Анализ крови на фетальное днк
Метод определения
ПЦР с детекцией в режиме реального времени.
Исследуемый материал
Плазма крови (ЭДТА)
Обнаружение фрагмента Y-хромосомы плода в крови беременной методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени, с целью определение пола плода.
В акушерско-гинекологической практике часто возникает необходимость определения генотипа плода на ранних сроках беременности. До недавнего времени материал для таких исследований получали инвазивно, при хорион- и плацентобиопсиии в ходе амнио- и кордоцентеза. Риск самопроизвольного прерывания беременности в этом случае составляет 2-3%. Открытие наличия фетальных ДНК и РНК в материнской крови послужило основой для развития неинвазивной пренатальной диагностики, которая в отличие от упоминаемых методов, не представляет угрозы течению беременности, т. к. материалом для исследования служит кровь матери. Фетальные клетки, т. е. клетки плода, обнаруживаются в крови женщины, их количество возрастает с увеличением срока беременности, зависит от состояния плаценты и особенностей течения беременности. Выяснение пола плода в первом – начале второго триместра может предотвратить случаи рождения больных детей в семьях с отягощенной наследственностью. Возможно прерывание беременности по медицинским показаниям при наличии у родителей носительства генов заболеваний, сцепленных с полом (например, гемофилии или прогрессирующей мышечной дистрофии Дюшенна/Беккера у матери). Вопрос о прерывании беременности и неблагоприятном прогнозе для жизни плода должен решаться индивидуально перинатальным консилиумом врачей.
Также врачу важно знать пол плода для принятия решения о возможности гормональной терапии беременной в случае наличия у пациентки гиперандрогении надпочечникового генеза (врожденная дисплазия коры надпочечников, ВДКН) или других маскулинизирующих эндокринных заболеваний.
Основным методом пренатального установления пола будущего ребенка является ультразвуковая диагностика, однако на ранних сроках беременности УЗИ не имеет необходимой точности и часто субъективно.
Лабораторный тест, выполняемый для определения пола плода, направлен на обнаружение в крови беременной мультикопийного фрагмента Y хромосомы плода* методом ПЦР в режиме реального времени, что с высокой достоверностью свидетельствует о беременности плодом мужского пола.
Метод, включающий исследование ДНК плода в крови матери, обладает рядом преимуществ:
- относится к неинвазивным для плода процедурам, не несет угрозы течению беременности и не вызывает осложнений;
- исследование фетДНК возможно проводить, начиная со срока 10 акушерских недель беременности;
- точность результата составляет 96-100% и зависит от количества ДНК плода, обнаруживаемой в материнской плазме. **
Аналитические показатели метода
Определяемый участок ДНК – мультикопийный фрагмент Y-хромосомы.
Диагностическая чувствительность: 92-100%.
Диагностическая специфичность: 90-100%.
Чувствительность метода составляет 150 копий геномной ДНК (суммарной ДНК матери и плода) в 1,0 мл исследуемого образца плазмы крови.
*Пол определяется парой половых хромосом: у женщин – ХХ, у мужчин – XY.
** Величина обусловлена состоянием плаценты, особенностью течения беременности и возрастает с увеличением срока беременности.
Литература
- Инструкция по применению набора реагентов для выявления фрагмента Y хромосомы плода в крови матери методом ПЦР в режиме реального времени. Пол плода. ДНК-технология». Регистрационное удостоверение № РЗН 2017/6242.
- Избранные клинические рекомендации по неонатологии. Под ред. Е.Н. Байбариной, Д.Н. Дегтярева. — М.: Изд. «ГЕОТАР-Медиа». 2016. 237.
- Ресурс для специалистов в области молекулярной биологии и клинической диагностики: https://www.dna-technology.ru/information..
Источник
Неинвазивный ДНК тест во время беременности (НИПТ) – залог спокойствия будущих родителей в отношении хромосомных болезней еще не родившегося ребенка. ДНК тест можно использовать для того, чтобы подтвердить отцовство, определить пол или резус-фактор, выявить ранние мутации и генные заболевания.
В материнской крови диагностически значимое количество фетальной фракции ДНК в норме появляется к 8–10 неделе беременности.
