Толстой капли в анализ крови
ТОЛСТАЯ КАПЛЯ — метод обнаружения паразитов крови, а также выявления морфологических элементов крови. Предложен Р. Россом в 1903 г. для выявления возбудителей малярии (см.).
Метод толстой капли используется для выявления спирохет (см.), трипаносом (см.), микрофилярий (см. Филяриатозы). Он нашел широкое применение в мед. практике, т. к. позволяет за одно и то же время исследовать в 30—50 раз большее количество крови на наличие паразитов, чем в тонком мазке. Это обусловлено тем, что при использовании этого метода кровь не фиксируется и во время окраски происходит гемолиз эритроцитов, к-рые становятся прозрачными, а паразиты, находящиеся в них, после окраски хорошо видимыми. С помощью этого метода может быть подсчитано число паразитов на определенное количество лейкоцитов. Ввиду неравномерного распределения паразитов и лейкоцитов в различных участках приготовленного по этому методу препарата подсчет следует производить в центральных и периферических его участках и выводить среднее значение.
При постановке метода возможно выявление полихроматофилов (см. Полихромазия), эозинофилов, базофилов, эндотелия (при затяжном септическом эндокардите и сепсисе), метгемоглобиновых телец (телец Гейнца — Эрлиха).
Приготовление препарата по методу толстой капли: на предметное стекло наносят 2—3 капли крови, к-рые распределяют с помощью иглы или угла предметного стекла до величины пятнадцатикопеечной монеты. Другой метод приготовления препарата был предложен в 1925 г. Гуппенбауэром (Huppenbauer): на предметном стекле делают мазок крови и, пока он влажный, наносят на него каплю крови, к-рая равномерно растекается, образуя правильный круг. Преимущества этого метода — равномерность капли,исключение механического повреждения элементов крови при ее размазывании; в мазке сохраняется строма эритроцитов, что позволяет изучать форму н величину пораженных эритроцитов; капля не трескается, хорошо пристает к стеклу.
Капли крови на стекле высушивают на воздухе или в термостате и, не фиксируя, окрашивают, чаще по Романовскому (см. Романовского— Гимзы метод) при pH 7,2—7,3. Препарат рекомендуется окрашивать не позже чем через 2—3 сут. после приготовления. В препаратах, длительно сохранявшихся, особенно в условиях сухого жаркого климата, паразиты окрашиваются хуже, эритроциты плохо лизируются. На такие препараты с целью обеспечения гемолиза рекомендуется до окраски наливать на 3—5 мин. дистиллированную воду, к-рую затем заменяют красящим р-ром.
Рекомендованы методы ускоренной окраски препаратов метиленовой синькой и эозином. Препарат, приготовленный по методу толстой капли, может быть также окрашен (после гемолизирования) щелочной синькой Мансона, а также по методу И. Г. Иоффе метиленовой синькой с фуксином ii другими методами.
См. также Гемограмма, Кровь, методы исследования.
Библиогр.: Лабораторные методы исследования патогенных простейших, под ред. Д. Н. Засухина, с. 165, М., 1957; Справочник по клиническим лабораторным методам исследования, под ред. Е. А. Кост, М., 1975; Field J. W. The microscopic diagnosis of human malaria, v. 1—2, Kuala Lumpur, 1948—1956.
H. А. Демина.
Источник: Большая Медицинская Энциклопедия (БМЭ), под редакцией Петровского Б.В., 3-е издание
Источник
Малярия — одно из опаснейших паразитарных заболеваний на планете, ежегодно поражающее сотни миллионов человек. Люди должны понимать, как проводятся исследования на малярию, как распознать симптомы и когда обратиться за лечением. Ежегодно из сотен миллионов заразившихся сотни тысяч умирают, несмотря на то, что существует лекарство, заболевание поддается лечению.
Что такое малярия?
Малярия — опасное и очень заразное паразитарное заболевание, легко передающееся через укусы комаров рода анофелис и через кровь, например, при переливании. Недуг сопровождается повторяющимися приступами лихорадки, наиболее широко распространен в странах с влажным и жарким климатом. После того как паразит попал в тело, он начинает размножаться, поражает клетки, разрушает их, лавинообразно наращивая свое присутствие. Посему решившие посетить жаркие тропические страны должны проявлять повышенную осторожность, и при наименьших подозрениях сдать анализ крови. Заражению особенно подвержены:
- люди с низким иммунитетом,
- дети до 5 лет,
- беременные женщины.
