Анализ крови реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном

При подозрении на сифилис врачи назначают исследование крови на антитела к кардиолипиновому антигену. Этот анализ является усовершенствованным вариантом реакции Вассермана (RW). В классическом виде тест на RW не используется уже около 30 лет. В наши дни это исследование проводят исключительно иммунологическими методами. Каковы нормальные показатели этой пробы? И как правильно расшифровать ее результаты? Эти вопросы мы рассмотрим в статье.

Что это такое?

Кардиолипиновый антиген представляет собой липидоподобное вещество. По своему составу оно похоже на белки возбудителя сифилиса — бледной трепонемы. Такой препарат используют для ранней диагностики этого опасного венерического заболевания. Он позволяет выявить патологию на ранних стадиях.

На исследование берут венозную кровь и смешивают с кардиолипиновым антигеном. Реакция взаимодействия биоматериала и препарата называется микропреципитацией (РМП). Если человек здоров, то его кровь не вырабатывает антитела к антигену. Если же пациент страдает сифилисом, то в его организме активно образуются иммуноглобулины класса M и G. В этом случае в смеси крови и препарата появляются хлопья. Этот осадок представляет собой скопление комплексов «антиген-антитело» (преципитат).

Образование иммуноглобулинов у зараженного человека начинается через 7-10 дней после появления шанкра (безболезненной язвы) на коже или слизистой. Это ранний симптом сифилиса. Обычно выработка антител наблюдается через 2-3 недели после инфицирования.

Для проведения теста используют набор «Кардиолипиновый антиген». Его получают из бычьего сердца. Экстракт органа смешивают с холестерином и лецитином. Полученное вещество обладает схожими свойствами с протеинами бледной трепонемы. Оно способно вызывать образование иммуноглобулинов при реакции с кровью больного сифилисом.

Показания

Анализ с кардиолипиновым антигеном назначают в следующих случаях:

• при наличии незащищенных половых контактов пациента со случайными партнерами;
• при бытовых контактах с больными сифилисом;
• при симптомах первичной и вторичной стадии сифилиса (шанкре, высыпаниях на теле);
• при подозрении на нейросифилис (психических и неврологических нарушениях);
• детям, рожденным инфицированными женщинами;
• для контроля эффективности противосифилитической терапии.

Этот тест не всегда бывает информативен при запущенных (третичных) формах патологии. На поздних стадиях сифилиса выработка антител существенно снижена.

Пробу с кардиолипиновым антигеном обязательно сдают во время беременности. Кроме этого, такое исследование требуется пройти донорам и людям, оформляющим медицинскую книжку.

Как проводится исследование?

Очень важно тщательно подготовиться к анализу. Этот тест довольно часто дает ложноположительные результаты. За двое суток до сдачи крови нужно полностью исключить:

• употребление спиртных напитков (даже слабоалкогольных);
• прием препаратов с наперстянкой;
• жирную пищу.

Анализ нужно сдавать утром натощак. На исследование берут 8-10 мл венозной крови. Результаты теста обычно бывают готовы через 1-2 дня.

Норма

Если пациент не страдает сифилисом, то его кровь не вступает в реакцию с кардиолипиновым антигеном. Отрицательный результат анализа в большинстве случаев означает, что человек здоров. В расшифровке теста это обозначается знаком «-» или «RW-«. Это считается нормой.

Однако даже при отрицательных результатах теста нельзя полностью исключать, что человек инфицирован бледной трепонемой. Ведь антитела не вырабатываются в инкубационный период патологии. Очень слабое продуцирование иммуноглобулинов отмечается и при третичной форме сифилиса. Поэтому если у человека при отрицательной реакции Вассермана имеются признаки патологии, то анализ назначают повторно.

Возможные отклонения

Рассмотрим расшифровку анализа. Выраженность положительной реакции обозначена в бланке с результатами пробы знаками «+». Отклонениями от нормы считаются следующие данные теста:

• «+ » — сомнительный результат (рекомендуется пересдать анализ).
• «++» — слабоположительная реакция.
• «+++» — положительный результат.
• «++++» — резко положительная проба.

Что делать, если проба с кардиолипином дала положительные результаты? Диагноз «сифилис» обычно не ставится только лишь по реакции Вассермана. В этом случае врачи всегда назначают дополнительные исследования.

Этот тест в 70 % случаев позволяет выявить первичную стадию сифилиса, и в 100 % случаев показывает вторичную форму болезни. Однако положительные результаты исследования не всегда свидетельствуют об инфицировании бледной трепонемой. На данные этого анализа могут повлиять многие факторы. Они будут рассмотрены далее.

Ложные результаты

Нередко бывают случаи, когда проба Вассермана показывает образование антител, однако при этом человек не страдает сифилисом. Ложная положительная реакция отмечается при следующих заболеваниях и состояниях:

• беременности;
• инфекционном мононуклеозе;
• подагре;
• сахарном диабете;
• малярии;
• кори;
• скарлатине;
• бруцеллезе;
• пневмонии;
• хламидиозе;
• микоплазменной инфекции;
• вирусном гепатите;
• туберкулезе;
• злокачественных опухолях;
• тиреоидите;
• аутоиммунных болезнях (системной красной волчанке, склеродермии, ревматоидном артрите);
• инфицировании энтеровирусами;
• недавней вакцинации;
• у пациентов старческого возраста (в 10 % случаев);
• употреблении алкоголя накануне исследования;
• наркотической зависимости.

