Анализ крови рнга что это

Сайт предоставляет справочную информацию исключительно для ознакомления. Диагностику и лечение заболеваний нужно проходить под наблюдением специалиста. У всех препаратов имеются противопоказания. Консультация специалиста обязательна!

Серологический анализ крови представляет собой способ лабораторного исследования определенных антигенов или антител (специфических белков) в сыворотке крови пациента, основанный на иммунных реакциях организма. Данный метод применяется при диагностике инфекционных заболеваний для выявления наличия антител в крови больного к определенному виду вирусов или бактерий, а также для определения групповой принадлежности крови.

Исследуемый материал

В первую очередь для проведения серологического анализа используют биологический материал, собранный от пациента:

• сыворотка крови
• слюна
• фекальные массы

В некоторых случаях исследуется материал, выделенный из определённых объектов окружающей среды:

• вода
• почва

Методика проведения анализа или забора крови

Данный анализ не требует специальной подготовки пациента. Забор крови проводится утром натощак и, производится в процедурных кабинетах лечебных учреждений, согласно общепринятым гематологическим методикам. Для серологического исследования забор крови производится двумя методами: венозную кровь забирают из локтевой вены пациента, а капиллярную кровь – из безымянного пальца. Кровь помещают в стерильные герметичные пробирки.

Особенности транспортировки крови и хранения сыворотки

Сразу же после забора крови её транспортируют в специальную лабораторию, где в тот же день производится подготовка сыворотки. Хранение сыворотки допускается не более 4 – 6 дней в холодильной камере при температуре 2 – 4 градусов. При необходимости более длительного хранения, сыворотка замораживается. Во избежание нарушения качества сыворотки допускается однократное её замораживание и, соответственно, размораживание. При длительном хранении антитела теряют свои свойства и становятся частично неактивными, наиболее чувствительными к замораживанию являются иммуноглобулины класса М. После размораживания сыворотки необходимо тщательное перемешивание её до однородной массы, что способствует восстановлению концентрации антител, содержащихся в данной сыворотке.

Для чего используют серологические исследования?

Серологические методы лабораторной диагностики используются для выявления таких заболеваний как эхинококкоз, трихинеллёз, токсокароз, описторхоз, цистицеркоз, токсоплазмоз, амебиаз, лямблиоз, для определения эффективности проведённого курса лечения и, наконец, для обнаружения повторного заболевания после полного выздоровления пациента.

Основные методы серологической диагностики

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Данная реакция является непрямым вариантом серологического исследования, то есть, производится она в два этапа. На первом этапе производят выявление необходимого антитела в циркулирующем комплексе антиген – антитело с помощью антиглобулина, схожего по своей структуре с белками иммунной сыворотки. Выявление искомого антитела возможно также при изучении заранее приготовленного антигенного препарата под люминесцентным микроскопом, без использования антиглобулинов.

Иммунофлюоресцентная реакция – очень трудоёмкий процесс, требующий от специалиста немало времени и ответственности. Начинается реакция с подготовки растворов, затем сыворотки и их контрольные образцы подвергаются титрованию (процесс, позволяющий определить содержание определённого вещества путём постепенного смешивания исследуемого раствора с контролируемым количеством реагента). Подготовленные ранее разведения и их контрольные образцы аккуратно наносятся на предметные стёкла с антигеном. Потом препараты подвергаются инкубации, затем следует их отмывание и высушивание на воздухе. На стёкла с антигеном тонким слоем наносится антисыворотка, после этого производится вторичная инкубация препаратов и, вся предыдущая цепь действий повторяется, завершаясь высушиванием препарата. В результате препарат на предметном стекле подвергается обработке глицерином и исследуется в люминесцентном микроскопе.