Вернуться к оглавлению
Виды плазмодий
Всего различают четыре различных вида малярии и четыре типа плазмодий, ее вызывающие:
- Plasmodium falciparum, что провоцирует тропическую лихорадку — одну из самих опасных и нуждающихся в срочном лечении разновидностей заболевания.
- Plasmodium vivax — провоцирует появление трехдневной малярии.
- Plasmodium malariae — является источником четырехдневной лихорадки.
- Plasmodium ovale — главная причина малярии овале (недуга вроде трехдневной).
Вернуться к оглавлению
Симптомы малярии
Главными (и самим очевидными) симптомами, проявляющимся при малярии, являются повторяющиеся с равными промежутками времени приступы лихорадки, повышение температуры и озноб. Длятся они несколько часов и сопровождаются такими признаками:
- повышение температуры до 41 °C;
- дрожь;
- проявления кашля;
- повышенная потливость (обычно сопровождает окончание приступа и снижение температуры).
Кроме того приступы могут сопровождаться такими явлениями как:
- расстройства пищеварительной системы,
- боль в разных частях тела, мышцах, голове,
- повышенная утомляемость,
- желтуха.
Хотя обычно симптомы при малярии проявляются спустя несколько недель после заражения, некоторые возбудители могут месяцами жить в организме незаметно. Во время острых приступов наблюдается тенденция к изменению состава крови, может возникать анемия, в особенности при тропической лихорадке. Возможно увеличение внутренних органов, например селезенки, но точную оценку может дать лишь врач.
Вернуться к оглавлению
Диагностические исследования малярии
Для точного диагноза необходимо сделать общий анализ крови и мочи.
При обнаружении вышеперечисленных симптомов необходимо срочно провести диагностику малярии. Единственным основным способом диагностирования заболевания до сих пор остается непосредственное обнаружение плазмодиев в крови, которая берется у больного во время приступов. Самые распространенные способы анализа включают взятие крови на малярию методом толстой капли и мазка. Обнаружив плазмодии, можно определить, серьезно ли болен человек, каким именно штаммом. Проводятся также общее исследование крови, обследование мочи, биохимические исследования на содержание билирубина или уровень альбумина.
Вернуться к оглавлению
Общий анализ крови
Поскольку паразит влияет непосредственно на кровь, из-за лихорадки в ее составе наблюдаются различные изменения. Таким образом, показано проведение общего обследования крови для выявления малярии. Лейкоцитоз, анемия, тромбоцитопения — вот лишь немногие возможные последствия болезни.
В общий анализ входят:
- Сравнение уровня гемоглобина, а также эритроцитов — плазмодии влияют напрямую на кровяные тельца, разрушая их во время болезни.
- Оценка показания уменьшения тромбоцитов — наблюдается у подавляющего большинства больных, является одним их характерных признаков малярии.
- Проверка лимфоцитов — их уровень тоже может меняться во время болезни.
Вернуться к оглавлению
Другие анализы
Толстая капля на малярию – простой метод обнаружения заболевания.
Можно также выделить ряд других анализов крови, что могут обнаружить малярию:
- Метод выявления антител к малярии — позволяет с помощью введения в организм плазмодия отслеживать реакцию иммунитета на него. Если итогом будет негативная реакция, это позволит исключить диагноз.
- Метод выявления белков плазмодия является одним из новейших возможных анализов, позволяющих определять составные молекулы возбудителя. При сравнительной быстроте способ обладает неплохой точностью, а также небольшими финансовыми затратами для пациента.
- Метод ПЦР, или полимеразная цепная реакция — непосредственно определяет генетический материал малярийного плазмодия. Проводя такой анализ крови можно определить точное число возбудителей, даже если оно небольшое. К сожалению, одним из недостатков является высокая стоимость процедуры.
