Анализ крови а энтеровирусную инфекцию

Среди энтеровирусов (семейство Picornaviridae) на сегодняшний день насчитывается более 100 серотипов. Энтеровирусная инфекция широко распространена во всех регионах мира. У человека энтеровирусная инфекция может протекать бессимптомно или сопровождаться широким спектром клинических проявлений: от легкого недомогания или диарейного синдрома до развития тяжелых заболеваний, таких как серозный менингит, паралич, миокардит, энтеровирусный сепсис новорожденных. Более 90% случаев заболевания серозным менингитом имеют энтеровирусную этиологию. Энтеровирусы одного серотипа могут быть связаны с различными клиническими проявлениями, но в то же время энтеровирусы разных серотипов могут вызывать схожую симптоматику заболевания. Наиболее подвержены заболеванию дети младшего возраста. Сезонный подъем заболеваемости в РФ – летне-осенний период. Циркуляция энтеровирусов может сопровождаться развитием вспышек заболевания. Диагностика энтеровирусной инфекции требует комплексной оценки клинической симптоматики заболевания, результатов лабораторных исследований и эпидемиологических данных.

К энтеровирусам относится вирус полиомиелита (полиовирус), имеющий особое эпидемиологическое значение в связи с проводимой ВОЗ Программой глобальной ликвидации полиомиелита. Острый полиомиелит характеризуется разнообразием клинических форм – от абортивных до паралитических. Паралитические формы с развитием вялых и периферических парезов и/или параличей возникают при поражении вирусом серого вещества, расположенного в передних рогах спинного мозга и двигательных ядрах черепно-мозговых нервов. Благодаря интенсивной иммунизации против полиомиелита, циркуляция вирусов дикого типа прекращена в большинстве стран. В 2002 г. Европейский регион, включая РФ, сертифицирован ВОЗ как свободный от вирусов полиомиелита дикого типа. Однако в рамках Программы во всех странах осуществляется эпидемиологический надзор за паралитическим полиомиелитом, а также за клинически схожим синдромом острого вялого паралича (надзор за ПОЛИО/ОВП). В случае выявления больного с подозрением на ПОЛИО/ОВП медицинские работники организаций и частнопрактикующие медицинские работники обязаны руководствоваться действующей нормативно-методической документацией СП 3.1.2951-11.

Показания к обследованию

Наличие одного или нескольких клинических синдромов: очаговая неврологическая симптоматика, менингеальные симптомы, сепсис новорожденных небактериальной природы, ящуроподобный синдром (экзантема полости рта и конечностей), герпангина, афтозный стоматит, миокардит, геморрагический конъюнктивит, увеит, миалгия,
возникновение групповой заболеваемости в детском организованном коллективе при наличии таких синдромов, как респираторный, гастроэнтерит, экзантема и другие.

Материал для исследований

Стерильные типы материала: СМЖ (при наличии клинических показаний для проведения люмбальной пункции), отделяемое конъюнктивы, мазок отделяемого везикул, биоптаты органов;
нестерильные типы материала: мазок (смыв) из ротоглотки/носоглотки, мазок отделяемого язв при герпангине, образцы фекалий.

Этиологическая лабораторная диагностика включает выделение энтеровируса в культуре клеток с последующей идентификацией, выявление РНК вируса.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Выделение изолята вируса из биологического материала позволяет с наибольшей информативностью изучать его свойства. Для идентификации (определения серотипа) выделенного энтеровируса с целью изучения эпидемиологических аспектов инфекции используют иммунологический метод нейтрализации с помощью типоспецифических диагностических сывороток. Культуральные исследования, характеризующиеся высокой трудоемкостью, в настоящее время применяются преимущественно в научно-исследовательских целях, их применение затруднено ограниченным набором типоспецифических диагностических сывороток. Обнаружение РНК вируса методом ПЦР является более быстрым и доступным для практики подходом. Применение ПЦР также позволяет обнаружить РНК энтеровирусов, не размножающихся в культуре клеток.

