Реактивы для анализа крови на гемоглобин

Клиническое значение определения гемоглобина

У взрослого человека норма концентрации Hb зависит от пола:

• женщины 11-14г/% или 110-140 г/л;
• мужчины 12-16 г/% или 120-160 г/л.

Для мужчин норма более завышена, так как они имеют большую мышечную массу, по сравнению с женщинами.

Снижение концентрации гемоглобина наблюдается при следующих состояниях и заболеваниях:

• сниженная концентрация эритроцитов в следствии железодефицитной, серповидно-клеточной анемии;
• недостаточное количество веществ, которые влияют на продукцию эритроцитов (фолиевая кислота, витамин B12);
• заболевание красного костного мозга.

Повышенная концентрация Hb наблюдается при следующих состояниях и заболеваниях:

• повышенная продукция эритроцитов при заболевании красного костного мозга, злокачественных новообразованиях;
• компенсаторное повышение количества эритроцитов вследствие сердечно-сосудистых и легочных заболеваний;
• снижение количества плазмы крови вследствие чего число форменных элементов повышается в 1 л биологической жидкости.

Гемоглобин появляется в эритроцитах после утраты ядра и приобретении зрелости клетки. Местом утилизации красных кровяных клеток и Hb является селезенка. Жизненный цикл 1 клетки совместно составляет 120 дней. После гибели в кровь выделяется железо, которое поставляется в красный костный мозг. С помощью этого элемента продуцируются новые красные кровяные тельца.

Методы измерения гемоглобина в крови

Существуют следующие методы анализа гемоглобина в биологической жидкости:

• гемиглобинцианидный;
• гемихромный;
• Сали;
• аммиачный;

После использования соответствующей методики чаще всего применяют полуавтоматический анализатор, который измеряет спектр длины волны молекулы Hb.

Подсчет показателей осуществляется не только в крови, но и в моче, так как в мочевыделительной системе возможны небольшие или значительные кровотечения.

Полуавтоматический гематологический анализатор полностью исключают реставрации врачебные ошибки в отчете необходимого значения. Но прибор не сможет увидеть и распознать нарушение различных параметров.

Ручной подсчет основывается на применении реактива и биологической жидкости. Метод не подсчитывает число клеток, а определяется их присутствие или отсутствие. Подходит для мочи

Унифицированные методы определения гемоглобина

Унифицированная методика – способы измерения показателей, применяемые в большинстве лаборатории. Являются точными, быстрыми, практичными. Для Hb это гемицианидный метод с фотоколориметрическим подсчетом. Позволяет выявить точное количество показателя с помощью подсчета длины волны на специализированном полуавтоматическом приборе.

Второй унифицированной методикой является гимехромный способ. Его принцип тот же, но используются более качественные реактивы, которые не приносят вреда здоровью врачей.

Гемиглобинцианидный метод определения гемоглобина в крови

У гемоглобина имеется множество форм, поэтому рассчитать длину его волны очень сложно. Для упрощения подсчета применяют специализированные химические вещества, которые переводит его в метгемоглобин.

Для получения точных результатов необходимо использовать трансформирующий раствор, специализированные измерительные пробирки, фотоэлектроколориметр. Hb имеет длину волны 540 м. Именно в таком пределе прибор подсчитывает заданный показатель.

Полученные данные подставляют в формулу, которая переводит общее количество показатели в граммы на литры (г/л).

Важно! На данный момент метод определения концентрации гемоглобина в крови используется редко, так как применяемые реактивы опасны для жизни и здоровья в врачей-лаборантов. При нарушении правил приготовления могут возникнуть ожоги кожных покровов и слизистых оболочек.

Читай подробно о гемиглобинцианидном методе в отдельной статье!

Гемихромный метод определения гемоглобина в крови

С помощью методики Hb переводится в циангемоглобин с помощью реактивов, которые полностью безопасны для человека. Для этого используют цианистые соединения (натрий додецилсульфат, лаурилсульфат).

Образуется гемихром, который подсчитывается при длине волны 540 нм. Полученные данные подставляют в формулу для перевода показателя в г/л.

Подробная статья о гемихромном методе определения гемоглобина.

Цианидный метод исследования гемоглобина в крови

Для проведения анализа используют капиллярную и венозную кровь. В биологическую жидкость человека добавляют трансформирующий раствор. С помощью него происходит преобразование всех форм Hb в метгемоглобин.

В пробирку наливают 5 мл реагента и 20 мкл биологической жидкости. Выжидают 10 минут, пока произойдет реакция. Полученную жидкость заливают в специальную кювету, фотоэлектроколориметр пропускает через нее лучи, подсчитывает элементы в области длины волны, равной 543 нм. Содержание Hb рассчитывается по формуле с помощью полученных показателей.

