Расшифровка анализа крови на гепатит с и антитела

Антитела к NS и core гепатита С – специфические иммуноглобулины, которые вырабатываются к структурным и неструктурным белкам вируса. Антигены вируса и антитела к нему обнаруживаются в рамках серологического исследования, которое называется иммуноферментным анализом (ИФА). Его выполняют при подозрении на гепатит С, во время противовирусной терапии и после нее. Снижение уровня антител (anti-HCV) отдельных классов указывает на полное уничтожение возбудителя инфекции.

Структурные и неструктурные белки гепатовируса

HCV – вирус рода Hepacivirus из семейства Flaviviridae, провоцирующий инфекционное воспаление печени. Когда антиген (чужеродное вещество) проникает в организм, возникает иммунный ответ, который характеризуется выработкой антител. При заражении гепатитом С специфические иммуноглобулины синтезируются к разным частям вируса:

• Ядро – содержит структурный белок core. При инфицировании он встраивается в геном клеток печени. В результате они превращаются в фабрику по производству дочерних вирионов. В 1 зараженной клетке ежедневно синтезируется от 30 до 50 вирусов.
• Оболочка – нуклеотидные протеины типа Е1 и Е2. Участвуют во взаимодействии возбудителя с иммунными клетками крови. Они помогают вирусу гепатита С (ВГС) защищаться от Т-лимфоцитов, гранулоцитов, фагоцитов и других клеток, борющихся с антигенами.
• Фрагменты генома – неструктурные белки типа NS2, NS3, NS4, NS5. Выполняют регуляторные функции, участвуют в репликации, то есть образовании копий вируса.

Структурные и неструктурные белки ВГС – антигены, к которым иммунная система вырабатывает антитела. Поэтому анализ на anti-HCV назначается всем людям с подозрением на гепатит С.

В рамках иммуноферментного анализа определяют только три неструктурных белка – NS3, NS4 и NS5. В действительности их больше и каждый выполняет определенные функции. Одни участвуют в расщеплении ферментов и белков, а другие – в сборке скопированного генетического материала. Учеными обнаружено 11 неструктурных белков, но функции некоторых из них до сих пор неизвестны.

Как проводят анализ на антигены и антитела к вирусу гепатита

Анализ на антитела к ВГС (anti HCV) – молекулярно-биологическое исследование, направленное на выявление иммуноглобулинов к гепатиту С. В его основе лежит реакция антиген-антитело, при которой формируются устойчивые комплексы из белков возбудителя и плазмы крови.

Чтобы обнаружить anti-HCV, во время анализа используют специальные ферменты. Они выполняют функцию меток, позволяющих регистрировать соответствующие сигналы. Главное преимущество серологического анализа – высокая специфичность. Полученные результаты дают информацию о:

1. типе возбудителя;
2. стадии заболевания;
3. форме гепатита (острый или хронический).

Для анализа берут венозную кровь из локтевой вены. Подготовка к исследованию не занимает много времени. Пациентам рекомендуют выполнять процедуру натощак в утренние часы, не курить за полчаса до сдачи крови.

Для чего назначается анализ на anti-HCV:

• первичная диагностика HCV-инфекции;

• дифференциальная диагностика гепатитов;

• выявление ранее перенесенного заболевания.

В случае раннего заражения (период до 4 недель) возрастает риск ложноотрицательного результата анализа. Поэтому даже при отсутствии в крови иммуноглобулинов дополнительно выполняется ПЦР на гепатит С. Если РНК возбудителя обнаруживается, диагноз подтверждают.

Анализ на anti-HCV выполняется при:

1. обследовании лиц из группы риска (хирургов, прооперированных пациентов, реципиентов крови);
2. признаках инфекционного поражения печени;
3. повышенном содержании печеночных ферментов;
4. планировании беременности;
5. мониторинге эффективности антивирусной терапии.

Сразу после забора крови лаборант подписывает образец и отправляет его в лабораторию для анализа. На исследование уходит не более 2-3 рабочих дней.

Расшифровка результатов

Если в крови обнаруживают иммуноглобулины к ВГС, это еще не свидетельствует о заражении. По статистике, до 30% пациентов излечиваются самостоятельно. Все они даже не догадываются, что переболели опасным заболеванием, исходом которого нередко становится фиброз, цирроз и гепатоцеллюлярная карцинома.

