Анализ крови ат к ядерным белкам

Диагностика патологий, ассоциированных с вирусом Эпштейна-Барр, подразумевает выявление уровня антител к ядерному антигену, капсидному и раннему.

Ядерный антиген вируса Эпштейна-Барр представляет один из белков вирусной частицы, наличие иммуноглобулинов к которому говорит о хронизации процесса, а присутствие их после реконвалесценции объясняется циркуляцией клеток памяти. Антитела к вирусу Эпштейна-Барр способствуют различию стадии и формы инфекции.

Общая характеристика патогенеза и антигенов ВЭБ

Вирус Эпштейна-Барр относится к 4 типу патогенов из семейства герпесвирусов, проявляет сродство к лимфоцитам, обладает онкогенными и иммунодепрессивными свойствами.

Структура Epstein-Barr virus сложная, поэтому при диагностике применяют несколько анализов для верификации ВЭБ в организме. Кроме того, исходя из выявленных показателей, удается определить давность инфицирования и форму инфекции.

Структура вириона представлена следующими, диагностически важными, белками:

• VСА – наружный или капсидный антиген;
• ЕВNА – внутренний или ядерный антиген;
• МА – антиген мембраны;
• ЕА – ранние (диффузный ЕАD и локализованный ЕАR).

В-клетки одними из первых принимают удар, а далее, вирус распространяется по остальной лимфатической системе.

Первое заражение вирусом сопровождается поражением 30% В-лимфоцитов. ДНК вируса Эпштейна-Барр поступает в клеточное ядро, при этом лимфоциты становятся «бессмертными»: несмотря на инфицирование, они непрерывно размножаются, что определяется присутствием атипичных мононуклеаров.

В период бессимптомного течения ВЭБ-инфекции вирион, персистирующий в лимфоцитах, экспрессирует ядерные и мембранные белки, что означает возникновение антител к указанным антигенам.

Ядерный антиген вируса Эпштейна-Барр провоцирует недоступность зараженных В-клеток для уничтожения иммунокомпетентными клетками.

В результате пораженные лимфоциты продолжают размножаться. Пролиферация их становится вирусзависимой.

В ответ на поражение В-лимфоцитов начинает активизироваться клеточное звено иммунитета, а именно Т-лимфоциты. Они тормозят избыточное размножение пораженных клеток, поэтому в анализах крови определяется лимфоцитоз, не только атипичные мононуклеары.

Цитотоксические иммунные клетки и киллеры (NK) сдерживают пул зараженных В-лимфоцитов, ограничивая патологический процесс, однако, погрешности иммунитета приводят к недостаточной атаке и постепенной пролиферации инфицированных человеческих клеток.

Поэтому при терапии инфекционного мононуклеоза и различных состояний, обусловленных ВЭБ-инфекцией, предпочтительно выполнить иммунограмму.

Во рту инфицированные клетки длительно локализуются в миндалинах, обуславливая выделение вирусных частиц с выдыхаемым воздухом, кашлем. ВЭБ покидает разрушенные В-лимфоциты для поражения новых.

Но описывают и иной тип паразитирования вируса Эпштейна-Барр в клеточных элементах – скрытый, когда образуется малое количество копий вируса, поддерживая тем самым носительство.

Вирус инфицирует не только В-клетки, но и ряд других клеток, несущих иммунную функцию, эпителиоциты сосудов. ДНК вируса в ядре может существовать в двух формах: кольцевая структура (эписома) или встроенная в геном.

Последняя приводит к хромосомным нарушениям, что лежит в основе онкологических заболеваний, ассоциированных с вирусом Эпштейна-Барр.

Важно!

В процессе размножения вируса образуется более 70 белков, но современные достижения медицины позволяют обнаружить антитела в крови у человека только к 4 антигенам ВЭБ.

