Взять кровь на анализ у свиньи
21.12.2015
В.В. Пругло, к.в.н., Руководитель
отдела технического сервиса ООО «Сева СА», Россия
С.В. Палазюк, к.в.н., Главный
ветеринарный врач ООО «ПсковАгроИнвест»
А.Н. Гречухин, к.в.н, Член
экспертно-консультационного совета при НСС
Практические
врачи свиноводческих хозяйств часто сталкиваются с процедурой отбора образцов
крови от свиней для проведения лабораторной диагностики. К сожалению, практика
показывает, что зачастую в свиноводческих хозяйствах не все специалисты владеют
этой процедурой и порой испытывают сложности при необходимости её практической
реализации.
В обзоре
рассматриваются несколько методик взятия образцов крови от свинейразличных
возрастных групп, легко осваиваемых и реализуемых на практике.
1.
Необходимый инструментарий:
1. Иглы
(зависят от возраста/размера):
·
до 10 кг ЖМ: 25-20G 16/25 мм;
·
до 45 кг ЖМ: 18G 38 мм;
·
до 100 кг ЖМ: 18G 38 мм
·
свиноматки/хряки: 16G 100 мм
2. Шприцы: 2, 10, 30 мл или Вакуумные пробирки: 7-10 мл
3. Этиловый
спирт, ватные тампоны, скальпель, петля/верёвка для фиксации,
4. Два
человека (с мозгами и руками)
2.
Выбор места отбора и методики
Таблица 1
| Место отбора | Методика | Возраст/размер животного | Комментарии |
| Ушные вены | 1.Вскрытие скальпелем и отбор в пробирку 2.Шприцом, игла калибра ≥ 20G | · Все возраста | · · · · |
| Хвостовые сосуды | 1. Шприцом 2.Вакуумной пробиркой 3.Надрезом/ампутацией хвоста | · Свиноматки · Свиньи откорма · Поросята | · Легко · Небольшой объем образца · От поросят: ~0,5 мл |
| Ярёмная вена | 1. Шприцом 2. Вакуумной пробиркой | · Все возраста | · Легко ·
|
| Наружная или внутренняя яремные вены Верхняя полая вена | 1. Шприцом 2. Вакуумной пробиркой | · Все возраста | · Легко · |
3.
Методики
3.1.
Методика взятия крови из ушных вен
Крайние
ушные вены, одни из немногих вен, легко обнаруживаемых у свиней любого возраста
и размера. Как правило,видны три вены.
Обычно наиболее крупными являются — латеральная (боковая) или центральная вены.
Ушные вены представляют собой ответвления каудальной ушной и поверхностной
шейной вены. Их рельеф, анастомозы и относительные размеры варьируют от
животного к животному.
Взятие крови из вены уха.
Рисунок 1
На рисунке 1 – поросёнок, весом около 7
кг. Ассистент фиксирует животное, одновременно зажимая вену у основания уха.
Фото иллюстрирует использование иглы калибра 22G.
Иногда процессу отбора крови может способствовать осторожное подкачивающее
нажатие пальцем на сосуд.
Свиньи имеют незначительное количество
функциональных потовых желёз и не способныактивно потеть. Именно поэтому
циркуляция крови в сосудах уха очень важна для регуляции температуры тела. При
повышенной температуреокружающей среды ушные вены будут расширены и
кровенаполнены, что значительно облегчает процесс отбора крови.
После
пункции вены, выделяющаяся кровь может быть сразу собрана в соответствующий
сосуд под воздействием капиллярного эффекта. Такая методика подходит для
измерения гематокрита и уровня гемоглобина, а также получения мазков крови. Пробирки,
используемые при отборе крови для оценки гематокрита, должны быть покрыты
антикоагулянтом. Пробирки, используемые для измерения гемоглобина (20 мкл) не
обрабатываются подобным способом. Поэтому, сразу после отбора в кровь
необходимо добавить раствор-антикоагулянт, препятствующий её свёртыванию.
Отбор
крови из ушных вен иногда выполняют с использованием скальпеля: разрезом сосуда
и сбором крови в открытую пробирку, однако данная методика не рекомендуется к
практическому применению.
