Анализ крови ребенка в утробе матери
Метод определения
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени.
Исследуемый материал
Плазма крови (ЭДТА)
Обнаружение гена RHD плода в крови беременной женщины с отрицательным резус-фактором применяют с целью прогнозирования риска развития резус-конфликта и гемолитической болезни плода и новорожденного.
Резус (Rh) – одна из важнейших систем эритроцитарных антигенов (наряду с системой АВ0), клинически значимая при оценке возможности возникновения резус-конфликта и риска развития гемолитической болезни плода и новорожденного.
В системе резус различают пять антигенов. Наиболее иммуногенным является антиген D, аминокислотная последовательность которого кодируется геном RHD. Присутствие антигена D на поверхности эритроцитов определяет положительный резус-фактор (Rh+). Доля резус-положительных лиц, носителей антигена D, в популяции составляет около 86%, а резус-отрицательных лиц (Rh-), не имеющих антигена D – около 14%.
Течение беременности резус-положительным плодом у резус-отрицательных женщин* часто осложняется развитием гемолитической болезни плода, связанной с трансплацентарным переносом эритроцитов плода в кровоток матери. 98% случаев гемолитической болезни новорожденных связаны с D-резус-антигеном. Попадая в кровь резус-отрицательной матери, он вызывает образование специфических антител, которые проникают через плаценту и разрушают эритроциты плода. Это влечет за собой развитие гемолитической болезни плода и новорожденного. При раннем проявлении резус-конфликт может послужить причиной самопроизвольного прерывания беременности или преждевременных родов. Сенсибилизация матери к D-антигену и риск развития резус-конфликта возрастают с каждой последующей беременностью резус-положительным плодом независимо от того, прервалась ли беременность или завершилась родоразрешением.
В настоящее время при выявлении резус-конфликта назначают следующий комплекс исследований:
- измерение уровня специфичных антител матери к D-антигену плода;
- получение плодного материала при хорион- и плацентобиопсии в ходе амнио- и кордоцентеза, что относится к инвазивным методам;
- допплерометрическое исследование скорости кровотока в аорте и средней мозговой артерии плода.
Риск самопроизвольного прерывания беременности при применении инвазивных методов исследования составляет 2-3%, а отсутствие антител не гарантирует, что плод резус-отрицательный, т. к. даже при положительном резусе у плода антитела у матери могут не вырабатываться по причине целостности плаценты в момент обследования или слабого иммунного ответа. Ситуация осложняется тем, что резус-конфликт может возникнуть на любом сроке беременности. Кроме того, возможна сенсибилизация матери. Выявление ДНК плода (фетальной фракции, свободно циркулирующей ДНК, фетДНК) в крови матери обладает рядом преимуществ:
- относится к неинвазивным для плода процедурам, не несет угрозы течению беременности, не вызывает осложнений;
- исследование фетДНК возможно, начиная со срока 10 акушерских недель беременности;
- точность результата 96 – 100%**
- позволяет оценить целесообразность назначения терапии иммуноглобулином при отсутствии в крови беременной женщины анти-резусных антител на сроке 20 недель.
Аналитические показатели метода
Определяемые участки ДНК: 7-й и 10-й экзоны гена RHD. Диагностическая чувствительность: 92-100%. Диагностическая специфичность: 90-100%. Чувствительность метода составляет 150 копий геномной ДНК (суммарной ДНК матери и плода), что соответствует 400 копиям гена RHD плода в 1,0 мл исследуемого образца плазмы.
Ограничения метода
У 1% серологически резус-отрицательных женщин определяется наличие гена RHD. Это происходит в следующих случаях:
- Ген RHD присутствует и генотипически резус-фактор будет положительным, но в результате мутаций D-антиген не синтезируется и серологическим методом определяется как отрицательный;
- Ген RHD присутствует полностью или частично, и генотипически резус-фактор будет положительным; из-за мутаций синтезируется измененный D-антиген. Серологически это определяется или как слабый резус-фактор, или как нестабильно положительный.
По крови таких пациенток определить резус-фактор плода методом ПЦР невозможно. Чаще всего отрицательный резус-фактор обусловлен полным отсутствием гена RHD. В таких случаях применяют серологический метод вместе с ПЦР. Резус-фактор определяется как отрицательный при совпадении отрицательных результатов тестов.
* У беременных женщин, имеющих резус-положительную принадлежность, проблем совместимости по резус-фактору с плодом не возникает.
** Величина обусловлена состоянием плаценты, особенностью течения беременности и возрастает с увеличением срока беременности.
Обращаем внимание, что сроки выполнения ПЦР-исследований могут быть увеличены при проведении подтверждающих тестов.
