Анализ крови на микрореакцию преципитации
![Анализ крови на микрореакцию преципитации Анализ крови на микрореакцию преципитации thumbnail](https://icvtormet.ru/files/field/image/mikroreakcya-kr.jpg)
[07-056]
Сифилис RPR (антикардиолипиновый тест / микрореакция преципитации), титр
335 руб.
Тест выявляет антитела против кардиолипина (липида, который входит в состав мембраны митохондрий и бактерий). Эти антитела присутствуют в крови у больных сифилисом.
Синонимы русские
Неспецифический антифосфолипидный (реагиновый) тест, современный аналог реакции Вассермана (RW).
Синонимы английские
Nontreponemal test, rapid plasma reagin test, syphilis screening test, STS.
Метод исследования
Флокуляционный тест.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь.
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Не курить в течение 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
Возбудителем сифилиса является Treponema pallidum (бледная трепонема), бактерия из семейства спирохет.
Сифилис – венерическое заболевание: наиболее часто он передается половым путем. Кроме того, возможно заражение через кровь (например, при совместном использовании шприцев, бритв и пр.), плода от матери или бытовым путем (очень редко).
В международной классификации болезней выделяют врождённый, ранний и поздний сифилис, а также неуточненные формы. В медицинской литературе используются понятия первичный, вторичный и третичный сифилис.
Инкубационный период начинается с момента заражения и длится до первых симптомов (твердого шанкра) в среднем 21 день (от 10 до 90 дней).
Первичный сифилис – стадия с возникновения твердого шанкра до появления сыпи. Твердый шанкр – это язвочка, которая может появляться в том месте, где возбудитель проник в организм (обычно на половых органах). Он не болит и исчезает (без лечения) через 2-6 недель. Также на этой же стадии иногда увеличиваются лимфоузлы. В первое время заболевший человек остается серонегативным (т. е. в его крови еще нет антител против сифилиса).
Вторичный сифилис. Примерно через 4-8 недель после появления шанкра проявляются новые симптомы: сыпь и общее недомогание, температура, головная боль и др. Возможны и более тяжелые проявления.
Затем признаки сифилиса исчезают и заболевание переходит в латентную фазу. При этом возбудитель все же не покидает организм, поэтому при ослаблении иммунитета могут возникать рецидивы болезни. Их симптомы совпадают с проявлениями вторичного сифилиса.
Бывает, что сифилис так и остается в латентной форме. Но в ряде случаев, если человек не лечится, с годами развивается третичный сифилис. При этом поражаются различные органы и ткани: нервная и сердечно-сосудистая система, кости, суставы и др.
Для диагностики сифилиса часто используют серологические тесты (основанные на выявлении антител). Все виды анализов можно разделить на две группы: трепонемные и нетрепонемные тесты. Анализ на сифилис RPR относится к нетрепонемным.
Трепонемные тесты выявляют антитела, направленные конкретно против самих бактерий T. Pallidum, например сифилис РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) или сифилис РИФ (реакция иммунофлуоресценции).
Посредством нетрепонемных тестов выявляют антитела против кардиолипина (липида, который входит в состав мембраны митохондрий и бактерий). Они появляются в организме человека со стадии первичного сифилиса (примерно через неделю после возникновения твердого шанкра). При нетрепонемных методах анализа на сифилис не различают тип антител (IgG, IgM или др.), а определяют суммарный ответ. К таким исследованиям относят микрореакции преципитации: RPR, VDRL и др.
При первичном и вторичном сифилисе чувствительность нетрепонемных тестов высокая (в случае RPR: 86 % при первичном, 100 % при вторичном), а чем выше чувствительность метода, тем больше вероятность, что тест выявит болезнь. Соответственно, если человек болен сифилисом, то результат теста со 100-процентной чувствительностью точно будет положительным.
Однако при использовании нетрепонемных тестов возможен и ложноположительный результат (выявление антител, несмотря на то что человек не болен сифилисом). Дело в том, что антитела против кардиолипина возникают не только при сифилисе, но и при некоторых других заболеваниях.
Поэтому при диагностике сифилиса нетрепонемный тест должен быть подтвержден с помощью более специфичного трепонемного.
У нетрепонемных тестов есть еще одна особенность. Антитела против кардиолипина появляются в острой фазе болезни. Поэтому, когда человек выздоравливает, их уровень снижается, так что по нему можно судить об успешности лечения.