Метод Сали для определения гемоглобина в крови

Определение количества гемоглобина по методу Сали редко применяется в клинических учреждениях, так как существуют более совершенные способы.

Получают биологическую жидкость человека, в которую добавляют хлористоводородная кислоту. Раствор тщательно перемешивают. Это позволяет Hb перейти в другую форму – солянокислый гематин. Добавляют дистиллированную воду до тех пор, пока окрашивание не будет идентичным с контрольной пробиркой (коричневый цвет).

На нижнем мениске пробирки будет стоять цифра, которая указывает на содержание показателя в 100 г крови. Для вычисления концентрации в 1 литре, показатели умножают на 10. Процентное содержание Hb вычисляется с помощью пропорции:

16,7%=100

• А%=Х
• Х=А×100/16,7
• Х – определяемый показатель,
• А – полученное число гемоглобина с помощью гемометра,
• 16,7 – процентное количество гемоглобина в контрольной пробе.

Метод спектрального анализа для измерения гемоглобина

Наиболее точным методом определения гемоглобина является использование спектрофотометра. Он определяет только 1 из форм гемоглобина, улавливая длину его волны. В крови человека существуют различные формы Hb:

• Оксигемоглобин;
• Дезоксигемоглобин;
• Карбоксигемоглобин;
• Метгемоглобин.

Для исследования с помощью спектрофотометра необходим перевод показателей только в 1 из форм. Для этого применяют различные реактивы. Показатель окрашивается определенным цветом (красный, зеленый). Его длину волны улавливает прибор, подсчитывает все элементы в заданной траектории.

Аммиачный метод определения гемоглобина

Аммиачный метод количественного определения гемоглобина соответствует предыдущим способам. Разницу составляет использование аммиака в концентрации 0,04%. Проба должна настояться, чтобы произошла реакция перехода всех форм Hb в одну. Ее рассчитывают с помощью полуавтоматического анализатора в виде спектрофотометра. Раствор помещают в кювету, устанавливают в прибор. Рассчитывают показатель на длине волны 543 нанометров.

Методы определения гемоглобина в моче

Существует 4 разновидности исследования мочи. Каждая из них отличается применяемыми реактивами. Для исследования собирают только свежую порцию урины. Если она настоится, Hb превратиться в медгемоглобин, Поэтому реакция будет невозможна. Урину подготавливают. Для этого к ней добавляет 2 мл уксусной кислоты и 5 мл диэтилового эфира.

• Реакция с гваяковой кислотой. Разводят щепотку кислоты, добавляют 3 мл этанола 96%. Добавляют 8-10 капель получившейся жидкости к 8-10 каплям разведенной урины. Если Hb присутствует в образце, он окрашивается в синий цвет.
• Реакция с амидопирином. К 2-3 мл разведенной урины добавляют 10 капель раствора амидопирина и 10 капель 3% перекиси водорода. Если Hb присутствует, урина окрашивается в фиолетовый цвет.
• Реакция с бензидином. В пробирку добавляют 6 капель бензидина, 6 капель 3% перекиси водорода,4 капли чистой урины. Если Hb присутствует, получившаяся жидкость окрашивается в зеленый цвет.
• Использование тест-полосок, таблеток. Они содержат специализированные реактивы в готовом виде. Полоски опускают в мочу, достают, оценивают цветовую шкалу. Таблетки полностью растворяют в биологической жидкости человека. Индикаторная шкала подписана на упаковке.

Какой метод определения гемоглобина наиболее точный?

Наиболее точным методом определения показателя считается фотоколориметрический с использованием гемихромного разведения. С помощью него снижается риск врачебной ошибки. Прибор автоматически подсчитывает показатель. Здесь важно правильно подготовить приборы, пробирки, кюветы, настроить аппарат. Методика безопасна для лаборанта.

В определении Hb в моче наиболее информативным является использование тест-полосок. Здесь полностью исключается риск неправильного разведения реактивов. 

Определение гемоглобина является важным информативным тестом. Можно определить кровотечение в мочевыводящих путях, состояние сердечно-сосудистой и легочной системы. С помощью методов вовремя выявляются различные виды анемии при низких концентрациях гемоглобина. После получения данных рекомендуется обратиться к лечащему врачу. Он расшифрует полученный результат, выявит нормы и отклонения, назначит лечение. 

Узнай о методах определения гликозилированного гемоглобина в крови!

