Уреаплазма анализ крови и пцр

Проблема диагностики уреаплазмоза у женщин и мужчин уже давно привлекает внимание врачей.

Благодаря прогрессу в молекулярно-генетических исследованиях, медики наконец получили надежный и качественный метод. Сокращенно он называется ПЦР — полимеразно-цепная реакция.

Причины диагностического поиска

Реальные цифры распространенности уреаплазмоза в человеческой популяции подсчитать невозможно. Причина в том, что эти микроорганизмы сложно выявить.

Бактериоскопические методы неэффективны из-за мелких размеров возбудителей.

Иммунологические иногда дают ложноположительные результаты. И тем не менее сейчас доказано, что около 20% репродуктивных потерь связаны именно с уреаплазменной инфекцией. В связи с этим очень большое значение приобретает раннее выявление инфекции. Желательно — на этапе подготовки к беременности, или при постановке на учет в женскую консультацию. Это позволило бы на 10-15% снизить количество ранних выкидышей и осложненных вариантов течения беременности.

Особенности возбудителей

По микробиологической номенклатуре, уреаплазмы относятся к классу Mollicutes. Это очень мелкие, лишенные ядер и сложных органелл микроорганизмы.

Паразитируют внутриклеточно, из-за чего организму сложно обеспечить адекватный иммунный ответ. Примечательно, что до сих пор в среде ученых нет единого мнения о патогенности уреаплазм. Однако примерно у 80% женщин с признаками хронического воспаления половых органов находят микробов класса Mollicutes, рода Ureaplasma.

Тщательное изучение показало, что среди уреаплазм патогенными являются два вида:

U. parvum.
U. urealyticum.

Клиническая разница между ними достаточно заметна, из-за чего идентификация возбудителей имеет заметное значение. Так, микробы вида парвум (U. parvum) чаще становятся причиной негонококковых уретритов у мужчин. А уреаплазму уреалитикум (U. urealyticum) обычно находят у женщин с хроническими воспалительными процессами органов малого таза. В целом по человеческой популяции более распространен вид парвум.

Показания к ПЦР обследованию

Искать микробов класса Mollicutes у всех людей бессмысленно. Результаты будут положительными едва ли не у 40-60% обследованных пациентов. И даже у тех, у кого не будет никаких признаков патологии. Именно поэтому есть ученые, которые относят эти микроорганизмы к сапрофитам и не считают патогенными.

Оптимальным обследование на микоплазму и уреаплазму считается в таких случаях:

Женщины с признаками хронического воспаления органов малого таза.
Женщины с самопроизвольным прерыванием беременности в анамнезе.
Мужчины с явлениями хронического уретрита, простатита.
Бесплодные пары.

И, конечно, в современных условиях можно пройти обследование по собственному желанию. Как поступить, чтобы обследование получилось максимально информативным, а результат — точным? Желательно обратиться к профессиональному врачу и у него взять направление на оптимальный в данном случае метод обследования.

Теоретическое обоснование ПЦР

В сложных научных терминах методика полимеразно-цепной реакции описывается как «гибридизационный метод анализа ДНК. Он основан на комплементарном взаимодействии специфических полинуклеотидных зондов с искомой матрицей — цепями ДНК в реакционной смеси». Речь идет о реакции искусственного синтеза уникальной молекулы ДНК отдельного патогенного микроорганизма. В нашем случае это — уреаплазмы.

Чтоб процесс запустился, необходимо чтоб в исследуемом образце был обнаружен хотя бы один образец, фрагмент искомой ДНК.

За счет этого и обеспечивается высокая специфичность теста. Чувствительность ПЦР в диагностике инфекции тоже достаточно высока и превосходит таковую при иммунологических методиках. Правда, очень многое в этом плане зависит от того, как берут диагностический материал.

Преимущества ПЦР в диагностике

Собственно говоря, полимеразно-цепная реакция является единственным оптимальным методом прямой диагностики уреаплазмоза.

Потому что увидеть возбудителей в микроскоп невозможно. А для культурального исследования необходимы сложные в производстве питательные субстраты с клеточным компонентом.

Положительные стороны методики:

Очень высокие показатели чувствительности и специфичности.
Наличие двух типов реакции — качественной и количественной.
Возможность выявления мутаций в геноме уреаплазм, которые определяют стойкость возбудителей к определенным противомикробным средствам.
Широкий выбор диагностических материалов: кровь, отделяемое из влагалища, цервикальная слизь, моча, сперма, секрет простаты.
Быстрое получение результатов.
Минимальная роль человека, что значительно снижает вероятность ошибок.

