Анализ крови на антитела к боррелиозу
Метод определения
Хемилюминесцентный иммуноанализ.
Исследуемый материал
Сыворотка крови
Специфические антитела к возбудителю боррелиоза (болезни Лайма, Lyme Disease), свидетельствующие о текущей или перенесённой в прошлом инфекции.
Боррелиоз или болезнь Лайма (по названию местечка, в котором в 1975 г. было впервые выявлено заболевание) – распространённая, переносимая клещами инфекция. Возбудитель – очень маленькая спирохета Borrelia burgdorferi, единственная из всех боррелий патогенная для человека. Хозяевами являются многие позвоночные животные: собаки, овцы, птицы, коровы и лошади, но основной хозяин и переносчик – иксодовые клещи, у которых инфекция длится на протяжении всей жизни клеща. В России — это I.ricinus и I.persulcatus. Заболевание характерно для весенне-летнего периода. Чаще наблюдается в Московской, Ленинградской, Тверской и других, преимущественно северных областях, а также в Прибалтике.
Заболевание системное, имеющее 3 стадии
- I стадия возникает через одну неделю после укуса клеща и длится от 3 до 33 дней. Для неё характерна лихорадка и мигрирующая эритема. Если терапию начинают в этой стадии, то дальнейшее развитие заболевание удаётся предотвратить.
- Через 4 недели после укуса развивается II стадия. Для неё характерны поражение сердца и неврологическая «триада»: асептический менингит, паралич лицевого нерва и периферические невропатии.
- Через 6 недель, а иногда через несколько лет у нелеченных больных развиваются тяжёлые поражения суставов.
Лабораторная диагностика. При классической картине мигрирующей эритемы диагноз ставится по клиническим признакам, в остальных случаях его подтверждают лабораторными методами. Посев, выявление антигена возбудителя и гистологическое исследование кожи недостаточно чувствительны и специфичны, гистологическое исследование, кроме того, инвазивно. Поэтому диагноз подтверждают, в основном, серологическими методами — выявлением в крови специфических IgG и IgM антител к возбудителю (в лаборатории ИНВИТРО, соответственно, тесты № 243 и № 244).
ПЦР-тестирование на наличие генетического материала возбудителя в данном случае малоэффективно, но используется при необходимости у пациентов с отрицательными результатами серологических тестов, но вескими клиническими подозрениями на инфицирование, а также у пациентов с иммунодефицитом.
Специфические антитела к Borrelia burgdorferi начинают обнаруживаться на 2-4 неделе после начала инфекции (сначала IgM, потом IgG), максимальное количество IgG синтезируется через 1,5 — 3 месяца после инфицирования. Антитела к Borrelia burgdorferi часто не выявляются на ранней, локализованной стадии заболевания или при рано назначенной антимикробной терапии.
Таким образом, отрицательный результат серологических тестов на ранних стадиях инфекции не является подтверждением её отсутствия и требует перепроверки в динамике через 2 — 4 недели. На диссеминированной и хронической стадиях специфические антитела к возбудителю имеются практически всегда. Антитела класса IgG циркулируют в крови длительный срок (от нескольких месяцев до нескольких лет), даже после успешной антимикробной терапии и излечения инфекции. Поэтому по присутствию и титру антител об успехе лечения судить нельзя. Иммунитет против Borrelia burgdorferi не является стерильным. У переболевших людей возможно повторное заражение через несколько лет. Выявление антител к Borrelia burgdorferi не всегда сопровождается клиническими признаками болезни Лайма.
По оценкам, специфичность ИФА тестирования антител к Borrelia burgdorferi в настоящее время достигает 95% (т. е. неспецифические реакции, перекрёстное реагирование с антигенами других бактерий могут примерно в 5% случаев давать ложноположительные результаты).
В сомнительных случаях для подтверждения результатов ИФА-тестов используют иммуноблот.
Литература
- Инфекционные болезни у детей. Ред. Д. Марри. М. Практика, 2006. 928 с.
- В.И. Офицеров. Лайм-боррелиоз и его диагностика. Новости «Вектор-Бест» N 2 (28).
Июнь 2003. - Tietz Clinical guide to laboratory tests. 4-th ed. Ed. Wu A.N.B.- USA,W.B Sounders Company, 2006. 1798 p.
Источник
Лайм-боррелиоз (ЛБ), болезнь Лайма или иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ) – трансмиссивное полисистемное заболевание, приводящее к поражению опорно-двигательного аппарата, нервной и сердечно-сосудистой систем, кожи, занимающее по широте распространения и уровню заболеваемости одно из ведущих мест среди природно-очаговых заболеваний. Заболевание регистрируется на значительной территории Российской Федерации.