Косвенные способы диагностики – оценка нарастания титров АТ в динамике заболевания не нашли широкого применения в диагностике энтеровирусной инфекции.

Показания к применению различных лабораторных исследований. Выявление РНК вируса методом ПЦР предпочтительно при обследовании пациентов для лабораторной диагностики энтеровирусных заболеваний.

Выделение вируса в культуре клеток показано при реализации программ эпидемиологического мониторинга циркулирующих изолятов энтеровирусов. В последние годы получает все более широкое распространение методов генетического типирования энтеровирусов. Такие исследования проводятся в ограниченном числе референтных лабораторий и применяются в основном для решения задач эпидемиологического мониторинга.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Обнаружение энтеровирусов или их РНК в стерильных типах биологического материала (СМЖ, отделяемое везикул) имеет высокую диагностическую значимость. Выявление энтеровирусов или их РНК в нестерильных типах биологического материала (фекалии, респираторные мазки) часто не имеет этиологической связи с диагностируемым заболеванием, в связи с высоким уровнем их бессимптомного носительства в популяции.

Недопустимо подтверждение или исключение диагноза энтеровирусной инфекции, сопровождающейся любой неврологической симптоматикой, на основании результатов исследования нестерильных типов клинического материала. Для установления энтеровирусной инфекции с менингеальной симптоматикой должны учитываться только результаты исследования СМЖ. К сожалению, в действующей нормативно- методической документации СП 3.1.2950-11 данный основополагающий принцип интерпретации отражения не нашел. Рекомендации по интерпретации результатов лабораторных исследований изложенные в МУ 3.1.1.2363-08 по этой причине являются более приемлемыми для клинической практики.

Читайте также: Анализы крови на вск дк

При наличии специфической для некоторых форм энтеровирусной инфекции симптоматики (ящуроподобное заболевание, острый геморрагический конъюктивит, увеит и др.) интерпретация результатов исследования нестерильных типов клинического материала должна проводиться с учетом эпидемиологических и клинических данных.

Выявление энтеровирусов или их РНК в образцах фекалий и материале из рото/ носоглотки у пациентов со спорадической заболеваемостью не может служить основанием для подтверждения этиологии не только серозных менингитов, но и заболеваний верхних дыхательных путей, диарейных инфекций и лихорадочных заболеваний неясной этиологии, вследствие высокой частоты транзиторного носительства энтеровирусов в популяции.

Выявление энтеровирусов или их РНК в нестерильных типах клинического материала может служить подтверждением энтеровирусной инфекции при проведении исследований в ходе вспышки и при наличии у пациента характерной для нее клинической картины заболевания, а также в отсутствие вспышки, но при соответствии идентифицированного вируса специфичной клинической картине.

Источник

Метод определения
ПЦР в реальном времени (RT-PCR).

Исследуемый материал
Кал

Тест используют в целях лабораторного подтверждения энтеровирусной инфекции (выявляется общая для различных видов и серотипов энтеровирусов нуклеотидная последовательность).

Энтеровирусы – род РНК-содержащих вирусов, который относится к семейству пикорнавирусов (Picornaviridae). Энтеровирусной инфекции подвержены лица всех возрастов, но наиболее восприимчивы к ней дети. Эта инфекция часто может оставаться нераспознанной, поскольку в большинстве случаев протекает бессимптомно (у 85% инфицированных лиц) либо в легкой или среднетяжелой форме, напоминающей обычную простуду (в 12-14% случаев). Тяжелое течение заболевания (спектр клинических форм см. ниже) отмечают у 1-3% инфицированных. Потребность в лабораторном подтверждении энтеровирусной инфекции для отличия от других видов патологии возникает при тяжелых формах заболевания (в том числе менингитах, энцефалитах) или при эпидемических вспышках инфекции.

Среди энтеровирусов выделяют различные виды и серотипы. Заболеваемость, связанная с полиомиелитными энтеровирусами (полиовирусами), во многих странах, включая Россию, практически ликвидирована благодаря эффективной вакцинации. Среди неполиомиелитных энтеровирусов потенциальную опасность для человека представляют 70 серотипов.