Результаты проведённой реакции оцениваются по четырёх бальной шкале, которая характеризуется интенсивностью поверхностного жёлто-зелёного свечения клеток антигенов:
+ очень слабое свечение клетки, заметное только на её периферии
++ слабое свечение периферии клетки, но с явно заметным зелёным оттенком
+++/++++ яркое свечение зелёного цвета периферии клетки
Титром реакции считается такое разведение сыворотки, где не менее 50 % клеток антигена проявляют чёткое поверхностное свечение, то есть результат реакции +++ или ++++. Значение тира реакции от 1/80 до 1/100.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

Принцип реакции основывается на способности эритроцитов концентрировать антиген на своей поверхности и склеиваться, образуя видимый осадок, при вступлении в контакт со специфическими антителами. Данная реакция очень информативна в диагностике острой формы описторхоза, острой и хронической формы эхинококкоза и трихинеллёза. Иногда РНГА используется для подтверждения результатов ИФА, что помогает повысить достоверность диагностики паразитарных заболеваний. Набор, необходимый для проведения реакции, содержит: (Д+) эритроциты барана, чувствительные к специфическому антигену, (Д-) эритроциты без антигена, (Э) сухие эритроциты барана, (К+) диагностическую агглютинирующую сыворотку – положительный контрольный тест, (К-) нормальная сыворотка человека – отрицательный тест, реагент, применяемый для подготовки раствора, используемого при разведении сыворотки. Постановка реакции происходит в несколько этапов, строго следующих один за другим. Вначале подготавливают необходимые растворы, затем готовят сыворотки и их контрольные образцы, после чего данные образцы наносятся на планшеты. Далее следует нанесение на планшеты сенсибилизированных (Д+) и несенсибилизированных (Д-) эритроцитов барана. Данные препараты инкубируются, и через некоторое время производится учёт результатов. Результаты проведённой реакции учитываются по четырёх бальной системе.

Интенсивность реакции зависит от количества осаждённых эритроцитов на дне образованных лунок:
– отрицательная реакция, которая характеризуется осаждением эритроцитов на дно лунок в виде небольшого колечка с гладкими краями или «пуговки»
+ слабая интенсивность, для данной реакции характерны небольшие одиночные отложения на дне лунки. Неагглютинированные эритроциты образовывают «маленькое колечко» в центре лунки
++ средняя интенсивность, ей свойственно образование на дне лунки «широкого плотного кольца» из неагглютинированных эритроцитов
+++ интенсивная реакция, агглютинированные эритроциты образуют так называемые «зонтики», в центре которых, явно видны кольца, образованные осевшими неагглютинированными эритроцитами
++++ резко интенсивная реакция, в которой агглютинируются все эритроциты и, образуя «зонтики», выстилают дно лунок.
Титром данной реакции считают последнее разведение сыворотки, при котором выявляется явная агглютинация эритроцитов не менее +++, то есть при интенсивной или резко интенсивной реакции.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Принцип метода заключается в своеобразном взаимодействии антитела с антигеном. Одним из обязательных условий реакции является предварительная фиксация одного из её компонентов, то есть антигена или антитела, на твёрдых планшетах. Затем, при помощи ферментной метки обнаруживают возникнувшие комплексы антиген – антитело благодаря изменению оптической плотности первоначальной смеси (субстрата), что проявляется изменением интенсивности её окраски. ИФА свойственны некоторые преимущества перед остальными серологическими методами, например, данная реакция является наиболее чувствительной, в тестах используются универсальные реагенты, остающиеся стабильными не менее 6 месяцев, автоматизированный процесс учёта результатов реакции. Набор, необходимый для проведения реакции, содержит следующие компоненты: паразитарный антиген, специфические сывороточные антитела, конъюгат, планшета с зафиксированным на ней специфическим паразитарным антигеном, контрольные сыворотки.

Постановка реакции ИФА происходит в несколько этапов: вначале производится приготовление необходимых растворов, затем готовятся исследуемые образцы сывороток, а также контрольные сыворотки, позже следует нанесение приготовленных образцов сыворотки и контрольных сывороток на твёрдофазные носители, планшеты инкубируются, промываются и, только после проведённых процедур в лунки планшет вносится конъюгат. Через некоторое время он удаляется путём промывания лунок. На завершающем этапе в лунки вносится субстратная смесь и выдерживается в тёмном месте при комнатной температуре. Оценка результатов проводится автоматически при помощи специальных измерительных приборов, в некоторых случаях допускается визуальный учёт результатов проведённой реакции.

Достоверность и качество методов серологической диагностики зависят от организации проведённого внутреннего и внешнего лабораторного контроля, состоящих из нескольких независимых процедур, предназначенных для оценки качества результатов проведённого анализа.