Оглавление
- Что такое неинвазивный пренатальный тест НИПТ
- Фракция фетальной ДНК – что это такое
- Что означает низкая фетальная фракция
- Что показывает анализ
- Показания
- Точность теста НИПТ
- Ложноположительные и ложноотрицательные результаты
- Ошибки в определении пола
- Подготовка к анализу
- Виды НИПТ
- Для чего определять резус-фактор у плода
- Выводы
НИПТ тест – что это такое
Неинвазивное пренатальное тестирование (NIPT, НИПТ), иногда называемое неинвазивным пренатальным скринингом (NIPS, НИПС) – это метод определения риска рождения плода с определенными генетическими отклонениями.
Это тестирование анализирует небольшие фрагменты ДНК, которые циркулируют в крови беременной женщины. В отличие от большей части ДНК, которая находится внутри ядра клетки, эти фрагменты свободно плавают в крови и поэтому их называют внеклеточной ДНК (вкДНК).
Наиболее часто в акушерской практике неинвазивный пренатальный тест используют для диагностики у плода синдрома Дауна, трисомии 13 и 18 пар хромосом.
Фракция фетальной ДНК – что это такое
Начиная с 4 недели беременности в крови матери появляется внеклеточная фетальная ДНК, принадлежащая плоду, и сохраняется до конца гестации. После рождения ребенка в течение нескольких часов ДНК плода полностью элиминируется из кровотока матери.
Плод (лат. fetus)
Фетальная ДНК – это небольшие, свободно циркулирующие фрагменты ДНК плода, содержащие до 200 пар оснований цепочки. Источник их появления в крови матери – трофобласт – те клетки, из которых формируется плацента. В процессе гестации некоторые клетки плаценты разрушаются (как и клетки любой ткани в организме человека), образованные фрагменты поступают в кровоток, наряду с обрывками хромосом. Таким образом, во время беременности кровь женщины содержит свободную фракцию материнской и плодной ДНК.
Сложность неинвазивного перинатального ДНК теста состоит в том, что кариотип (набор хромосом) плодных оболочек может отличаться от кариотипа плода. Плюс к этому, есть такое понятие, как мозаицизм плаценты и плода – это наличие клеток с аномальным кариотипом среди пула клеток с полноценным набором хромосом. Тем не менее, тест НИПТ занимает все более устойчивую позицию в диагностике хромосомных аномалий плода.
В норме фракция фетальной ДНК медленно увеличивается на протяжении всего срока беременности, в среднем составляя 11–13,4% всей внеклеточной ДНК. Остальные 89–86,6% – это материнская фракция.
Начиная с 10 недели беременности уже можно из крови матери получить 4% плодной внеклеточной ДНК, что позволяет оценить, с определенной долей вероятности, риск развития хромосомных аномалий у плода. Если в анализе крови получают ДНК плода менее 4% – то прохождение НИПТ – невозможно. В этом случае рекомендован перезабор крови через 2 недели.
Важно! До 21 недели беременности фракция ДНК плода в материнской крови увеличивается на 0,11% в неделю. После 21 недели прирост составляет 1,1% в неделю.
Что означает низкая фетальная фракция
Низкий процент внеклеточной фетальной ДНК – может быть особенностью материнского организма (2%). Но в большинстве случаев низкая концентрация ассоциирована с увеличенной вероятностью плодных анеуплоидий (клетки содержат измененное количество хромосом) и кореллирует с весом матери. Чем больше вес женщины, тем ниже процент фетальной фракции. Вес матери более 140 кг – не позволяет провести НИПС.
Что показывает анализ
В ходе неинвазивного ДНК теста из образца материнской крови извлекаются ДНК матери и плода, которые подвергаются скринингу на повышенную вероятность специфических проблем с хромосомами:
- трисомия 21 пары – синдром Дауна;
- трисомия 18, 13 пар хромосом.
Этот анализ также покажет резус-фактор плода и пол. Прицельное тестирование на предмет резус-фактора малыша позволяет вовремя принять меры по профилактике резус-конфликта во время беременности. Принадлежность к полу важна при диагностике хромосомных болезней, сцепленных с полом.
Расширенный НИПТ тест позволяет оценить риски:
- трисомии по 16 и 22 паре хромосом;
- триплоидии;
- анеуплоидии половых хромосом (дополнительной половой хромосомы);
- делеции.
