Анализ крови на гепатит методом ифа расшифровка

Анализ крови на гепатит методом ифа расшифровка thumbnail

Вирусом гепатита С заражено около 170 миллионов человек по всему миру. Болезнь коварная – при смазанной симптоматике начала заболевания ее дебют проходит незамеченным. Часто развиваются хронические формы, которые приводят к разрушению клеток печени.

Исходом гепатита С становятся цирроз или рак печени. Для выявления маркеров заболевания в первую очередь назначают иммуноферментный анализ – ИФА на гепатит С.

Что такое ИФА?

Анализ основан на способности специфических антител (белков крови) связываться с антигеном (частицами вируса), при этом один из них «помечен» ферментом. Образовавшийся комплекс реагирует с подкрашенным субстратом, что фиксируется спектрофотометрическими методами.

Иммуноферментный анализ (ИФА) на гепатит С показывает не присутствие самого вируса-возбудителя в крови, а ответ иммунной системы на столкновение с ним. Количество вируса в крови на момент проведения ИФА может быть ничтожно мало, за порогом определения. А антитела – иммуноглобулины, которые выработались при встрече с «агрессором», продолжают циркулировать в кровеносной системе.

Именно присутствие антител определяется при ИФА. Появляются они в срок от нескольких дней до нескольких недель после заражения гепатитом С.

ИФА выявляет циркулирующие иммуноглобулины даже в малой концентрации. По их типу можно судить о давности заболевания. В острый период, когда вирус гепатита активно размножается, определяют иммуноглобулины класса М.

В хронической стадии (спустя 6 мес. от начала заболевания) при ИФА обнаруживают иммуноглобулины класса G. Последний тип также может свидетельствовать не о хронизации процесса, а о самом факте столкновения иммунной системы с вирусом гепатита С в прошлом.

Показания к ИФА на гепатит С

Обследование на маркеры гепатита С, к которым относятся антитела – иммуноглобулины, давно стала рутинной процедурой. ИФА назначают при:

  • острых и хронических заболеваниях печени;
  • желтухе неясного генеза;
  • обследовании перед хирургическими вмешательствами;
  • стандартном обследовании доноров крови;
  • постановке на учет в женской консультации при беременности. Повторно анализ сдают за 2-4 недели до предполагаемой даты родов;
  • прохождении гемодиализа;
  • профилактических осмотрах медработникам, контактирующим с компонентами крови и другими биологическими жидкостями;
  • незащищенном сомнительном половом контакте;
  • рождении детей от инфицированных матерей.

В порядке рекомендаций анализ на гепатит С назначают родственникам больного, близко с ним контактирующим. В 50% случаев парентеральный источник заражения выявить не удается. Инфекционисты предполагают бытовой путь передачи, когда зараженная кровь может попадать в кровоток здорового человека через кожные ранки и трещины. У этой версии много противников.

Как проводится анализ?

За 48 часов до ИФА исключают из пищи алкоголь, жареное, жирное и соленое. За 12 часов до забора крови из вены пациенту необходимо воздержаться от приема каких-либо лекарств. Анализ сдают утром натощак.

Наибольшее распространение получил «твердофазный» ИФА. Твердая фаза – это материал, на котором фиксируют антитела или антигены. В этом качестве используют мембраны, активно собирающие на себя белки (лабораторные планшеты, стенки пробирки, шарики и бусины из полипропилена или поливинилхлорида, нитроцеллюлозу и пр.).

Вне зависимости от разновидности ИФА, в его проведении существует строгая этапность:

  1. На первой стадии исследуемый материал «узнается» специфическим антителом и связывается с ним, образуя иммунный комплекс;
  2. На второй стадии с образовавшимся иммунным комплексом реагирует помеченный ферментом так называемый конъюгат – антитело или антиген;
  3. Заключительная стадия ИФА позволяет уловить и зарегистрировать сигнал от ферментной метки.