Вернуться к оглавлению
Анализ толстой капли крови и мазка
Анализ мазка и толстой капли крови являются наиболее дешевыми и простыми методами обнаружения малярии. В то же время они требуют внимательности и значительных трудозатрат, а также исполнения ряда рекомендаций. При необходимости обследовать более одного пациента необходимо подготовить инструментарий заранее. При тонком мазке кровь берут из безымянного либо среднего пальца на левой руке. При изготовлении мазка палец удерживается ранкой кверху. Мазок крови — небольшой, его располагают в центре стекла.
Толстая капля отличается от мазка возможностью исследовать больший объем материала. Если обычные мазки крови— тоненькие, то капля, наносимая на стекло этим методом, имеет размер с монету. В итоге, исследуется в десятки раз больший объем крови. В дальнейшем каплю подсушивают, и после окрашивания краской Романовского, промывания — исследуют. Лучше, если анализы будет проводить опытный исследователь, ведь неподготовленный может принять за паразитов различные загрязнения или образования: бляшки Биццоцеро, обломки лейкоцитов, различные микроорганизмы, включая грибок или простейших, случайно попавших на образец.
Источник
Где проводится: Во всех медицинских центрах и лабораториях «Тонус»
Срок выполнения: 3 рабочих дня
350 Р
+ Забор материала 200 руб.
+ Забор анализа на дому у взрослого (только Нижний Новгород) 200 руб.
В корзину
- Описание
- Подготовка
- Показания
- Интерпретация результатов
Малярия относится к одним из наиболее опасных и заразных заболеваний, передающихся трансмиссивным путем (через укусы насекомых – комаров рода Anofeles). Заболевание сопровождается характерной клинической картиной – триада симптомов «озноб-жар-пот» и четкой цикличностью (приступы лихорадки могут возникать каждые 48 или 72 часа, в зависимости от возбудителя).
Наиболее восприимчивы к малярии – дети до 5 лет, беременные женщины, люди со сниженным иммунитетом (в состоянии иммунодефицита), а также, туристы, посещающие страны, эндемичные по данному заболеванию.
Важна быстрая и точная диагностика, которая позволяет своевременно назначить лечение. Препараты от малярии доступны и дают положительный эффект уже через небольшой промежуток времени после их приема.
Виды возбудителей.
Такое заболевание. Как малярия, вызывает малярийный плазмодий, это простейшее, часть жизненного цикла которого проходит в желудочно-кишечном тракте комара, откуда он и попадает в организм человека через укус.
Существует несколько видов малярийных плазмодиев:
- Plasmodium falciparum – возбудитель тропической лихорадки (одной из наиболее тяжело протекающих)
- Plasmodium vivax – возбудитель трехдневной малярии
- Plasmodium malariae – возбудитель четырехдневной лихорадки
- Plasmodium ovale- вызывает малярию, по клинической картине сходную с трехдневной
При обнаружении характерных для малярии клинических симптомов, а также, соответствующего эпидемиологического анамнеза (нахождение в тропических странах, «аэропортная малярия», нахождение в других зонах, эндемичных по малярии) необходима срочная диагностика.
Специфическая диагностика малярии заключается в микроскопии препаратов крови по типу «тонкий мазок» или «толстая капля». При использовании только общеклинических анализов, информации может быть недостаточно.
Специальной подготовки к проведению исследования крови на малярию не требуется. Единственным условием для успешно проведенного анализа является взятие крови на высоте лихорадки, так как именно в этот момент происходит высвобождение плазмодия и появляется возможность его успешного выявления.
Исследование крови на малярию показано в следующих случаях:
- Обследование пациентов, прибывших из стран, эндемичных по малярии
- Туристы, из регионов не имеющих данного заболевания, посетившие регион, где возможно заражение малярией
- Наличие лихорадки неясного происхождения, имеющей волнообразное течение
- Эпидемиологические исследования
Анализ является качественным, в результате выдается заключение о наличии или отсутствии малярийного плазмодия в крови пациента с его видовой идентификацией.
Источник
Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:
- Предметные стекла простые и шлифованные.
- Покровные стекла.
- Лоток эмалированный с мостиком для препаратов.
- Промывалка.
- Мерные цилиндры емкостью 100 мл.
- Пинцеты Корне.
- Песочные часы.
- Пипетки градуированные на 1, 2, 5 и 10 мл.
- Краска Романовского.
- Азур.
- Эозин.
- Краска Май-Грюнвальда.
- Краска Лейшмана.
- Метиловый спирт.