Противопоказания к проведению исследования:
- Трансплантации органов и тканей в анамнезе у пациентки
Литература
- Costa J.M., Giovangrandi Y., Ernault P., Lohmann L., Nataf V., El Halali N., Gautier E. Fetal RHD genotyping in maternal serum during the first trimester of pregnancy. British journal of haematology. 2002;119:255-260.
- Finning K.M., Martin P.G., Soothill P.W., Avent N.D. Prediction of fetal D status from maternal plasma: introduction of a new noninvasive fetal RHD genotyping service. Transfusion. 2002;42:1079-1085.
- Freeman K., Osipenko L., Clay D., Hyde J., Szczepura A. A Review of Evidence on Non-invasive Prenatal Diagnosis (NIPD): Tests for Fetal RHD Genotype. Workpackage 6, SAFE Network of Excellence Warwick Medical School, UK. 2006.
- Wagner F.F., Frohmajer A., Flegel W.A. RHD positive haplotypes in D negative Europeans. BioMed Central genetics. 2001;15:10.
- Минеева П.В. Группы крови человека. Основы иммуногематологии. – СПб. 2004:188.
- Инструкция по применению набора реагентов для выявления гена RHD плода в крови матери методом ПЦР в режиме реального времени Резус-фактор плода ООО «ДНК-технология». Регистрационное удостоверение № ФСР 2017/5310.
Источник
Вынашивание и рождение ребенка – очень волнующий и серьезный процесс. На протяжении всей беременности специалисты-медики (перинатологи, гинекологи) следят за целым перечнем показателей и оценивают факторы, характеризующие состояние здоровья матери и развивающегося малыша. Одним из таких показателей является резус-фактор плода.
Что такое резус-фактор
Под этим понятием скрывается особый белок, располагающийся на поверхности эритроцитов. У большинства людей (около 85%) этот белок есть, поэтому их называют резус-положительными. У остальных 15% населения планеты этого белка нет. Такие люди считаются резус-отрицательными. Если выражаться другими словами, то резус-фактор – это одна из многих иммунологических характеристик крови, которая не оказывает влияния на состояние здоровья человека.
Когда это важно?
Существуют ситуации, когда знать о своей резус-принадлежности надо обязательно. Во-первых, это важно при возникновении ситуации, когда требуется переливание крови. Во-вторых, подготовка к оперативному вмешательству также предполагает осведомленность в этом вопросе. В-третьих, важно знать резус-принадлежность плода при планировании беременности и рождении ребенка. В этом случае наиболее опасна ситуация, когда будущая мама резус-отрицательна, а развивающийся младенец имеет положительную кровь. Здесь уже имеет смысл говорить о резус-конфликте.
Суть «конфликтной ситуации»
Представим себе, что женщина имеет Rh-отрицательную кровь, а будущий отец резус-положителен. Вероятность развития конфликта в этом случае оценивается как 50 на 50. Это достаточно много, поэтому ситуация должна находиться под жестким контролем специалистов.
При таком варианте у будущих родителей ребенок может унаследовать положительный резус-фактор отца. Через плацентарный барьер эритроциты крови ребенка могут попасть в кровь матери и будут восприняты ее организмом как чужие, что даст толчок ее иммунной системе к выработке антител для уничтожения эритроцитов крови малыша. В тяжелых случаях возникает угроза жизни ребенка, поэтому провести анализ на резус-фактор плода – значит дать шанс малышу родиться здоровым.
Симптоматика
Для чего нужно знать резус-фактор своего будущего ребенка? Проведя все необходимые исследования, будущая мамочка либо полностью исключит возможность развития конфликта, успокоится и будет вынашивать здорового ребенка, либо узнает о существующей проблеме и предпримет все необходимые меры для того, чтобы родить здорового малыша.
Однако для организма взрослой женщины все процессы, связанные с такого рода конфликтом, не несут никакой угрозы или опасности и не имеют никаких симптомов. Тогда как для ребенка эта ситуация может иметь катастрофические последствия.
Грозные признаки наличия проблем с резус-принадлежностью дает возможность увидеть УЗИ плода. Здесь будут видны и скопления жидкости в тех местах, где ее не должно быть, и отечность, и поза ребеночка, которую нельзя назвать естественной (поза Будды).
Скопление больших объемов жидкости приводит к увеличению животика у ребенка, вынуждает его развести ножки в стороны. При проведении УЗИ с высокой долей вероятности будет виден сдвоенный контур детской головки, что свидетельствует о наличии отечности. Не соответствует норме размер плаценты и диаметр вены в пуповине.
Все эти признаки указывают на развитие конфликта между организмами матери и малыша и должны стать побудительным мотивов для того, чтобы выяснить резус-принадлежность развивающегося в утробе ребенка.
Определения резус-фактора ребенка по материнской крови
Современное медицинское оборудование дает возможность выяснить резус-фактор плода уже в первом триместре беременности, начиная с 10 недели.
