Анализ крови антинуклеарные антитела повышены вирус

Иммунная система человека – уникальный слаженный механизм, способный реагировать на любые внешние внедрения патогенных факторов, тем самым защищая организм от целого ряда заболеваний. Но как известно, из каждого правила есть исключения, и в данном случае они выглядят как реагирование иммунитета на собственные клетки, что получило название аутоиммунные болезни.

При данных патологиях идет выработка антител, атакующих здоровые клетки, поражая или уничтожая их. В результате происходит нарушение функционирования отдельных тканевых структур и даже органов. Такие патологии из-за своей распространенности и вовлеченности в процесс нескольких органов или систем получили название системных заболеваний.

При появлении современных методов лабораторной диагностики, одним из которых является АНФ анализ крови на поиск антинуклеарного фактора, позволяющий выявить антинуклеарные (антиядерные) антитела и определить причину патологии. Данный показатель является одним из маркеров системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ), принятым как «золотой стандарт» данного вида исследований.

Основные понятия, характеризующие СЗСТ

Как уже описывалось выше, патогенез данных патологий берет свое начало со сбоев функционала иммунной системы, и выработке защитных антител к определенным компонентам собственных клеток. Такие клетки за особенность своего происхождения имеют второе название – аутоантитела. В процессе иммунного сбоя они вступают в контакт с белковыми соединениями ядра, нуклеиновыми кислотами и антигенами цитоплазмы, что приводит к появлению симптомов воспалительных заболеваний, таких как:

• структурные изменения тканей и органов;
• выраженное необоснованное утомление;
• болевые ощущения в мышцах и суставах;
• поражение кожных покровов;
• снижение веса тела и другие.

Антинуклеарные антитела (АНА) могут образовываться при довольно обширном спектре аутоиммунных патологий, но наибольшая вероятность их появления при системной красной волчанке (СКВ).

АНФ необходимо сдать при признаках длительного воспалительного процесса

Справка! По статистике, более чем у 90% пациентов, страдающих СЗСТ, определяется патологическая выработка подобных антител. На текущий момент изучено около 200 их видов, которые получили обобщенное название – антинуклеарный фактор. В основном они представлены иммуноглобулинами класса G, но иногда встречаются М или А.

Суть анализа крови на антинуклеарный фактор

Прежде чем углубляться в особенности проведения исследования на АНФ, стоит отметить, что методика была изобретена и начала применяться довольно давно – в 60-х годах прошлого века. Но широкое распространение в диагностической практике получила лишь в начале 80-х годов XX века после усовершенствования. В качестве субстрата еще в 1961 году ученый Beck применял клетки лабораторных животных, и только в 1982 году Tan воспользовался перевиваемой клеточной линией человека HEp-2 для поиска АНФ.

Хотя основная цель использования данного теста – это установление диагноза красная волчанка, все же он считается универсальной методикой и для других коллагенозов (СЗСТ). К последним относятся:

• склеродермия;
• дерматомиозит;
• узелковый периартериит;
• хронический активный гепатит и т. д.

Одной из наиболее удобных, и поэтому чаще всего используемых методик для определения в крови пациентов антинуклеарного фактора, считается непрямая иммунофлюорестенция. Исследование проводится при нанесении сыворотки крови на клетки перевиваемой эпителиоидной линии аденокарциномы гортани человека НЕр-2 (содержащих определенный ряд ядерных антигенов) с применением меченого коньюгата (соединения) с антителами.

Этот выбор сделан неслучайно – клетки НЕр-2 – очень удобный субстрат для изучения биоматериала. Они имеют довольно крупные ядра, и при высадке на лабораторных стеклах растут однослойно. В качестве субстрата можно использовать и другие клеточные линии человека, но удачная морфология и культивирование однозначно делает именно НЕр-2 – незаменимым материалом.

В ходе диагностики при инкубации сыворотки обследуемого с клеточным субстратом, при наличии АНА происходит их соединение с соответствующими нуклеарными антигенами. Места связки АНФ с НЕр-2 определяются при использовании меченого флюоресцеином (красителем) коньюгата. Для выполнения оценки результатов произошедших реакций применяется люминесцентный микроскоп, позволяющий дифференцировать характер и степень получившихся связок.

Люминесцентный микроскоп для лабораторных исследований АНФ

Справка! HEp-2 человека, в отличие от тканевых криосрезов животных, имеют более высокую скорость деления клеток, что дает возможность обнаружить антитела к антигенам, которые экспрессируются лишь при делении. Также в субстрате человека отсутствует клеточный матрикс, снижающий качество визуализации изучаемого свечения.

Какие группы антигенов используются при исследовании?