Черезушныевеныможновыполнятьвнутривенныеинъекциидажеу
новорождённыхпоросят. Животное фиксируется также, как и в предыдущем случае.
Длямаленькихпоросятиспользуютсяоченьтонкиеиглы, калибра 25G. Поросёнокнарисунке 2несколькокрупнее. Вэтомслучаеиспользуетсяиглакалибра
23G. Вены – тонкостенныесосудыилегкоперфорируются.
Поэтому рекомендуется подсоединять шприц к игле до начала пункции, а оператор
должен попытаться аккуратно аспирировать кровь после прокола вены.
Рекомендуетсяначинатьинъецированиеспериферической части вены, поскольку в
случае неудачной попытки остаётся возможность повторной пункции/инъекциина
участке, расположенном ближе к голове.
Иглаиухофиксируютсямеждубольшимиуказательнымпальцемоператора.
Когдаэтаоперациявыполнена, ассистентможетпрекратитьсжимание/наполнениевеныис
этого момента начинается инъекция.Практически, инъецированиедолжнобытьвыполненоотносительнобыстро
и поэтому количество вводимого раствора/препарата несколько лимитировано.
Введение раствора в ушную вену.
Рисунок 2
В
продаже имеются устройства для вливания в малые вены (внутривенной инъекции), состоящие из трубочки,
соединённой с иглой ( рис.3). Эти «иглы-бабочки» предназначены для стандартной
венепункции, снабжены гибкими прозрачными соединительными трубками и
прикрепляются к коже с использованием липкой ленты. Крылышки обеспечивают
удобное крепление системы, и часто имеют цветную маркировку в зависимости от размера
инъекционной иглы. Их важнейшим преимуществом является гибкость соединительной
трубочки и возможность фиксации иглы на участке инъекции. Доступны наборы
различных размеров/калибров: 19-21G.
Устройство для вливания в малые
вены
Рисунок
3
Для
облегчения взятия крови или внутривенной инъекции можно использоватьпредварительное
внутримышечное введение седативного средства. Подобныепрепараты (например, «Ветранквил»)
облегчают процесс, вызывая расширение и повышая доступность периферических
кровеносных сосудов. Использование катетера(например, Braunule, 18G). со стилетом облегчает внутривенное введение ипри
фиксации гарантирует нахождение иглы в вене, даже если свинья активно двигает
головой.
Дляубойныхживотныхимолодыхсвиноматокподходиткалибр 18G. Дляболеекрупныхживотных (свиноматки, хряки)
можетбыть использован калибр 16G.
Последнийразмертакже можетбытьрекомендовандлябольных животных при необходимости
введения больших объёмов жидкости/препаратов.
3.2.
Методика взятия крови у взрослых животных и
подсвинков
Образцы
крови от взрослых свиней чаще всего отбирают из поверхностной яремной вены.
Животное должно быть зафиксировано верёвкой, или фиксатором за верхнюю
челюсть,а шея вытянута вверх. При этом желательно, чтобы животное стояло на
всех четырёх конечностях. Верёвка затягивается, с таким расчётом, чтобы она не
соскальзывала и не перемещалась по направлению к носовому хрящу, поскольку
сдавливание этой области некомфортно для свиней. Животное будет пытаться двигаться назад
и затянет верёвку в достаточной степени.
Такимобразом, после затягивания петли нетнеобходимостиблокироватьдвижениесвиньивперёд(
рис.4).
Фиксация
подсвинка за верхнюю челюсть
Рисунок 4
Постановка
и удержание животного в правильной позиции являются важными элементами быстрого
и лёгкого отбора образца крови. При достаточном практическом навыке специалиста
процедура не занимает более 1-2 минут.
Поверхностная яремная вена пролегает на
глубине 25-40 мм от поверхности кожи. Правильная область венопункции (прокола
вены), находится приблизительно в 120 мм выше точки плечевого сустава и
расположена в самой глубокой точка яремного жёлоба, сформированного медиальной
грудино-головной (sternocephalic) и латеральной
плечеголовной (brachiocephalic) мышцами (рис.5).