Виды антител, которые выявляются при иммуноферментном анализе:

• Anti-HCV core IgM – иммуноглобулины, которые синтезируются к ядру возбудителя. Они начинают циркулировать в крови раньше других антител. При хронической форме гепатита их концентрация сильно уменьшается.
• Anti-HCV NS – антитела, синтезированные к неструктурным белкам ВГС. Если при анализе выявляются anti-NS3, это свидетельствует об острой форме гепатита. Белковые комплексы anti-NS4 и anti-NS5 обнаруживаются преимущественно при переходе гепатита в вялотекущую форму.
• Anti-HCV total – суммарные антитела, которые возникают к возбудителю. Если они выявляются во время анализа, это значит, что человек либо заражен гепатитом, либо перенес инфекцию.

Во время диагностики вирусной болезни учитываются результаты качественной ПЦР. При выявлении HCV RNA, то есть РНК возбудителя, диагноз подтверждается.

Пример иммуноферментного анализа с расшифровкой данных

Во время иммуноферментного анализа обязательно определяют позитивность пробы на структурный белок ВГС – КП (core-Ag). Коэффициент позитивности применяется для оценки уровня иммуноглобулинов в крови. В мировой практике он измеряется в МЕ/мл. Результаты анализа считаются положительными, если этот коэффициент превышает 1. Иными словами, чем выше КП, тем больше содержание иммуноглобулинов в образце.

Если данные иммуноферментного анализа указывают на инфицирование, выполняют ПЦ.

После подтверждения диагноза проводят дополнительные инструментально-лабораторные исследования, посредством которых определяются:

1. структурные изменения – фиброз, цирроз печени, печеночно-клеточный рак;
2. вирусная нагрузка – концентрация РНК возбудителя в 1 мл крови;
3. активность воспаления – стадия гепатита С;
4. генотип ВГС – тип и подтип возбудителя.

С учетом результатов анализов составляют схему противовирусной терапии. При курсовом приеме ингибиторов неструктурных белков ВГС – Софосбувира, Нарлапревира, Ледипасвира Омбитасвира, Даклатасвира – выздоровления достигают 96-100% пациентов. Поэтому если вы подозреваете гепатит, запишитесь на прием к врачу.

Гепатит С продолжает распространяться в мире, несмотря на предлагаемые меры профилактики. Особая опасность, связанная с переходом в цирроз и рак печени, заставляет разрабатывать новые способы диагностики на ранних стадиях заболевания.

Антитела к гепатиту С представляют возможность изучения вируса-антигена и его свойств. Они позволяют выявить носителя инфекции, отличить его от больного заразного человека. Диагностика на основе антител к гепатиту С считается наиболее достоверным методом.

Неутешительная статистика

Статистика ВОЗ показывает, что сегодня в мире насчитывается около 75 млн людей, зараженных вирусным гепатитом С, свыше 80% из них — трудоспособного возраста. Ежегодно заболевают 1,7 млн.

Численность инфицированных людей составляет население таких стран, как Германия или Франция. Другими словами, каждый год в мире появляется город-миллионник, сплошь населенный зараженными людьми.

Предположительно, в России число инфицированных 4–5 млн человек, к ним ежегодно добавляется около 58 тыс. Практически это означает, что почти 4% населения заражены вирусом. Многие инфицированные и уже больные не знают о своей болезни. Ведь гепатит С длительно протекает бессимптомно.

Диагноз чаще ставится случайно, в качестве находки во время профилактического обследования или иного заболевания. Например, болезнь обнаруживается в период подготовки к плановой операции, когда кровь в соответствии со стандартами проверяют на различные инфекции. 

В итоге: из 4–5 млн вирусоносителей лишь 780 тысяч знают о своем диагнозе, а на учете у врача стоят 240 тысяч пациентов. Представьте себе ситуацию, когда заболевшая в период беременности мать, не зная о своем диагнозе, передает заболевание новорожденному малышу.

Аналогичная российская ситуация сохраняется в большинстве стран мира. Высоким уровнем диагностики (80–90%) отличаются Финляндия, Люксембург и Нидерланды.

