Анализ крови кота на инфекции
Метод ПЦР был разработан сравнительно недавно, но к настоящему времени успел занять передовые позиции как в медицинской, так и в ветеринарной лабораторной диагностике инфекционных и инвазионных заболеваний. Основные принципы ПЦР открыл в 1983 году американский химик Кэри Б. Мюллис, за что и был удостоен Нобелевской премии.
ПЦР-анализ состоит из нескольких этапов. Первый этап — пробоподготовка — заключается в обработке исследуемого материала (приготовление суспензии, центрифугирование). На втором этапе проводится выделение наследственного материала — ДНК или РНК — из клеток. При этом после лизиса клеток и разрушения комплекса «ДНК-белок» производится осаждение ДНК или РНК на сорбенте с последующим переходом их в элюирующий буфер. На третьем этапе проводится амплификация, то есть умножение количества специфических участков ДНК. Для этого используются тест-системы, в состав которых входят праймеры — олигонуклеотиды, которые являются специфическими для каждого возбудителя. К разлитой в микропробирки ПЦР-смеси добавляют образцы и контроли, которые помещают в амплификатор или термоциклер — программируемый термостат с высокой скоростью и точностью задаваемой температуры. Процесс амплификации заключает в себе три стадии: денатурация, отжиг и элонгация. При определении в клинических образцах РНК-содержащих вирусов амплификации предшествует стадия обратной транскрипции, при которой РНК переводят в форму ДНК с использованием фермента обратной транскриптазы, или ревертазы. Четвертый этап ПЦР-диагностики заключается в проведении электрофоретической детекции продуктов ПЦР — ампликонов. При этом продукты ПЦР помещают в лунки агарозного геля и подвергают действию постоянного электрического тока, в результате чего отрицательно заряженная молекула ДНК движется к положительному электроду. В состав геля входит бромид этидия, который, образуя устойчивый комплекс с ДНК, делает эти полосы хорошо заметными при просмотре под ультрафиолетовым облучением (рис. 1).
Рис. 1. Стадии ПЦР
Следует отметить, что для получения достоверного результата ПЦР-анализа необходимым условием является соблюдение правил отбора, хранения и транспортировки клинического материала. Несмотря на то, что ПЦР является очень чувствительным методом, желательно наличие определенного количества возбудителя в пробе.
Взятие материала для ПЦР-исследования следует проводить в одноразовых неталькованных перчатках (так как тальк угнетает ПЦР). При взятии соскобов и смывов следует пользоваться одноразовыми стерильными зондами с повышенной адсорбцией (имеющими на конце щеточку), так как они отбирают оптимальное количество материала.
Соскобы и смывы со слизистых оболочек носа, ротовой полости, влагалища, конъюнктивы отбирают в одноразовые пластиковые микропробирки — эппендорфы — объемом 1,5 мл, в которые разлито по 0,5 мл стерильного физиологического раствора. Желательно не использовать зонды с ватными наконечниками. Следует также избегать отламывания кончика зонда в пробирку с физиологическим раствором, так как это затрудняет дальнейшую обработку и повышает риск перекрестной контаминации проб. Для получения необходимого количества материала достаточно вращать зонд в пробирке в течение 1-2 минут, избегая разбрызгивания жидкости. Проба должна быть мутной на вид, а при отстаивании в ней должен образовываться небольшой осадок.
Забор крови проводят одноразовой иглой в одноразовый шприц или в стеклянную пробирку без антикоагулянта. При заборе в шприц, кровь из него аккуратно (без образования пены) переносят в одноразовую стеклянную пробирку. Возможно использование вакуумных систем («Vacuette») для забора крови. Для исследования можно предоставить сыворотку крови: пробирки с кровью отстаивают при комнатной температуре в течение 30 минут до полного образования сгустка, затем центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 10 минут и переносят в количестве не менее 1 мл в стерильные эппендорфы объемом 1,5 мл.
Сперму отбирают в стерильные одноразовые пробирки или флаконы.