На рисунке 5эта область помечена(крупный план, сбоку) чёрной точкой.Игла должна
быть направлена каудо-дорсально и в этом случае – перпендикулярно коже. Оператору-правше,
как правило, удобнее проводить пункцию правой яремной вены.
Игла
вводится навсюдлинуик иглодержателю присоединяетсявакуумнаяпробирка.
Жироваяткань, лежащаяповерхвены, должнабытьслегкаприжата. При попадании иглы в
вену кровь начнёт поступать в пробирку. На рисунке 6вакуумнаяпробиркасиглойудерживаетсятолькоуказательнымпальцемоператора
для наилучшейдемонстрацииметодикиотбора. Вдействительностиигла с пробиркойдолжныбытьзафиксированыболеекрепко.
Место
пункции при взятии крови из яремной вены
Рисунок 5
Взятие крови из яремной вены
Рисунок
6
При
необходимости смены вакуумной пробирки необходимо крепко удерживать
иглодержатель. Оператор удерживает иглодержатель левой рукой, одновременно
осторожно надавливая на шею свиньи.
Правая рука используется для смены пробирки.Подобная методика также
используется для отбора образцов крови у подсвинков массой 20-50 кг. На рисунке
6 показана процедура у животного массой около 40 кг.
Настоятельно
рекомендуется не перемещать иглу из стороны в сторону после введения в ткани,
поскольку это может привести к серьёзным повреждениям сосудов, кровотечению и
смерти (у поросят). При неправильном введении иглы или потере сосуда, рекомендуется:
·
отсоединить вакуумную пробирку;
·
вынуть иглу из тканей
·
ввести иглу в ткани под другим углом
·
подсоединить вакуумную пробирку
3.3.
Методика взятиякрови у поросят (до 20 кг)
Грудное венозное сплетение, сформированное из:
верхней полой, внутренней ярёмной,наружной ярёмной, общей ярёмной, плечеголовной,
подмышечной, и внутренней грудной вен.
Рисунок 7
У поросят массой менее 20 кг
рекомендуется отбирать кровь более каудально и медиально в яремном жёлобе,
ближе к рукоятке грудины (лат. manubriumsterni, манубриум). В зависимости от
участка пункции(прокола), угла и глубины введения иглы, кровь будет отобрана из
какого-либо кровеносного сосуда, показанного на рисунке 7. Трудно сказать из
какого именно. Ассистент может удерживать поросят до 20 кг за конечности:
необходимо зафиксировать передние ноги и голову. Манубриум (рукоятка) грудины и
точка/направление укола показаны черным (рис.8,9).
Рисунок
8 Рисунок 9
Взятие крови из грудного венозного сплетения
Качественная
фиксация животного является важным элементом процедуры. Желательно избегать
искривления позвоночного столба поросёнка, а также не допускать избыточного
вытягивания шеи и запрокидывания головы.Подобные деформациипрепятствуютдыханию,
ведут к смещению/сдавливанию кровеносных сосудов и затрудняют отбор крови.
Дляпоросятгруппы
подсоса/доращивания (до 20 кг)можноиспользоватьшприцииглу.
Иглаприсоединяетсякшприцуишприцзаполняетсяантикоагулянтом (например, 3%
раствором лимоннокислого натрия на физрастворе).
Дляноворожденныхпоросятиспользуютсяиглыкалибра 23G, дляболеекрупных – 22G.Послевведенияиглыподкожу, операторосторожноаспирирует
(создаётотрицательноедавление в шприце) вытягивая поршень. Кровь должна начать
поступать после введения иглы на 10-25 мм. После того как кровь начала
поступать через иглу необходимо крепко удерживать шприц, избегая дальнейшего
движения. Дляопорыиглыоператорможетуперетьсвоюрукувтелопоросёнка, как показано
на рисунке 9.
3.4.
Методика взятия крови из
хвостовой вены
Медиальная
хвостовая вена лежит в подхвостовом жёлобе, близко к артерии. Оператор
поднимает хвост одной рукой и прокалывает вену другой. Обычно используются иглы
калибра 20G
и вакуумные пробирки. Областью пункции является первый,свободно двигающийся
хвостовой сустав, расположенный около пятого хвостового позвонка. У взрослых свиней игла вводится под углом в
45° к коже. У более мелких животных рекомендуется удерживать хвост почти
горизонтально, а иглу вводить параллельно коже.