Можно сделать вывод, что перечень заболеваний и состояний, при которых отмечаются ложные результаты теста, довольно обширен. Поэтому для постановки точного диагноза назначают иммунофлюоресцентный анализ крови. Он позволяет более достоверно выявить наличие иммуноглобулинов G к бледной трепонеме. Проводят также анализ крови методом ПЦР-диагностики. Он показывает наличие у пациента фрагментов ДНК бледной трепонемы. Окончательный диагноз врач ставит только на основании комплексного исследования.

Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном (RPR — Rapid Plasma Reagin)

— скрининговый метод диагностики сифилиса, (является нетрепонемным тестом, так называемые реагиновые или кардиолипиновые тесты, которые проводят при первичном обследовании на сифилис) посредством определения реагинов — антител класса IgM и IgG (их еще называют реагины), образующихся против антигенов липидного происхождения, образовавшихся при повреждении клеток больного сифилисом или против липидных антигенов бледной трепонемы. Основные показания к применению: первичное обследование на сифилис, медицинские осмотры, контроль эффективности лечения.

RPR

— первичный скрининговый тест на сифилис, выявляющий антифосфолипидные антитела (своего рода отборочный тест для последующего подробного обследования на сифилис). В настоящее время одна из классических реакций диагностики сифилиса — реакция Вассермана в лабораториях практически не выполняется. На смену этой реакции пришли новые современные методы ИФА-диагностики. Метод RPR, в какой то мере, можно рассматривать как замену реакции Вассермана. Метод RPR относится к нетрепонемным тестам. Антитела выявляемые в RPR реакции появляются, как правило, появляются в крови больного через 3-5 недель после заражения (через 10 дней после появления первичного шанкра). В первые 10 дней после появления твердого шанкра они, как правило, не обнаруживаются.

Считается, что RPR-тест положителен в 78% случаев при первичном сифилисе и в 97% случаев при вторичном сифилисе. Низкий титр реагиновых антител (менее 1:8) в первую очередь свидетельствует о ложноположительной реакции, однако такие цифры можут быть и при позднем сифилисе.

Следует учитывать, что липопротеиды трепонем и тканей человека сходны друг с другом, поэтому результаты нетрепонемных реакций могут быть в ряде случаев ложноположительными. Образовавшиеся антитела могут быть неспецифическими — их называют реагины. Они образуются на липидные антигены бледной трепонемы и против аутоантигенов, которые образуются при разрушении клеток больных. Поскольку тест не специфический, то можно ожидать получение как ложноположительных, так и ложноотрицательных результатов. В случае положительной реакции RPR проводят тесты — ИФА, РПГА, РИФ, РИТ.
Присутствие в крови антител к фосфолипидам является одной из причин получения ложноположительных результатов в реакции преципитации с кардиолипиновым антигеном (VDRL-тест – Venereal Disease Research Laboratory).
В VDRL-тесте определяют агглютинацию липидных частиц, содержащих холестерин и кардиолипин. Антитела к фосфолипидам присоединяются к кардиолипину этих частиц и вызывают их агглютинацию. Аналогичная реакция наблюдается у больных сифилисом, у которых ложноположительный характер VDRL-теста должен быть доказан отрицательными результатами специфических методов исследования на сифилис, которые выявляют непосредственно антитела к трепонемным антигенам.

Ложноположительная реакция может наблюдаться при аутоиммунных заболеваниях (системная красная волчанка, склеродермия). Ложноположительная реакция также является одним из признаков АФС (в результате повышения содержания антител к кардиолипину). Выявляются, также, больные с транзиторно-положительной реакцией, которые часто болеют вирусными и бактериальными инфекциями (мононуклеоз, лепра, малярия, боррелиоз — болезнь Лайма, корь, ветряная оспа, хламидиоз, туберкулез), при беременности.

Данные антитела у больных сифилисом образуются, как правило, в 70-80% случаев при первичном сифилисе, и практически, достигают 97% у больных со вторичным и ранним латентным сифилисом. После успешного лечения сифилиса у 90% пациентов реакция RPR становится отрицательной.

Согласно приказу МЗ РФ от 26.03.2001 г. за №87 «О совершенстовании серологической диагностики сифилиса» последовательность обследования пациентов на сифилис представляется следующим образом:

• При первичном обследовании производится постановка отборочной (скрининговой) реакции микропреципитации (РМП) или её модификации (RPR — РПР, TRUST — ТРАСТ, VDRL — ВДРЛ) в количественном и качественном вариантах и в случае положительного результата — любого специфического подтверждающего трепонемного теста (РПГА, ИФА, КСР, РИФ, РИТ).
• После окончания терапии ставится РМП или её модификация и по снижению титра судят о динамике инфекционного процесса и эффективности терапии. Подтверждением эффективности проведенной терапии считается снижение титра в 4 и более раз в течение 1 года.
• По окончанию этого срока осуществляется постановка той же специфической реакции, что и при первичном обследовании. Следует учитывать, что специфические трепонемные тесты могут оставаться положительными (не негативировать) в течение ряда лет, а в отдельных случаях остаются положительными на всю жизнь.