Моча. Отбирают первую порцию утренней мочи в количестве не менее 20-40 мл в стерильный сухой флакон или пробирку.
Фекалии. Отбирают пробы массой 1-3 грамма из предварительно продезинфицированного и вымытого лотка, одноразовыми лопаточками переносят в стерильный флакон.
Кусочки пораженных органов от павших животных отбирают в стерильные одноразовые контейнеры или в чистые стеклянные или пластиковые емкости.
Следует строго соблюдать температурные режимы хранения и транспортирования отобранного материала. Транспортирование осуществляют в термоконтейнере с охлаждающими элементами или в термосе со льдом. При хранении материала более суток его необходимо заморозить при Т минус 20°С.
Наиболее часто встречающимися заболеваниями у кошек и собак являются конъюнктивит, ринотрахеит, а также энтерит. Для того чтобы выяснить этиологию заболевания, требуется провести качественную лабораторную диагностику.
Причиной коньюнктивитов или инфекций верхнего респираторного тракта у кошек может быть инфицирование следующими микроорганизмами: герпесвирус типа 1 (FHV1), калицивирус кошек, Chlamediapcittaci. Mycoplasma felis, Bordetella bronchiseptica, Feline reovirus, Staphylococ-cuc aureus, Brohaemolytic streptococcic и Salmonella tephimurium.
Наиболее частой причиной, по данным различных авторов и методов исследования, являются герпес-вирус типа FHY1 (от 10% до 34%) и калицивирус кошек (от 20% до 53%). Chlamydia pcittaci (от 10% до 35%).
Герпесвирусная инфекция, ассоциирована абортами, высокой смертностью новорожденных (инфицирование почти 60% случаев) с признаками интерстициальной пневмонии.
Калицивирус — тяжело протекает у котят, в то же время 25-80% переболевших взрослых животных становятся носителями и являются источником заражения, передавая вирус через слюну.
Панлейкопения — контагиозное вирусное заболевание кошек, характеризующееся резким падением уровня лейкоцитов, гастроэнтеритом, ринитами с конъюнктивитами, высокой смертностью (30-90 % заболевших котят).
Настоящим бичом для питомников является инфекционный перитонит кошек — тяжелое заболевание, возбудителем которого является РНК-содержащий высокопатогенный вирус. Вирус реплицируется в миндалинах и энтероцитах тонкого кишечника, рассеиваясь по организму через макрофаги и моноциты. Коронавирусы с низкой вирулентностью вызывают энтериты средней тяжести, чаще всего у котят после отъема от матери. Высоковирулентный коронавирус может привести к развитию сухого или выпотного перитонита. Перитонит часто сопровождается почечной недостаточностью, печеночными и неврологическими симптомами.
При инфицировании аденовирусами обоих типов и вирусом чумы плотоядных у собак проявляется общий комплекс симптомов: лихорадка, конъюнктивиты и ринотрахеиты, расстройство желудочно-кишечного тракта, поражение нервной системы.
При чуме плотоядных клинические признаки могут включать серозно-слизистые назальные и конъюнктивальные выделения, кашель, одышку, пневмонию, рвоту и понос, а также лихорадку и гиперкератоз.
Аденовирус плотоядных. Возбудитель — ДНК-содержащий аденовирус плотоядных первого типа (вызывает инфекционный гепатит плотоядных) и второго типа (вызывает аденовироз собак). Наблюдаются лихорадка, апатия, анорексия, жажда, рвота и понос, болезненность брюшной стенки при пальпации. Иногда развиваются конъюнктивит, кератит, светобоязнь. Могут быть точечные кровоизлияния на слизистой оболочке и коже. Редко наблюдаются неврологические нарушения.
Все перечисленные заболевания имеют высокий индекс контагиозности и ассоциированы с высокой смертностью среди щенков, от парвовирусного энтерита погибает 10-50% заболевших щенков, при инфицировании не вакцинированных щенков вирусом чумы плотоядных смертность доходит до 100%.
Токсоплазмоз. Возбудитель — простейшее Toxoplasma gondii. Размножение возбудителя происходит у кошек на стенках кишечника. С калом они выделяют во внешнюю среду ооцисты.