Как образуются антитела к вирусу гепатита С?

Антитела формируются из белково-полисахаридных комплексов в ответ на внедрение в организм человека чужеродного микроорганизма. При гепатите С — это вирус с определенными свойствами. Он содержит собственную РНК (рибонуклеиновую кислоту), способен мутировать, размножаться в гепатоцитах печени и постепенно разрушать их.

Интересный момент: нельзя считать человека, у которого нашли антитела обязательно больным. Известны случаи, когда вирус внедряется в организм, но сильными иммунными клетками вытесняется без запуска цепи патологических реакций.

Свидетелями присутствия вируса в крови являются особые антитела, по наличию которых можно установить стадию заболевания, судить о последствиях активного гепатита.

Для заражения всегда необходим контакт с кровью больного человека

Инфицирование возможно:

• во время переливания недостаточно стерильной крови и препаратов из нее;
• при процедуре гемодиализа;
• инъекциях многоразовыми шприцами (в том числе наркотиков);
• оперативном вмешательстве;
• стоматологических процедурах;
• при производстве маникюра, педикюра, татуажа, пирсинга.

Незащищенный секс рассматривается как повышенный риск заражения. Особое значение придается пути передачи вируса от беременной матери к плоду. Шанс составляет до 7% случаев. Обнаружено, что при выявлении антител к вирусу гепатита С и ВИЧ-инфицирования у женщины вероятность заражения ребенка составляет 20%.

Что нужно знать о течении и последствиях?

При гепатите С острая форма наблюдается крайне редко, в основном (до 70% случаев) течение заболевания сразу приобретает хронический характер. Среди симптомов следует отметить:

• повышенную слабость и усталость;
• чувство тяжести в подреберье справа;
• рост температуры тела;
• желтушность кожи и слизистых;
• тошноту;
• снижение аппетита.

Для этого типа вирусного гепатита характерно преобладание легких и безжелтушных форм. В некоторых случаях проявления заболевания очень скудные (бессимптомное течение в 50–75% случаев).

Диагноз ставится на основании единственного признака — заключения анализа на антитела.

Парадокс заключается в том, что печеночная клетка сама «кормит» и помогает размножаться вирусу

Последствиями гепатита С являются:

• печеночная недостаточность;
• развитие цирроза печени с необратимыми изменениями (у каждого пятого больного);
• выраженная портальная гипертензия;
• раковое перерождение в гепатоцеллюлярную карциному.

Существующие варианты терапии не всегда предоставляют способы как избавиться от вируса. Присоединение осложнений оставляет надежду только на пересадку печени донора.

Что значит для диагностики наличие у человека антител к гепатиту С?

Чтобы исключить ложноположительный результат анализа на фоне отсутствия жалоб и признаков болезни, необходимо повторить исследование крови. Такая ситуация возникает нечасто, в основном при проведении профилактических осмотров.

Серьезное внимание вызывает выявление положительного теста на антитела к гепатиту С при повторных анализах. Это указывает, что такие изменения могут быть вызваны только присутствием вируса в гепатоцитах печени, подтверждает инфицированность человека.

Для дополнительной диагностики назначают биохимический анализ крови с определением уровня трансаминаз (аланиновой и аспарагиновой), билирубина, белка и фракций, протромбина, холестерина, липопротеидов и триглицеридов, то есть всех видов обмена веществ, в которых участвует печень.

Определение в крови наличия РНК вируса гепатита С (HCV), другого генетического материала с помощью полимеразной цепной реакции. Полученная информация о нарушенной функции печеночных клеток и подтверждение присутствия РНК НСV в сочетании с симптоматикой придает уверенность в диагнозе вирусного гепатита С.

Окончательный диагноз ставит врач после ряда обследований

Генотипы вируса HCV

Изучение распространения вируса в разных странах позволило выделить 6 видов генотипа, они отличаются по структурной цепочке РНК:

• №1 — распространен наиболее широко (40–80% случаев заражения), причем различают дополнительно 1а — доминирующий в США и 1b — на западе Европы и в Южной Азии;
• №2 — встречается всюду, но реже (10–40%);
• №3 — типичен для полуострова Индостан, Австралии, Шотландии;
• №4 — поражает население Египта и Средней Азии;
• №5 — характерен для стран Южной Африки;
• №6 — локализован в Гонконге и Макао.