Для чего используется исследование?
- Для первичной диагностики сифилиса.
- Чтобы оценить успешность лечения.
Когда назначается исследование?
- При скрининговом обследовании на сифилис. Обследоваться должны беременные женщины, доноры крови (и органов), представители некоторых профессий (врачи, работники сферы питания, люди, контактирующие с детьми, пациенты перед госпитализацией или хирургической операцией.
- При подозрении на сифилис (если у пациента есть симптомы сифилиса, генитальные язвы или другие половые инфекции, а также если его половой партнер болен сифилисом). В частности, когда ребенок родился от матери, больной сифилисом.
- После прохождения курса лечения от сифилиса.
Что означают результаты?
Референсные значения: отрицательно.
Отрицательный результат
- Сифилиса нет. Однако нельзя полностью исключить и другие варианты.
- Сифилис на ранней стадии. Если с момента заражения прошло меньше 3-5 недель, то антитела против кардиолипина еще не детектируются. Тест следует повторить через 10-14 дней.
- Сифилис на поздней стадии. После стадии вторичного сифилиса количество кардиолипиновых антител снижается. Например, чувствительность метода VDLR при третичном сифилисе составляет 70 % (т. е. у 30 % больных результат будет отрицательным).
- Ложноотрицательный результат (в редких случаях). Существует «эффект прозоны»: если антител очень много (слишком высокий титр), то результат может оказаться отрицательным.
Окончательное решение о постановке диагноза зависит от результата других тестов (трепонемных).
Положительный результат
- Сифилис.
- Ложноположительный результат. В этом случае титр антител обычно очень низкий.
Положительный результат должен быть подтвержден с помощью специфических трепонемных тестов.
Что означают результаты теста, который сдают повторно (после курса лечения)?
- Если результат стал отрицательным или титр снизился в 4 раза и более – лечение прошло успешно.
- Если титр не снизился – нужна консультация с врачом и дальнейшие исследования.
Что может влиять на результат?
Ложноположительные результаты могут быть:
- при аутоиммунных расстройствах (например, при системной красной волчанке, тиреоидите),
- при лепре, ВИЧ-инфекции, атипичной пневмонии, малярии и др.,
- у людей, употребляющих наркотики внутривенно,
- у пожилых.
Также рекомендуется
- Сифилис РПГА (реакция пассивной гемагглютинации), титр
- Treponema pallidum, антитела
- Treponema pallidum, ДНК [ПЦР]
- Treponema pallidum, IgG, титр
- Treponema pallidum, IgM, титр
- Treponema pallidum, IgG в ликворе
Кто назначает исследование?
Врач общей практики, терапевт, инфекционист, венеролог.
Литература
- Марданлы С. Г., Дмитриев Г. А. Лабораторная диагностика сифилиса (информационно-методическое пособие. М., 2009.
- Goldman’s Cecil Medicine. 24th ed. Goldman L, Schafer A.I., eds. Saunders Elsevier; 2011.
Источник
Отборочный метод исследования крови для диагностики сифилиса называют микрореакцией преципитации. Он проводится для выявления в крови антител, которые представляют собой специфические белки, синтезируемые иммунной системой. Эти вещества выделяются при образовании в организме антигенов – липидных веществ из клеточных мембран, разрушенных бледной трепонемой (возбудитель сифилиса). Методика отличается простотой в использовании, быстротой проведения и низкими финансовыми затратами.
Виды анализа
Микрореакция относится к неспецифическим (нетрепонемным) методам исследования, потому что выявляет не возбудитель, а повреждение клеток. Их разрушение может возникать при других патологиях в организме. При положительном результате анализа назначают специфические серологические тесты, такие как ИФА (иммуноферментный анализ), РПГА (реакция прямой гемагглютинации), РИФ (реакция иммунофлюоресценции). Они позволяют напрямую выявлять содержание возбудителя сифилиса.
Проведение теста при помощи микроскопа высокого разрешения
Выделяют микрореакцию преципитации нескольких типов.
- Тест с макроскопией (экспресс-диагностика сифилиса). Выявление комплекса из антигенов и антител проводится без использования аппаратуры. Для визуализации невооруженным глазом в сыворотку крови добавляют химическое вещество, которое соединяется с комплексом. Применяют частички угля или красный пигмент.
