Анализ крови на иерсиниоз пцр
[40-179]
Диагностика иерсиниоза и псевдотуберкулеза
2260 руб.
Комплексное исследование для выявления возбудителя иерсиниоза (Yersinia enterocolitica) и псевдотуберкулеза (Yersinia pseudotuberculosis), включающее серологические тесты и полимеразную цепную реакцию (ПЦР).
Синонимы русские
Анализы на иерсиниоз и псевдотуберкулез.
Синонимы английские
Laboratory Diagnostics of Yersiniosis, Enteropathogenic Yersiniae Lab Panel.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь, кал.
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
- Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.
- Не курить в течение 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
Иерсинии — это грамотрицательные, факультативно-анаэробные палочки, относящиеся к семейству Enterobacteriaceae. Известно 11 видов иерсиний, три из которых являются возбудителями заболеваний человека: Yersinia pestis – это возбудитель чумы, Yersinia enterocolitica (Y. enterocolitica) и Yersinia pseudotuberculosis (Y. pseudotuberculosis) – кишечные патогены. Хотя Y. enterocolitica и Y. pseudotuberculosis относятся к разным видам, они имеют много общего, особенно в плане клинической картины и диагностики.
Основной «резервуар» иерсиний — дикие и домашние животные (свиньи, грызуны, овцы, козы, коровы, собаки, кошки и птицы). Считается, что человек не участвует в естественном жизненном цикле этих патогенов ни в качестве промежуточного, ни окончательного хозяина и его заражение, таким образом, носит случайный характер. Как правило, заражение кишечными иерсиниями происходит фекально-оральным путем при употреблении контаминированных продуктов питания (молочные продукты, сырое или плохо приготовленное мясо, особенно свинина). Как Y. enterocolitica, так и Y. pseudotuberculosis сохраняют жизнеспособность в условиях пониженных температур. Случаи передачи инфекции от человека к человеку или при переливании инфицированной крови описаны, но очень редки.
Следует отметить, что не все кишечные иерсинии являются патогенами. Так, к развитию заболевания у человека приводят серотипы Y. enterocolitica O:3, O:8, O:9 и O:5,27 и Y. pseudotuberculosis O:1 и O:2. Только указанные серотипы являются истинно энетропатогенными иерсиниями.
Особенностью энтеропатогенных иерсиний является их тропность к лимфатичекой ткани. Проникая через слизистую оболочку кишечника, эти микроорганизмы попадают в мезентериальные лимфатические узлы. Развивающийся воспалительный ответ сопровождается болью в области живота и диареей, а также мезентериальным лимфаденитом. У иммунокомпетентных лиц заражение энтеропатогенными иерсиниями чаще ограничивается гастроэнтеритом и регионарным лимфаденитом. Если возбудителем заболевания является Y. enterocolitica, говорят об иерсиниозе, если Y. pseudotuberculosis – о псевдотуберкулезе. Иерсиниоз встречается чаще, чем псевдотуберкулез. Как при иерсиниозе, так и при псевдотуберкулезе могут наблюдаться иммунопатологические феномены в виде реактивного артрита и узловатой эритемы. У лиц с иммунодефицитом, а также маленьких детей могут наблюдаться тяжелые формы иерсиниоза и псевдотуберкулеза с диссеминацией бактерий и сепсисом.
Диагностика иерсиниоза и псевдотуберкулеза достаточно сложна. Хотя бактериологический посев кала (крови или других биологических материалов) считается «золотым стандартом» диагностики, он трудноосуществим. Это связано с тем, что энтеропатогенные иерсинии сложно отличить от других кишечных микроорганизмов, которые в норме преобладают в кишечной флоре. После выявлении роста иерсиний проводят дополнительные биохимические тесты, устанавливающие их энтеропатогенность. Кроме того, метод бактериологического посева характеризуется достаточно низкой чувствительностью (для получения результата необходимо 103-106 КОЕ в грамме образца биоматериала). Учитывая эти особенности, диагностика иерсиниоза и псевдотуберкулеза носит комплексный характер и включает следующие дополнительные тесты:
- Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – один из методов молекулярной диагностики, в ходе которого определяется генетический материал (ДНК) микроорганизма в образце биоматериала (в кале). Основными преимуществами ПЦР являются быстрота получения результата, высокая чувствительность и специфичность. В данное комплексное исследование входит анализ ПЦР на Y. pseudotuberculosis.