Екатерина Беликова, врач лабораторной диагностики, специально для Mirmam.pro

Полезное видео

Гемоглобин состоит из двух основных частей, белка и железа. Данная структура крови задействована в доставке кислорода и углекислого газа. Помимо этого gemoglobin необходим для нормального проведения обменных процессов. В нормальном состоянии у человека в крови можно обнаружить сразу три вида гемоглобина: соединенный с кислородом, передавший кислород и связавший углекислый газ.

Что показывает анализ

Гемоглобин может соединяться с другими молекулами, но такие образования вредны организму.

К патологическим видам гемоглобина относят:

• Соединение Hb с углекислым газом. Такой форменный элемент выводится из схемы транспортировки кислорода, так как не может более с ним взаимодействовать.
• Соединение Hb с нитритами и нитратами.
• Гемоглобин, вырабатываемый при серповидноклеточной анемии.
• Гликированный, образуется при повышенной концентрации сахара в крови. Его появление — прямое подтверждение наличия сахарного диабета. Это патологическое соединение встречается чаще других.

Общий анализ крови показывает концентрацию нормального гемоглобина в плазме. При необходимости определить уровень гликозилированного гемоглобина проводят уже биохимический анализ.

Показания к анализу

Общий анализ проводится при каждой диспансеризации и при обращении пациента с жалобами к врачу. Поводом для направления на анализ могут стать жалобы:

• На сонливость, мышечную слабость и быструю утомляемость.
• На приобретение кожей землистого оттенка, или, наоборот, на появление желтизны.
• На шелушение кожных покровов и образование ранок в уголках рта.
• На сильную ломкость ногтей.
• На изменение обоняния, которое начинает улавливать неприятные запахи.
• На массовое выпадение волос в области головы и теле.

Исследования назначают людям из группы риска — беременным женщинам, пожилым пациентам и людям, которые часто болеют простудными заболеваниями.

Подготовка к анализу

Подготовка к процедуре проводится в следующем порядке:

• Анализ крови на гемоглобин требуется сдавать натощак. Обычно лаборатории проводят забор материала с восьми до одиннадцати часов утра.
• Последний прием пищи проходит за десять часов до обследования.
• Утром после сна запрещено пить крепкий кофе и чай, обычная вода на результат не влияет.
• Накануне забора крови нельзя употреблять большое количество пищи, особенно жирной и жареной.
• Полностью исключается прием алкоголя.
• Курить разрешено, но рекомендуется отложить все перекуры за час до сдачи материала.
• Необходимо за несколько дней прекратить прием лекарств.

Несоблюдение правил подготовки часто приводит к ошибочным результатам.

Причины ложных результатов

На уровень гемоглобина в крови могут влиять разные факторы. Рост количества Hb будет наблюдаться при подъеме на большую высоту. Подобные изменения наблюдаются в крови у альпинистов и летчиков. Незначительно уровень вещества будет повышаться при прогулках по лесу, где содержание кислорода в воздухе чуть выше, чем в городе.

Уровень гемоглобина может повышаться при приеме некоторых медицинских препаратов, в том числе имеющих в своем составе железо.

Как проводится анализ

В медицине используются несколько методов определения количества гемоглобина. Каждый из них имеет свои достоинства и недостатки. Из этих методов особо выделяют:

• гемиглобинцианидный;
• гемихромный;
• аммиачный;
• Сали.

Подсчет ведется на полуавтоматических анализаторах. В недостаточно оснащенных лабораториях определение уровня проходит с помощью микроскопа. В этом случае производится подкрашивание образца с помощью реактивов, лаборант не считает клетки, а обращает внимание на их наличие или отсутствие.

Унифицированный метод считается самым эффективным. Он позволяет определить количество Hb очень точно.

Нормы и расшифровка результата

В норме в крови мужчин при подсчете содержится гемоглобин от 13.7 до 17.5 г/дл. У женщин этот показатель немного ниже от 11.2 до 15.7 г/дл.

Повышение уровня гемоглобина связывают со следующими патологиями:

• Диабетом.
• Образованием большой ожоговой поверхности.
• Отравлениями, сопровождаемыми диареей и частыми приступами рвоты.
• Перитонитом.
• Поликистозом почек.
• Эритремией.
• Ростом опухолей.
• Снижением объема плазмы.

Снижение уровня гемоглобина наблюдается:

• на фоне анемий различного происхождения;
• при гипергидратации;
• при дефиците фолиевой кислоты и витамина B12 в организме;
• при болезнях, связанных с нарушением работы красного костного мозга.

Небольшое отклонение от нормы может быть физиологичным и не всегда указывает на патологию, поэтому расшифровку анализа крови лучше доверить врачу.

Анализ крови на гемоглобин в Москве — цены