- Этиловый 96° спирт.
- Эфир.
- Двууглекислый натрий.
- Ледяная уксусная кислота.
- Дистиллированная вода.
Подготовка предметных стекол для приготовления мазков крови и толстой капли
Качество препаратов крови зависит от чистоты предметных стекол, поэтому новые и бывшие в употреблении стекла подвергают специальной обработке. Для этого с них предварительно удаляют иммерсионное масло кусочком ватки, смоченной бензином или эфиром и помещают на 30 минут в кастрюлю с кипящим мыльным раствором. Многократно промывают водопроводной и дистиллированной водой и помещают в смесь, состоящую из равных частей 96° спирта и эфира. Подготовленные предметные стекла извлекают из смеси с помощью пинцета, вытирают тряпочкой без ворса и, не прикасаясь к ним руками, во избежание загрязнения их поверхности, складывают в коробки, чтобы предохранить от пыли.
Мазки крови приготовляют на чистых предметных стеклах, пользуясь шлифованными предметными или покровными стеклами, чтобы край этих стекол был уже поверхности предметного стекла, на котором готовят мазки, углы стекол иногда надламывают или надпиливают.
Приготовление мазков крови
Прием 1. Предметное стекло захватывают за длинные ребра большим и указательным пальцами правой руки и прикасаются противоположным концом стекла к свежевыступившей капле крови на расстоянии 1-1,5 см от края стекла.
Прием 2. (рис. 29, 1). Предметное стекло располагают между большим пальцем левой руки с одной стороны и указательным и средним — с другой так, чтобы капля крови оказалась сверху и справа.
Прием 3 (рис. 29, 2). Шлифованное предметное или покровное стекло располагают слева и от капли под углом в 45°, при этом его держат большим и указательным пальцами правой руки так, чтобы кончики пальцев касались его длинных ребер.
Прием 4 (рис. 29, 3). Шлифованное предметное или покровное стекло продвигают вправо до соприкосновения с каплей крови и тем самым способствуют распределению крови между стеклами. Когда вся кровь распределится между стеклами (рис. 29, 4), достаточно быстро, спокойно и не надавливая продвигают стекло влево до тех пор, пока капля крови не будет исчерпана (рис. 29, 5, 6). Правильно сделанный мазок равномерной толщины, желтоватого цвета, просвечивает и на конце заканчивается щеточкой; он занимает не более 3/4 и не менее 1/2 длины предметного стекла. Это достигается распределением капли крови, размер которой в диаметре 2-3 мм.
Приготовленный мазок подсушивают на воздухе, после чего на его поверхности углом предметного стекла или грифельным карандашом надписывают фамилию больного. Из крови каждого больного готовят не менее двух мазков.
Приготовление толстой капли
К свежевыступившей капле крови прикасаются предметным стеклом три раза подряд, причем так, чтобы каждая капля отстояла на некотором расстоянии от другой. Углом чистого предметного стекла расширяют капли. Затем препарат подсушивают на воздухе в течение 1-2 часов и маркируют его карандашом по стеклу или специальными чернилами.
Окраска и фиксация мазков крови
До окраски мазки крови необходимо зафиксировать: 1) метиловым алкоголем в течение 3 минут, 2) абсолютным этиловым спиртом — 5 минут, 3) чистым ацетоном — 5 минут, 4) смесью Никифорова (равные объемы 96° этилового сппрта и эфира) — 10-15 минут или 5) фиксатором Май-Грюнвальда в течение 3 минут.
Фиксацию препаратов крови производят следующим образом. В широкогорлую банку с притертой пробкой, в которую налит один из фиксаторов, устанавливают предметные стекла, сложенные попарно мазками наружу (рис. 30). При большом количестве мазков крови каждую пару предметных стекол захватывают кусочками разрезанной по длиннику полой резиновой трубки, что предотвращает соприкосновение мазков друг с другом. По истечении времени фиксации предметные стекла захватывают пинцетом Корне, располагают на мостике мазками кверху на небольшом расстоянии друг от друга. Мостик монтируют из двух одинакового диаметра и длины трубок или пипеток, которые соединяют между собой резиновой трубкой (расстояние между параллельно расположенными стеклянными трубками должно быть 5-6 см).