Взятие крови из
медиальной каудальной вены
Рисунок
10
На рисунке 10 показан
отбор крови из медиальной каудальной вены. Даже у крупных животных трудно
получать большие объёмы венозной крови. Но поскольку артерия пролегает очень
близко к вене,часто при этом способе отбирается артериальная кровь.Впрочем, как
правило, это не несёт угрозы здоровью животного.
3.5 Методика взятия крови из орбитального (глазного) венозного синуса.
Методика взятия крови из орбитального
венозного синуса оптимальна для получения образцов у новорожденных поросят
(рис. 11,12). Впрочем, подобная методика также применима у животных любого
возраста.
При этом методе иглу 18-19G через третье веко направляют к
носовой перегородке сверху вниз до упора в кость орбиты глаза. Затем слегка
оттягивают назад и набирают нужное количество крови.
Иногда
в практике используются другие методики отбора, например, из молочной или
других вен. Выбор места пункции или внутривенной инфузии остаётся на усмотрение
ветеринарного специалиста.
Введение иглы со стороны внутреннего угла глаза
Рисунок 11
Взятие крови из глазного венозного синуса
Рисунок 12
3.6.
Получение сыворотки крови
После взятия крови у свиней, полученная кровь очень
быстро сворачивается. Поэтому для получения качественной сыворотки желательно
соблюдать ряд простых условий:
1. Кровь
собирают в чистые (в идеале – стерильные) пробирки. Чем чище произведён отбор,
тем дольше можно хранить образец и ниже вероятность неспецифических реакций. Удобным
вариантом является взятие крови в специализированные вакуумные пробирки с
коагулянтом.
2. Отобранные
образцы крови выдерживают при комнатной температуре на 1-2 часа или помещают в
баночку с тёплой водой на 30 минут. Чистой (стерильной) спицей или иглой отделяют
сгусток от стенок пробирки и помещают пробирку с материалом в холодильник (4ºС)для
лучшей ретракции (сжатия) кровяного сгустка
3. Через
несколько часов (ночь хранения) можно отделить сыворотку, отобрав/слив в
отдельную пробирку.
4. Объем
образца сыворотки должен составлять не менее 2 мл.
4.
Литература
1.
https://www.thepigsite.com/pighealth/article/550/blood-sampling-methods-available
2.
https://oslovet.norecopa.no/teaching/pig/pigbleed/
3.
https://faculty.clintoncc.suny.edu/faculty/Michael.Gregory/files/BioLaboratory/FetalPig/Anterior_blood_vessels_5.jpg
Источник
Сергей Ушаков, кандидат ветеринарных наук, технолог ЗАО «Консул»
Кровь – жидкая ткань организма, выполняющая ряд функций, одной из которых является транспортная. Осуществляя в организме транспорт химических веществ, происходит интеграция биохимических процессов в различных клетках и межклеточных пространствах в единую систему. Правильно отобранные образцы крови предоставляют возможность мониторинга нозологического профиля поголовья, уровня метаболических процессов, обеспеченности организма витаминами, минералами, незаменимыми аминокислотами и т.д. Для получения достоверных результатов необходимо свести к минимуму возможность появления артефактов, обусловленного нарушением правил отбора проб крови, ее стабилизирования и транспортировки.
Иглы перед взятием крови от каждого животного обязательно стерилизуют кипячением, либо применяют стерильные. Оптимальным вариантом является использование шприц-пробирок или вакуумных пробирок. При их использовании кровь не контактирует с внешней средой, т.е. остается асептической и не подвергается окислению кислородом воздуха, тем самым предупреждается агрегация тромбоцитов и образование сгустков в образцах, предназначенных для полного определения клеточного состава крови. Место пункции необходимо обработать 70%-ным спиртовым раствором или 3%-ным раствором карболовой кислоты. При заборе крови нужно следить, чтобы она стекала по стенке в пробирку струей, а не каплями. Кровь, взятая каплями и вспененная, быстрее гемолизируется и часто дает неправильные результаты показаний при лабораторных исследованиях.