При расшифровке материалов всегда необходимо брать во внимание, что в спектр АНА входит довольно большая группа аутоантител к нуклеопротеидам, рибонуклеопротеидам, гистонам, ДНК и другим структурным единицам ядра. Из этого следует, что функционал теста направлен на выявление антител к составляющим ядра и цитоплазмы, которые изначально были определены при СКВ.

Позже диагностические возможности исследования были расширены, что обусловлено определением подобных антител при других СЗСТ. В скрининговых методиках для обнаружения суммарных АНА, как правило, применяется определенный набор антигенов, принятых за основные маркеры аутоиммунных ЗСТ.

К ним относятся антитела класса IgG:

• SS-A (Ro) – ядерные рибонуклеопротеины;
• SS-B (La) – ядерные белки;
• Scl-70 – белок-фермент (топоизомераза-1);
• нативная двухцепочная ДНК;
• RNP/Sm – комплекс антигенов;
• Jo-1 – фермент РНК – синтетаза;
• CENP-B (центромера)
• Hep-2 клетки;
• митохондрии (PDC).

АНА практически безвредны для организма – они не способны проникать в живые ткани. Но в отдельных случаях могут соединяться в комплексы антиген-антитело, что в результате приводит к структурным разрушениям тканей. Одним из таких примеров является поражение паренхимы почек при СКВ. Так как при СЗСТ в процесс вовлечено несколько органов, то выявление АНА не является первостепенно важным для диагностики, а считается лишь подтверждением определенной симптоматики.

Возможности анализа АНФ, выраженные в процентном соотношении

Изучение полученных результатов

После проведения всех необходимых процедур – взятия биоматериала и его лабораторной подготовке к исследованию, проводится оценка и интерпретация результатов. Сюда входит определение титра (концентрации) антител и типа свечения. Значимым параметром для диагностики является показатель концентрации свыше 1:160. К примеру, при обострении ревматизма он может превышать отметку 1:640, тогда как в ремиссионном периоде наблюдается понижение до 1:160–1:320.

Тип свечения показывает мишени АНА, что является особо важным клиническим моментом, направляющим последующие действия врача в назначении диагностических мероприятий. По характеру свечения ядер при использовании НЕр-2 определится свыше 20 вариантов ядерного окрашивания, в зависимости от видов присутствующих антител в биоматериале. К основным из них относятся следующие типы свечения.

• Периферическое. Свечение свидетельствует о наличии анти-ДНК-антител, что подтверждает СКВ. Основным видом антигенов для периферического типа являются гистоновые белки и ДНК.
• Диффузное (гомогенное). Такое свечение наблюдается при СКВ, сопровождающейся поражением структуры почек и похожих ЗСТ, нефрите, склеродермии, а также лекарственно-индуцированной СКВ. Антигены при данном типе представлены дсДНК, гистонатами и нуклеосомами.
• Ядрышковое (нуклеарное). Данный тип характерен для системной формы склеродермии, и определяется при присутствии у пациентов антител – PHК полимераза 1, PM/Scl, NOR, U3RNP.
• Цитоплазматическое. Подобный тип подсвечивания указывает на наличие АНА к тРНК–синтетазам, а именно Jo-1, и наблюдается при полимиозите.
• Гранулярное. Определяется при синдроме Шегрена, инфекционном мононуклеозе, смешанном ЗСТ (Sharp-синдром, MCTD) и лекарственном волчаночном синдроме. Преимущественно присутствующие антигены для этого типа – SS-A, SS-B, Sm, U1-RNP, и PCNA.
• Крупногранулярное. Характерно для смешанных ЗСТ и, по мнению многих ученых, связано с наличием антигена RNP.
• Мелкогранулярное. Определяется присутствие антител, образующихся против рибонуклеиновых белков – АSSP (АЦЦП), SS-A, SS-B и других. Такие антитела характерны для СКВ, также ее специфических кожных формах, ревматоидном артрите, склеродермии, полимиозите, синдроме Шегрена.
• Центромерное. Данный тип в основном отмечается при склеродермии. Хотя в одном образце крови, особенно у обследуемых с диффузными ЗСТ, в отделенной плазме могут определяться антитела к различным ядерным компонентам.
• Точечные вкрапления в ядре. Этот тип преимущественно выявляется при болезнях печени аутоиммунного характера. При нем могут сочетаться несколько флюоресцентных типов, к примеру, ядрышковый и мелкогранулярный, что обусловлено антителами к Scl-70.

Справка! Отмечено, что при увеличении разведения плазменного биоматериала параметры свечения могут видоизменяться, так как для многих антител характерна смена активности при разной степени концентрации.