В клинической практике наиболее важны первые три пункта из списка. Они в некотором роде дублируют наиболее информативный метод любых бактериологических исследований — культуральный посев. Вот только молекулярно-генетическая методика дает ответы на все эти вопросы в течение нескольких часов, а не дней.

Недостатки ПЦР в диагностике

Их гораздо меньше, чем преимуществ.

Основные:

Высокая стоимость оборудования и расходных материалов для проведения реакции.
Ложноотрицательные результаты при неправильном заборе диагностического материала.

Вот, в принципе, и все. Чтоб снизить себестоимость одного анализа, производители выпускают системы, предназначенные для проведения сразу нескольких десятков анализов.

Пока лаборатория не насобирает необходимое количество проб, приходится подождать. Отсюда проистекает необходимость долгого ожидания результатов, хотя сам процесс ПЦР длится 4-5 часов. Снизить влияние второго фактора можно путем обращения для сбора диагностического материала к квалифицированному врачу.

Постановка реакции

Для диагностики в разных случаях применяются разные методики. Сначала людям с показаниями к исследованию (мы перечисляли их немного выше) рекомендуется сделать качественную реакцию. И если она окажется положительной — то пролечиться и потом провести уже количественную ПЦР. Такой контроль после лечения позволяет убедиться в том, что терапия возымела эффект, и организм человека полностью очистился от уреаплазм.

Качественная проба

Аппарат для постановки ПЦР называется амплификатором.

Процесс состоит из трех этапов:

Обработка исследуемого материала с целью «расплетения» нуклеиновых кислот в пробе (всех — и микробных тел и клеток самого человеческого организма) или денатурация. Длительность этого этапа — около минуты.
Процесс гибридизации. Именно в это время проходит реакция поиска и идентификации ДНК материала уреаплазм. Требуется 20-60 секунд.
Репликация обнаруженных нуклеиновых кислот искомых возбудителей — примерно 30 секунд.

Таких циклов проводится не менее 40, из-за чего общая длительность постановки ПЦР достигает часа и более. Затем 2-3 часа необходимо технике для подсчета результатов. Если в первом образце была обнаружены ДНК уреаплазмы, то к 40-му циклу количество таких ампликонов в исследуемом субстрате вырастает в геометрической прогрессии. И достигает той концентрации, когда их можно будет достоверно обнаружить иммунологическими методиками. В случае, когда в пробе не было изначально генома уреаплазм, то последующие циклы будут проходить как бы в холостую. И потому иммунофорез на плотном агаре или флуоресцентная детекция окажутся отрицательными.

Промышленностью выпускается несколько видов реактивов для второго этапа ПЦР. Среди них есть такие, что прореагируют только с ДНК U. parvum или только с ДНК U. Urealyticum. Или с только теми участками ДНК уреаплазм, которыми кодируется медикаментозная резистентность возбудителей. Это позволяет методике достигать беспрецедентной специфичности и за очень короткое время обнаруживать стойкость микробов к лекарствам.

Количественная проба

Ее еще называют ультрачувствительной. Отличие в том, что каждый вновь синтезированный ампликон помечается молекулой люминофора и светится под ультрафиолетом. После 30-40 циклов амплификации специальный аппарат проводит хроматографический анализ пробы и подсчитывает количество «маячков». Затем математическими методами рассчитывает исходное число микробных тел.

Комплекс ПЦР хламидии, уреаплазма и микоплазма

Эпидемиологической особенностью современных инфекций, передающихся половым путем (ИППП) является микст. То есть передача сразу нескольких возбудителей.

Практика показывает, что вместе с возбудителями класса Mollicutes часто обнаруживаются хламидии. Для них также характерно вялое малосимптомное воспаление. Поэтому существенное клиническое значение приобретает комплексная диагностика пациентов.

В особенности — женщин, планирующих беременность или с признаками хронических воспалительных процессов со стороны органов малого таза.

Тогда грамотный врач поступает так:

Сначала делает микроскопию обычного гинекологического или урологического мазка.

При наличии признаков воспаления без явного возбудителя — назначается комплекс ПЦР.

Возможности современных лабораторий позволяют сделать молекулярно-генетический анализ сразу на несколько возбудителей с дифференцировкой каждого вида. То есть в результатах указывается факт наличия или отсутствия у пациента отдельно хламидий, отдельно микоплазм и отдельно — уреаплазм. Такая возможность удешевляет диагностику и заодно — делает ее более полной, разносторонней.

Дальнейшая врачебная тактика зависит от результатов обследований. Идеальный результат терапии — если на ПЦР ДНК уреаплазм после лечения не обнаружено. Достичь негативизации результатов можно только в сотрудничестве с квалифицированным дерматовенерологом.

