Расшифровка анализа крови на гепатит рнк

РНК гепатита С – это молекула, содержащая наследственную информацию вируса. Именно ее определяет анализ методом ПЦР (полимеразной цепной реакции). Это ключевой этап диагностики, подтверждающий инфицирование гепатитом. Также по строению РНК определяют генотип HCV. Эти данные нужны для выбора терапии, поскольку некоторые подтипы (3а, 3б) не поддаются традиционному лечению интерфероном. Для достоверного результата потребуется соблюдать правила подготовки к исследованию.

Что такое РНК вируса

РНК, или рибонуклеиновая кислота, – это уникальный генетический материал организма. У вирусных гепатитов С от конструкции РНК зависит устойчивость вируса к разным типам лечения и особенности протекания болезни. Появление в крови фрагментов вирусной РНК значит, что болезнь вступила в острую фазу.

У хронических больных в состоянии ремиссии кровь также содержит РНК гепатита С и антитела к ней, но в меньшем объеме, чем при обострениях. Тем не менее, этого количества вируса все равно достаточно для заражения здоровых людей.

Кому назначают диагностику

Обследование крови на РНК HCV нужно в таких случаях:

При обнаружении антител или повышения печеночных ферментов у человека, считающегося здоровым. Анализы на разные виды гепатита проводят для выявления болезни или ее исключения из списка возможных причин разрушения клеток печени.
Когда лечат уже обнаруженный гепатит для отслеживания эффективности терапии. Контроль за уровнем вирусной РНК в крови своевременно выявит резистентность (устойчивость) к принимаемым лекарствам.
После выздоровления на протяжении года – чтобы вовремя заметить рецидив.

Техника проведения анализа

Методом ПЦР обнаруживают нуклеиновые элементы, входящие в состав белковой оболочки вируса. Полимеразная цепная реакция выявляет:

присутствие фрагментов HCV в крови;

уровень вирусной нагрузки – количество частиц в миллилитре крови;

генотип гепатита.

Важно правильно подготовиться к забору крови из вены для полимеразной реакции, чтобы не было искажений в результате теста. Для этого:

Не употреблять алкоголь, энергетики, жирную и жареную пищу в течение 3 дней до сдачи теста.
Избегать физических и нервных нагрузок за 2-3 дня до анализа.
Отказаться от приема лекарств, а если это невозможно – уведомить врача о принимаемых препаратах.
Не сдавать анализ во время обострения хронических вирусных болезней, а также при ОРВИ.
При беременности и во время менструации предупредить врача о своем состоянии, поскольку гормональные нарушения в этот период вызывают искажения результатов.

Расшифровка

Обработка крови состоит из трех этапов:

Определение РНК вируса гепатита в крови (качественный анализ).
Оценка вирусной нагрузки (количественный анализ). Применяется только при положительном результате первого (когда в материале обнаружено присутствие вируса).
Генотипирование. Его проводят при первом обращении по подозрению на гепатит, а также при низкой эффективности терапии – чтобы выявить мутацию вируса.

При подозрении на ложный результат потребуется повторно пройти обследование через 2 недели.

Качественный анализ

На оборудовании большинства лабораторий гепатит С будет выявлен, если количество частиц больше 50 МЕ/мл (международных единиц на миллилитр крови). Редкие диагностические аппараты способны выявить гепатит при уровне 10 МЕ/мл. При меньшем количестве частиц вируса будет получен ложноотрицательный результат (гепатита C не обнаружено).

Присутствие в крови антител с одновременным отрицательным результатом на тестирование по вирусу – причина пройти повторное обследование через 2 недели. Также можно обратиться в другую лабораторию с более современным оборудованием для диагностики.

Количественный анализ

По результатам количественного теста можно определить, насколько эффективно организм борется с гепатитом С. Этим тестом определяют прогресс болезни, а также действенность терапевтической программы. Уровень вируса в крови определяют в МЕ/мл. В зависимости от результатов пациента относят к одной из пяти групп:

Здоров (вируса не обнаружено).
Минимальный уровень вируса в крови (меньше 180 МЕ/мл. Условно здоров. Иногда может означать ложноположительный результат или скрытое носительство без болезни.
Болен с низкой вирусной нагрузкой (менее 800 тыс. МЕ/мл)
Болен с высокой вирусной нагрузкой (от 800 тыс. до 2.5 млн. МЕ/мл)
Терминальная вирусная нагрузка (более 2,5 млн. МЕ/мл).

От регресса вирусной нагрузки зависит длительность терапии. При слишком медленном падении активности вируса (плохой эффективности терапии) лечение растягивается на полгода и более. Если вирус удастся уничтожить быстрей, срок лечения не превышает 3 месяцев.

Генотипирование

Существует 11 генотипов вируса с различными подтипами. Некоторые из них вводят больных в группу риска по онкологии и фиброзу сильней остальных, другие не поддаются стандартной терапии интерфероном. В идеале генотипирование нужно провести при первичном обнаружении гепатита. Но из-за ограниченности ресурсов к этому анализу прибегают только при отсутствии результатов терапии.

Если есть возможность сделать генотипирование платно, обязательно нужно ею воспользоваться. Этот анализ предотвратит потерю времени на терапию, которая может быть неэффективна при редком субтипе гепатита С.

Как часто нужно сдавать кровь на диагностику

Регулярное обследование на гепатит показано:

Людям, которые входят в группу риска из-за профессии или вредных привычек. К первым относятся врачи, ко вторым – наркоманы и люди, практикующие беспорядочные половые связи без использования презервативов.
Проходящим терапию – для отслеживания эффективности лечения.
Излечившимся от гепатита с целью предотвращения рецидивов.