Виды ИФА

Вариантов выполнения анализа достаточно много. Их классифицируют:

  • По типу реагентов, используемых на первом этапе ИФА:
    a) конкурентный;
    b) неконкурентный;
  • По степени однородности среды, в которой происходят реакции ИФА:
    a) гомогенные;
    b) гетерогенные;
  • 3) По принципу определения исследуемого вещества:
    a) прямой;
    b) непрямой. Именно непрямой метод ИФА используется при выявлении маркеров гепатита С.

Прямой метод ИФА

При этом методе используют стандартные антитела к вирусу гепатита С, помеченные меткой – ферментом.

  1. В лунки лабораторного планшета (если выбрали именно его в качестве твердой фазы) помещают сыворотку крови пациента. Выдерживают 20 минут, чтобы антигены (белки вируса гепатита С) успели прикрепиться к стенкам.
  2. Добавляют стандартные помеченные ферментом антитела к гепатиту С. Выдерживают еще несколько часов – за это время образуются иммунные комплексы антиген-антитело с меткой. Чем больше антигенов в исследуемой сыворотке, тем больше таких комплексов образуется.
  3. Содержимое лунок промывается от несвязанных белков. Затем добавляют субстрат. Это вещество при реакции с ферментом-меткой меняет цвет. Чем больше комплексов при ИФА образовалось, тем большее количество фермента может воздействовать на субстрат и тем ярче хроматографическая реакция. Она считывается ИФА-ридером и оценивается количественно.

Непрямой метод

При этом методе ИФА стандартный антиген связывается с антителами сыворотки пациента. К образовавшемуся иммунному комплексу добавляют меченые ферментом стандартные антитела к иммуноглобулинам.

  1. В лунки лабораторного планшета помещают стандартный антиген гепатита С (частички вируса). Антиген прикрепляется к стенке, незакрепленные белки вымываются лаборантом.
  2. В подготовленные таким образом лунки помещают исследуемый материал (сыворотку крови), инкубируют. Есть обязательные контрольные лунки со стандартными реагентами. За время инкубации образуются комплексы антиген-антитело. Непрореагировавшие компоненты опять вымывают.
  3. В лунки добавляют меченые ферментом антитела к иммуноглобулинам М и G. Эти белки прореагируют с образовавшимся ранее комплексом, только если в исследуемом образце есть антитела к гепатиту С. Промывают.
  4. Добавляют еще один компонент – субстрат. Это химическое соединение разрушается ферментом из комплекса антиген-антитело. При этом образуется окрашенное вещество, количество которого фиксируют специальным прибором – ИФА-ридером. Чем больше фермента, тем сильнее он прореагирует с субстратом и тем ярче будет цветовой сигнал.
Читайте также:  Общий анализ крови покажет эозинофилы

Расшифровка результатов

Высокая чувствительность ИФА иногда играет с пациентом злую шутку. Не каждый положительный результат означает заболевание и не каждый отрицательный – гарантия свободы от вируса.

При положительном ИФА определяют генотип вируса и определяют количество циркулирующих в крови вирусов с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Положительный

При ИФА выявляют маркеры острой фазы заболевания (иммуноглобулины класса М (IgM)) и иммуноглобулины класса G (IgG). Последние могут означать, что у пациента хронический гепатит С или то, что иммунная система хотя бы раз в прошлом сталкивалась с этим вирусом и выработался иммунитет.

Выявление одновременно двух типов иммуноглобулинов при ИФА говорит об обострении хронического гепатита С.

Отрицательный

Самый вероятный вариант – пациент не болен и его иммунная система никогда не сталкивалась с вирусом.

Псевдоотрицательный результат при ИФА можно получить в том случае, если пациент инфицировался относительно недавно и защитные антитела просто не успели выработаться. Это так называемое «диагностическое окно». Его срок – 6 месяцев.

Наконец, нельзя полностью исключить ошибку лаборатории.

Ложноположительный

ИФА реже дает погрешности по сравнению с ПЦР. Тем не менее, исследуемые вещества – белки. Реагент может связаться с неспецифическим белком сыворотки крови. Ложноположительный ИФА на гепатит С нередок в случаях:

  • выполненной накануне вакцинации;
  • при аутоиммунных патологиях или туберкулезе, рассеянном склерозе, склеродермии;
  • опухолевом процессе;
  • инфекциях, протекающих с гипертермией (грипп, ОРЗ и пр.).

