Технология проведения общего анализ крови

Методика исследований

Забор крови, с последующим её исследованием производился у мужчин в возрасте от 20-ти до 35-ти лет, до и после физической нагрузки. В исследовании приняла участие группа из тридцати трёх человек, каждый из которой, после взятия пробы до физической нагрузки, проходил стандартную тренировку в течение часа. В таблице 3 сведены типы и продолжительность упражнений, которым подвергались все испытуемые.

Таблица 3 — типы физической нагрузки, применяемой в исследовании

Тренировка включала в себя 15 минут бега в нормальном темпе (один тридцатиметровый круг в минуту); выполнение комплекса упражнений (подтягивания, отжимания от пола, приседания) в течение 15 минут в ускоренном темпе (20 подтягиваний в минуту, 50 приседаний в минуту, 30 отжиманий в минуту); 30 минутный спарринг в нормальном темпе (20-25 бросков в минуту). По окончанию тренировки вновь бралась проба такого же объёма, у тех же испытуемых, что и до тренировки.

Техника проведения общего анализа крови

Основные этапы выполнения общего анализа крови:

1 взятие материала;

2 приготовление мазков крови;

3 проведение анализов на гематологическом анализаторе;

4 фиксация мазков крови;

5 окраска мазков крови;

6 подсчёт лейкоцитарной формулы.

Взятие материала. Кровь для исследования получили путём прокола четвёртого пальца левой руки обследуемого слева от срединной линии на некотором расстоянии от ногтя. В зависимости от толщины кожи глубина прокола составляет 2-3 мм. Обработанная кожа пальца высыхает несколько секунд. Цель этого «высыхания» — исключить растекание крови по пальцу, а также гемолитического воздействия антисептика на эритроциты. Скарификатор одноразового использования плотно зажимается между указательным и большим пальцами правой руки; производится прокол. Прокол произвели перпендикулярно рисунку кожных покровов пальца, так как в этом случае происходит повреждение нескольких капилляров, ход которых совпадает с ходом линий кожного рисунка. Учитываем, что разрез произведённый параллельно кожным линиям, спадается, что затрудняет забор крови. Первую, выступившую каплю крови удалили ватным тампоном, а последующие были взяты на исследование. Взятую кровь поместили в пронумерованные и обработанные раствором антикоагулянта. Трилоном-Б, пластиковые микрокюветы. На следующем рисунке показаны одноразовые пластиковые микрокюветы, более удобные и безопасные в использовании, чем стеклянные пробирки.

Все манипуляции связанные с забором крови проводились используя стерильные комплекты инструментов для взятия крови (капилляры Панченкова, предметные стёкла, скарификаторы и микрокюветы). Для каждого обследуемого использовалась индивидуальная пара перчаток и стерильных ватных укладок. Все манипуляции проводились в соответствии с требованиями приказа №165 МЗ РБ от 25.11.2002 г «О методах стерилизации и дезинфекции в медицинских учреждениях» [21].

Рисунок 1 — Микрокюветы с раствором антикоагулянта

Приготовление мазков крови. Для изготовления мазка крови использовались тщательно обезжиренные предметные стёкла. Мазок крови готовился шлифованным стеклом с идеально ровным краем, ширина которого была приблизительно на 2-3 мм уже предметного стекла. К куполу свеже выпущенной из прокола капли было сделано прикосновение предметным стеклом на расстоянии 1,5-2 см от его края, не касаясь кожи в месте прокола. Размер капли на стекле не менее 2-3 мм в диаметре. Шлифованным стеклом, приставленным к предметному под углом 45°, быстрым движением справа налево был сделан мазок. Критерием правильности выполненного мазка является его полупрозрачность и желтоватый цвет. Техника приготовления мазка крови представлена на следующем рисунке.

Рисунок 2 — Техника приготовления мазка крови

Проведение анализов на гематологическом анализаторе. Для исследований использовался гематологический анализатор SISMYX-500. Взятую кровь в миниёмкастях тщательно перемешали и поместили в загрузочную часть аппарата. Предварительно была проведена калибровка данного аппарата, которая заключалась в проведении полного анализа микрокюветы с дистиллированной водой. Определение параметров исследуемой крови протекает в автономном режиме, без непосредственного участия человека. По завершению цикла исследования сняли выданные аппаратом результаты [22].