Показатели крови к вирусу герпеса 4 типа расшифровываются следующим образом:

1. Ранний антиген вириона обеспечивает выработку антител в начале заражения или при обострении.
2. Капсидный антиген вируса Эпштейна-Барр характеризуется продукцией иммуноглобулинов в острой фазе начала патологии, при реактивации процесса. Особенностью считается наличие иммуноглобулинов к капсидному белку VCA как при обострении хронической инфекции, так и при ремиссии.
3. Антитела к ядерному белку вируса определяются при любой разновидности формы хронической патологии. После выздоровления от острой формы их наличие означает циркуляцию антител памяти: инфекция протекала ранее.
4. Антитела к мембранному антигену циркулируют при скрытом течении ВЭБ-инфекции.

Образуют структуру вириона капсидный, ядерный и мембранный антигены – они считаются уникальными или вирусоспецифическими.

Антитела IgG и IgM — что это?

Иммунная система человека в ответ на внедрение чужеродных агентов инфекционного происхождения реагирует продукцией специальных антител – иммуноглобулинов, которые инактивируют патогены.

Антитела классифицируются на несколько разновидностей, из которых для большинства инфекций актуально определение двух: M и G.

В чем разница антител IgM и IgG? Белки разновидности (класса) М продуцируются первыми в ответ на проникновение возбудителя или повторную реактивацию процесса. Антитела IgM к вирусу Эпштейна-Барр самоустраняются примерно спустя три месяца от начала болезни.

IgG продуцируются через несколько недель и определяются в крови всю жизнь, означая, что инфекция перенесена пациентом ранее.

IgG положительный – что это значит?

Вопрос возникает у многих людей, так как в рамках профилактического или диагностического обследования у взрослого человека будет такой результат с вероятностью ближе к 90%. Практически все взрослые люди инфицированы ВЭБ. Анализ означает, что инфекция перенесена.

При исследовании крови иммунохемилюминисцентным методом или ИФА выдают количественный результат, значения которого подразумевают отрицательный, сомнительный, положительный ответы.

Если получен сомнительный ответ, анализ крови повторяют через 7 дней. В случае второго сомнительного ответа анализ считают отрицательным.

Авидность позволяет установить срок давности заражения вирусным агентом. Авидность IgG к вирусу Эпштейна-Барр описывается большими значениями при давнем инфицировании, а низкое – говорит о свежем заболевании.

Расшифровка анализа на вирус Эпштейна-Барр помогает выяснить сроки попадания патогена в организм, форму инфекции.

Ранний антиген

Вскоре после поражения В-клеток в крови начинает формироваться пул иммуноглобулинов к раннему антигену. Когда уровень иммуноглобулинов достигает порогового уровня, их можно зафиксировать лабораторным методом.

Ранний антиген вируса Эпштейна-Барр не является структурным, он необходим для размножения вириона, к нему продуцируются антитела класса IgM и IgG.

Антитела IgM к раннему белку ВЭБ довольно рано формируются и так же быстро исчезают, поэтому выявить их зачастую не удается.

Это объясняется довольно длительным инкубационным сроком инфекционного мононуклеоза. Пока ВЭБ размножается в В-лимфоцитах в инкубации, симптомов не наблюдается.

Антитела IgG к раннему антигену начинают свою выработку уже при начавшейся симптоматике – в фазу разгара.

Таким образом, идентификация иммуноглобулинов к белку раннего типа является тестом ранней диагностики. При этом длительное сохранение антител IgG к ЕА говорит о хронизации, а рост считается маркером обострения.

Капсидный антиген

Антитела к капсидному антигену вируса Эпштейна-Барр IgM начинают формироваться по окончании инкубации (в начале патологии) и к моменту разгара клиники имеют значения, определяемые лабораторно.

Важно!

Антитела класса IgM на капсидный антиген положительные и определяются на максимуме в течение 1,5 месяцев от начала заболевания, через полгода они снижаются.

Если иммуноглобулины М на капсидную форму белка вируса Эпштейна-Барр положительные на протяжении больше 12 недель, подозревают затяжной мононуклеоз и иммунодефицит.

