Анализ крови пцр на гепатит с натощак

Гепатит С – заболевание, которое долгое время протекает без видимых признаков, а на поздней стадии приводит к тяжелым, нередко необратимым последствиям. Чтобы подтвердить или опровергнуть присутствие вируса в организме, назначают различные виды анализов – ПЦР, ИФА, а также иные исследования. Все их объединяет биологический материал – венозная кровь. Не существует строгих правил подготовки к анализу на гепатит С, но есть общие рекомендации, которых следует придерживаться, чтобы получить предельно достоверный результат. 

Правила подготовки за 3-5 дней

К анализу на гепатит С готовятся поэтапно в течение нескольких суток. В этот промежуток желательно исключить факторы, которые могут повлиять на физиологическое состояние, а также биохимические, гормональные и гематологические показатели. 

Питание

Сдача крови на гепатит С обычно проводится в период с 8 до 11 утра натощак. Время выбрано для того, чтобы между процедурой и последним приемом пищи прошло не меньше 8 и не больше 14 часов.

Если человек принимает пищу в этот промежуток, результаты исследования будут искажены:

• продукты с содержанием сахаров вызывают колебание глюкозы;
• жирная пища провоцирует изменение мутности проб крови, повышает холестерин, калий, щелочную фосфатазу и триацилглицериды;
• томаты, бананы, орехи повышают показатели серотонина;
• кофе и чай вызывают скачок кортизола, изменение показателей эритроцитов и лейкоцитов, глюкозы.

Если период голода продолжается более 14 часов, анализы дадут результат, который невозможно будет сопоставить со значением нормы.

За сутки до исследования нужно отказаться от жирной и чрезмерно сладкой пищи.

Питание должно соответствовать обычному режиму. Для ужина накануне сдачи подойдет нежирный творог, диетическое мясо птицы, каши на воде, яблоки, макароны из твердых сортов пшеницы, яйца, хлеб, нежирная рыба, суп на легком овощном бульоне. 

Ограничения не касаются чистой питьевой воды. Ее можно употреблять в привычном режиме.

Ограничение физической активности

Накануне анализа крови на гепатит С рекомендуется отказаться от физических перегрузок (в том числе, от секса), поскольку это вызывает гормональные и биохимические перестройки в организме. Активные нагрузки влияют на следующие показатели:

• ферменты (креатинфосфокиназа, альдолаза, аспартатаминотрансфераза, лактатдегидрогеназа);
• гормоны (тестостерон, лютеинизирующий гормон, андростендион).

За сутки до исследования на гепатит желательно отказаться от посещения бассейна и тренажерного зала.

Алкоголь

За 3-5 дней до анализа надо исключить алкоголь. Он оказывает следующее влияние на показатели крови:

• снижает концентрацию эритроцитов, гемоглобина, тромбоцитов;
• повышает вязкость крови и скорость оседания эритроцитов;
• угнетает функцию печени и поджелудочной железы, за счет чего уровень сахара в лабораторных показателях снижается;
• повышает образование молочной и уксусной кислоты;
• повышает содержание азотистых веществ из-за усиленного распада белка;
• вызывает сгущение крови и повышает ее свертываемость;
• понижает концентрацию антител, создает картину, которая соответствует вирусному гепатиту и прочим инфекциям, аллергии, злокачественным опухолям, может вызвать ложноположительный результат;
• снижает выработку гормонов щитовидной железы (Т3 и Т4) и надпочечников (кортизол, альдостерон, андрогенный гормон ДЭА, норадреналин).

Медикаменты

Прием лекарств – самый надежный способ исказить результаты анализа на гепатит и прочих лабораторных показателей. Препараты оказывают физико-химическое и фармакологическое влияние.

Физико-химическое, или прямое, влияние выражается в том, что действующие вещества вмешиваются в сам ход анализа. Например, тетрациклин, хинидин и другие препараты обладают свойствами флюоресценции. Витамины А и В2 повышают оптическую плотность раствора и тем самым искажают показатели билирубина.