- Тест с микроскопией. Для выявления липидных антител используют световой микроскоп, который позволяет не применять дополнительных веществ.
- Тест с количественным показателем. Проводится в условиях многократного разведения исследуемого материала и выявления количества комплексов в каждой порции. Титром считается последнее разведение, в котором определяется связка антиген-антитело.
Микрореакция преципитации получила свое название из-за малого количества исследуемого материала и выпадения комплексов в осадок (преципитация) в виде мелких хлопьев.
Показания к проведению анализа
Исследование проводят для выявления возбудителей сифилиса среди больших групп населения. Главной целью анализа является массовость проведения скринингового теста для последующей диагностики в случае положительных результатов.
Кровь на микрореакцию назначают:
- при госпитализации в стационар;
- заключенным в местах лишения свободы;
- перед проведением оперативного вмешательства;
- беременным женщинам;
- лицам, проходящим военную службу;
- во время проведения медицинских осмотров работникам образования, медицины, общепита;
- донорам крови или органов.
Метод широко используется для проведения контроля эффективности лечения. Микрореакция преципитации относится к достоверным методам выздоровления от сифилиса. Кроме того, количественный тест помогает корректировать дозировку препаратов или проводить их замену. Стоит отметить, что специфические серологические анализы не несут в себе такую информацию и дают положительные результаты после уничтожения возбудителя в организме.
Методика проведения и оценка результатов
Для исследования делают забор капиллярной крови из пальца, венозной крови из локтевой вены натощак или получают спинномозговую жидкость. Анализ проводят на стерильном обезжиренном стекле, куда помещают классический реагент (антиген), каплю сыворотки или плазмы. После тщательного перемешивания ингредиентов и добавления частиц угля при макроскопии следят за результатами реакции.
Сыворотку крови и лабораторный антиген смешивают на стерильной чашке Петри
- Положительная реакция. Характеризуется образованием хлопьев в осадке при обнаружении антител к липидам разрушенных клеточных мембран. Она свидетельствует о заболевании любой формой сифилиса, а также о сохранении титра у небольшой группы людей после лечения болезни.
- Отрицательная реакция. Характеризуется отсутствием образования характерных хлопьев, кровь не содержит специфических белков. Это означает, что сифилис не выявлен, либо находится на поздней стадии. В некоторых случаях обследование проводят на ранних этапах первичной формы болезни, когда антитела еще не образовались или их количество ничтожно мало.
- Сомнительная реакция. Выявляется незначительное выпадение осадка, что свидетельствует о низком содержании антилипидных антител. В таких случаях необходимо наблюдение, повторные анализы, назначение дополнительных методов обследования.
Возможность обнаружения иммунных комплексов при помощи микрореакции преципитации наступает через месяц после заражения. В процессе развития болезни концентрация антител нарастает. При скрытой форме и позднем сифилисе титр может быть невысоким, а иногда давать отрицательные реакции.
Ложные результаты анализа
В некоторых случаях кровь при обследовании дает ложные результаты. На это может влиять нарушение техники проведения теста. Некачественный забор исследуемого материала и его неправильное хранение, недостаточное перемешивание или загрязнение часто вызывают ошибочные реакции.
Ложноположительные результаты возникают при различных патологических и физиологических состояниях в организме. Поэтому весомое значение для верной трактовки микрореакции имеет выявление этих факторов. Ложноположительные результаты вызывают:
- вынашивание плода;
- новообразования;
- вирусные повреждения печени;
- сахарный диабет;
- воспаление легких, туберкулез;
- аутоиммунная патология;
- подагра;
- злоупотребление алкогольными напитками;
- наркотическая зависимость.
Ложноотрицательные результаты микрореакции образуются при высоком содержании иммунных комплексов в крови либо в первые недели заболевания при ничтожно малом количестве антител. В сомнительных случаях назначается консультация венеролога для осмотра кожных покровов и слизистых оболочек, проведение специфических серологических анализов.
Микрореакция преципитации крови считается эффективным скрининг-тестом для выявления сифилиса и контроля эффективности терапии. Она позволяет выявлять тяжелую патологию среди широких масс населения, назначать своевременное лечение, избегать развития запущенных форм заболевания.