Таким образом, положительный результат анализа крови на IgM к капсидному антигену подтверждает острую инфекцию. IgG положительный на первом месяце болезни, а пик достигается на 8 неделе от момента развития клиники.

При отсутствии признаков положительный IgG на капсидный антиген к вирусу Эпштейна-Барр подтверждают, что инфекция перенесена. Эти иммуноглобулины называют клетками памяти.

Если анализ выполняют в течение всей инфекции и определяют постепенное нарастание значения антител IgG, то выставляют острую инфекцию первичного характера.

Если в крови пациента длительно присутствуют IgG к VCA и к ЕА, возрастает вероятность хронизации. Очень высокие уровни IgG к VCA могут указывать на  лимфому Беркитта и рак назофарингеальной области.

Ядерный антиген

Антитела к ядерному антигену EBNA начинают продуцироваться после патологии в период реконвалесценции. Определению в большинстве подлежат иммуноглобулины IgG.

Антитела к EBNA могут фиксироваться несколько лет после острого мононуклеоза. Возрастает их количество на третьем-двенадцатом месяце от момента начала болезни.

Следует знать, что отсутствие этих иммуноглобулинов при параллельной циркуляции антител IgM к VCA, а также антител IgG к ЕА, указывает на текущий инфекционный мононуклеоз.

Если ранее результат на EBNA был негативный, а затем стал положительный – предполагают существующую инфекцию.

При наличии клиники мононуклеоза или другой ВЭБ-патологии изредка отсутствие данных иммуноглобулинов к Эпштейна-Барр указывает на выраженный иммунодефицит.

Обнаружение в крови антител к EBNA классов IgM при негативных IgG показывает на острое инфицирование. Если соотношение обратное, то процесс считается перенесенным ранее.

Обнаружение ДНК

С целью непосредственного обнаружения вирусной ДНК в биоматериале больного применяют ПЦР. Благодаря этому способу удается выявить вирус в следующих образцах и:

• в слюне;
• в цервикальном канале;
• в секрете предстательной железы;
• в моче;
• в соскобе из уретры.

С помощью ПЦР удается обнаружить не менее 80 вирионов в 5 мкл биологической жидкости. Специфичность теста приближается к 100%.

Результат возможно расценить двояко. Положительный ПЦР в слюне на вирус Эпштейна-Барр свидетельствует о носительстве или заболевании. Если присутствует характерная клиника и результат ПЦР положительный, диагноз подтверждается.

ДНК Эпштейна-Барр удается зафиксировать в начале заболевания. Спонтанное выделение возбудителя при исключении наличия клиники указывает на носительство.

В слюне ДНК определяют в конце инкубации, в фазе разгара и в течение полугода после выздоровления.

ВЭБ могут определять качественно и количественно при лечении хронической формы, при иммунодефиците на фоне Эпштейна-Барр, при терапии опухолей, связанных с вирусом.

Определение DNA EBV (Эпштейн-Барр вируса) в количественном выражении необходимо для анализа эффективности лечения, так как количественная ПЦР позволяет выявить вирусную нагрузку.

Если со временем при терапии число копий снижается, тактика выбрана верно. В норме копий вируса в биоматериале быть не должно.

Диагностика ВЭБ-инфекции имеет большое значение при планировании беременности, у часто болеющих детей и взрослых, пожилых людей.

С целью выбора адекватной тактики лечения, идентифицируют антитела к белкам Эпштейна-Барр, а также определяют ДНК с помощью ПЦР. Анализы помогают выявить давность заражения и форму инфекции.

Автор: Куликовская Н.А., врач-инфекционист

Полезное видео

[07-022]
Epstein Barr Virus ядерный антиген (EBNA), IgG (количественно)

640 руб.

Anti-ЕBNA IgG – специфические иммуноглобулины, которые указывают на перенесенную или хроническую инфекцию, вызванную вирусом Эпштейна – Барр.