- Серологические тесты. Антитела к энтеропатогенным иерсиниям обычно могут быть определены в первые 2-4 недели болезни (IgM-антитела). Следует отметить, что из-за определенного антигенного сходства Yersinia с бактериями других родов (Salmonella, Morganella, Brucella) серологические тесты могут давать ложноположительные результаты. Еще одним недостатком серологических тестов является то, что антитела к иерсиниям (IgG-антитела) сохраняются в течение нескольких лет после инфицирования, что может препятствовать интерпретации результата. Следует помнить, что результат серологических тестов зависит от иммунного статуса организма.
Точность ПЦР и серологических тестов в меньшей степени, чем бактериологического метода, подвержена влиянию антибактериальных препаратов. Однако максимально точный результат теста будет получен при анализе биоматериала, полученного до начала лечения.
Гастроэнтерит, возникающий при инфицировании энтеропатогенными иерсиниями, сложно отличить от сальмонеллеза, кампилобактериоза и других кишечных инфекций. По этой причине часто требуются дополнительные лабораторные анализы.
Для чего используется исследование?
- Для диагностики иерсиниоза и псевдотуберкулеза.
Когда назначается исследование?
- При подозрении на иерсиниоз или псевдотуберкулез: лихорадка, тошнота, боли в животе (боль может локализоваться в правой паховой области), диарея, а также узловатая эритема или реактивный артрит;
- в некоторых случаях при подозрении на острый аппендицит.
Что означают результаты?
Референсные значения
Для каждого показателя, входящего в состав комплекса:
- [07-115] Yersinia pseudotuberculosis, Yersinia enterocolitica, IgM, полуколичественно
- [07-116] Yersinia pseudotuberculosis, Yersinia enterocolitica, IgG, полуколичественно
- [09-101] Yersinia pseudotuberculosis, ДНК [реал-тайм ПЦР]
Что может влиять на результат?
- Время, прошедшее с момента заражения;
- состояние иммунной системы организма;
- применение антибактериальных препаратов (аминогликозиды, ко-тримоксазол, цефалоспорины, тетрациклины, фторхинолоны).
Важные замечания
- Результат исследования оценивают с учетом анамнестических, клинических и дополнительных лабораторных данных.
Также рекомендуется
[09-150] Yersinia enterocolitica, ДНК [ПЦР]
[10-051] Посев на Yersinia spp.
[07-114] Yersinia pseudotuberculosis, Yersinia enterocolitica, IgА, полуколичественно
[09-134] Острые кишечные инфекции, скрининг (Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus 2 генотип, Astrovirus)
[02-012] Анализ кала на цисты простейших
[02-010] Анализ кала на яйца гельминтов
[02-001] Анализ кала на скрытую кровь
Кто назначает исследование?
Инфекционист, терапевт, врач общей практики.
Литература
- Galindo CL, Rosenzweig JA, Kirtley ML, Chopra AK. Pathogenesis of Y. enterocolitica and Y. pseudotuberculosis in Human Yersiniosis. J Pathog. 2011;2011:182051.
- McPhee S.J., Papadakis M. CURRENT Medical Diagnosis and Treatment / S. J. McPhee, M. Papadakis; 49 ed. — McGraw-Hill Medical, 2009.
Источник
[09-150]
Yersinia enterocolitica, ДНК [реал-тайм ПЦР]
1080 руб.
Исследование для выявления возбудителя иерсиниоза (Yersinia enterocolitica), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) микроорганизма в образце биоматериала.
Синонимы русские
Иерсиния, возбудитель иерсиниоза [полимеразная цепная реакция].
Синонимы английские
Y. enterocolitica, DNA [polymerase chain reaction, PCR].
Метод исследования
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Кал.
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
- Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.
Общая информация об исследовании
Иерсиния – это грамотрицательная коккобактерия ,являющаяся возбудителем иерсиниоза. Иерсиниоз часто протекает по типу гастроэнтерита, однако наблюдаются и другие формы этого заболевания, например мезентериальный лимфаденит, который можно легко принять за острый аппендицит, или сепсис. Инфицирование происходит при употреблении зараженных продуктов питания или воды. Естественными переносчиками этого патогена являются свиньи, овцы, крупный рогатый скот, а также собаки и кошки. Благодаря способности иерсинии расти в условиях пониженных температур, этот микроорганизм сохраняет жизнеспособность и патогенность в охлажденных до +4°С продуктах питания.