Промежуточными хозяевами могут быть кошка, собака, человек. У кошек развитие паразита в кишечнике обычно проходит бессимптомно, изредка вызывая «легкий» понос.
Тканевые цисты могут вызывать анорексию, угнетение, кератиты, желтуху, рвоту, понос и неврологические симптомы в зависимости от пораженных органов. У собак клинические симптомы зависят от пораженных органов: могут наблюдаться неврологические нарушения (тремор, атаксия, паралич) или токсоплазмозный миозит (нарушение походки, атрофия мышц, ригидность), а также миокардит и гепатит.
Хламидиоз и орнитоз. Возбудители у кошек — Chlamydophila felts, у собак — Chlamydophila abortus, Ch. pecorum, у тех и у других заболевание может вызывать Ch. psittaci. У птиц — Ch. psittaci.
У кошек заболевание проявляется в основном в форме гнойных и негнойных конъюнктивитов и кератитов, также могут наблюдаться ринит, пневмония, вагинит, аборты и бесплодие. У котят встречается неонатальныи хламидиозный конъюнктивит. У собак симптомы разнообразны и проявляются воспалительными заболеваниями конъюнктивы, половых органов, гастритами, артритами, абортами и бесплодием. Есть данные о роли хламидий в патогенезе атеросклероза у собак.
Микоплазмоз. Возбудители — микроорганизмы рода Mycoplasma. Протекает с признаками бронхопневмонии, кератоконъюктевитов и кератитов.
Вирусный иммунодефицит кошек. Иммунодефицит кошек — тяжелое заболевание, вызываемое вирусом из семейства Retrovoridae, рода Lentivirus. Вирус поражает иммунную и нервную системы. Обладает тропизмом к Т-лимфоцитам. В результате иммунодепрессии организм становится беззащитным против бактерий, грибов, вирусов и погибает от вторичной инфекции.
Клинические признаки развиваются медленно, и заболевание чаще регистрируется среди кошек 6-10 лет.
И.М. Донник, член-корреспондент РАСХН, д.б.н., профессор, Н.А. Пелевина, м.н.с, О.Г. Бодрова, м.н.с,
ГНУ Уральский государственный научно-исследовательский ветеринарный нститут РАСХН
Источник
Человек, решивший помогать бездомным животным, неизбежно сталкивается с медицинскими вопросами, порой – вопросами жизни и смерти. Конечно, погружаться во все из них с головой для волонтера излишне, но принципиально важно иметь базовое представление об инфекциях, угрожающих здоровью найденного животного и его сородичей.
Какие анализы нужно сдать бездомному коту? Какие методы эффективнее для выявления инфекции? Как и в какие сроки они проявляются? Опасны ли для животных других видов идля человека? На эти и ряд других важных вопросов отвечают ветеринарные фельдшеры приюта «Муркоша».
Бешенство
Крайне опасный вирус, поражающий нервную систему.
1. 100% летальность при заражении.
2. Смертельно опасен для человека, кошек, собак и других животных.
3. Единственная защита – вакцинация.
Симптомы: вялость, нарочитое дружелюбие, сменяющееся агрессией, обильное слюнотечение, конвульсии, паралич.
Диагностируется посмертно. Кошку, подобранную с улицы, нужно осмотреть на предмет укусов. При выявлении следов или симптомов – карантин: зараженные животные погибают в течение 10 дней. В других случаях – немедленная профилактическая вакцинация. Если вас укусило животное с неизвестным статусом по вакцинации, немедленно обратитесь в медицинское учреждение, где вам сделают прививки. Все ваши питомцы обязательно должны быть привиты от бешенства.
Панлейкопения кошек
Опасная вирусная инфекция с острым началом и высокой вероятностью летального исхода, но возможно и бессимптомное течение.
1. В основном вирус активен весной и летом.
2. Как правило, видоспецифичен, но кошки могут болеть еще и вирусом собак, а собаки могут быть носителями кошачьего вируса (бессимптомно). Следовательно, при выявлении парвовирусной инфекции необходимо раздельное содержание собак и кошек.