Кроме того, зарегистрировано более 80 субтипов генома. К каждому из них образуются антитела.

Разновидности антител к гепатиту С

Антитела к гепатиту С делятся на два основных вида иммуноглобулинов. IgM (иммуноглобулины «М», core IgM) — образуются на белок ядер вируса, начинают вырабатываться через месяц–полтора после заражения, обычно свидетельствуют об острой фазе или недавно начавшемся воспалении в печени. Снижение активности вируса и трансформация болезни в хроническую форму может сопровождаться исчезновением из крови этого вида антител.

IgG — образуются позже, указывают на то, что процесс перешел в хроническое и затяжное течение, представляют основной маркер, который используется для скрининга (массового исследования) с целью обнаружения зараженных лиц, появляются через 60–70 дней от момента инфицирования.

Максимума достигает через 5–6 месяцев. Показатель не говорит об активности процесса, может быть признаком как текущего заболевания, так сохраняться многие годы после лечения.

На практике легче и дешевле определить суммарные антитела к вирусу гепатита С (total Anti-HCV). Сумма антител представлена обоими классами маркеров (М+G). Через 3–6 недель накапливаются М-антитела, затем вырабатываются G. Они появляются в крови пациента через 30 дней после заражения и остаются пожизненно или до момента полного удаления инфекционного агента.

Приведенные виды относятся к структурируемым белковым комплексам. Более тонкий анализ — определение антител не к вирусу, а к его отдельным неструктурируемым белковым компонентам. Они кодируются иммунологами, как NS.

Каждый результат указывает на особенности заражения и «поведения» возбудителя. Проведение исследований значительно увеличивает стоимость диагностики, поэтому в государственных медицинских учреждениях не применяется.

Диагностика предусматривает использование ИФА

Наиболее важными считаются:

• Anti-HCV core IgG — возникают спустя 3 месяца после заражения;
• Anti-NS3 — повышены при остром характере воспаления;
• Anti-NS4 — подчеркивают длительное течение болезни и степень разрушения печеночных клеток;
• Anti-NS5 — появляются при высокой вероятности хронического течения, указывают на присутствие вирусной РНК.

Наличие антител к неструктурируемым белкам NS3, NS4 и NS5 определяют по специальным показаниям, анализ не входит в стандарт обследования. Считается достаточным определение структурируемых иммуноглобулинов и суммарных антител.

Периоды обнаружения антител в крови

Различные сроки образования антител к вирусу гепатита С и его компонентам позволяют достаточно точно судить о времени инфицирования, стадии заболевания и риске возникновения осложнений. Эта сторона диагностики используется при назначении оптимального лечения и для установления круга контактных лиц.

Таблица указывает на возможные сроки формирования антител

Этапы и сравнительная характеристика методов выявления антител

Работа по выявлению антител HCV проходит в 2 этапа. На первом — выполняются скрининговые исследования в больших объемах. Используются методы, не отличающиеся высокой специфичностью. Положительный результат анализа означает, что необходимо провести дополнительные специфичные тесты.

На втором — в исследования включаются только пробы с ранее предполагаемым положительным или сомнительным значением. Истинным положительным результатом считаются те анализы, которые подтверждены высокочувствительными и специфичными способами.

Сомнительные итоговые пробы предложено дополнительно тестировать несколькими сериями наборов реагентов (обязательно 2 и более) различных фирм-производителей. Например, для выявления anti-HСV IgG используются иммунологические наборы реагентов, которые могут определить антитела к четырем белковым компонентам (антигенам) вирусного гепатита С (NS3, NS4, NS5 и сore). Исследование считается наиболее высоко специфичным.

Методом ИФА можно выявлять как антитела, так и антигены, это зависит от выбора тестирующего вещества

Для первичного выявления антител в лабораториях могут использоваться скрининговые тестовые системы или иммуноферментный метод (ИФА). Его суть: возможность зафиксировать и количественно определить специфическую реакцию антиген+антитело при участии особых меченых ферментных систем.