Факторы, способные исказить результаты

На достоверность полученных в ходе исследования данных могут повлиять всего несколько факторов, способных показать и ложноположительный и ложноотрицательный результат. Так, неправдоподобные ответы со сдвигом вверх наблюдаются у пожилых пациентов в возрасте от 60 лет (по статистике в 10–37% случаях) и при приеме медпрепаратов, вызывающих лекарственную волчанку (некоторые антибиотики, контрацептивы, сульфаниламиды, тиазидные диуретики).

Отмечено, что у 5–55% особ женского пола, имеющих грудные имплантаты, повышается уровень концентрации АНА. К ошибочной диагностике со сдвигом вниз может привести употребление глюкокортикоидных препаратов – Преднизолона, Метипреда или Дексаметазона.

Синонимы: АНА, антинуклеарные антитела, антинуклеарный фактор, АНФ, антиядерные антитела, antinuclear antibodies, ANAs, Fluorescent Antinuclear Antibody, Antinuclear factor, ANF

Научный редактор: М. Меркушева, ПСПбГМУ им. акад. Павлова, лечебное дело.

Аутоиммунные заболевания, когда иммунная система атакует собственные ткани организма, считаются одними из самых опасных. Большинство аутоиммунных патологий относятся к хроническим и могут вызывать серьезные нарушения в работе внутренних органов и систем.

Одним из наиболее распространенных тестов, применяемых в диагностике аутоиммунных состояний, является обследование на антинуклеарные антитела (АНА), который проводится тремя способами: 

• методом иммуноферментного анализа ИФА (определяется общий уровень ANA), 
• методом реакции непрямой иммунофлуоресценции РНИФ (выявляется до 15 разновидностей ANA)
• методом иммуноблоттинга.

Общие сведения

Антинуклеарные (антиядерные) антитела представляют собой группу аутоантител, которые, вступая в реакцию с ядрами собственных клеток организма, разрушают их. Поэтому анализ на АНА считается достаточно чувствительным маркером в диагностике именно аутоиммунных нарушений, большая часть из которых сопровождается поражением соединительной ткани. Однако некоторые из видов антинуклеарных антител обнаруживаются и при заболеваниях не иммунной этиологии: воспалительных, инфекционных, злокачественных и пр.

Наиболее специфичны антинуклеарные антитела к следующим заболеваниям:

• системная красная волчанка (СКВ) – заболевание кожи и соединительной ткани;
• дерматомиозит – поражение кожи, мышц, скелетной ткани и т.д.;
• узелковый периартериит – воспаление артериальной сосудистой стенки;
• склеродермия – уплотнение и затвердение соединительной ткани;
• ревматоидный артрит – поражение соединительной ткани суставов;
• болезнь Шегрена – поражение ткани с железистыми проявлениями (снижение секрета слезных и слюнных желез).

Антинуклеарные антитела могут обнаруживаться более чем у 1/3 больных хроническим рецидивирующим гепатитом. Также уровень АНА может возрастать в случае:

• инфекционного мононуклеоза (вирусное заболевание, сопровождается массовым поражением внутренних органов);
• лейкоза (злокачественное заболевание крови) в острой и хронической форме;
• гемолитической анемии (малокровие в результате разрушения эритроцитов);
• болезни Вальденстрема (поражение костного мозга);
• цирроза печени (хроническое заболевание, связанное с изменением структуры печеночной ткани);
• малярии;
• лепры (инфекционное поражение кожи);
• хронической почечной недостаточности;
• тромбоцитопении (снижение выработки тромбоцитов);
• лимфопролиферативных патологий (опухоли лимфатической системы);
• миастении (патологическая утомляемость мышц);
• тимомы (опухоль из вилочковой железы).

Одновременно с определением антинуклеарных антител в процессе иммуноферментного анализа оценивается концентрация иммуноглобулинов: IgA, IgM, IgG. Обнаружение этих компонентов в крови может свидетельствовать о высокой вероятности развития ревматических заболеваний и коллагенозов.

В случае, когда связь между концентрацией антител и симптоматикой у больного не обнаруживается, само присутствие антиядерных антител в крови является диагностическим критерием и может повлиять на выбор лечения. Сохранение высокого уровня антинуклеарных антител при продолжительном курсе терапии свидетельствует о неблагоприятном прогнозе заболевания. Снижение значений АНА на фоне проводимого лечения может указывать на ремиссию (чаще) или приближающийся летальный исход (реже).

Также антинуклеарные антитела могут быть обнаружены у здоровых людей до 65 лет (3-5% случаев), после 65 (до 37%).