Источник

Бактериологический посев — микробиологическое лабораторное исследование, позволяющее выявить в биоматериале наличие или отсутствие уреаплазмы, а также определить чувствительность вируса к антибиотикам.

Подробнее об исследовании…

ПЦР — метод лабораторной диагностики, позволяющий определить наличие возбудителя болезни, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул его ДНК.

Подробнее…

ИФА — один из самых распространенных и точных методов, который позволяет обнаружить антитела к белкам уреаплазмы.

Узнать цены…

Для того чтобы результаты анализов были максимально достоверными, необходимо правильно подготовиться к их сдаче.

Как подготовиться?

Существуют инфекции, носителями которых является большинство людей на планете, но они об этом даже не подозревают. Речь идет, например, о вирусах герпеса и гепатита, уреаплазме. И если о первых двух известно достаточно много, то о последнем широкая аудитория почти ничего не знает. А между тем болезнь может передаваться не только половым путем, но и бытовым. Это, конечно, сделало диагноз «уреаплазмоз» менее «постыдным» в глазах обывателя, но от того — не менее опасным.

Что это такое и чем грозит патологическая активность этой бактерии в клетках человека? Разбираемся в особенностях влияния инфекционного агента на внутренние органы и выясняем, где и какой анализ сдать на уреаплазму.

Что такое уреаплазма и когда стоит сдать биоматериал на анализ?

Уреаплазма — это паразитирующий одноклеточный микроорганизм, который, формально являясь бактерией, по свойствам схож с вирусами. Существует множество разновидностей уреаплазм, среди которых есть крайне опасные для человека — Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealiticum. Они могут базироваться в клетках мочеполовой и мочевыводящей систем, а также в легочной ткани здоровых людей. По статистике около 60% женщин являются носителями этих микроорганизмов, и в большинстве случаев они не наносят вреда их здоровью. Однако из-за снижения иммунитета, особенно при незащищенных половых актах, уреаплазмы могут проявить патологическую активность и стать причиной уреаплазмоза.

Женщины чаще страдают от уреаплазмоза, чем мужчины, но опасности заражения могут быть подвержены и те, и другие. У представительниц прекрасного пола, помимо приведенного фактора, усиленное размножение Ureaplasma вызывают бактериальный вагиноз, воспалительные процессы шейки матки, маточных труб, яичников и другие болезни органов малого таза. У сильной половины человечества риск развития заболевания повышается при простатите, воспалении уретры и/или придатков яичек, нарушении сперматогенеза и т. д. Сильнее же всего на возникновение уреаплазмоза влияет зараженность хламидиозом и гонореей (у обоих полов). Патология может также передаваться от матери плоду.

Если не лечить уреаплазмоз, он может перейти в хроническую форму и причинить вред всему организму (привести к воспалению суставов, пиелонефриту и др.). Одним из самых неприятных последствий заболевания может стать бесплодие. Если же инфицированная женщина уже вынашивает ребенка, то велика вероятность выкидыша. Именно поэтому планирующим беременность и уже беременным женщинам обязательно назначают анализ на уреаплазму.

Кстати
Около 20% новорожденных инфицированы уреаплазменной инфекцией. Но зачастую дети, заразившиеся уреаплазмозом во время прохождения родовых путей матери, излечиваются от этой болезни без помощи врача — инфекция просто проходит сама при должном уходе за ребенком. К трем месяцам уреаплазмоз выявляют лишь у 5% детей. Новорожденным мальчикам проще, чем девочкам, — у последних в 30% случаев выявления заболевание все же приходится лечить.

Часто уреаплазмы могут длительное время никак не проявить свое присутствие в организме, и носитель даже не будет знать о заражении. Однако могут проявиться симптомы, очень похожие на признаки ЗППП: боль, зуд и жжение в мочеиспускательном канале и половых органах, возможны выделения с характерным запахом или без него. При таких жалобах врач может назначить больному один из анализов на уреаплазмоз: ПЦР, ИФА, бактериологический посев. Эти методы отличаются не только подходом к исследованию биоматериала, но также скоростью получения результата и уровнем точности.

Методы анализа

В зависимости от симптомов, врач решает, какой именно биоматериал сдать (кровь, мочу, мазок, соскоб) и каким методом его нужно будет исследовать. Расскажем подробнее о наиболее достоверных и часто назначаемых типах анализов биоматериала на уреаплазмоз.