Биологическое, или опосредованное, влияние выражается в том, что лекарства связываются с белками, повышают или подавляют их синтез, оказывают побочное действие на разные органы и системы, вызывают токсический эффект при передозировке, а также накапливаются в тканях. Их прием накануне анализа может спровоцировать ложноположительные и ложноотрицательные результаты. Такой эффект заметен при приеме седативных, снотворных, психотропных и других препаратов.

Лаборатории рекомендуют перед анализом прекратить прием лекарств и выждать примерно 4-5 периодов полувыведения препарата. В среднем перерыв составляет около 3 суток. После анализа прием препаратов возобновляется.

Если лекарства жизненно необходимы и их нельзя отменить, предупредите лечащего врача, чтобы тот учел погрешности, вносимые препаратом.

Что еще может повлиять на точность анализа

Биохимические свойства крови изменяются под действием самых разных факторов:

1. Курение. Изменяет секрецию некоторых биологически активных веществ. Рекомендуется отказ минимум за 60 мин. до анализа.
2. Инструментальные обследования, например, ректальные, биопсия, МРТ, УЗИ, рентген и т.д. Нужен недельный перерыв между процедурой и анализом.
3. Тепловые процедуры. Требуется суточный перерыв перед сдачей крови на анализ на гепатит С и приемом бани или сауны.
4. Менструации у женщин. Вызывают колебания гормональных показателей.
5. Диета. Скудное питание провоцирует скачок билирубина. Рекомендуется есть в привычном режиме, но исключить жирную пищу.

Эмоциональное состояние оказывает непосредственное влияние на на показатели. При психологическом напряжении повышается уровень гормонов, альбумина, глюкозы, холестерина, фибриногена. Чтобы справиться с невольным волнением, стоит прийти в лабораторию за 10-20 минут до взятия проб и немного отдохнуть. Тогда влияние факторов стресса будет минимальным.

Особенности забора крови

Для анализа на гепатит С подходит только венозная кровь. Взятие материала из пальца не практикуется: если конечности холодные или отекшие либо в них нарушено кровообращение, результат будет недостоверным.

Лаборант проводит пункцию вены стерильной иглой в локтевом сгибе. Если это по каким-либо причинам невозможно, прокол делается в венах кистей рук или берется сосуд выше большого пальца руки. У детей забор может быть выполнен из яремной, лобной или височной вены. При наличии шрама или гематомы в точке забора выбирается другое место.

Анализ на гепатит может проходить как в лаборатории, так и дома. Чтобы сэкономить время или исключить фактор волнения, следует поинтересоваться, выполняет ли лаборатория выездные исследования, и по возможности сдать кровь дома.

Анализ крови на гепатит проводится натощак. Чистить зубы или воспользоваться жевательной резинкой лучше после диагностики, так как это провоцирует скачок сахара. Перед пункцией исключите резкие движения.

Перед непосредственной сдачей необходимо несколько минут посидеть, восстановить глубокое дыхание, успокоиться.

Повторный анализ на гепатит C следует сдать в тех же условиях, что и в предыдущий раз (та же лаборатория, аналогичное время, забор из той же вены). Если анализ сделан в разных лабораториях и с разной подготовкой, это не покажет результат в динамике.

Когда будут готовы результаты

На продолжительность исследования влияет не только методика, но и расположение лаборатории. Например, если образцы отправляются в соседний крупный город, где проводится исследование, то результат задержится. В среднем диагностика гепатита выполняется в следующие сроки:

• определение билирубина, АСТ, АЛТ, ГГТ – 1 день;
• ПЦР количественный и генотипирование – 1 день;
• антитела IgM к белкам вируса гепатита С – 2 дня;
• ПЦР в качественном формате, ультрачувствительный тест – 4 дня;
• иммуноблот рекомбинантный, антитела к вирусу гепатита С, IgG – 5 дней;
• ПЦР с количественным выявлением РНК вируса в режиме реального времени – 5 дней;
• выявление РНК гепатита С в плазме крови у пациентов с хронической инфекцией – 10 дней.

Если лаборатория находится не в клинике, где берется анализ, то результат исследования приходит с задержкой. 