Синонимы русские

Антитела класса IgG к ЯА вируса Эпштейна – Барр, иммуноглобулины класса G к ядерному антигену вируса инфекционного мононуклеоза, anti-ЕBNA класса IgG, IgG-EBNA-антитела.

Синонимы английские

EBV-NA Antibodies, IgG, Antibodies to Epstein-Barr Virus Nuclear Antigen, IgG, EBNA Antibodies, IgG, EBNA-IgG Ab.

Метод исследования

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную, капиллярную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Вирус Эпштейна – Барр относится к вирусам человеческого герпеса 4-й группы. Он склонен поражать В-лимфоциты и вызывает у человека острое заболевание – инфекционный мононуклеоз, а также связан с развитием назофарингеальной карциномы, лимфомы Беркитта, болезни Ходжкина, волосистой лейкоплакии и В-клеточной лимфомы.

Вирус распространен по всему миру. В некоторых странах до 95  % населения в возрасте 40 лет были ранее инфицированы им и имеют антитела. Инфекция передается со слюной. Пик заболеваемости отмечается в раннем детском возрасте, а также в подростковом периоде.

Через эпителий рта, горла и слюнных желез вирус попадает в кровоток и проникает в В-лимфоциты, стимулируя их размножение. Вследствие этого увеличиваются миндалины, лимфатические узлы, селезенка. При нормальном клеточном иммунитете инфицированные В-лимфоциты и вирус удаляются из крови и симптомы заболевания постепенно исчезают. Вирус Эпштейна – Барр, как и другие герпес-вирусы, способен переходить в латентную инфекцию. Его генетический материал может сохраняться в небольшом количестве В-лимфоцитов и способен к бессимптомной реактивации. При дефектах клеточного иммунитета, ВИЧ, терапии иммуносупрессорами вирус Эпштейна – Барр опасен онкологическими заболеваниями (например, В-клеточной лимфомой, назофарингеальной карциномой).

Во многих случаях первичная инфекция протекает бессимптомно или с умеренно выраженным фарингитом и тонзиллитом. Симптомы инфекционного мононуклеоза проявляются у 35-50  % инфицированных.

Инкубационный период заболевания составляет 4-6 недель. В продромальный период инфекция проявляется болями в мышцах, утомляемостью, общим недомоганием. Затем присоединяются лихорадка, боль в горле, увеличение лимфатических узлов, селезенки и иногда печени. В некоторых случаях появляется сыпь на руках и туловище. Симптомысохраняются 2-4 недели.

С началом проявления симптомов в крови обнаруживаются атипичные мононуклеары (> 10  % лимфоцитов) и показатели нарушения функции печени.

Основные антигены вируса Эпштейна – Барр, к которым определяются антитела: антиген вирусного капсида (VCA), ранний антиген (ЕA) и ядерный антиген (EBNA).

Антигены EBNA обнаруживаются в ядрах всех клеток, измененных под действием вируса Эпштейна – Барр. Их находят в опухолевых клетках из лимфомы Беркитта, назофарингеальной карциномы. Антитела anti-EBNA редко присутствуют в крови во время острой инфекции, их количество увеличивается во время выздоровления от инфекционного мононуклеоза и затем достигает стабильного уровня через 3-12 месяцев. В крови антитела к ядерному антигену вируса обнаруживаются в среднем через 2-4 месяца после заболевания и могут сохраняться всю жизнь.

Отсутствие anti-EBNA при положительных anti-VCA класса IgМ указывает на первичное инфицирование вирусом Эпштейна – Барр. Повышенные титры IgG к капсидному антигену при отсутствии anti-EBNA через 4 недели после первых симптомов заболевания также говорят о первичной инфекции.

При положительном anti-EBNA повышение уровня anti-ЕА может быть связано с обострением латентной инфекции. Однако одновременное присутствие данных иммуноглобулинов в крови не всегда свидетельствует о связи состояния пациента в момент обследования с вирусом Эпштейна – Барр. Это обусловлено тем, что антитела могут выявляться в течение нескольких лет после перенесенной инфекции, а вирус иногда реактивируется без каких-либо симптомов.