3. Передача вируса происходит через одежду, руки, другие поверхности и фекально-оральным способом. Беременных кошек нельзя прививать живой вакциной, чтобы не заразить котят в утробе.
4. Устойчив в условиях квартиры до 1 года.Перезаражение происходит при контакте с поверхностями, на которых сохраняется вирус.
5. В зараженное помещение можно подселять только вакцинированных животных. Карантин должен осуществляться строго в отдельном безопасном помещении за пределами квартиры (предпочтительно, в стационаре клиники).
Симптомы: диарея (черный кал, кровь в стуле), обезвоживание.Заболевание проявляется внешне на 3-8 сутки, когда вирус уже распространился по организму.
Методы диагностики и результаты
· Положительный ПЦР крови – вирус есть в организме, если бессимптомное протекание → карантин от 2 до 6 недель;
· Положительный ПЦР фекалий – кошка опасна для непривитых сородичей.
· ИФА диагностика на антиген тесты IDEXX.
Иммунитет после вакцинации или переболевания сохраняется в течение 1-3 года (в условиях повышенного риска обязательно вакцинировать каждый год).
Калицивирусная инфекция кошек
Очень заразная инфекция верхних дыхательных путей, в тяжелой форме – системное заболевание, возможно длительное носительство (аналогично герпесу у человека).
1. Вирус распространен повсеместно, при скученном содержании поражает до 90% популяции.
2. Видоспецифичен – нет опасности заражения других видов животных и человека.
3. Вирус передается с выделениями из верхних дыхательных путей (респираторная форма) или с любыми выделениями через кожу (системная форма), а также через руки, одежду, различные поверхности, блох и их фекалии.
4. Устойчив в условиях квартиры до 28 дней.
5. Вирус очень часто мутирует, поэтому вакцинация в большинстве случаев помогает только облегчить течение заболевания. Могут возникать суперинфекции, от которых вакцина не защищает (смертность 50%).
6. Во внешнюю среду вирус выделяется в течение 30 дней, но некоторые кошки становятся носителями пожизненно.
Симптомы появляются спустя 2-10 дней после заражения: чихание, наличие пузырьков или язвочек во рту, обильное слюнотечение, насморк, повышенная температура, вялость.
Методы диагностики и результаты
· ПЦР диагностика (смывы из носа, ротоглотки и др.) – иногда может быть неэффективна из-за частой мутации вируса. Результаты оцениваются врачом в контексте клинической картины. Подтверждение того, что кошка перестала выделять вирус – 3 отрицательных результата с семидневными промежутками.
Вирусная лейкемия кошек (ВЛК)
Инфекция распространена повсеместно: 1% домашних, до 8% гуляющих и бездомных кошек.
1. Факторы риска: скученное содержание, юный возраст, проживание на улице.
2. Наиболее уязвимы котята, с возрастом в хороших условиях содержания развивается устойчивость.
3. Может переходить в спящую форму, а в 20-30% случаев возможно полное выздоровление.
4. Вирус видоспецифичен– нет опасности заражения других видов животных и человека.
5. Не устойчив во внешней среде, но может сохраняться в жидкостях.
6. Передается через слюну (укусы, вылизывание, общая посуда), фекалии, выделения из носа и молоко, при переливании крови.
7. Требуется раздельное содержание здоровых и больных, включая носителей, кошек.
Симптомы:вялость, лихорадка, отсутствие аппетита, ослабление иммунитета, появление лимфом и других опухолей, лейкемия, увеличение лимфоузлов, присоединение вторичных инфекций, неврологические симптомы и тд.
Методы диагностики и результаты
— Иммунохроматография: отрицательный результат возможен у здорового животного, при спящей форме, в первые 4 недели заболевания → повторить анализ через 4-8 недель; положительный – животное инфицировано, активная фаза заболевания, при неясной клинической картине анализ нужно повторить через 6 и еще через 10 недель.
— Иммуноферментный анализ.