Показания для анализа во время беременности
Для НИПТ, как и любого другого анализа, есть показания:
- возраст матери более 35 лет, достоверно известно, что с возрастом риск рождения плода с синдромом Дауна резко возрастают;
- возраст будущего отца старше 45 лет;
- повышенный риск хромосомных аномалий по результату биохимического скрининга и УЗИ;
- привычное невынашивание;
- мертворождение в прошлом;
- угроза невынашивания на ранних сроках беременности;
- бесплодие в анамнезе;
- присутствие в семейном анамнезе хромосомных патологий.
Анеуплоидии плода во время гестации не проявляются, поэтому каждая беременная женщина может по собственной инициативе пройти НИПС, для получения точной информации о состоянии плода.
Точность теста НИПТ
НИПТ по сравнению с комбинированным скринингом 1 и 2 триместра дает принципиально новые возможности. Самое главное, что чувствительность НИПС значительно отличается от эффективности биохимического скрининга 1 и 2 триместра. С использованием достоверно снижается количество ложноположительных и ложноотрицательных результатов. Например, при комбинированном скрининге (биохимический скрининг и УЗИ) в группу ложноположительных результатов попадает 5% беременных, а при использовании НИПТ – 1%. Выявление синдрома Дауна с помощью БХ скрининга составляет 81-90%, а с помощью НИПС более 99%.
Поэтому применение неинвазивного перинатального теста ДНК оправдано, благодаря его высокой эффективности.
Ложноположительные и ложноотрицательные результаты
При любом исследовании могут быть ложноположительные и ложноотрицательные результаты, неинвазивный перинатальный тест – не исключение, он тоже «ошибается». Но нужно понимать, что процент ложных результатов при комбинированном биохимическом исследовании плода значительно выше. При проведении тестирование по ДНК плода количество ложноположительных результатов ниже в 4 раза.
Важно: результат тестирования фетальной ДНК – не устанавливает и не подтверждает диагноз хромосомной болезни. Он позволяет заподозрить высокий риск генетических нарушений у плода.
Факторы, которые влияют на появление ошибок:
- низкая концентрация свободной фракции ДНК плода в крови матери;
- избыточный вес и ожирение;
- мозаицизм плаценты;
- неправильно поведенный забор биологического материала.
Тест фетальной ДНК на синдром Дауна дает ложноположительные результаты лишь в 0,1% случаев.
Ошибки в определении пола
Неинвазивный ДНК тест на определение пола ребенка по крови матери основан на определении фетальной фракции ДНК и поиске в ней маркеров мужской Y-хромосомы. Это значит, что если в фетальной фракции вкДНК маркеры обнаружены – женщина беременна плодом мужского пола, если нет, плодом женского пола.
Чувствительность и достоверность анализа ДНК плода после 9 недели беременности составляет 99%. На сроке 6-9 недель достоверность ниже и составляет 90-95%.
Когда необходимо провести НИПТ на определение пола
Известно более 300 наследственных заболеваний, сцепленных с половыми хромосомами.
К патологиям, сцепленным с полом относятся:
- гемофилия A и B;
- формы умственной отсталости, сцепленные с Х-хромосомой (например, синдром ломкой Х-хромосомы;
- миопатия Дюшена;
- нефрогенный несахарный диабет.
Подготовка к анализу
Кровь для НИПТ теста берется из вены локтевого сгиба натощак. Дополнительной подготовки перед сдачей анализа не требуется.
Виды НИПТ
Сейчас существует 3 основных вида неинвазивного ДНК теста фетальной фракции ДНК (НИПТ).
| НИПТ тест | ||
| Метод | Что определяет | Ограничения метода |
| Prenetix | Наиболее распространенные хромосомные синдромы (Дауна, Патау, Эдвардса). Позволяет определить пол при двойне | Беременность 3 и более плодами. Пересадка костного мозга и стволовых клеток в прошлом. Феномен исчезнувшего близнеца |
| Panorama | Выявляет риски синдромов: Дауна, Патау, Эдвардса, Шерешевского-Тернера, Кляйнфельтера, дополнительные половые хромосомы, пол. | Многоплодие. Беременность после протокола ЭКО и экстракорпорального оплодотворения с использованием донорской яйцеклетки. Суррогатное материнство. Замершая беременность. |
| Panorama тест с микроделециями | Кроме вышеперечисленных определяет синдромы делеций хромосом и пол. | |
Для чего определять резус-фактор у плода
Если у беременной резус-отрицательный фактор, а у отца положительный, появляется вероятность рождения малыша с резус-положительным фактором. Во время беременности может развиваться резус-конфликт: иммунная система матери начинает вырабатывать антитела к эритроцитам ребенка.