Диагностика инфекции, вызванной вирусом Эпштейна – Барр, не может основываться только на повышенном количестве антител anti-ЕBNA класса IgG, поскольку они могут определяться и у здоровых, но ранее переболевших инфекционным мононуклеозом.

Одновременное определение антител к ранним антигенам, капсидному белку и ядерным антигенам позволяет выявить инфекцию, вызванную вирусом Эпштейна – Барр, и определить, является ли она текущей, недавней или давно перенесенной.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики инфекционного мононуклеоза.
• Для дифференциальной диагностики заболеваний, симптомы которого схожи с инфекционным мононуклеозом.
• Для выявления обострения хронической инфекции, вызванной вирусом Эпштейна – Барр.
• Для мониторинга некоторых онкологических заболеваний (лимфомы Беркитта, назофарингеальной карциномы), связанных с вирусом Эпштейна – Барр.

Когда назначается исследование?

• При симптомах инфекционного мононуклеоза (боли в горле, увеличении лимфатических узлов, селезенки и печени, лихорадке, быстрой утомляемости).
• При подозрении на ранее перенесенный инфекционный мононуклеоз.
• При диагностике лимфопролиферативных и онкологических заболеваний, предположительно связанных с вирусом Эпштейна – Барр.

Что означают результаты?

Референсные значения

Результат: отрицательный.

При положительном результате выдается количественное значение в у.е/мл.

Причины положительного результата:

• инфекционный мононуклеоз (в период выздоровления или позже);
• перенесенная инфекция, вызванная вирусом Эпштейна – Барр (более 2-4 месяцев после заболевания);
• хроническая инфекция, вызванная вирусом Эпштейна – Барр;
• новообразования, связанные с вирусом Эпштейна – Барр (лимфома Беркитта, назофарингеальная карцинома).

Причины отрицательного результата:

• отсутствие вируса Эпштейна – Барр;
• инкубационный, продромальный или острый период инфекционного мононуклеоза;
• многолетний период после перенесенного инфекционного мононуклеоза;
• некоторые иммунодефициты с нарушенным образованием антител.



Важные замечания

• При сомнительном результате анализ необходимо повторить через 10-14 дней.
• При дифференциальной диагностике лимфаденопатии и заболеваний, схожих с инфекционным мононуклеозом, особенно у беременных женщин, рекомендовано исключить токсоплазмоз, цитомегаловирусную инфекцию, ВИЧ и вирус герпеса 6-го типа.
• Для определения активности и периода инфекции необходимо одновременно выяснить уровни и других антител к вирусу Эпштейна – Барр.

Также рекомендуется

• Epstein Barr Virus, ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Epstein Barr Virus капсидный белок (VCA), IgM
• Epstein Barr Virus ранние антигены (EA), IgG
• Human Herpes Virus 6, ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Cytomegalovirus, IgM
• HIV 1, 2 Ag/Ab Combo (определение антител к ВИЧ типов 1 и 2 и антигена p24)
• Toxoplasma gondii, IgM (количественно)
• Аланинаминотрансфераза (АЛТ)
• Аспартатаминотрансфераза (АСТ)
• Фосфатаза щелочная общая
• Билирубин общий
• Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
• Лейкоцитарная формула

Кто назначает исследование?

Инфекционист, педиатр, врач общей практики, терапевт, онколог.

Литература

1. Кишкун А. А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике. – М.:ООО МИА, 2006. – 335-345 с.
2. Dennis L. Kasper, Eugene Braunwald, Anthony Fauci, Stephen Hauser, Dan Longo, J. Larry Jameson. Harrison’s Principles of Internal Medicine. 16th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 2783 р.
3. Fischbach F.T., Dunning M.B. A Manual of Laboratory and Diagnostic Tests, 8th Ed. Lippincott Williams & Wilkins, 2008: 1344 pp.