Клиническая картина иерсиниоза хотя и имеет некоторые характерные черты, очень похожа на другие желудочно-кишечные инфекции, а основным способом диагностики этого заболевания является лабораторное исследование. «Золотым стандартом» диагностики иерсиниоза считается посев на питательную среду (бактериологический метод). Однако выращивание иерсинии на питательной среде – это достаточно трудная задача, и для этого требуется специальная обогащенная и охлажденная среда. Даже при использовании подходящей среды для выращивания колоний иерсинии требуется нужно 2 недели. Эти трудности объясняют необходимость использования других методов диагностики иерсиниоза. Молекулярные методы диагностики – относительно новая группа методов, основанная на определении генетического материала микроорганизма в образце биологического материала. В зависимости от клинической формы иерсиниоза могут быть использованы кровь, моча, спинномозговая жидкость, однако чаще всего используется кал.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это один из современных молекулярных методов. ПЦР обладает несколькими преимуществами по сравнению с другими методами диагностики иерсиниоза:
- Быстрота получения результата.
- Высокая чувствительность исследования. Теоретически для осуществления этой реакции достаточно всего 1 молекулы ДНК. На практике, однако, требуется около 10-1000 молекул. Так как для осуществления реакции достаточно фрагментов ДНК, а не наличия живого микроорганизма, исследование идеально подходит при работе с биологическим материалом, забранным на фоне начатой терапии антибиотиками.
- Высокая специфичность. Так как в реакции используются специфические именно к Y. enterocolitica праймеры, метод позволяет четко дифференцировать этот патоген от других, схожих в микробиологическом, культуральном и антигенном плане бактерий.
Следует отметить некоторые ограничения метода ПЦР:
- Исследование не может быть использовано для контроля лечения: результат анализа будет оставаться положительным (ложноположительным) еще в течение некоторого времени после начала лечения, даже если лечение эффективно.
- Чувствительность ПЦР в меньшей степени, чем культурологического метода, подвержена влиянию антибактериальных препаратов. Однако максимально точный результат теста будет получен при анализе биоматериала, полученного до начала лечения.
Результат исследования ПЦР оценивается с учетом анамнестических, клинических и других лабораторных данных.
Для чего используется исследование?
- Для диагностики иерсиниоза.
Когда назначается исследование?
- При наличии симптомов иерсиниоза: лихорадки, тошноты, боли в животе (боль может локализоваться в правой паховой области), диареи, а также узловатой эритемы или экссудативного фарингита;
- в некоторых случаях при подозрении на острый аппендицит.
Что означают результаты?
Референсные значения: отрицательно.
Положительный результат:
- иерсиниоз.
Отрицательный результат:
- норма.
Что может влиять на результат?
- Применение антибактериальных препаратов (аминогликозиды, котримоксазол, цефалоспорины, тетрациклины, фторхинолоны).
Важные замечания
- Исследование не предназначено для контроля лечения заболевания;
- результат исследования оценивают с учетом анамнестических, клинических и дополнительных лабораторных данных.
Также рекомендуется
[02-009] Копрограмма
[09-101] Yersinia pseudotuberculosis, ДНК [реал-тайм ПЦР]
[40-179] Диагностика иерсиниоза и псевдотуберкулеза
[02-001] Анализ кала на скрытую кровь
[02-012] Анализ кала на цисты простейших
[02-010] Анализ кала на яйца гельминтов
[40-169] Лабораторная диагностика гельминтозов и паразитозов
[40-156] Целиакия. Скрининг при селективном дефиците IgA
Кто назначает исследование?
Инфекционист, терапевт, врач общей практики.
Литература
- Nakajima H, Inoue M, Mori T, Itoh K, Arakawa E, Watanabe H. Detection and identification of Yersinia pseudotuberculosis and pathogenic Yersinia enterocolitica by an improved polymerase chain reaction method.J Clin Microbiol. 1992 Sep;30(9):2484-6.
- McPhee S.J., Papadakis M. CURRENT Medical Diagnosis and Treatment / S. J. McPhee, M. Papadakis; 49 ed. — McGraw-Hill Medical, 2009.
Источник
Кишечный иерсиниоз и псевдотуберкулез – две самостоятельные, имеющие много общих черт зоонозные инфекции с фекально-оральным механизмом передачи. Клинические проявления этих заболеваний полиморфны и включают симптомы поражения ЖКТ в некоторых случаях со склонностью к генерализации инфекции, развитием экзантемы, в отдельных случаях с последующими поражениями опорнодвигательного аппарата.
Возбудители данных заболеваний относятся к роду Yersinia, сем Enterobacteriaceae. Вид Y.enterocolitica в настоящее время насчитывает 6 биоваров и более 50 серогрупп, из которых 5 наиболее часто вызывают заболевания у человека. Вид Y.pseudotuberculosis включает 21 серотип, объединенный в 5 биоваров.