Таблица 1. Влияние гемолиза на результаты исследований биохимических компонентов сыворотки крови
Существует несколько способов отбора проб крови у свиней. Среди них можно выделить:
- Из ушной вены и вены хвоста
Данный способ подходит, если необходимо отобрать небольшое количество крови (2-3 мл). Для асептического отбора используется шприц с иглой толщиной 0,8 мм (типа Луер), и отбор крови осуществляется при внутривенном введении иглы, в противном случае происходит бакобсемененность образца. Вены уха свиньи, как правило, расположены в трех точках уха и легко различимы. Одна вена располагается вдоль внешнего края уха, другая – посередине, третья – около 2 см от медиального края. Хвостовые вены находятся в вентральной части хвоста. Для этого способа взятия крови требуются иглы 0,8х25 мм.
После отбора крови необходимо удалить иглу, а место пункции пережать лещеткой, лигатурой или большим пальцем руки на 2-3 минуты. Опасность метода состоит в том, что лигатура может произвольно соскочить и произойдет обескровливание организма животного.
- Из яремной вены
Это безопасный и быстрый способ отбора крови, требующий правильной фиксации животного. Для этого используют металлическую петлю или веревку, при помощи которых животное фиксируется в стоячем положении. При фиксации голова поросенка должна быть поднята вверх таким образом, чтобы шея образовала прямую линию, а кожа была натянута.
Отбор крови производят с правой стороны (при дыхательной недостаточности, развивающейся у свиней при пневмонии или плевропневмонии возможно при введении иглы повреждение левого диафрагмального или блуждающего нерва, поэтому рекомендуется введение иглы справа). Точка пункции находится на краю плечеголовной мышцы – внешнего края яремного желоба, на линии между краем плечевого сустава и рукояти грудной кости (рис 1, 2). Вторая линия проходит от рукояти грудной кости к основанию уха. Глубина прокола для взрослых животных составляет от 75 до 100 мм, для маленьких поросят – 40-75 мм.
Рис. 1. Поверхностные мышцы шеи свиньи
Рис. 1.1. Сеть венозных сосудов шеи
Рис. 2. Место пункции яремной вены
Рис. 3. Забор крови из яремной вены
После введения иглы под кожу поршень шприц-пробирки необходимо отвести назад для создания в ней отрицательного давления. Игла вводится в дорсомедиакаудальном направлении (рис. 3). Когда кровь начинает поступать в пробирку, необходимо следить, чтобы она не вспенивалась, не капала, не билась о дно, а плавно стекала по стенке – с целью предупреждения гемолиза эритроцитов.
Если игла с первого раза не попала в яремную вену, ее необходимо отвести назад и вводить в слегка измененном произвольном направлении. Если и в этот раз цель не достигается, иглу необходимо заменить. При наличии кровотечения после извлечения иглы, место пункции необходимо прижать большим пальцем руки до ее полной остановки.
- Из краниальной полой вены
Свиней массой <20 кг фиксируют в спинном лежачем положении, передние конечности фиксируются вдоль туловища, а голова вытягивается вперед (рис 4).
Рис. 4. Забор крови из краниальной полой вены
Для маленьких поросят требуется игла 0,8х40 мм, для взрослой свиньи – 1,2х100 мм. Точка пункции находится вблизи рукояти грудной кости в области первого ребра. Игла должна вводиться медленно вниз перпендикулярно телу между двумя первыми ребрами. Шприц вводится с небольшим вакуумом, как игла достигает полой вены, кровь будет поступать в шприц. Если кровь не поступает после первого введения, игла должна быть отведена назад и перенаправлена. Выводить иглу из полой вены необходимо, создав предварительно отрицательное давление.
Данный способ забора крови используется крайне редко ввиду возможных осложнений: гемоторракс, тампонада сердца, дыхательная недостаточность, прокол сонной артерии. Как правило, наблюдается до 10% отхода поросят, у которых кровь берется из краниальной полой вены. Поэтому более предпочтительным способом является забор из яремной вены.