Грешат ложноположительными результатами исследования на маркеры гепатита С у беременных. Довольно часто ИФА дает ложное заключение о наличии антител пациентам со II группой крови.

ИФА положительный, а ПЦР отрицательный: что это значит?

Полимеразная цепная реакция выявляет присутствие вируса в крови и его количество, помогает определить генотип. ИФА «видит» антитела – клетки, вырабатываемые спустя какое-то время после инфицирования и остающиеся в организме после уничтожения «врага».

Вариантов, при которых у пациентов с гепатитом С ПЦР отрицательный, а ИФА – положительный, два. Самый вероятный – сформировался иммунитет к вирусу, а сам он уничтожен иммунной системой или лекарствами.

Второй: нельзя исключить ошибку лаборатории при проведении ПЦР.

Диагностикой заболеваний должен заниматься врач. Он учитывает все нюансы обследования. А лабораторная диагностика, в том числе ИФА – только вспомогательный метод, не лишенный погрешностей.

Источник

Для диагностики вирусного гепатита в рамках медицинского протокола используется несколько лабораторных и инструментальных методик. Одной из самых достоверных является иммуноферментный анализ (ИФА). Метод помогает определить наличие антигена к тому или иному виду вируса. Для этого выполняется стандартная процедура забора крови из вены пациента. Результаты становятся известны уже через неделю после взятия анализа.

Анализ крови на гепатит методом ифа расшифровка

Что такое ИФА?

Термин расшифровывается как «иммуноферментный анализ». Он подразумевает определение в крови комплексов антиген-антитело для уточнения этиологии возбудителя. Если это вирус, определяются его виды и подвиды. Антигены — это частички на поверхности клеток возбудителей, связывающиеся с определенными участками антител. Последние являются иммунными молекулами, вырабатываемыми организмом для собственной защиты. Антигены и антитела неповторимы, поэтому определение их структуры с помощью иммуноферментного анализа свидетельствует о наличии конкретной патологии в организме больного. В качестве меток используются ферменты, которые и дали название методике.

Вернуться к оглавлению

Плюсы исследования

ИФА — это высокоточная методика, ее чувствительность достигает 90%. Она помогает проводить скрининг парентеральных гепатитов. Эти заболевания передаются путем инъекции, или через переливание крови. ИФА помогает выявить пациентов, у которых отсутствуют симптомы. Таковыми является большинство хронических больных. Они имеют риск развития цирроза. Его обнаружение на поздних стадиях — это плохой прогноз. Поэтому иммуноферментная методика позволяет своевременно определить заболевание и сэкономить деньги на лечение. ИФА верифицирует этиологию возбудителя и определяет прогноз недуга. Диагностические наборы для нее стоят недорого и длительно хранятся. За быстроту, удобство и точность данных ИФА называют экспресс-методом.

Вернуться к оглавлению

Когда нужен анализ?

Анализ крови на гепатит методом ифа расшифровкаДля определения вида вируса необходимо сдать ИФА.

ИФА необходим, когда требуется уточнить этиологию вирусного возбудителя для определения схемы лечения. У пациента идентифицируют наличие хронического гепатита B и C, или перенесенного заболевания вирусом подтипа A. Методику нужно применять у членов семьи больного, которые могут заразиться. В инфекционном стационаре анализ выполняется всем пациентам, у которых присутствуют такие симптомы:

  • Желтуха. Желтушность кожных покровов не сопровождается болями в правом подреберье и изменением цвета стула и мочи.
  • Повышение температуры тела. Она вырастает до субфебрильных цифр, иногда наступает лихорадка.
  • Диспепсия. Присутствуют тошнота и рвота, которая не приносит облегчение.
  • Немотивированная слабость.
  • Мелкоточечные высыпания на теле. Это мелкие кровоизлияния вследствие печеночной недостаточности.
  • Тяжесть в правом подреберье. Симптом возникает вследствие растяжения увеличенной печенью собственной капсулы, содержащей множество нервных окончаний.