Вид	Число серотипов	Серотипы
A	16	Коксаки A2–8, 10, 12, 14, 16 Энтеровирусы 71, 76, 89–91
B	41	Коксаки A9, Коксаки B1–6 ЕСНО 1–7, 9, 11–21, 24–27, 29–33 Энтеровирусы 69, 73–75, 77, 78
C	11	Коксаки A1, 11, 13, 15, 17–22, 24
D	2	Энтеровирусы 68 и 70

Пик заболеваемости, связанной с энтеровирусами, приходится на лето и осень. Основной механизм передачи – фекально-оральный (включает пищевой, водный и бытовой (через предметы обихода) пути), возможен воздушно-капельный путь передачи инфекции. Относительная роль каждого из путей передачи может варьировать в зависимости от разновидности энтеровирусов, сроков после начала болезни, жизненных условий. Возможна вертикальная (трансплацентарная) передача инфекции от матери к плоду во время беременности.

Размножение вирусов начинается в эпителии желудочно-кишечного тракта. Из желудочно-кишечного тракта вирусные частицы попадают в кровоток и поражают внутренние органы, где проходит вторая волна размножения вируса. Энтеровирусы можно обнаружить в секретах дыхательных путей и фекалиях инфицированных лиц, иногда – в крови и спинномозговой жидкости.

Особенностью энтеровирусной инфекции является то, что различные клинические формы заболевания могут быть обусловлены представителями одного серотипа, а сходные клинические проявления могут вызывать разные серотипы вирусов. Лишь для некоторых серотипов энтеровирусов характерен определенный комплекс симптомов, который не наблюдается при инфицировании другими разновидностями. Многие из возможных клинических проявлений не являются специфичными для энтеровирусной инфекции и встречаются при других инфекционных заболеваниях.

Заболевания, вызываемые энтеровирусами, можно разделить на две группы:

Менее опасные формы заболевания: трехдневная лихорадка с сыпью или без, герпангина, плевродиния, везикулярный фарингит, конъюнктивит, увеит, гастроэнтерит.
Потенциально тяжелые формы заболевания: менингит, энцефалит, острый паралич, септикоподобные состояния у новорожденных, миокардит, перикардит, гепатит, хронические инфекции у лиц с иммунодефицитами.

Основные методы лабораторной диагностики энтеровирусной инфекции – выделение энтеровирусов в культуре клеток и обнаружение РНК энтеровирусов методом ПЦР. По сравнению с методом выделения и идентификации вируса с применением культуры клеток, ПЦР-исследование обладает большей чувствительностью и требует меньших временных затрат.

Присутствие энтеровирусов в фекалиях не является специфичным только для периода острых клинических проявлений, вирусная РНК в пробах кала может обнаруживаться до одного месяца и более от начала инфицирования. Следует учитывать, что, в соответствии с указаниями Роспотребнадзора, обнаружение РНК энтеровирусов в образцах фекалий (в отсутствие эпидемической вспышки) не может служить основанием для лабораторного подтверждения этиологии серозных менингитов, заболеваний верхних дыхательных путей, диарейных инфекций и лихорадочных заболеваний неясной этиологии вследствие высокой частоты носительства энтеровирусов в популяции.

Аналитическая чувствительность (фекалии) – 1х104 ГЭ/мл.

Литература

Ботвиньева В.В., Намазова-Баранова Л.С., Гордеева О.Б., Ботвиньев О.К., Коноплева Т.Н. Современные возможности диагностики, профилактики и лечения энтеровирусной инфекции Коксаки у детей. Педиатрическая фармакология. — М. 2012;9(3):40-45.
Инфекционные болезни у детей. Под ред. Д. Марри. — М.: Изд. «Практика». 2006:928.
Эпидемиологический надзор и профилактика энтеровирусных (неполио) инфекций: Методические указания. МУ 3.1.1.2363-08. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. — М. 2008.
Kupila L., Vuorinen T., Vainionpõā R., Marttila R.J., Kotilainen P. Diagnosis of Enteroviral Meningitis by Use of Polymerase Chain Reaction of Cerebrospinal Fluid, Stool, and Serum Specimens. Clinical Infectious Diseases. 2005;40(7):982-987.
Материалы фирмы-производителя реагентов.