Суть метода в следующем. У будущей матери производится забор венозной крови. Из нее выделяется ДНК развивающегося в утробе ребенка. Далее эта ДНК исследуется на предмет наличия в ней гена RhD (резус-фактора). Если в процессе изысканий фрагменты резус-фактора обнаруживаются, можно считать что будущий человек резус-положителен. Если таких фрагментов в ДНК ребенка нет – значит, малыш имеет отрицательную резус-принадлежность.
Своевременно произведенное определение резуса плода дает возможность вовремя начать профилактические мероприятия, отодвигающие возникновение резус-конфликтов на более поздние сроки и, как следствие, сводящие к минимуму нанесение вреда здоровью ребенка.
Эта методика считается неинвазивной и не несет никакой угрозы жизни и здоровью матери и ребенка. Однако до недавнего времени узнать резус-фактор плода можно было только с помощью проведения исследования ворсин плаценты или взятой внутриутробно крови у малыша. Эти виды методик (амниоцентез, кордоцентез) считают инвазивными и только строгие медицинские показания могут стать причиной их назначения.
Амниоцентез
Если возникает необходимость выяснить состояние ребенка как можно более точно, встает вопрос о том, как определить резус-фактор плода, специалисты могут предложить амниоцентез, который представляет собой прокол плодного пузыря с целью взятия околоплодных вод для проведения исследований о содержании в них билирубина. Этот показатель с высокой точностью характеризует состояние малыша.
Однако женщине стоит знать, что процедура эта является достаточно опасной. Всегда существует вероятность занесения инфекции в околоплодные воды. Также возможно подтекание жидкости за пределы плодного пузыря, появление кровотечения. Определение резус-фактора плода методом амниоцентеза может спровоцировать отслойку плаценты раньше времени.
Процедура может быть назначена в тех случаях, когда антитела к резус-фактору уже присутствуют в крови матери и их содержание (титр) составляет 1:16 или у этой женщины уже есть ребенок с гемолитической болезнью новорожденных (ГБН) в тяжелой форме.
Кордоцентез
Как узнать резус-фактор плода с помощью этой методики? Суть в том, что в пуповине делается прокол, оттуда производится взятие крови для проведения исследований. С применением этого метода уровень билирубина устанавливается точнее, чем при амниоцентезе. Переливание крови малышу также производится с применением этого способа.
Кордоцентез также является достаточно опасным и может вызвать все осложнения, характерные для амниоцентеза. Кроме того, возможно образование гематомы на пуповине, что в дальнейшем может нарушить нормальный обмен веществ между организмами матери и младенца.
Определение резус-фактора плода с применение кордоцентеза обычно назначается при содержании антител в пропорции 1:32, наличии детей, больных ГБН или умерших от последствий резус-конфликта.
Возможно ли лечение резус-конфликтов у беременных
Лечение, конечно же, возможно. Однако самым действенным методом, дающим наиболее эффективный результат, является переливание крови ребенку. Процедура среди специалистов считается очень рискованной, но значительно улучшает состояние будущего человека, и с высокой степенью вероятности дает возможность избежать преждевременного родоразрешения.
Ранее были популярными другие методики лечения, которые тем не менее не давали явного терапевтического эффекта и считались мало- или совсем неэффективными. К таким способам можно отнести пересадку кожи от мужа будущей матери, плазмоферез и т.п.
В любом случае, если резус-фактор плода и его матери дает возможность поставить диагноз резус-конфликта, самым действенным вариантом благополучного завершения беременности и рождения здорового малыша будет нахождение под контролем специалистов-медиков и выполнение всех их указаний и назначений.
Резус-конфликт и родоразрешение
Когда вопрос о том, как определить резус-фактор плода, решен, и наличие конфликта в организме матери установлено, большое значение при протекании беременности имеет временной фактор. Специалисты говорят, что чем раньше это произошло, тем с большими проблемами и осложнениями будет протекать беременность.
Причина этого явления в том, что эффект от резус-конфликта с течением времени накапливается. Поэтому в основной массе случаев такую беременность специалисты рекомендуют заканчивать плановыми преждевременными родами.
Медики всеми доступными способами следят за состоянием ребенка и на основании полученной информации принимают решение о том, необходимо ли сохранение беременности или малышу безопаснее родиться чуть раньше времени. Естественные роды в таких ситуациях возможны только в том случае, если ребенок находится в удовлетворительном состоянии и никаких других осложнений нет. В процессе развивающейся родовой деятельности врачи ведут мониторинг жизненно важных характеристик состояния малыша и если появляются какие-либо факторы, осложняющие роды, принимается решение о проведении операции кесарева сечения. Для данной конкретной проблемы такой вариант родоразрешения считается наиболее щадящим.