Основным показанием к выполнению анализа является наличие определенных анамнестических данных. Если пациент ранее страдал инъекционной наркоманией, ему переливали кровь или пересаживали органы — это повод выполнить ИФА.

Вернуться к оглавлению

Читайте также:  Анализ крови лейкоциты для женщины

Подготовка к проведению

Чтобы результаты ИФА были достоверными, требуется предварительно подготовиться. За день до сдачи крови пациенту рекомендуется перестать употреблять жирную и жареную пищу, продукты с высокой концентрацией красителей, стабилизаторов, консервантов, усилителей вкуса и аромата. Нежелательно непосредственно перед выполнением метода заниматься тяжелым физическим трудом и спортивными упражнениями. В день сдачи крови необходимо воздержаться от завтрака. Забор материала натощак позволит получить точный результат. Необходимо исключить из употребления некоторые лекарственные средства. Но самостоятельно это делать не рекомендуется, поскольку есть вероятность вреда для здоровья. Нужна предварительная консультация лечащего доктора.

Вернуться к оглавлению

Методология проведения

Анализ крови на гепатит методом ифа расшифровкаМетод ИФА.

Метод ИФА состоит из двух этапов. На первом выполняется забор материала, на втором последний исследуется в лаборатории. Начальный этап проходит стандартно. Ему предшествует подготовка пациента к сдаче крови. В стерильном помещении проводится забор биоматериала, отправляемый в герметических контейнерах на лабораторное исследование. Дальнейшее определение комплексов антиген-антитело происходит с помощью ферментов и тест-систем на специализированном оборудовании. Результат становится известен в течение недели и отправляется пациенту на электронную почту.

Вернуться к оглавлению

Расшифровка показателей

Интерпретация данных подразделяется на качественную и количественную. При качественном определении результаты анализа считаются позитивными, если обнаружены суммарные антитела к определенному подтипу вируса. Выявление anti-НАV IgМ свидетельствует про острый, а anti-НАV IgG — хронический гепатит А. Позитивный маркер НВsAg — признак инфицирования вирусом подтипа В. Он наблюдается в острой и хронической фазах заболевания. Если же выявлен HBCAg, у человека присутствует хронический гепатит С. А anti-НDV сигнализирует про инфицирование подвидом D. Пациенты, у которых определен положительный маркер к вирусу, нуждаются в дальнейшем обследовании для более точной верификации диагноза.

Источник

Во многих случаях врачам необходимо правильно оценить, насколько хорошо и слаженно работают защитные функции организма пациента. Для точной диагностики различных заболеваний, патологий крови, выявления иммунодефицитов используется специальный анализ крови методом ИФА. Эта аббревиатура расшифровывается как иммуноферментный анализ.

Суть метода ИФА

Этот метод относится к числу иммунохимических реакций, которые основаны на взаимодействии антигенов и антител. К молекуле антитела химически присоединяют молекулу антигена-энзима. Фермент применяют в качестве метки, по которой следят за одним из компонентов реакции.

Основными компонентами ИФА являются:

  • antibodies-attacking-a-virus1-440x264антиген;
  • антитело;
  • антитело, меченное ферментом;
  • субстрат фермента;
  • индикаторный краситель.

Антитела или иммуноглобулины вырабатываются в тот момент, когда в организм попадают какие-то антигены или чужеродные микроорганизмы. Иммуноглобулины входят в контакт с антигенами и обезвреживают их. Связываясь с конкретным антигеном, иммуноглобулины образуют своеобразный комплект: антиген-антитело. У этого комплекта могут быть как количественные, так и качественные показатели. Именно их и определяет с высокой точностью метод ИФА.

В некоторых случаях в качестве исследуемого материала берут спинномозговую жидкость или содержимое стекловидного тела. У беременных женщин исследуют околоплодные воды. Но чаще всего для исследования используется кровь пациента. Она берется из вены строго натощак.