Показания

Исследовать антинуклеарный фактор целесообразно в следующих случаях:

• Диагностика аутоиммунных и некоторых других системных заболеваний без ярко выраженной симптоматики;
• Комплексная диагностика системной красной волчанки, ее формы и стадии, а также выбор тактики лечения и составление прогноза;
• Диагностика лекарственной волчанки;
• Профилактическое обследование пациентов с диагнозом красная волчанка;
• Наличие специфических симптомов: продолжительная лихорадка без установленной причины, боли и ломота в суставах, мышцах, кожные высыпания, повышенная утомляемость и т.д.;
• Наличие симптомов системных заболеваний: поражение кожи или внутренних органов (почки, сердце), артрит, эпилептические припадки и судороги, лихорадка, беспричинное повышение температуры и т.д.;
• Назначение лекарственной терапии дизопирамидом, гидралазином, пропафеноном, прокаинамидом, ингибиторами АПФ, бета-блокаторами, пропилтиоурацилом, хлорпромазином, литием, карбамазепином, фенитоином, изониазидом, миноциклином, гидрохлортиазидом, статинами, поскольку есть риск развития лекарственной красной волчанки.

Кто дает направление

Помимо врача общей практики, направляют на анализ такие узкие специалисты, как 

• ревматолог, 
• дерматовенеролог, 
• нефролог, 
• педиатр.

Норма для АНА и факторы влияния

В норме антинуклеарные антител в плазме отсутствуют или определяются в небольшом количестве. Результат зависит от способа выполнения теста:

1. Тест делался методом ИФА

• менее 0,9 пунктов – отрицательно (норма);
• от 0,9 до 1,1 пунктов – сомнительно (рекомендуется сделать повторный тест через 7-14 дней);
• более 1,1 пункта – положительно.

2. Для количественного анализа РНИФ нормой считается титр менее 1:160.
3. Иммуноблоттинг – норма «не обнаружено» (общее заключение / напротив каждого вида антител).

Что может повлиять на результат

• нарушение правил подготовки пациентом или алгоритма венепункции медработником;
• прием лекарственных препаратов (карбамазепин, метилдопа, пеницилламин, токаинид, нифедилин и др.);
• наличие у пациента уремии (отравление продуктами белкового обмена) может дать ложноотрицательный результат.

Важно! Интерпретация результатов всегда проводится комплексно. Поставить точный диагноз на основании только одного анализа невозможно.

Антинуклеарные антитела в крови (результат положительный)

Обнаружение антинуклеарных антител может указывать на следующие заболевания:

• системная красная волчанка;
• панкреатит (воспаление поджелудочной железы) аутоиммунной природы;
• сахарный диабет I типа;
• аутоиммунные поражения щитовидной железы;
• злокачественные поражения внутренних органов;
• дерматомиозит;
• аутоиммунный гепатит;
• заболевания соединительной ткани;
• болезнь Шегрена;
• миастения;
• склеродермия;
• ревматоидный артрит;
• диффузный интерстициальный фиброз (поражение легочной ткани в хронической форме);
• синдром Рейно (ишемия мелких концевых артерий) и т.д.

Повышение титра АНА при количественном иммуноферментном анализе (РНИФ) говорит о:

• Системной красной волчанке в активной стадии – титр повышен до 98%;
• Болезни Крона (гранулематозное поражение пищеварительного тракта) – около 15%;
• язвенном колите (воспаление слизистой толстой кишки) – от 50 до 80%;
• склеродермии;
• болезни Шегрена;
• Болезни Рейно – до 20%;
• синдроме Шарпа (смешанное заболевание соединительной ткани);
• лекарственной волчанке.

Важно! При расшифровке анализа важно понимать, что отрицательный результат не исключает наличия аутоиммунных нарушений у пациентов с характерной симптоматикой. Положительный результат без клинической картины аутоиммунного процесса необходимо интерпретировать с учетом данных других лабораторных анализов.

Подготовка

Биоматериал для проведения ИФА на антинуклеарный фактор – сыворотка венозной крови.

• Венепункция выполняется в утреннее время и натощак (с момента последнего приема пищи должно пройти минимум 8 часов). Пить чистую негазированную воду можно;
• Непосредственно перед забором крови (за 2-3 часа) не рекомендуется курить и пользоваться никотинозаменителями (пластырь, спрей, жевательная резинка);
• Накануне и в день процедуры нельзя употреблять алкогольные и энергетические напитки, волноваться и заниматься тяжелой физической работой;
• За 15 дней до теста по согласованию с лечащим врачом отменяется прием лекарственных препаратов (антибиотики, противовирусные, гормоны и др.);
• Для получения достоверного результата анализ желательно повторить через 2 недели.

Ответ ИФА можно ожидать в течение 1 суток после венепункции, а в экстренных ситуациях, когда обследование проводится по «cito» – около 3 часов.

Источники: 

• Информация с сайтов лаборатории Инвитро и Хеликс;
• Данные Национальной медицинской библиотеки США  PubMed.

Другие анализы ревматологического скрининга

• АСЛ-О (Анти-стрептолизин-О) 
• СРБ (С-реактивный белок)
• РФ (Ревматоидный фактор)