Несмотря на то что РПГА анализ крови применяется уже более 10 лет, это тестирование до сих пор не утрачивает актуальности. При помощи процедуры можно выявить разные патологические процессы, но чаще направление на анализ выдается при подозрении на сифилис и инфекционные заболевания органов желудочно-кишечного тракта. При выдаче направления на исследование нужно разобраться в том, как сдавать кровь и насколько точным является тестирование.

Особенности анализа

Из 10 человек расшифровку анализа крови РПГА знают не более половины. Под этой аббревиатурой подразумевается реакция пассивной гемагглютинации. Методика применяется для выявления внутренних патологических процессов, но особенно она эффективна при подозрении на сифилис.

Это обусловлено тем, что тест точно определяет антитела бледной трепонемы – микроорганизма, провоцирующего развитие сифилиса. При попадании в здоровый организм этого возбудителя иммунная система начинает активно вырабатывать антитела против него. Если тестирование показало присутствие возбудителя, пациенту нужно незамедлительно сдать дополнительные анализы на сифилис.

Условно тестирование можно разделить на 2 типа:

• специфическое;
• неспецифическое.

Классификация варьируется от типа антител, которые были выявлены в сыворотке крови. Главное преимущество анализа крови на РПГА заключается в том, что при помощи него можно выявить заболевание, вне зависимости от того, на каком этапе оно находится.

Преимущества РПГА

Тест РПГА проводят во всем мире не только из-за высокой точности и достоверности, но и из-за следующих достоинств:

• процедура отличается простотой. Все, что необходимо сделать пациенту, – сдать кровь;
• отсутствие необходимости использования специального дорогостоящего оборудования;
• быстрая расшифровка. Обычно результат оглашается уже через сутки после сдачи биоматериала.

Показания к тестированию

В целях профилактики медики рекомендуют сдавать кровь на РПГА каждый год. Абсолютными показаниями к проведению такого тестирования являются:

• проявление симптомов сифилиса. Основные признаки этого заболевания – возникновение эрозий и язв на кожном покрове (в особенности в области половых органов), увеличение лимфоузлов, частичное поредение волосяного покрова;
• появление симптомов алопеции разных видов (патологическое облысение);
• незащищенный половой контакт с предполагаемым носителем болезни.

Также тестирование в обязательном порядке назначается людям, которые хотят сдавать кровь как доноры. Кроме вышеперечисленных ситуаций, подобный анализ назначается при оформлении медкнижки и при определении человека в стационар. Также медик может выписать направление на РПГА анализ при подозрении на дифтерию, дизентерию или сальмонеллу.

Что показывает анализ

В большинстве случаев положительный результат РПГА указывает на сифилис врожденной или приобретенной формы. Также при помощи тестирования можно обнаружить следующие патологии:

• вирус иммунодефицита человека;
• гепатит;
• возвратный брюшной тиф;
• туберкулез легких;
• дифтерия;
• коклюш;
• воспалительные поражения слизистых оболочек ротовой полости и гениталий;
• формирование новообразований злокачественного происхождения;
• мононуклеоз инфекционной природы;
• диффузные поражения соединительных тканей;
• венерические заболевания.

Чтобы тестирование показало достоверный результат, сдавать биоматериал нужно, соблюдая все врачебные рекомендации. В противном случае возбудитель может быть не обнаружен.

Многих интересует вопрос, почему при подозрении на сифилис назначается именно анализ РПГА. Популярность такого тестирования в диагностике этой опасной болезни обусловлена его достоверностью. Медики уверяют, что анализ показывает правильный результат в 99% случаев.

При отсутствии антител бледной трепонемы реакция агглютинации не произойдет, что говорит о том, что человек здоров.

Стоит учитывать, что чувствительность такого теста очень высока, поэтому обнаружить возбудитель сифилиса удастся даже на скрытых стадиях заболевания.

Сдачу образца на такое тестирование назначают и при подозрении на другие болезни, например, коклюш или иерсиниоз. Востребованность анализа обусловлена тем, что по сравнению с другими серологическими тестированиями он более чувствителен, что увеличивает вероятность получения достоверного результата.