Эпидемиологической особенностью данных заболеваний является их частая связь с употреблением овощной продукции, хранящейся в овощехранилищах и контаминированной экскрементами грызунов. Описаны случаи крайне тяжелого течения сепсиса, связанные с использованием донорской крови, взятой у доноров с субклинической бактериемией, в которой происходило селективное накопление Y.enterocolitica при хранении образцов крови без замораживания при низких температурах. В редких случаях иерсиниоз может быть вызван другими, т. н. «enterocolitica like» видами иерсиний. Иерсинии часто выявляют у пациентов с симптоматикой острого аппендицита, госпитализированных в хирургические стационары.
Несмотря на существенное снижение заболеваемости псевдотуберкулезом и кишечным иерсиниозом в последние годы, сохраняются территории с эндемично высокими показателями заболеваемости. Кроме того, эти заболевания продолжают представлять значительную проблему для лиц в отдельных изолированных коллективах (воинские части и др.).
Показания к обследованию
- Пациенты с ОКИ при наличии эпидемиологических показаний (проживание на эндемичной территории, принадлежность к группе риска);
- пациенты с особенностями клинической симптоматики ОКИ (сочетание ОКИ с катаральной симптоматикой, экзантемой, периферической лимфаденопатией, суставным синдромом) при отрицательных результатах выявления более распространенных патогенов.
Материал для исследований
- Образцы фекалий – культуральные исследования, выявление АГ, ДНК;
- сыворотка крови – обнаружение АТ.
Этиологическая лабораторная диагностика включает выделение чистой культуры с дальнейшей идентификацией возбудителя; обнаружение НК и АГ патогенов, выявление специфических АТ.
Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Наиболее информативным методом лабораторной диагностики кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза является культуральный в сочетании с адекватными методами видовой идентификации возбудителя. Обязательным этапом исследования при выявлении Y.enterocolitica является определение вирулентных свойств выделенного изолята. Антигенная характеристика изолята не может служить прямым доказательством наличия у него вирулентных свойств и его этиологической связи с картиной заболевания.
Выявление ДНК патогенов с использованием ПЦР применяется для скрининговой диагностики иерсиниоза и псевдотуберкулеза в острой фазе заболевания. Тест наиболее адаптирован для скрининговых исследований, что связано с его оперативностью и возможностью детектировать нежизнеспособные на фоне антибиотикотерапии формы микроорганизмов. Обязательным требованием к диагностическим тестам данной группы является возможность определять не только видовую принадлежность изолята, но и гены ключевых факторов вирулентности (для Y.еnterocolitica), а также отсутствие перекрестных реакций с близким в филогенетическом плане видом (в случае Y.pseudotuberculosis – Y.рestis).
Для выявления АТ применяют наборы реагентов с использованием ИФА (в РФ мало распространены), а также РА и РНГА. Выявление специфических АТ малоинформативно в первую неделю заболевания, но позволяют уточнять его этиологию в более поздние сроки при отрицательных результатах прямых методов выявления возбудителей.
Показания к применению различных лабораторных исследований. Для применения прямых методов выявления Y.enterocolitica и Y.pseudotuberculosis следует использовать образцы фекалий, забранные у пациента в первые 3–5 дней заболевания до начала антибактериальной терапии. При проведении исследований в очагах групповой заболеваемости или решении других эпидемиологических задач целесообразно применение культурального исследования для изоляции штамма микроорганизма и возможностью его последующей характеристики по ферментативным и антигенным свойствам. Выявление ДНК возбудителей методом ПЦР оправдано при решении задач диагностики, обследовании пациентов на фоне антибиотикотерапии или в качестве скринингового этапа исследования.
Выявление АТ к указанным возбудителям целесообразно при неинформативности результатов прямых методов выявления патогенов. Рекомендовано выполнение исследования в образцах крови, взятых в динамике (конец первой недели и начало третьей недели заболевания). При интерпретации результатов таких исследований следует учитывать наличие у иерсиний АГ, вызывающих перекрестные реакции (возможность ложноположительных результатов).
Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Факт обнаружения Y.enterocolitica или ее ДНК в фекалиях у пациентов с острыми диарейными заболеваниями недостаточен для установления иерсиниозной этиологии заболевания. Лабораторным подтверждением диагноза кишечного иерсиниоза служит выявление штаммов возбудителя, обладающих факторами вирулентности (или их генами). Выявление Y.pseudotuberculosis или ее ДНК методом ПЦР является достаточным для подтверждения диагноза псевдотуберкулеза.
При интерпретации результатов определения специфических АТ минимально учитываемым диагностическим титром при использовании методов РА и РНГА считают 1:160 и 1:200 соответственно. При исследовании в формате «парных сывороток » диагностически значимым считается 2–4-кратное и выше нарастание титра АТ. Следует учитывать возможность ложноположительных результатов в связи с наличием у иерсиний АГ, вызывающих перекрестные реакции
Источник