Источник

Анализ на энтеровирусную инфекцию является одним из распространенных лабораторных методов в силу частого заражения этим возбудителем. Для уточнения диагноза используются различные способы диагностики.

Основные методы диагностики

Чтобы подтвердить диагноз энтеровирусной инфекции, применяют методы лабораторной диагностики: специфические вирусологические методики.

Инфекцию может вызвать содержащий рнк энтеровирус или семейство аденовирусов, которые поражают как слизистую оболочку кишечника, так и ткани верхних дыхательных путей, глаз. По этой причине материалом для исследования является не только кал, но и смывы с носоглотки и конъюнктивы. диагностика

Если подозревается энтеровирусная инфекция, диагностика проводится в первые дни от начала заболевания, когда концентрация вирусов является наибольшей.

Чтобы дифференцировать инфекцию применяются такие серологические методы:

определение иммуноглобулинов к вирусу;
выделение аденовирусов в кале;
ПЦР-диагностика;
иммунофлуоресцентный метод.

Особенностью при инфицировании аденовирусной инфекцией является длительное выделение возбудителя и вирусоносительство после исчезновения симптомов болезни. По этой причине через 2-3 недели после заболевания обследование необходимо повторить, что важно для профилактики повторного заражения в коллективе. Инфицированию больше подвержены дети в возрасте до 14 лет.

Выявление антител

Определение антител (иммуноглобулинов) к аденовирусам проводится методом иммуноферментного анализа (ИФА). Такая диагностика основана на способности организма вырабатывать защитные белки (антитела, иммуноглобулины) в ответ на заражение. С помощью специально подобранных реактивов можно определить наличие антител к определенному типу возбудителя. Кроме диагностики аденовирусной инфекции в целом, можно определить серотип возбудителя.

Для сдачи анализа в стерильную емкость набирается венозная кровь. Забор материала необходимо проводить натощак, а интервал после приема пищи должен быть не меньше 8 часов. За 24 часа до исследования нельзя принимать алкоголь. Для профилактики искажений результата не стоит проводить анализ после физиотерапевтических процедур, флюорографии и других рентгенологических исследований.

Позитивный результат подтверждается наличием иммуноглобулинов класса IgG. Эти антитела образуются в крови человека разу после заражения, а в периоде острой фазы болезни концентрация их резко повышается.

Метод парных сывороток – это диагностический способ определить острую фазу энтеровирусной инфекции в течение первых 2-х недель от заражения. Для этого исследуется динамика нарастания концентрации антител с интервалом от 10 дней до 2 недель. В случае значительного роста подтверждается наличие свежей инфекции. Чувствительность такого метода составляет 90%.

Кроме того, рост IgG отмечается при реактивации латентной инфекции. По мере выздоровления концентрация антител в крови падает, но они циркулируют еще продолжительно время, указывая на перенесенную инфекцию.

Стойкого иммунитета к энтеровирусной инфекции нет, а при повторном заражении отмечается повторный стремительный рост специфических IgG.

Анализ кала

Энтеровирусы и аденовирусы вызывают кишечные формы заболевания или по мере развития инфекции она распространяется на слизистую оболочку кишечника, вызывая характерные симптомы.

Из-за недостаточного выполнения норм личной гигиены инфекцией чаще заражаются маленькие дети, у которых распространенным путем передачи является фекально-оральный.

К высокой температуре, явлениям катара верхних дыхательных путей и конъюнктивита присоединяется учащенное испражнение. Больного беспокоит диарея, водянистый светлый кал, боли в животе.