В роли подтверждающего метода хорошо помогает иммуноблоттинг. Он сочетает ИФА с электрофорезом. Одновременно позволяет дифференцировать антитела и иммуноглобулины. Положительными считаются пробы при обнаружении антител к двум и более антигенам.

Кроме выявления антител, в диагностике эффективно используют метод полимеразной цепной реакции, который позволяет зарегистрировать мельчайшее количество генного материала РНК, а также определение массивности вирусной нагрузки.

Как расшифровать результаты анализов?

По результатам исследований необходимо выявить одну из фаз гепатита.

• При латентном течении — нельзя обнаружить никаких маркеров антител.
• В острую фазу — возбудитель появляется в крови, наличие инфицирования можно подтвердить маркерами по антителам (IgM, IgG, суммарному показателю) и РНК.
• При переходе в фазу восстановления — в крови остаются антитела к иммуноглобулинам IgG.

График показывает, что первый достоверный факт присутствия вируса подтверждается по наличию РНК (с десятого дня заражения)

Полную расшифровку развернутого исследования на антитела может сделать только врач специалист. В норме у здорового человека никаких антител к вирусу гепатита нет. Бывают случаи, когда при отрицательной пробе на антитела у пациента выявляется вирусная нагрузка. Такой результат нельзя сразу перевести в разряд ошибок лаборатории.

Ситуация может объясняться ранним этапом развития инфекции, кровь взята в тот момент, когда антитела еще не сформировались.

Оценка развернутых исследований

Приводим первичную (грубую) оценку анализов на антитела в сочетании с наличием РНК (генного материала). Окончательный диагноз ставится с учетом полного биохимического обследования функций печени. При остром вирусном гепатите С — в крови имеются антитела к IgM и core IgG, положительный генный тест, нет антител к неструктурированным белкам (NS).

Хронический гепатит С с высокой активностью сопровождается — наличием всех видов антител (IgM, core IgG, NS) и положительным тестом на РНК вируса. Хронический гепатит С в латентной фазе показывает — антитела к типу core и NS, отсутствие к IgM, негативное значение теста на РНК.

В период выздоровления — длительно удерживаются положительные тесты на иммуноглобулины типа G, возможно некоторое повышение фракций NS, другие тесты будут отрицательными. Специалисты придают значение выяснению соотношения между антителами к IgM и IgG.

Так, в острую фазу коэффициент IgM/IgG составляет 3–4 (количественно антитела IgM преобладают, что указывает на высокую активность воспаления). В процессе лечения и приближения выздоровления коэффициент становится в 1,5–2 раза меньше. Так подтверждается падение активности вируса.

Сдать анализ можно по собственному желанию инкогнито в частных клиниках

Кого необходимо обследовать на антитела в первую очередь?

В первую очередь опасности заражения подвергаются определенные контингенты людей, кроме пациентов с клиническими признаками гепатита неясной этиологии. Чтобы раньше выявить заболевание и начать лечение вирусного гепатита С, необходимо проводить обследование на антитела:

• беременных;
• доноров крови и органов;
• людей, которым переливалась кровь и ее компоненты;
• детей, рожденных от инфицированных матерей;
• персонал станций переливания крови, отделений по заготовке, переработке, хранению донорской крови и препаратов из ее компонентов;
• медицинских работников отделений гемодиализа, трансплантации, хирургии любого профиля, гематологии, лабораторий, стационарных отделений хирургического профиля, процедурных и прививочных кабинетов, стоматологических клиник, станций скорой помощи;
• всех больных с заболеваниями печени;
• пациентов центров гемодиализа, перенесших пересадку органов, хирургическое вмешательство;
• пациенты наркологических клиник, противотуберкулезных и кожно-венерологических диспансеров;
• сотрудников домов ребенка, спец. интернатов, детских домов, школ-интернатов;
• контактных лиц в очагах вирусного гепатита.

Своевременно пройти обследование на антитела и маркеры — меньшее, что можно сделать для профилактики. Ведь недаром гепатит С именуется «ласковым убийцей». Ежегодно из-за вируса гепатита С на планете умирает около 400 тыс. человек. В основном причина — осложнения заболевания (цирроз, рак печени).