Как проводится процедура

Для осуществления анализа подходит только венозная кровь. Чтобы тестирование показало точный результат, пациенту требуется подготовиться к нему и придерживаться следующих рекомендаций:

• кровь сдают исключительно на голодный желудок, поэтому есть можно не позднее, чем за 10 часов до процедуры. Единственное, что допускается – выпить утром стакан воды;
• за 3 часа до забора крови нельзя курить;
• если пациенту назначен прием лекарственных средств на постоянной основе, об этом нужно оповестить врача, который будет проводить расшифровку анализа.

В большинстве случаев расшифровка результата занимает не более суток, но иногда длится до 4 дней. Срок может незначительно меняться в зависимости от лаборатории и типа используемого оборудования.

Расшифровка результата

Анализ проводится путем добавления к образцу специального реактива. При наличии в крови бледной трепонемы происходит реакция агглютинации, и эритроциты выпадают в осадок. По числу склеенных эритроцитов можно делать выводы о том, сколько антител присутствует в образце.

Результаты тестирования оцениваются по 4-балльной системе, по размеру сформировавшейся пленки. При появлении реакции агглютинации эритроциты остаются на поверхности лунки, образуя собой «зонтик». При отрицательном результате они опускаются вниз и скапливаются на дне в центре лунки.

Результат тестирования расшифровывается таким образом:

• «-» – отрицательный результат. При нем красные кровяные тельца опускаются на дно, образуя компактный осадок;
• «1+» – неоднозначная реакция. Эритроциты формируют неплотный осадок с нечеткими краями и просветом в середине;
• «2+» – слабоположительная реакция. Внизу лунки появляется пленочка, образуя плотное кольцо с выраженным просветлением в центре;
• «3+» – положительная реакция. Красные кровяные тельца почти целиком застилают лунку, при этом вокруг осадка образуется четкое кольцо;
• «4+» – положительная реакция. При РПГА 4+ эритроциты формируют зонтик и равномерно застилают лунку.

Вот как могут выглядеть результаты теста РПГА

Положительный результат

Если тестирование дало положительную ответную реакцию, это говорит о присутствии в организме возбудителя болезни. В этом случае пациенту назначают дополнительные лабораторные и инструментальные анализы, отталкиваясь от которых можно будет подтвердить или опровергнуть наличие заболевания.

При положительном результате сдать анализ РПГА необходимо провести человеку, с которым инфицированный вступал в половой контакт. Стоит учитывать, что примерно в 5% случаев анализ РПГА дает ложноположительный результат. Чаще всего это связано с игнорированием правил подготовки.

Также ложноположительная реакция может проявиться в следующих случаях:

• формирование онкологических новообразований;
• гепатит разных форм;
• ВИЧ.

В редких случаях ложноположительная реакция является признаком беременности. Отличительная особенность ложноположительного ответа – он сопровождается низким титром. Также стоит учитывать, что анализ может быть положительным, если пациент уже был болен сифилисом, но прошел успешное лечение.

Отрицательный результат

Отрицательная реакция РПГА говорит о том, что:

• возбудитель сифилиса отсутствует в организме;
• с момента инфицирования прошло менее 3-х недель. На столь раннем этапе иммунная система не начинает выработку антител;
• неправильное проведение забора крови.

Если врач подозревал сифилис у пациента, но тестирование показало отрицательный результат. Через некоторое время рекомендуется сдать анализ повторно, чтобы убедиться в отсутствии патогенных микроорганизмов в сыворотке крови.

Насколько достоверен анализ

В ходе клинических исследований было выявлено, если забор крови осуществлялся должным образом и пациент соблюдал все правила по подготовке к процедуре, анализ не покажет ложный результат.

Если РПГА показало положительную реакцию, вероятность того, что человек является носителем сифилиса, составляет более 97%. Что касается ложноположительного ответа, то он может проявиться, если тестирование осуществлялось во время инфекционного заболевания или другого патологического состояния.

Заключение

Сегодня реакция пассивной агглютинации является преимущественной и по результативности превосходит все остальные тестирования. Несмотря на то что методика чаще всего применяется для обнаружения антител бледной трепонемы, при помощи нее можно выявить и другие заболевания инфекционного происхождения. Важно помнить, что результат тестирования зависит не только от методики проведения теста, но и от того, насколько правильно пациент подготовится к процедуре.