Возбудители ЛБ – боррелии комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato, переносчики – иксодовые клещи. В диагностике ЛБ необходимо учитывать эпидемиологический анамнез (посещение леса, присасывание клеща) и клинические проявления, главным из которых, является мигрирующая эритема на ранних стадиях заболевания. Однако до 50% случаев ЛБ могут протекать со стертыми клиническими признаками, в частности, в безэритемной форме, что осложняет постановку диагноза. Использование в клинической практике современных высокочувствительных и специфичных методов серологической диагностики ЛБ позволяет своевременно выявить ранний боррелиоз и начать курс лечения, сократить риск развития тяжелых хронических форм болезни Лайма, а также провести дифференциальную диагностику боррелиоза от других инфекций, передающихся иксодовыми клещами.
Серологическая диагностика клещевого боррелиоза (300049, 300051) – это уникальные исследования, выполняемые с помощью диагностической тест-системы в формате иммуночипа, разработанной в ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора!
Иммуночип повышает эффективность проведения серологического анализа ЛБ и информативность результата, т.к. позволяет одновременно определять в исследуемом образце антитела к 8 группам диагностически значимых антигенов боррелий видов Borrelia afzelii и Borrelia garinii, наиболее распространенных в РФ, и одновременно дифференцировать их по классам: IgM и IgG. Показано, что использование комбинации из нескольких рекомбинантных белков разных видов боррелий позволяет повысить чувствительность и специфичность теста. Иммуночип – высокочувствителен и специфичен (сравнительная оценка проводилась с коммерческими тест-системами в формате ИФА и иммунного блоттинга, зарегистрированными на территории РФ), исключает субъективность оценки благодаря автоматизированной интерпретации результатов.
На I (острой, первые три месяца) стадии заболевания антитела IgM и IgG обнаруживаются у 50-70% пациентов; уровень антител IgM достигает пика в первые 3-6 недель заболевания, пик синтеза антител IgG приходится на 6–8-ю неделю после начала инфекции. На ранней стадии острой формы заболевания с целью установления сероконверсии важно исследовать парные сыворотки, полученные от пациентов с интервалом в 20–30 дней. На II (подострой, длящейся 3-6 месяцев) стадии заболевания в зависимости от сроков развития диссеминации и органной патологии антитела IgM обнаруживаются у 30-80% пациентов, антитела IgG – у 65-100%. ВАЖНО: наличие антител IgМ к антигенам боррелий в сыворотке крови больных Лайм-боррелиозом, как правило, указывает на раннюю стадию инфекции. В некоторых случаях антитела IgM могут выявляться в течение 1–2 лет и более. На III (хронической, длящейся более 6 месяцев) стадии заболевания антитела IgM выявляются у 5-50 % больных, антитела IgG – практически в 100% случаев. ВАЖНО: специфические иммуноглобулины класса G могут детектироваться в течение длительного периода времени (несколько лет). Долго они сохраняются также и после успешно проведенной антибиотикотерапии.
Для подтверждения диагноза рекомендуется использовать двухшаговую схему лабораторной диагностики: определение специфических антител методом ИФА, при положительном результате — подтверждение их специфичности методом иммунного блоттинга или иммуночипа.
Список антигенов, к которым определяется наличие антител в иммуночипе: p100 В.garinii, p100 B.afzelii, VlsE B.garinii, VlsE B.afzelii, p39 B.afzelii, p41 B.garinii, p41 B.afzelii, p58 B.afzelii, BBK32 B.garinii, BBK32 B.afzelii, OspC B.garinii, OspC B.afzelii, p17 B.garinii, p17 B.afzelii.
Критерии результата при тестировании IgM антител
| Отрицательный | Положительный | Неопределенный |
|---|---|---|
|
|
|
Критерии результата при тестировании IgG антител
| Отрицательный | Положительный | Неопределенный |
|---|---|---|
|
| Выявлены антитела только к одному антигену из группы: p100, p58, p41, p39, BBK32, OspC |
Комплекс антител, выявляемый на разных стадиях ЛБ
| Стадия заболевания | IgM антитела | IgG антитела |
|---|---|---|
| Острая (I) | OspC, p41, p17, VlsE | P41, BBK32, p17, OspC, VlsE |
| Подострая (II) | OspC, p41, p17, BBK32, VlsE | p17, p41, VlsE, OspC, BBK32, p58 |
| Хроническая (III) | OspC, p41, VlsE, P39, p58 | p17, BBK32, p41, p58, VlsE, p100, OspC, p39 |
Внимание!