Для своевременной диагностики и принятия мер необходимо определить резус-фактор у плода. НИПТ позволяет это сделать по анализу крови беременной. В зависимости от результата – это дает либо психологический комфорт во время гестации, либо возможность выбрать правильную тактику ведения беременной.
Выводы
НИПТ не дает 100%-ный результат и не позволяет поставить диагноз. Анализ фетальной фракции ДНК показывает риски развития определенной патологии.
Если у ребенка выявляется высокий риск генной болезни, то, как правило, подтверждение диагноза проводится с помощью инвазивных методов пренатальной диагностики (амниоцентез, кордоцентез). Хромосомные аномалии у плода не могут быть исправлены. При подтверждении диагноза необходимо самостоятельно решить, пролонгировать беременность или нет.
Актуальное видео
Неинвазивный пренатальный тест (НИПТ)
Статьи по теме
Сравнительная геномная гибридизация CGH эмбрионов
Что такое ЭКО с ПГД
Генетическая диагностика эмбрионов ПГД
Биохимический скрининг 1 и 2 триместра
Источник
Что такое НИПТ?
НИПТ – это скрининг-тест ДНК, который поможет узнать важную информацию о вашей беременности.
С помощью этого теста, вы сможете:
Узнать степень риска развития синдрома Дауна и хромосомных аномалий
Узнать пол вашего будущего ребенка
Преимущества НИПТ:
Неинвазивный и высокочастотный метод снижает уровень ложнопо- ложительных результатов
Тест Panorama можно сделать уже на 9 неделе беременности с помощью забора крови
При развитии плода в утробе матери постоянно происходит обновление его клеток. ДНК из отмирающих клеток плода (фетальная ДНК) попадает в кровоток беременной женщины. Такая фетальная ДНК может быть выделена из материнской крови уже на пятой недели беременности, и почти всегда на девятой неделе.
Концентрация фетальной ДНК обычно сотставляет 10 до 15 процентов от общей ДНК в крови матери в конце первого и начале второго триместра, когда обычно проводится пренатальная диагностика. Концентрация возрастает с увеличением гестационного возраста и может быть выше, чем 50 процентов от общей ДНК в материнском кровотоке поздней стадии беременности.
Фетальную ДНК можно выделить из крови матери и определить наличие у плода хромосомной патологии, наследственных заболеваний, получить информацию о том какй пол у будущего ребенка или резус — фактор. В некоторых, очень редких, случаях концентрация фетальной ДНК может быть недостаточной, для диагностики, это, бывает, как правило у женщин с избыточным весом, поскольку большой объем материнской плазмы приводит с сильному «разведению» фетальной ДНК.
Неинавзивная пренатальная диагностка хромосомной патологии
Новый неинвазивный пренатальный ДНК тест становится все более доступным для беременных женщин, которые хотят узнать есть ли у их ребенка врожденная хромосомная патология. Если результаты этого теста отрицательные, то будущая мама может избежать инвазивной и, соответственно, более опасной процедуры, такой как биопсия хориона или амниоцентез.
При помощи неинвазивного пренатального ДНК теста анализируются фрагменты ДНК из плода, которые проникают в кровь беременной женщины. Эта ДНК показывает, если есть хромосомные аномалии — трисомия 21 хромосомы, более известная как синдром Дауна. Это наиболее распространенный тип хромосомного дефекта (1 из каждых 700 рождений), а также трисомия 18 хромосомы, известная как синдром Эдвардса, трисомия 13 хромосомы -синдрм Патау или моносомия X — синдром Тернера.
Многие клиники в мире предлагает пациентам с осложненной беременностью (женщины старше 35 лет, хромосомная патология при беременности ранее, плохой биохимический скрининг).