Для постановки диагноза “хронический вирусный гепатит С (ХВГС)” требуется комплексное обследование человека, которое включает клинические, лабораторные и инструментальные исследования. Важным с точки зрения диагностики для постановки правильного диагноза является метод ПЦР – полимеразная цепная реакция.

Содержание
Что показывает этот анализ и зачем он нужен?
Три вида ПЦР анализов
Как сдавать анализ ПЦР на гепатит С?
Результат анализа ПЦР на гепатит С

Что показывает этот анализ и зачем он нужен?

Этим лабораторным методом обнаруживают РНК вируса гепатита С в крови человека. Вместе с иммуноферментным анализом (ИФА) на антитела к вирусу, ПЦР используют для постановки диагноза ХВГС и генотипа его возбудителя. Это исследование является одним из новейших методов лабораторной диагностики. Его достоверность при ХВГС превышает 97%, что считается очень хорошим показателем для исследований.

Существует три ПЦР анализа крови при ХВГС: качественный, количественный и генотипирование вируса. Первое исследование (качественный анализ) на вирус обнаруживает его в крови, поэтому используется только для постановки диагноза.

Второе (количественное) исследование определяет степень вирусной нагрузки на организм, поэтому применяется для контроля эффективности терапии.

Третий ПЦР (генотипирование) уточняет диагноз, устанавливая генотип вируса, что очень важно для назначения правильного противовирусного лечения.

Суть методики полимеразной цепной реакции заключается в использовании ферментов, которые многократно размножают генетический материал возбудителя в биоматериале. В процессе такой репликации пробирку с кровью несколько раз подогревают и охлаждают до температуры, необходимой для ускорения ферментативной реакции. В результате этих манипуляций количество вирусного генома многократно увеличивается, что позволяет его выявить даже при минимальном количестве.

ПЦР диагностика имеет много преимуществ перед другими лабораторными исследованиями:

• высокая чувствительность – 97-98%;
• гарантированная аналитическая специфичность (выявляет именно тот возбудитель, который требуется найти, а не его родственный штамм);
• быстрота проведения (требуется не более 2 суток для получения заключения).

Три вида ПЦР анализов

Качественный ПЦР анализ назначается всем пациентам, у кого ИФА-анализом были выявлены антитела к вирусу ХВГС. После проведения качественного ПЦР может быть получено два варианта ответа: «РНК обнаружено» или «РНК не обнаружено». Чтобы обнаружить в крови минимальное количество вируса, необходимы тест-системы с чувствительностью не менее 50 МЕ/мл. Если концентрация вируса в крови больного будет меньше, чем может определить диагностикум, то результат исследования может быть и ложноотрицательным. Чтобы избежать такой диагностической ошибки, лаборатории, осуществляющие ПЦР-диагностику, должны быть обеспечены высокочувствительными тест-системами. В лаборатории «Инвитро», к примеру, используются тесты с чувствительностью от 15 МЕ/мл. Информацию о чувствительности тестов работники лаборатории обязаны предоставлять пациентам и врачам по их первому требованию.

Количественный анализ ПЦР определяет степень виремии, то есть  концентрацию возбудителя в крови, вирусную нагрузку. Результат этого исследования, в отличие от качественного ПЦР, выражается цифрами, например, 2×10*6 МЕ/мл, что означает 2 миллиона международных единиц в 1 мл крови. Часть лабораторий применяет другой показатель – число копий/мл. Эти два показателя легко конвертировать: 1 международная единица равна 4 копиям РНК. Таким образом, 2×10*6 МЕ/мл будет означать, что в крови больного обнаружено 8×10*6 копий вирусной РНК в 1 мл, т.е. 8 млн. копий в 1мл крови.

Генотипирование – это определение одного из шести генотипов вируса. От генотипа возбудителя зависит клиническая картина, скорость развития осложнений со стороны печени и прогноз для дальнейшей жизни пациента. Генотип вируса очень важен уже на стадии постановки диагноза, поскольку от его правильного определения зависит комбинация препаратов и длительность терапевтического курса, который будет назначен больному.