Источник
Что такое микрореакция преципитации
Микрореакция преципитации является нетрепонемным тестом,основанным на иммунологической реакции антиген-антитело.Реакция определяет в крови так называемые реагиновые антитела,которые организм вырабатывает против липидов поврежденных бледной трепонемой клеток организма и ,возможно, липопротеинов мембраны спирохет.Антилипидные антитела могут вырабатываться при многих заболеваниях и состояниях организма,сопровождающихся
разрушением тканей,поэтому микрореакция преципитации является не подтверждающим сифилис тестом,а отборочным.
Микрореакцией тест назван в связи с тем,что для исследования необходимо незначительное количество исследуемого материала и реагентов,а преципитацией (от лат. Precepitacio — падение) в связи с тем,что обрузующийся в результате реакции антиген-антител комплекс выпадает в осадок (преципитация) с образованием хлопьев (флоккуляция).
Разновидности микрореакций1. Микроскопический тест — оценка результатов реакции с использованием световой
микроскопии для подсчета преципитантов — VDRL ( (по названию лаборатории-разработчика – Venereal Diseases Research Laboratory) — реакция с инактивированной сывороткой крови. При подозрении на нейросифилис при помощи VDRL исследуют спинномозговую жидкость.
2. Макроскопический тест — оценка результатов реакции невооруженным глазом -тест быстрых плазменных реагинов (Rapid Plasma Reagins, RPR),применяется в России под названиями реакция преципитации (РПР) с кардиолипиновым антигеном,отборочная реакция
на сифилис (ОРС),микрореакция преципитации (МР),экспресс-диагностика сифилиса (ЭДС). Для подсчета применяют так называемые визуализирующие агенты,вовлекающиеся в комплекс антиген-антитело (чаще частицы угля и частицы толуидинового красного).
Количественная микрореакция преципитации
Проводится методом серийного разведения исследуемой сыворотки крови.Титром преципитинов считают последнее разведение плазмы или сыворотки крови,где обнаружен преципитат.
Когда применяется микрореакция преципитации
Скрининг на сифилис
Массовое обследование определенных групп населения.Для скрининга применяются дешевые,простые и быстрые по исполнению тест системы,основанные на микрореакции преципитации.Скринингу на сифилис подвергаются:
- Беременные женщины
- Доноры
крови и органов для трансплантации - Некоторые профессиональные контингенты (работники питания,образования,здравоохранения)
- Военнослужащие
- Лица,отбывающие наказание в местах лишения свободы
- Больные,готовящиеся к оперативному хирургическому вмешательству
- Лица,поступившие на стационарное лечение (обязательная вассерманизация — в России,странах СНГ и некоторых других странах)
Диагностика сифилиса
Для диагностики сифилиса применяются
комбинация количественной модификации микрореакции преципитации и трепонемных тестов на сифилис.Серологическое обследование на сифилис назначается в следущих случаях:
- Лицам,имеющих клинические признаки сифилиса
- Лицам с любыми генитальными язвами
- Лицам — половым партнерам больных сифилисом,а также в случае близкого бытового контакта с больным вторичным сифилисом
- Детям,родившимся от больных сифилисом матерей
- Лицам с подтвержденным диагнозом других половых инфекций
- Для подтверждения результатов скрининга (отборочных реакций)
Контроль за лечением сифилиса
Так как к моменту снятия с учета леченного больного сифилисом микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном обычно негативируется, а позитивные специфические реакции (РИТ, РИФ, ИФА, РПГА.) могут наблюдаться долго после окончания лечения (поэтому эти тесты не могут служить критерием излеченности) микрореакция преципитации является
основным тестом для установления критерия излеченности сифилиса.
![]() | Снижение титров нетрепонемных тестов в 4 и более раза в течении года после лечения подверждает эффективность проведенной терапии сифилиса и является критерием его излеченности( Приказ Минздрава РФ № 87 от 26.03.01 г,МЗ РФ Приказ от 25 июля 2003 г. N 327,Рекомендации CDC (USA) 2006) |
Применяется количественная модификация микрореакции преципитации.Величина титра указывает на активность процесса, а его снижение во время лечения — на эффективность терапии. Стабильность титров должна
настораживать в отношении эффективности терапии, увеличение их требует пересмотра лечения.
Как проводится микрореакция преципитации
Материал для исследования: кровь из пальца,венозная кровь,спинномозговая жидкость.Взятие крови желательно производить натощак.