Источник
Резус-фактор плода – это параметр, который играет жизненно важную роль в успешном протекании беременности. Если он не совпадает с материнским, возникает резус-конфликт, несущий угрозу для здоровья ребенка. Раннее выявление проблемы позволяет врачам сохранить беременность и довести ее до благополучных родов.
Для чего нужно определять резус фактор плода?
Открытие нового антигена, названного резус-фактором, привело ученых к пониманию такого явления, как резус-конфликт между матерью и ребенком. По своей сути резус-фактор – это белок, скапливающийся на оболочке эритроцита. У большинства людей он присутствует, если же его нет, то человека относят к резус-отрицательному носителю.
Вот как получается резус-конфликт матери и ребенка:
- проблема возникает, если малыш унаследовал от отца положительный резус-фактор, а у матери он отрицательный;
- эритроциты плода, обладающие положительным резус-фактором, попадают через плаценту в кровь женщины;
- иммунные клетки женщины воспринимают их враждебно и начинают выработку антител;
- запускается обратная реакция, антитела проникают в кровь плода и убивают его эритроциты.
Образовавшийся резус-конфликт может привести к гибели плода в самом начале беременности или рождению малыша с водянкой, анемией, желтухой или отеком. Для предупреждения печальных последствий на 8-10-й неделе беременности проводится анализ на RhD. При одинаковых показателях у женщины и ребенка никакого конфликта не возникает, но ребенок становится носителем отрицательного антигена.
При первой беременности, как показывают многочисленные наблюдения, при резус-положительном статусе плода выработка антител в крови женщины происходит в минимальном количестве. Опасность настигает женщину при второй беременности: у ребенка повышается риск развития гемолитической болезни.
Суть методики
Исследование методом ПЦР (полимеразной цепной реакции) – это важнейшее открытие молекулярной биологии. Благодаря этому анализу, у репродуктологов появился абсолютно безопасный способ определения резус-фактора плода. Совсем недавно врачам приходилось добывать материал для изучения, проникая в утробу матери. Инвазивная процедура создавала определенные риски для здоровья ребенка. Новая методика позволяет вычислить резус-фактор малыша по крови его мамы.
Как проходит определение резус-фактора плода? Женщина приходит в лабораторию, где у нее берут кровь из вены. Полученный материал пропускают через специальный аппарат, который выделяет из крови матери фрагменты ДНК ребенка. Затем выделенную клетку исследуют на присутствие в ней гена RhD: если он обнаруживается, значит, у плода положительный резус. Соответственно, отсутствие гена говорит об отрицательной резус-принадлежности ребенка.
Медицинским сообществом такая методика признана лучшей на сегодняшний день, и по технике определения, и по срокам получения результата. Кровеносная система эмбриона начинает формироваться с 6-8 недели беременности, с этого же срока врачи могут определить его резус. Такая ранняя диагностика позволяет вовремя узнать о резус-конфликте и принять необходимые лечебные меры по снижению риска серьезных последствий.
Что делают при резус-конфликте?
Какая задача стоит перед врачами при обнаружении резус-конфликта? Прежде всего, это постоянный контроль за ходом беременности. С помощью УЗИ отслеживается состояние плода. Признаками иммунологической несовместимости считаются:
- избыток жидкости в теле плода;
- при исследовании ультразвуком отчетливо просматривается отечность ребенка;
- неестественное расположение плода в утробе (поза лотоса).
Для предупреждения возможных осложнений матери назначают внутривенные инъекции антирезус-иммуноглобулина. Препарат стимулирует вывод из крови матери антител, способных уничтожать эритроциты ребенка. Для повышения шансов на успешные беременность и роды рекомендуется проводить вакцинацию препаратом перед планированием беременности. Показанием к его введению служит наличие резус-конфликта между мужчиной и женщиной.
В сложной ситуации может быть принято решение о переливании крови плоду. Рискованная процедура, но она значительно повышает шансы ребенка на выживание. Наблюдая за развитием плода, гинеколог делает выводы о прерывании или продолжении беременности. Если состояние ребенка удовлетворительно, роды проводятся в срок и естественным путем. Часто ситуация требует преждевременного родоразрешения через кесарево сечение, чтобы сохранить здоровье плода.
Сухие цифры статистики говорят о том, что 15% забеременевших женщин находятся в группе риска по резус-конфликту. Появление новой методики, позволяющей на ранних сроках определять иммунобиологическую несовместимость матери и плода, подарило многим семейным парам надежду благополучно выносить и родить ребенка. Совершенствуются методы исправления ситуации, разрабатываются эффективные лекарства, улучшаются способы исследований. Возможно, скоро резус-конфликт перестанет восприниматься как угрожающий фактор, а станет лишь небольшим препятствием.
Врач акушер-гинеколог, репродуктолог, консультант по грудному вскармливанию, окончила ЧГУ им. Ульянова со специализацией гинекология, маммология Подробнее »
Источник