- При наличии признаков поражения центральной нервной системы рекомендуется проводить анализ специфических антител в спинномозговой жидкости (интратекальный синтез антител), так как отрицательный результат анализа сыворотки крови у больного нейроборрелиозом не свидетельствует об отсутствии у него инфекции. Исследование спинномозговой жидкости (СМЖ) обязательно проводится одновременно с исследованием сыворотки крови.
- Отрицательный результат серологических тестов на ранних стадиях заболевания не является доказательством отсутствия инфекции.
- В исследовании 300051 (кровь + спинномозговая жидкость) отдельно описываются антигены для каждого вида биоматериала.
Показания к назначению исследования: диагностика иксодового клещевого боррелиоза (болезни Лайма).
Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21 ноября 2011 года, должны производиться врачом соответствующей специализации.
Источник
Исследование предназначено для качественного определения антител к антигенам боррелий в сыворотке крови человека для диагностики клещевого боррелиоза (болезни Лайма) и ассоциированных заболеваний: хронической мигрирующей эритемы, доброкачественного кожного лимфаденоза, атрофического хронического акродерматита, артрита, кардита, лимфоцитарного менингорадикулоневрита, нейроборрелиоза. Первыми в крови появляются иммуноглобулины M (IgM). Они выявляются через 2-3 недели после укуса клеща, достигая максимума через 6 недель, затем их уровень постепенно снижается в течение нескольких месяцев и даже лет. Исследование антител IgM оптимально проводить для диагностики недавнего заражения (в течение 1-2 месяцев после первых симптомов).
Синонимы русские
Антитела класса IgM к Borrelia burgdorferi (вестерн-блот), иммуноглобулины класса M к возбудителю боррелиоза (болезни Лайма, клещевого боррелиоза, лайм-боррелиоза).
Синонимы английские
Lyme Disease Antibody (IgM), Western Blot.
Метод исследования
Иммуноблотинг.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь.
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Не курить в течение 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
Тест выявляет антитела к Borrelia burgdorferi. Эта бактерия относится к группе спирохет и вызывает у человека клещевой боррелиоз (болезнь Лайма).
Человек заражается, если его укусил клещ, который сам был инфицирован B. burgdorferi. Иксодовые клещи, переносчики боррелиоза, – это самая распространенная группа клещей, в умеренном поясе Северного полушария они встречаются повсеместно. Чаще всего заражение людей происходит в период активности клещей – весной и летом.
Инкубационный период боррелиоза составляет несколько недель. На ранних стадиях могут наблюдаться следующие симптомы: усталость, озноб, головные боли. Также при боррелиозе иногда возникает характерная сыпь – мигрирующая эритема (кольцевидное покраснение кожи, которое постепенно расширяется). Если болезнь не лечить, то могут возникнуть серьезные проблемы: боль в суставах, менингит, онемение конечностей, паралич лицевого нерва, расстройства памяти и (в редких случаях) поражения глаз и сердца. Лечение болезни, как правило, эффективно.
При инфицировании лимфоциты человека начинают вырабатывать антитела – специальные белки (иммуноглобулины), которые должны нейтрализовать бактерии. Иммуноглобулины M (IgM) появляются в крови первыми, через несколько дней после заражения. Однако выявить их удается обычно на более поздних сроках (через 2-3 недели). Примерно через 6 недель концентрация IgM достигает максимума и затем постепенно уменьшается (в течение нескольких месяцев и даже лет).
Антитела другого типа – иммуноглобулины G (IgG) – появляются обычно немного позже и сохраняются в крови дольше. Однако и IgG, и IgM могут присутствовать у человека, который уже выздоровел.
Таким образом, антитела IgM лучше всего подходят для диагностики недавнего заражения (тест на них имеет смысл в течение 1-2 месяцев после первых симптомов).
Анализ на антитела рекомендуется проводить в два этапа. Первый шаг – это определение титра антител IgM и IgG (обычно с помощью ИФА). Второй шаг – белковый иммуноблот (вестерн-блотинг).
Если с помощью ИФА получен отрицательный результат, то его не проверяют, считая достоверным. Если же результат ИФА был положительный или неточный, то тест проводят еще и с помощью иммуноблота. Иммуноблот более специфичен, чем ИФА, и позволяет отсечь некоторые ложноположительные результаты. Исследование обладает высокой специфичностью (98 %) и чувствительностью (95 %), является более точным по сравнению с ИФА, при тестировании используется рекомбинантный высокоиммуногенный белок VlsE, выделенный из Borrelia burgdorferi, обладающий наибольшей чувствительностью по сравнению с другими антигенами для выявления IgG.