Для окрашивания фиксированных препаратов крови применяется краска Романовского, которая готовится следующим образом: 3,8 г сухой краски растворяют в 250 мл чистого метилового или этилового спирта. Оставляют на несколько дней и периодически взбалтывают, после чего прибавляют 250 мл чистого глицерина и вновь оставляют на 3-5 дней при частом взбалтывании. В работе применяют краску Романовского, имеющуюся в продаже, которую разводят на дистиллированной нейтральной воде. Так как дистиллированная вода не всегда бывает нейтральной, ее реакцию проверяют с помощью индикаторной бумаги.
Для получения лучшей окраски пользуются буферными растворами.
Для нейтрализации воду щелочной реакции подкисляют 1% раствором уксусной кислоты. Дистиллированную воду кислой реакции нейтрализуют 1% раствором двууглекислого натрия. Результаты нейтрализации устанавливают с помощью индикаторной бумаги.
Титр краски Романовского (количество капель основного раствора краски на 1 мл дистиллированной воды) устанавливают путем окрашивания мазков крови разными разведениями краски: 1, 2 или 3 капли на 1 мл нейтральной дистиллированной воды. Для окраски одного мазка требуется 3-4 мл разведенной краски Романовского. Разведение краски производят в цилиндрах, причем краску приливают к воде и размешивают, но не наоборот. По мазку с лучшей окраской устанавливают титр краски и время окрашивания; этим титром пользуются для окрашивания препаратов крови.
Окраска мазков крови по Романовскому
Высушенные на воздухе и надписанные мазки фиксируют одним из указанных выше фиксаторов, кладут на мостики и после высыхания фиксатора покрывают на 20-25 минут разведенной по титру краской Романовского. Краску сливают, а мазки смывают водой и высушивают.
Окраска мазков крови по Нохту
Для окраски препаратов по этому методу готовят краску азур-эозин: 1 г сухой краски азур II растворяют в 1 л дистиллированной воды и 1 г водного эозина растворяют в 1 л дистиллированной воды. Растворы хранят отдельно в темном месте.
Для окраски используют смесь, состоящую из 0,5 мл раствора азура, 0,5 мл раствора эозина и 3 мл дистиллированной воды.
На фиксированный и высушенный мазок крови наливают на 20-30 минут азур-эозин, затем краску смывают: водой и высушивают мазки.
Окраска мазков крови по Лейшману
Для окраски препаратов необходима краска Лейшмана, которая продается в готовом виде, и дистиллированная вода нейтральной реакции.
На нефиксированный мазок наливают 15-20 капель, краски Лейшмана (благодаря наличию спирта в краске; происходит одновременная фиксация препарата) на 2 минуты. Пипеткой прибавляют 30-40 капель дистиллированной воды нейтральной реакции, производят смешение реактива с водой, красят 4-5 минут. Мазок промывают водой и высушивают на воздухе.
Окраска мазков крови по Крюкову-Папенгейму
Для окраски препаратов надо иметь: 1) фиксатор Май-Грюнвальда, 2) дистиллированную воду нейтральной реакции и 3) разведенную по титру краску Романовского. Для приготовления фиксатора Май-Грюнвальда 0,5 г краски (эозиновокислой метиленовой синьки) растворяют в 200 мл метилового спирта; фиксатор имеется также в готовом виде.
На нефиксированный мазок на 3 минуты наливают 10-15 капель фиксатора Май-Грюнвальда. Не сливая фиксатор, на мазок наливают 10-15 капель дистиллированной воды нейтральной реакции и выдерживают одну минуту, затем фиксатор с водой сливают и на препарат наливают разведенную по титру краску Романовского. Через 15-20 минут препарат промывают водой и высушивают на воздухе.
Окраска толстой капли крови
Толстые капли крови не фиксируют. Предметные стекла с хорошо просушенными толстыми каплями располагают па мостике на некотором расстоянии одно от другого и на 8-10 минут наливают на них краску Романовского (того же разведения, что и для окраски мазков крови). Происходит выщелачивание эритроцитов. Затем краску сливают и на препараты наливают новую порцию разведенной краски Романовского на 20-30 минут. Затем осторожно, чтобы не смыть, капли, предметные стекла ополаскивают водой и высушивают.
Источник: ginekolog.my1.ru
Источник