Схема микрореакции преципитации
Для проведения реакции используется классический VDRL-антиген (кардиолипин+лецитин+холестерин)
с добавлением частиц угля для визуальной оценки результатов.теста.Исследуемая сыворотка крови перемешивается на стекле с антигеном.Если в сыворотке содержатся реагиновые антитела то образуются чёрные хлопья (флоккулянты), являющиеся признаком положительной реакции. При отсутствии реагиновых антител в сыворотке образования хлопьев (флоккуляции) не происходит.
Результаты микрореакции на сифилис
При обнаружении антилипидных антител — положительная реакция (при проведении
количественной модификации титры от 1: 2 до 1: 320 и выше
При отсутствии антилипидных антител — отрицательная реакция
При низких титрах антител — сомнительная реакция
Как оценивается микрореакция преципитации
Микрореакция становиться положительной в среднем через 4-5 недель после инфицирования.По
мере развития сифилитической инфекции титры ее нарастают,при скрытом и позднем сифилисе количество антител уменьшается и микрореакция может быть оценена как слабоположительная или сомнительня,а иногда при третичном сифилисе и отрицательная.
Положительная реакция |
|
Отрицательная реакция |
|
Наиболее часто в мировой венерологии,а последнее время и в России результаты микрореакции оценивает совместно с трепонемными тестами РИФ и РПГА
RPR,VDRL | РИФ (FTA) | РПГА (TPHA) | Интерпретация |
— | — | — | нет сифилиса или инкубационный период или очень ранняя стадия |
+ | + | + | нелеченный или недавно леченный сифилис |
+ | + | — | первичный сифилис или ложноположительные РПР и РИФ |
+ | — | + | ложноположительные РП |
— | + | + | леченный сифилис или нелеченный поздний сифилис |
+ | — | — | биологическая ложноположительная реакция |
— | + | — | ранний первичный сифилис или недавно леченный сифилис или ложноположительная РИФ |
— | — | + | пролеченный сифилис или ложноположительная РПГА |
Какие ошибки могут быть при постановке микрореакции
Микрореакция преципитации не применяется для подтверждающей диагностики сифилиса,так как кроме антител к липидным антигенам бледной трепонемы, в этих реакциях определяются антитела к липидам и липопротеинам, образовавшимся в результате повреждения клеток организма.Поэтому положительные
результаты нетрепонемных серологических реакций в ряде случаев могут быть не связаны с сифилисом,а быть результатом неспецифических повреждений тканей.Кроме того как к ложноположительным, так и ложноотрицательным результатам могут приводить нарушения при проведении теста.
Неправильная техника проведения исследования
- неправильное взятие крови из пальца (наличие пузырей воздуха в капилляре пипеток);
- исключение из постановки реакции контрольных
сывороток крови, в частности, слабоположительных; - неравномерная концентрация антигена в эмульсии вследствие недостаточного перемешивания ее перед использованием;
- бактериальное загрязнение эмульсии;
- нарушение сроков и условий хранения плазмы и сыворотки крови, антигена и его эмульсии, растворов;
- замена трехзамещенного цитрата натрия двухзамещенным;
- использование при постановке реакций загрязненных
пробирок, пипеток, пластинок, растворов.
Причины ложноположительные результатов микрореакции на сифилис
- Антифосфолипидный синдром
- Невенерические трепонематозы
- Беременность
- Сахарный диабет
- Туберкулез
- Онкологические заболевания
- Аутоиммунные (системные) заболевания (системная красная волчанка,дерматомиозит и.т.д.)
- Подагра
- Хронический алкоголизме и наркомании;
- Инфекционный мононуклеоз
(инфекция Эпштейн-Барра) - Вирусные гепатитаы
- Пневмонии
Причины ложноотрицательных результатов микрореакции на сифилис
Встречаются редко и связаны с так называемым эффектом «прозоны» при очень высоком содержании антител в крови.Ложноотрицательные результаты надо отличать от отрицательных результатов микрореакции при первичном периоде сифилиса,когда при наличии сифилитической инфекции организм еще не успел выработать антитела и при позднем
третичном сифилисе,когда уровень антилипидных антител существенно снижен.
![]() | При положительных результатах микрореакции преципитации) |
Где можно получить еще информацию
посещений 175239 обновлено 11.06.10
Источник