Культуральный метод (бактериологический посев). Этот метод анализа используется для выявления уреаплазмы чаще других. Его суть — в помещении биоматериала (мазка с шейки матки или со слизистой оболочки уретры, реже — мочи или секрета простаты) в специальную питательную среду. Если в материале есть уреаплазмы, они начинают активно размножаться, что и фиксирует специалист. Также бакпосев используют для определения чувствительности возбудителей инфекции к различным видам антибиотиков (для назначения конкретного препарата). Этот метод обладает высоким уровнем точности, но результатов придется ждать довольно долго — от 4 до 8 дней.
ПЦР. Полимеразная цепная реакция — один из самых точных (чувствительность метода около 98%) и быстрых анализов на уреаплазмоз на сегодняшний день. Результат лабораторного исследования можно получить в течение четырех часов. Для анализа обычно берут выделения из влагалища, мочу. ПЦР позволяет найти в организме участки РНК возбудителя заболевания, даже если микроорганизмы содержатся в пробе в мизерных количествах. Однако у метода есть свои минусы: он не дает (в отличие от посева) информации об активности уреаплазм, может оказаться ложноположительным (при загрязнении пробы) или ложноотрицательным (если человек проходил курс лечения антибиотиками менее чем за месяц до исследования).
ИФА. Иммуноферментный анализ проводится путем помещения биоматериала (в данном случае — крови) на специальную полоску с антигенами возбудителя болезни. Исследование показывает не наличие самих микроорганизмов, а присутствие в пробе антител. Для каждой инфекции вырабатываются особые иммунные белки, поэтому диагноз по результату анализа можно ставить с большой долей точности. Для получения результатов требуется обычно не более одного дня. Недостаток исследования в том, что антитела организм вырабатывает не всегда, могут быть сбои, и инфекция останется не обнаруженной.

Есть еще один вид исследования — серологический анализ, но из-за низкой точности его обычно заменяют или дополняют одним из перечисленных. Все эти методы анализов на уреаплазму считаются точными и достоверными. Хотя последний показатель сильно зависит от качества биоматериала, на которое в том числе влияет тщательность соблюдения пациентом правил подготовки к исследованию.

Как сдавать биоматериал на анализ

Если пациент сдает кровь, процедуру проводят натощак, утром. Мочу на выявление уреаплазмы также собирают утреннюю (нужно, чтобы она находилась в мочевом пузыре не менее пяти–шести часов). При сдаче соскоба из уретры мужчине придется воздержаться от похода в туалет за два часа до исследования. Женщинам соскоб не делают (как и не берут мазок) во время менструации, предпочтительна середина цикла. Представителям обоих полов следует избегать половых контактов за два-три дня перед анализом.

Для сдачи мазка или соскоба гигиену половых органов пациент может провести вечером накануне анализа, но не позже. Не стоит использовать какие-либо мази и гели.

Для дам есть и дополнительные правила. За несколько дней до сдачи мазка на уреаплазмоз нельзя пользоваться местными контрацептивами (свечи, мази, вагинальные таблетки), делать спринцевания, подмываться горячей водой.

И женщинам, и мужчинам необходимо помнить, что при сдаче любого анализа на уреаплазмоз нельзя принимать антибактериальные и противовирусные препараты. Если же прием таких средств имел место менее чем за месяц до исследования, необходимо предупредить об этом врача.

Расшифровка анализа на уреаплазмы: норма и патологии

После того как пациент сдал анализ на уреаплазму, врач определяет наличие заболевания по показателям нормы. Стоит помнить, что наличие в организме уреаплазм или других чужеродных микроорганизмов вовсе не означает, что человек болен и нуждается в лечении. Не стоит самому пытаться диагностировать у себя инфекцию.

Если в качестве метода исследования был выбран ИФА, то в бланке будет обозначен титр (количество антител в пробе) и, в идеале, рядом с ним должно стоять слово «норма». В разных клиниках специфика анализа может отличаться, поэтому и «нормальная» цифра может быть разной — ориентироваться надо именно на слово. Также бывают ситуации, когда полученный результат признается сомнительным, тогда пациенту назначают другой анализ.

С результатом ПЦР разобраться немного проще: количество РНК уреаплазм в пробе не должно превышать отметку 104 КОЕ на 1 мл, если титр больше — это говорит о наличии патологической активности микроорганизмов. Эта же цифра считается нормой для результата культурального метода анализа (посева).

Анализы на уреаплазмоз — лишь одни из большого списка профилактических исследований, которые человеку стоит проходить хотя бы раз в год, стыдиться этого не нужно. Особенно внимательно к вопросу нужно подойти людям, состоящим в группе риска (обладающим ослабленным иммунитетом, часто меняющим половых партнеров, переболевшим заболеваниями органов малого таза).

Источник