— ПЦР РНК.
— ПЦР ДНК.
ВЛК – сложное в диагностике заболевание, поэтому требует комбинации разных методов для окончательного вывода. В любом случае поставить диагноз может только ветеринарный врач, поэтому одна из первостепенных задач волонтеров и хозяев – найти квалифицированного специалиста, которому они готовы доверить жизнь и здоровье животного.
Вирус иммунодефицита кошек (ВИК)
Аналогичен вирусу иммунодефицита человека, в терминальной стадии – СПИД кошек. Скрыто протекающая инфекция, поражающая иммунную систему.
1. ВИК остается в организме кошки пожизненно.
2. Вирус видоспецифичен–нет опасности заражения других видов животных и человека.
3. Не устойчив во внешней среде.
4. Пути передачи инфекции: укусы, переливание крови, от матери котятам (редко).
5. Строго раздельное содержание больных и здоровых животных.
Симптомы:на начальных стадиях их может вообще не быть, в терминальной — появление опухолей, присоединение вторичных инфекций, неврологические заболевания.
Методы диагностики и результаты
— Положительный анализ на антитела (ИФА, ИХА) – если следы иммунного ответа есть в крови, значит, животное контактировало с вирусом и 100% является инфицированным. Пожизненно нуждается в поддерживающей терапии и должно содержаться отдельно от сородичей либо вместе с другими ВИК-положительными кошками.
Примечание. Существует комбинированный иммуноферментный метод (SNAP-тест), показывающий сразу результат и по ВИК, и по ВЛК. Такой вариант в некоторых случаях гораздо удобнее, к тому же дешевле отдельных анализов на каждый из вирусов.
Короновирус
Вирус, широко распространый в популяции: наличие антител выявляется у 50% домашних кошек иу 90% кошек в приютах и питомниках.
1. Фактор риска– скученное содержание.
2. Видоспецифичен – не несет опасности для животных других видов и человека.
3. Вирус может исчезать из организма при снижении общей инфекционной нагрузки (одиночное содержание, регулярная обработка лотка) или по другим причинам.
4. Пути передачи: фекально-оральный (общий лоток с зараженным животным).
5. Мутирует в смертельное заболевание (FIP) в 5% случаев. Фактор риска – стресс (любой).
6. Нежелательно совместное содержание здоровых и инфицированных животных в одном пространстве.
Симптомы: диарея и рвота. Может проявиться один раз за всю жизнь, либо возникать периодически, а может перейти в тяжелую форму с плохим прогнозом.
Методы диагностики и результаты
— Выявление антител – контактировала ли кошка с вирусом? Положительный анализ и высокие титры – нужно пересдать спустя 2-3 месяца. Отрицательный анализ может иногда быть ложным, поэтому также лучше повторить (выжидать долго не нужно, но можно сдать в другой проверенной лаборатории, либо на другой день в той же).
— Положительный ПЦР фекалий – кошка выделяет вирус и в данный момент опасна для других животных. Вероятно, будут проявляться симптомы.
До выяснения ситуации в обоих случаях животное должно находиться в карантине без сородичей.
Итак, мы перечислили основные и наиболее грозные инфекции, с которыми информационно должен быть знаком каждый волонтер. Без понимания рисков велика вероятность натворить бед, будь у вас даже самые благие намерения. Команда приюта «Муркоша» призывает всех волонтеров серьезно отнестись к мерам безопасности, чтобы не навредить своим подопечным и другим животным. Также не пренебрегайте вакцинацией. Зачастую это единственный способ защитить кошек от смертельных заболеваний.
Подробнее о важности прививок: «Прививки у кошек – что, как, зачем?»
Хочу помочь приюту
Вы собираетесь подключить регулярный платеж. В случае успешной оплаты с Вашей карты с указанной периодичностью будет списываться указанная Вами в первом платеже сумма. Вы в любой момент можете отключить регулярный платёж, перейдя по ссылке указанной в письме с данным платежом.
Поставив галочку «Согласен с условиями», Вы принимаете публичную оферту.
Источник