При проведении иммуноблота выявляются антитела к нескольким разным белкам B. burgdorferi. Результат этого теста – качественный, то есть он должен быть однозначным: либо антитела есть, либо их нет. Однако распространена ситуация, когда некоторые белки связались с антителами, а некоторые нет. В таком случае интерпретация результатов исследования зависит от того, какую именно тест-систему используют в диагностической лаборатории. Дело в том, что набор белков для иммуноблота может быть разным. Поэтому каждая фирма-производитель предлагает свои критерии оценки (например, результат считается положительным, если 2 из 3 важнейших белков связались с антителами). Поэтому интерпретацию результатов теста проводят сотрудники диагностической лаборатории, которые знают, какую именно методику использовать, и они же делают окончательный вывод, заражен ли пациент боррелиозом.
Для чего используется исследование?
- Чтобы проверить положительный результат ИФА (или др. серологических методов) для подтверждения диагноза «клещевой боррелиоз».
Когда назначается исследование?
- Когда первый тест (обычно ИФА) выявил антитела против B. burgdorferi;
- когда результаты первого теста (ИФА) были неоднозначные (например, титр антител был очень низким);
- при симптомах клещевого боррелиоза: мигрирующая эритема, повышенная температура, озноб, головная боль, тошнота, повышенная утомляемость, периодическая боль в суставах, костях и мышцах, менингит, паралич лицевого нерва, онемение конечностей, расстройства памяти, поражения глаз и сердца (в редких случаях);
- для оценки эффективности лечения клещевого боррелиоза.
* Перед анализом после укуса клеща должно пройти более 2 недель.
Что означают результаты?
Референсные значения
Экспрессир. белково-подобн. посл-ть | не обнаружено |
Белок мембранных везикул, p83 | не обнаружено |
BmpA, p39 | не обнаружено |
Osp, p31 | не обнаружено |
p30 | не обнаружено |
OspC, p25 | не обнаружено |
p21 | не обнаружено |
p19 | не обнаружено |
p17 | не обнаружено |
Причины отрицательного результата (антитела IgM не обнаружены)
- Боррелиоза нет. Инфекция отсутствует.
- Недавняя инфекция. Если заражение произошло меньше 2-3 недель назад, то уровень антител может быть еще слишком низким и их не удается обнаружить. Это маловероятно, поскольку иммуноблот проводится после того, как получен положительный результат с помощью ИФА. Если существует серьезное подозрение на боррелиоз, то необходимо сдать анализ еще раз, позже.
Причины положительного результата (антитела IgM обнаружены)
- Боррелиоз.
- Ложноположительный результат. Вероятность такого результата меньше, чем в случае ИФА.
Антитела IgМ к Borrelia, сформированные в ранней фазе боррелиозной инфекции, обычно направлены против антигена OspC (p25) – наружный поверхностный белок С — маркер свежей инфекции. Обнаружение IgM-антител против других специфичных антигенов боррелий при отсутствии антител к OspC не считается достаточным указанием на недавно возникшую инфекцию.
Отрицательный результат по IgM-антителам не исключает наличия свежей инфекции, поскольку при повторном заражении могут формироваться только антитела класса IgG.
Ложноположительный результат по IgM-антителам на поздней стадии заболевания может быть связан с инфекционным мононуклеозом, герпес-вирусной инфекцией или аутоиммунными заболеваниями.
Для установления диагноза свежей боррелиозной инфекции полученный положительный результат по антителам класса IgM должен быть обязательно подтвержден через 3-6 недель положительным результатом по антителам класса IgG на свежем образце крови.
Что может влиять на результат?
- Другие заболевания, например инфекции, вызванные родственными бактериями (спирохетами). Хотя на иммуноблот они влияют меньше, чем на ИФА.
- Ошибка при интерпретации (например, учет неспецифического связывания).
Важные замечания
- Если результат ИФА будет отрицательным, иммуноблот, возможно, не понадобится вообще.
- Надежность иммуноблота высокая, но не абсолютная. Поэтому для уверенности в результате нужно использовать двойное тестирование (вначале ИФА, затем иммуноблот для подтверждения).
Также рекомендуется
[02-029] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)
[09-039] Borrelia burgdorferi s.l., ДНК [реал-тайм ПЦР]
Кто назначает исследование?
Врач общей практики, терапевт, инфекционист, невропатолог, ревматолог.
Литература
- Allen C. S. et al. Prospective Study of Serologic Tests for Lyme Disease. Clin Infect Dis. 2008; 47(2): 188-195.
- Goldman’s Cecil Medicine. 24th ed. Goldman L, Schafer A.I., eds. Saunders Elsevier; 2011.
Источник