Такие симптомы являются показанием для лабораторной диагностики энтеровируса. Исследование необходимо проводить не позже 3 – 5 дня после появления симптомов. Через неделю болезни концентрация энтеровируса в кале уменьшается, что может снижать качество диагностики.

Тем не менее после выздоровления переболевший является источником инфекции, так как отмечается вирусоносительство, а возбудитель продолжает выделяться с калом.

Анализ также проводится для выделения конкретного возбудителя – для человека патогенными считаются несколько серотипов вируса.

Перед сдачей анализа необходимо помочиться, чтобы исключить попадание мочи в исследуемый материал. Для диагностики необходим свежий стул не более 15 г. Его набирают в специальный контейнер. Анализ должен пройти лабораторную диагностику не позже чем через 3 часа после забора материала.

Перед сбором кала нельзя применять любые препараты, влияющие на работу кишечника (слабительные или закрепляющие), а также делать клизмы. Прием дополнительных препаратов накануне забора материала, примеси мочи или других биологических жидкостей могут повлиять на конечный результат, сделав его недостоверным.

Результатом диагностики является положительный или отрицательный ответ. В первом случае врач может подтвердить диагноз и приступить к целенаправленному лечению болезни. В случае негативного результата, но при продолжающихся симптомах необходимо повторное проведение исследования.

Метод ПЦР

Диагностика энтеровирусной инфекции современной методикой цепной полимеразной реакции является одним из наиболее достоверных и быстрых способов.

Этот тест основан на обнаружении вирусной ДНК в крови человека или мазке из зева. С его помощью возможна как диагностика острых форм болезни, так и определение вирусоносительства.

Анализ на энтеровирус методом ПЦР является “золотым стандартом” вирусологической диагностики. Этим способом проводится дифференциальная диагностика энтеровирусной инфекции.

Больной не нуждается в специальной подготовке, однако перед забором материала необходимо следовать некоторым правилам:

исследование рекомендовано проводить натощак и с интервалом не менее 8 часов после еды;
желательно не принимать какие-либо препараты за сутки до сдачи крови;
отказ от приема алкоголя за день до исследования и курения не менее чем за час до забора крови;
отказ от физических и психических перенапряжений накануне диагностики;

Нежелательно осуществлять забор крови после физиотерапевтического лечения или инструментальных исследований. В случае проведения биопсии следует сделать паузу на несколько дней.

Если доктор назначил проведение повторного лабораторного исследования, желательно делать это в одинаковых условиях: в той же лаборатории, в одно и то же время. назначение

Иммунофлуоресцентный метод

Метод иммунофлюоресценции основан на реакции со специальными реагентами, которые помечены красителем. Он применяется в рамках ранней диагностики энтеровирусной инфекции. Для исследования проводят соскоб со слизистой носа.

При определении энтеровирусов в организме человека во время микроскопии мазок подсвечивают ультрафиолетовыми лучами. Этот метод является способом экспресс-диагностики инфекции.

Специальные реактивы содержат антитела против энтеровирусов. При связывании антигенов и антител образовавшиеся комплексы становятся хорошо видимыми в ультрафиолетовом свете.

Такой тест имеет три разновидности:

прямой;
непрямой;
конкурентный.

Для проведения прямого способа диагностики к материалу анализа добавляют люминесцентный реактив. Образовавшиеся комплексы рассматривают через флуоресцентный микроскоп. При том анализе определяют наличие вирусных антигенов.

Тест при непрямой реакции определяет наличие антител в собранном материале. Реагентом выступает специальный антиген, который взаимодействует с антителами, выработанными в организме человека.

При конкурентном способе исследуют наличие вирусных антигенов. Отличие способа состоит в добавлении двух реагентов: антител и специальных меченых антигенов, которые конкурируют в реакции связывания.

Заключение

Точное диагностирование энтеровирусной инфекции необходимо для дифференциального диагноза и правильного назначения терапии. Современные методы позволяют сделать это быстро и качественно.

( 1 оценка, среднее 5 из 5 )

Источник