к оглавлению ↑

Как подготовиться к анализу?

Перед сдачей анализа следует воздержаться от еды в течение 12 часов. Также в течение 2-3 дней перед анализом не надо есть жирную и жареную пищу, употреблять алкоголь.

Физические нагрузки перед сдачей анализа и стрессы могут не лучшим образом повлиять на результат, поэтому желательно их исключить.

Врач должен знать, не принимал ли пациент накануне каких-то лекарств. Женщинам необходимо сообщить доктору о фазе своего менструального цикла – это тоже имеет значение.

к оглавлению ↑

Показания

Врач может назначить сдачу этого анализа при подозрении на следующие заболевания:

  • 751c2420bf30cc8fb98d996095a44cb7ed52815bвирусные заболевания – гепатит, герпес, цитомегаловирус и т.п.;
  • аллергические состояния;
  • заболевания, передающиеся половым путем – хламидиоз, сифилис, микоплазмоз и т.д.;
  • иммунодефицитные заболевания;
  • некоторые онкологические заболевания (например, рак печени).

Также метод ИФА применятся для того, чтобы лечащий врач мог оценить, насколько эффективна назначенная пациенту терапия при лечении того или иного заболевания, каков уровень гормонов у больного. Он также входит в комплексное обследование пациента перед предстоящим оперативным вмешательством.

Расшифровка некоторых показаний анализа ИФА:

Показатель IgG,Показатель IgAПоказатель IgMРезультат
не определяетсяне определяетсяполное выздоровление
отсутствует иммунитет

к инфекции

+ и —+ и —+острая инфекция
+Поствакцинальный или

постинфекционный иммунитет

+ и —+ и —хроническая инфекция
+++обострение хронической

инфекции

+ – положительный результат

— – отрицательный результат

Время ожидания результатов зависит от того, какое именно заболевание необходимо диагностировать. Кроме этого, надо учитывать возможности лаборатории, в которой проводится исследование. Некоторые небольшие медицинские учреждения в целях экономии средств ждут, когда кровь сдадут несколько пациентов, чтобы одновременно использовать реактивы.

Но даже с учетом всех вариантов, вы должны получить результаты не позднее чем через 10 дней после забора крови. А в самом быстром случае время ожидания составляет 1 день.

к оглавлению ↑

Преимущества анализа

К несомненным плюсам данного метода исследования крови относятся:

  • высокая точность показателей. ИФА превосходит другие методы по чувствительности в 10- 100 раз;
  • kak_sdavat_analiz_krovi_i_kala_na_lyambliiвысокая скорость проведения  – выигрыш во времени получения результата повышается в 30 раз;
  • невысокая стоимость по сравнению с другими методами исследований;
  • возможность раннего диагностирования заболеваний и отслеживания динамики процесса болезни;
  • автоматизация всех этапов исследования;
  • высокая унификация.
Читайте также:  Анализ крови на аллергены когда лучше сдавать

К недостаткам можно отнести то, что в отдельных случаях результаты бывают как ложноположительными, так и ложноотрицательными. На достоверность могут повлиять прием пациентом ряда лекарств, различные нарушения в обмене веществ больного и наличие некоторых хронических заболеваний (например, ревматоидный артрит), при которых идет активная выработка организмом антител.

При взятии данного анализа у новорожденного ребенка достоверность также может нарушиться из-за присутствия в крови младенца антител матери.

к оглавлению ↑

Метод ПЦР

Для того чтобы перепроверить данные анализа ИФА, уточнить диагноз, пациенту предлагают слать анализ ПЦР. Это диагностика полимеразных цепных реакций. Благодаря данному анализу выявляется микроскопический фрагмент ДНК любого возбудителя болезни, например, вируса гепатита. Достоверность анализа составляет в большинстве случаев 100 %.

Ряд хронических заболеваний с вялотекущим течением анализ ИФА не способен выявить, а методу ПЦР это вполне по силам. При помощи этого анализа выявляются такие заболевания, как мононуклеоз, вирусный гепатит, цитомегаловирус, клещевой энцефалит, различные инфекции, передающиеся половым путем, папилломавирус, кандидоз, ВИЧ.