- Орбитального венозного синуса
Техника взятия крови складывается с фиксации животного: маленьких поросят фиксируют в лежачем брюшном или спинном положении, взрослых свиней фиксируют петлей за верхнюю челюсть и привязывают к станку. Игла вводится до упора со стороны внутреннего угла глаза, через третье веко по направлению к противоположному локтевому бугру. Затем иглу отводят немного назад, и кровь набирается в шприц или пробирку. У взрослых свиней орбитальный синус немного смещается книзу, что необходимо учитывать при введении иглы. Если после введения иглы кровь не идет в течение 5-7 секунд, ее необходимо поменять на новую.
В некоторых случаях попадаются стресс-восприимчивые животные, это проявляется агрессией, сильно выраженными оборонительными действиями и усиленным визгом. В таком случае животное необходимо отпустить, обливать холодной водой на протяжении 10 мин и изолировать до прихода в нормальное состояние.
Для стабилизации крови можно использовать гепарин, цитрат натрия, ЭДТА и т.д. Лучше всего подходит ЭДТА и гепарин. Недостаток гепарина состоит в том, что в его присутствии лейкоциты окрашиваются хуже (предположительно вследствие связывания гепарина с клетками крови) и агрегация тромбоцитов сильнее, чем в случае применения ЭДТА. Необходимо также учитывать влияние антикоагулянта на биохимические (при биохимическом анализе плазмы крови) и общие клинические показатели крови (Табл. 2).
Таблица 2. Влияние антикоагулянтов на биохимические показатели крови
Брать кровь необходимо по возможности утром, до кормления животных. Голодание в течение ночи у животных с однокамерным желудком предотвращает возникновение липемии, которая может затруднить определение белков плазмы, фибриногена и гемоглобина. Примерно 25,4% ошибочных результатов при лабораторной диагностике связаны с несоблюдением правил отбора проб, 46% – хранения и транспортировки и 28,6% приходится на внутрилабораторные ошибки.
Для получения наиболее достоверных результатов пробы крови необходимо отправлять в лабораторию свежие (хранение неразделенной крови не более 2-х часов). При невозможности выполнить это требование необходимо как можно скорее отделить сыворотку от форменных элементов (в течение 1-2 часов), поскольку большинство ферментов (аланинаминотрансфераза, аспартатаминотрансферата, лактатдегидрогеназа, щелочная фосфатаза), а также калий, фосфор, медь — в высоких концентрациях содержатся в форменных элементах и диффундируют в сыворотку. Поэтому хранение неразделенной сыворотки и гемолиз приводят к высвобождению этих ферментов в сыворотку из клеток крови и завышению отдельных биохимических параметров. Глюкоза в этом случае наоборот убывает примерно на 10% в час за счет гликолитических процессов, протекающих в эритроцитах, а также убывает концентрация хлоридов, которые накапливаются в эритроцитах.
Транспортировать отделенную сыворотку в лабораторию при условии, что она будет исследована на следующий день, необходимо в термобоксе, при температуре 4-8оС, исключая воздействие света и тепла. Если сыворотка будет исследована позже, в течение недели или на следующей неделе, ее необходимо заморозить при -20оС и исследовать сразу же после разморозки.
Таким образом, если целью отбора крови является получение достоверных результатов, необходимо четко следовать методическим требованиям при отборе, хранении и транспортировке проб. В современных условиях (насыщенности ветеринарной программы, удаленности лаборатории от производства, отсутствия необходимого инвентаря и оборудования) этого сделать практически невозможно. Поэтому при интерпретации полученных из лаборатории результатов, необходимо учитывать все факторы, которые могут на них повлиять. Четкой границы, дифференцирующей патологию от физиологической нормы, у свиней не существует. На полученные из лаборатории результаты можно ориентироваться, но 100% им доверять нельзя.
Литературные источники
- Ветеринарная клиническая патология/ Джексон М. – 384 с.
- Мейер, Д. Ветеринарная лабораторная медицина. Интерпритация и диагностика /Д. Мейер, Дж. Харви // Перевод с англ. – М.: Софион, 2007. – 456 с.
- Schweinekrankheiten / K. Heinritzi, H.R. Gindele, G. Reiner, U. Schnurrbusch / Verlag eugen ulmer Stutgart. – 2006. – 480 p.
- Swine Nutrition Guide: 2 nd / Y.F. Patience et all. – 2001. – 271 p.
Источник