Изображение аппарата SISMYX-500, и момента отбора пробы для анализа, представлены на рисунке 3.

Фиксация мазков крови. Данный этап предохраняет форменные элементы от содержащейся в красителях воды, под влиянием которой в не фиксированных мазках происходит гемолиз эритроцитов и изменяется морфология лейкоцитов.

Фиксатор также вызывает коагуляцию белков и тем самым закрепляет препарат на стекле. В качестве фиксирующей жидкости использовали раствор эозинметиленового синего по Май-Грюнвальду. Высушенные мазки опускались в широкогорлую банку с фиксатором на 3-5 минут. Далее пинцетом мазки были извлечены и высушены на воздухе.

Рисунок 3 — Гематологический анализатор SISMYX-500

Окраска мазков крови. Фиксированные сухие мазки поместили в контейнер, который опустили в кювету с рабочим раствором красителя и выдержали в нём экспозицию в 30 минут.

Затем, контейнер был перенесён в кювету с водопроводной водой, а затем в вертикальный штатив для сушки. В качестве красящего раствора был использован краситель по прописи Романовского-Гимзы. В состав красителя входят: азур-2 (смесь равных количеств азура-1 и метиленового синего) и эозин. Критериями правильности данной окраски являются розово-оранжевые гранулы эозинофилов, светло-розовый цвет эритроцитов, нейтрофильная зернистость фиолетового цвета.

Подсчёт лейкоцитарной формулы производят с помощью иммерсионной системы микроскопа с увеличением Ч630. Для работы используется специальное иммерсионное масло, каплю которого наносят на препарат. Удобный обзор препарата настраивают с помощью микро- и макровинтов. Для регистрации клеток при подсчёте лейкоцитарной формулы использовался счётчик лабораторный СЛ-1.

Это простейший арифмометр снабжённый клавишами, обозначенными буквами для подсчёта соответствующих видов лейкоцитов, изображён на рисунке 4.

Рисунок 4 — Счётчик лабораторный СЛ-1

Подсчёт лейкоцитов производился в тонкой части мазка, где эритроциты располагаются одиночно. Препарат просматривают по зигзагообразной линии («линии Меандра») в количестве 3-5 полей зрения. Когда сосчитано 100 клеток, счётчик издаёт характерный сигнал, что означает окончание подсчёта лейкограммы данного препарата. Подсчитывались только целые, не разрушенные клетки.

Статистическая обработка результатов исследования

Для оценки влияния физической нагрузки на состояние показателей периферической крови использовались результаты общего анализа крови до и после физической нагрузки.

В ходе исследования нами были вычислены среднее арифметическое, стандартное отклонение, стандартная ошибка, коэффициент вариации по продуктивности и устойчивости внимания, а также по показателям темпа выполнения.

Средняя арифметическая вычисляется по формуле:

, (4)

где Xi — значение признака, варианта;

n — число значений.

Стандартное отклонение:

, (5)

где x2 — сумма квадратов центральных отклонений, т. е. квадратов разностей между каждым значением и средней арифметической;

n — 1 — число степеней свободы, равное числу объектов в группе без одного.

Ошибка стандартного отклонения:

(6)

где — дисперсия;

n — объём выборки.

Коэффициента вариации:

, (7)

где у — стандартное отклонение;

м — средняя арифметическая.

В результате обработки полученного материала, был проведён статистический анализ, построены графики зависимости показателей концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, от воздействующего на них фактора физической нагрузки, а также таблицы результатов дисперсионного анализа, для каждого из исследуемых показателей.

Статистическая обработка результатов исследований выполнена с использованием прикладных программ MS Excel 2007 и Statistica for Windows 6.0. Оценка достоверности различий осуществлялась на основе критерия Фишера. Влияние физической нагрузки на показатели крови оценено методом однофакторного дисперсионного [23].