Материалом для исследования является кровь, а также моча, слюна, слизь, сперма, соскоб эпителия, внутрисуставные жидкости.

к оглавлению ↑

Как подготовиться к анализу?

Для того чтобы результат оказался верным, пациенту необходимо правильно подготовиться к сдаче анализа. Если на анализ берется венозная кровь, что за несколько часов до сдачи нельзя ни есть, ни пить. За несколько дней до анализа желательно исключить из своего рациона все жирные и жареные блюда и продукты, которые могут вызвать аллергическую реакцию. Следуют воздержаться от приема алкогольных напитков и курения.

Также не менее, чем за 10 дней до дня диагностики следует прекратить принимать антибактериальные препараты. Если на анализ сдается моча, то перед сбором нельзя мочиться в течение примерно 3 часов. Моча собирается утром в строго стерильную баночку.

Перед сдачей мазка женщинам не следует спринцеваться и применять какие-либо вагинальные свечи.

Сдавать мазок на анализ надо до наступления месячных или спустя 4 дня после их окончания. Ответ пациент получает через сутки после сдачи анализа.

к оглавлению ↑

Диагностика вирусных гепатитов методами ИФА и ПЦР

Для подтверждения у пациента диагноза «вирусный гепатит» результаты исследований при помощи ИФА и ПЦР играют ведущую роль. Посредством ПЦР в крови пациента выявляется генетический материал вируса, что дает возможность не только подтвердить диагноз, но и выявить количество вируса, и определить стадию самого инфекционного процесса. С помощью ИФА-диагностики выявляются антитела к вирусам гепатитов.

information_items_3811

Диагноз гепатита А врач первоначально ставит после опроса больного, по жалобам, свидетельствующим об остром начале заболевания: сильная тошнота и рвота, боль в животе, развитие желтухи. В фекалиях больного, если они собраны в острой стадии заболевания, можно обнаружить вирус.

При исследовании крови больного на ИФА в острой фазе заболевания будет значительно повышен уровень IgM, а титр IgG останется на высоком уровне даже после выздоровления пациента. Специфические антитела выявляются уже на 3 день острой фазы заболевания и могут сохраняться до полугода. Все современные тест-системы диагностики гепатита А основаны именно на методе ИФА.

Для диагностики вирусного гепатита В врачи стараются использовать как метод ИФА, так и метод ПЦР. Высокий уровень титров IgM и IgG говорит о высокой активности вируса, что характерно для недавнего по времени заражения. К ПЦР диагностике в данном случае обращаются для того, чтобы выявить степень концентрации вируса.

1351156929_kliniki_germanii_1

Также оба метода используют при подозрении на гепатит С. Антитела титра IgM будут обнаружены примерно через 8 недель после заражения, титр IgG появится через 12 недель. С помощью ПЦР диагностики врач точно определит стадию инфекционного процесса, количество и качество самого вируса. Также можно определить генотип вируса гепатита С.

Дело в том, что на сегодняшний момент науке известно 11 видов этого вируса. В России наиболее распространены 3 генотипа. Если врач точно знает, каким именно генотипом заражен пациент, то лечение будет направлено именно на борьбу с конкретным генотипом. Все препараты и дозы будут правильно подобраны и шансы на успех, таким образом, значительно возрастут.

Несмотря на то, что метод ИФА был изобретен достаточно давно (впервые такой анализ был проведен в 1971 году), его актуальность не потеряла своего значения и сегодня.

Следует помнить, что необходимость проведения подобной диагностики может установить только врач. И только квалифицированный медицинский работник может правильно интерпретировать результаты анализа и назначить соответствующее лечение. Ни в коем случае не занимайтесь самодиагностикой и тем более самолечением.

Рекомендуем прочитать:

загрузка…

Якутина Светлана

Якутина Светлана

Эксперт проекта VseProPechen.ru

Статья помогла вам?

Дайте нам об этом знать — поставьте оценку

Загрузка…

Источник