ед/мл) принимается величина обратного разведения его титра, при котором задерживается деструкция монослоя клеток от внесенного тест-вируса VSV, т.е. то максимальное разведение, при котором наблюдается 50-процентная защита клеток монослоя от ЦПД VSV.

Существуют две группы методов определения ИФН: иммунохимический (иммуноферментный и радиоиммунный анализ) и метод, основанный на определении биологической активности ИФН. Иммунохимические методы не позволяют анализировать биологическую активность ИФН и при исследовании клинического материала могут давать ложно-положительные результаты. Метод, позволяющий тестировать биологическую активность ИФН, основан на определении противовирусного действия ИФН в биологической тест-системе, представляющей собой культуру клеток и тест-вирус с его цитопатическим действием.

Определение ИФН статуса используется как интегральный показатель функционального состояния системы ИФН и эффективности проводимого лечения. В России определение ИФН статуса применяется как в научных исследованиях, так и в практике лабораторной диагностики для определения нарушений интерфероногенеза при различных воспалительных процессах.

Установлено, что характер изменений основных показателей ИФН статуса связан с клиническими формами заболеваний, а также с особенностями медикаментозного лечения.

Когда назначается исследование?

Острые и хронические формы вирусных инфекций;
рецидивирующие оппортунистические инфекции;
часто болеющим детям;
врождённые и приобретенные дефекты системы ИФН;
аллергические и аутоиммунные заболевания;
для выбора наиболее чувствительных препаратов в терапии;
подбор и оценка эффективности терапии при использовании препаратов индукторов ИФН и иммуномодуляторов.

Что означают результаты?

Референсные значения

Показатель биологической активности продукции ИФН лейкоцитами крови	Норма для взрослых (в ед/мл)	Норма для детей до 14 лет (в ед/мл)
ИФН в сыворотке крови
ИФН I типа	≥ 640	≥ 320
ИФН II типа	≥ 64	≥ 32

Критерии интерпретации результатов

Любой воспалительный процесс инфекционной и неинфекционной природы характеризуется недостаточной способностью лейкоцитов к индуцированной выработке ИФН (ед/мл) в биологическом культуральном методе «ИФН статус». В зависимости от тяжести заболевания, клинических проявлений выявляется недостаточность функциональной биологической активности ИФН разной степени выраженности, что отражено в таблице.

Повышение биологической активности ИФН в сыворотке крови > 8 ед/мл свидетельствует об остроте воспалительного процесса. В норме биологическая активность ИФН в сыворотке крови, определенная по методу ИФН статуса, соответствует 2-8 ед/мл.

Состояние системы ИФН, в частности её биологическая активность, помогает определить стратегию иммуномодулирующих воздействий при помощи разработанной методики определения чувствительности лейкоцитов к иммуноактивным препаратам. Положительная динамика показателей ИФН статуса соответствует благоприятному исходу заболевания.

Врач-клиницист на основании анамнеза больного, клинических проявлений, лабораторных анализов и исследований, в т.ч. и ИФН статуса, ИФН статуса с определением чувствительности к препаратам, делает общее заключение и назначает соответствующую терапию.

Важные замечания

Результаты исследования функциональной биологической активности ИФН лейкоцитами крови необходимо рассматривать в комплексе с остальными лабораторными и клинико-анамнестическими данными.

Источник