Многочисленные исследования показывают, что неинвазивный пренатальный ДНК тест обеспечивает точность прибижающуюся к 100% уже на 10 неделе беременности.
Подробную информацию о неинвозивном пренатальном ДНК тесте можно получить на нашем специальном сайте panoramatest.ru
Неинвазивное определение отцотвства
Неинвазивный пренатальный ДНК тест на отцовство основан на сравнении генетических профилей фетальных клеток циркулирующих в крови матери и образцов от предполагаемого отца.
Анализируя профили ДНК на основе множества пецифических маркеров, лаборатория в состоянии сравнить плода профиль ДНК с генетическими профилями ДНК матери и предполагаемых отцов.
Неинвазивное определение отцовства возможно с 10 недель беременности.
Процедура в среднем занимает 9 рабочих дней.
Точность теста превышает 99%
Наша лаборатория предлагает полный сервис для наших пациентов:
- Бесплатное предварительное консультирование, которое проводит врач-генетик.
- Консультация о возможности использования разных типов образцов (волос, ногтей, смывов с зубной щетки и др).
- Исследование материала от нескольких предполагаемых отцов без дополнительной платы.
Неинвазивное определение пола плода
Неинвазивное пренатальное генетическое определение пола ребенка по крови матери — генетический лабораторный метод диагностики, позволяющий определить пол плода на ранних сроках беременности.
Половая принадлежность человека на уровне генотипа определяется парой так называемых половых хромосом. У женщин набор половых хромосом состоит из двух X хромосом, у мужчин — из X и Y хромосом. Методы генетической лабораторной диагностики, позволяющие обнаруживать эти хромосомы в клетках организма человека, разработаны очень давно. Но применительно к задаче раннего генетического определения пола плода добавляется еще одна проблема — получения материала (клеток, фрагментов ДНК) плода. При проведении ЭКО эта проблема решается просто — материал для исследования берется непосрседственно из пробирки. А вот при естественно протекающей беременности до недавнего времени для решения этой задачи предлагались только так называемые инвазивные методы пренатальной диагностики(пункции хориона и плаценты иглой под УЗИ-контролем через переднюю брюшную стенку будущей мамы). Поскольку инвазивная диагностика сопровождается существенным дискомфортом для беременной женщины и несет за собой вероятность прерывания беременности, в широкой клинической практике раннее определение пола ребенка использовалось редко.
В 1997 году было доказано наличие в крови беременных внеклеточных ДНК плода, а тремя годами позже также было доказано наличие в плазме циркулирующих плодных РНК. Это открытие послужило толчком к развитию ранней неинвазивной пренатальной диагностики, в том числе к определению пола плода. Таким образом, раннее генетическое определение пола плода основано на выявлении в крови беременной клеток и ДНК плода, и поиск в них маркеров мужской Y-хромосомы, которой нет у девочек.
Неинвазивное определение резус-фактора
Иммунологическая несовместимость плода и матери по резус-фактору является основной причиной гемолитической болезни новорожденного. В некоторых случаях воздействия антигенов, проникающих через плаценту, приводят к гибели плода.
У людей с отрицательным резус-фактором есть мутации или отсутствует полностью ген RHD, кодирующий белок RhD, но почти у всех людей на поверхности эритроцитов есть полиморфный белок RhCcEe, кодируемый геном RHCE. Таким образом, фенотипы Rh крови человека зависят от генов RHD и RHCE, пары гомологичных генов на коротком плече хромосомы 1 (1p34-36), которые имеют по 10 экзонов. Белки RhCcEe и RhD имеют схожие структуры, отличаются они лишь на 35–36 аминокислотных остатка (в зависимости от RhC/c и E/e статуса группы крови).
Анализ на неинвазивное определение гена резус-фактора плода рекомендуется проводить для резус-отрицательных женщин, начиная с 10-й недели беременности.
При соблюдении указанных сроков вероятность правильного определения составляет более 99%. В редких случаях из-за индивидуальных особенностей содержание внеклеточной ДНК в плазме беременной женщины на сроках 10-11 недель низкое. В этих случаях результат может быть сомнительным, рекомендуется сдать кровь на анализ повторно через2-3 недели.
Остались вопросы?
Звоните нам по телефону федеральной горячей линии
8-800-333-45-38
или обращайтесь к нашим партнерам.
Источник