Однако даже такое казалось бы «идеальное» лабораторное исследование имеет свои минусы:

• в ходе исследования происходит репликация генетического материала всех возбудителей, даже неживых, что может исказить результат. Поэтому для осуществления контроля эффективности с помощью ПЦР повторный анализ проводят не ранее, чем через 2 месяца после предыдущего, чтобы погибшие вирусы успели «покинуть» организм больного;
• часть вирусного генома, который определяют с помощью тест-систем, теоретически может присутствовать и в других вирусах или микроорганизмах, поэтому есть вероятность ложноположительного ответа;
• вирусы быстро мутируют. Иногда скорость и степень мутирования вируса настолько высока, что тест-система перестает улавливать их геном. Как следствие, возможен ложноотрицательный результат.

Для нивелирования этих недостатков, производители лабораторных тест-систем для ПЦР диагностики постоянно проводят их испытания, в том числе на перекрестные реакции и на чувствительность к тому или иному генотипу вируса.

Как сдавать анализ ПЦР на гепатит С?

Чтобы заключение обследования методом ПЦР были достоверными, необходимо строго соблюдать правила подготовки к его проведению:

• исследование проводится на голодный желудок (глюкоза, жиры, минералы, попадающие в кровь из пищи, могут повлиять на скорость и качество ферментной реакции);
• разрыв между последним приемом пищи и отбором крови для анализа должен составлять не менее 8 часов;
• накануне исследования запрещено принимать алкоголь и употреблять жирную пищу, период выведения которых затяжной;
• за сутки до похода в лабораторию следует избегать сильных физических и эмоциональных нагрузок;
• до момента забора крови не рекомендуется курить.

Чтобы избежать появления ложных заключений, предполагаемому больному необходимо прийти в лабораторию немного раньше, чем будет проведен забор крови. Нужно 15-20 минут для того, чтобы человек отдышался, успокоился. Адреналин, присутствующий в крови после быстрой ходьбы, может повлиять на результат обследования.

Если направляемый на анализ пациент принимает какие-либо лекарственные препараты, об этом он должен уведомить врача. Вполне возможно, что от приема некоторых из них придется на некоторое время отказаться (если это возможно).

Результат анализа ПЦР на гепатит С

Расшифровкой результатов занимается врач-лаборант той лаборатории, которая проводила анализ. Расшифровка – это определение отклонения полученного результата от нормы. Норма показателей устанавливается непосредственно производителем тест-системы, которая используется лабораторией для диагностики. Поэтому не стоит удивляться, что в одних лабораториях вирусную нагрузку определяют в МЕ/мл, а в других – в копиях/мл.

Получив заключение, его нужно уметь правильно трактовать. Трактовкой результатов исследования должен заниматься лечащий врач больного гепатитом С. Только после объективного, инструментального и лабораторного обследования пациента, врач может получить достаточное количество данных для грамотной трактовки полученных результатов ПЦР.

Оценка качественного анализа, как правило, не вызывает затруднений, даже у пациентов. Результат там может быть только один: «обнаружен» или «не обнаружен». При этом второй из них является нормой.

Показатели количественного анализа трактовать сложнее. Он показывает степень вирусной нагрузки на пациента. Даже среди гепатологов нет единого мнения по поводу того, как трактовать обнаруженную виремию. Большинство врачей склоняются к тому, что высокой нужно считать нагрузку более 8×10*5 МЕ/мл. Очень высокой считается нагрузка более 1×10*7 МЕ/мл, а низкой – менее 4×10*5 МЕ/мл.

Степень вирусной нагрузки говорит о вирулентности (агрессивности) вируса: чем больше его количество в крови, тем быстрее могут развиваться осложнения со стороны печени. Высокая концентрация вируса в крови беременной женщины повышает вероятность его проникновения через гематоплацентарный барьер к плоду. Виремия также влияет на эффективность лечения: при низких цифрах результативность терапии выше, чем при высоких.

Для того, чтобы быть уверенным в достоверности проведенного анализа ПЦР на гепатит С, нужно отдавать предпочтение только тем лабораториям, которые хорошо себя зарекомендовали. Ценовая политика при этом не должна играть первостепенную роль.