Кровь на профилактическое обследование у группы риска берут раз 3-6 месяцев. Во время лечения потребуется сдавать анализы чаще – раз в 4-6 недель. При сомнениях в эффективности оборудования той лаборатории, где проводятся анализы, лучше сдать тест в нескольких клиниках одновременно.

Источник

Если диагностирован вирус гепатита С, количественный анализ, расшифровка которого влияет на назначение лечебной схемы, строго обязателен. В отличие от генотипирования, подобное исследование выполняется несколько раз: непосредственно на этапе комплексной диагностики заболевания и в ходе терапии. Доктору важно знать количественное содержание вируса в крови пациента, чтобы назначить адекватное лечение.

Анализ крови на гепатит

Уже на стадии терапии анализ крови на уровень HCV предназначен для оценки эффективности принимаемых лекарств. По данным клинических исследований, на фоне подавляющего большинства противовирусных препаратов прямого действия количественный тест демонстрирует отрицательный результат уже на 21–28 день. Однако о полном выздоровлении речь идет в том случае, если негативные данные сохраняются на протяжении двух лет с последнего дня приема таргетных таблеток.

Для установления числового значения генома возбудителя гепатита С в сыворотке крови обычно пользуются молекулярной технологией ПЦР. Только таким образом можно точно посчитать уровень виремии: данный термин обозначает концентрацию копий (частиц генома) возбудителя гепатита С в определенной единице крови. Прочие методы, например, выявление core-антигена иммуноферментным тестом применяются гораздо реже из-за высоких финансовых затрат и сложностей, касающихся технического выполнения исследования.

Лабораторные исследования методом ПЦР

Полимеразная цепная реакция до недавнего времени была лишь экспериментальным методом анализа и не была широко распространена в клинической практике. Принцип методики основан на так называемой амплификации – способности определенного участка генома патогена к многократному копированию.

Это достигается при помощи обязательных компонентов выполнения ПЦР:

праймера, структура которого практически идентична определенным участкам РНК HCV,
фермента, обеспечивающего реакцию амплификации.

Сам процесс лабораторного исследования происходит в буферном растворе, в котором содержится фиксированная комбинация катионов и анионов. Таким образом возможно поддержание оптимального для течения ПЦР уровня рН. Набор для проведения ПЦР содержит и протеины, используемые в качестве своего рода «строительного материала» при амплификации.

Структура праймера такова, что он может взаимодействовать только со строго определенным возбудителем. На этом принципе основана специфичность анализа методом ПЦР. Если иммуноферментные серологические исследования зависят от индивидуальных параметров иммунной системы человека, ПЦР направлена исключительно на выявление РНК возбудителя HCV.

Еще одна особенность проведения подобного исследования состоит в том, что расшифровка ПЦР гепатита С возможна как с использованием компьютерных программ (обычно используется, когда необходимо количественно установить содержание вируса в крови) и микроскопических методов. В норме у здорового в плане вирусного поражения печени человека патоген в крови отсутствует. Выявление возбудителя HCV методом ПЦР, будь то качественное либо количественное исследование, однозначно указывает на инфицирование.

Виды тестов

При помощи постановки ПЦР можно не только определить виремию, то есть фактический уровень патогена в кровотоке, но и генотип вируса. Все доступные исследования, выполняемые по такой методике, приведены в таблице.

Перечень тестов	Краткое описание
Анализ ПЦР на гепатит С качественный	Предназначен для подтверждения результатов серологического теста (ИФА). Используемые тест-системы позволяют только выявить РНК патогена без определения его содержания
Анализ ПЦР вирусное содержание возбудителя патологии	Чувствительность исследования составляет 5–10 МЕ/мл. Для удобства расшифровки используют универсальный параметр, так как при определении количества копий могут возникать различные погрешности. Исследование проводится в обязательном порядке и не может заменить ни качественный тест методом ПЦР, ни генотипирование
Генотипирование	При исследовании определяется последовательность протеинов, что определяет разновидность возбудителя гепатита С. В настоящее время установлено 6 генотипов, и практически каждый требует индивидуального подхода в терапии

Количественный анализ крови

При гепатите С проводится все три исследования ПЦР. Алгоритм диагностики состоит в следующем:

Общие клинические исследования («стандартный набор» – кровь, моча, биохимия и печеночные пробы), дополнительно могут назначать ревматоидные тесты и ряд других анализов при подозрении на аутоиммунные процессы;
Серологическое исследование (ИФА) на выявление антител к возбудителю гепатита С. Изначально показан тест Anti-HCV Total.
Качественная ПЦР, предназначена для подтверждения результатов ИФА.
Количественная ПЦР, выполняется при подтвержденном диагнозе HCV-инфекции.
Генотипирование, также проводится при установленном факте заражения.

Если человек желает самостоятельно обследоваться на гепатит С, рекомендуют сдавать ИФА. Дальнейшие обследования проводят в зависимости от полученных результатов. Если ИФА отрицательный и человек не предъявляет никаких жалоб, повторное тестирование проходят через год. Но при наличии симптомов патологии (в том числе и неспецифических, например, сильная слабость, утомляемость, боли в правом подреберье) следует сдать качественную ПЦР.

Характеристика количественного анализа

В целом, техника выполнения ПЦР по большому счету одинакова, как для качественного, так и количественного исследования. Образец биологического материала смешивают с тест-раствором, который содержит специальные соединения. Их роль состоит в стимуляции деления РНК патогена (причем строго специфичного генетического материала возбудителя).

В результате концентрация HCV достигает лабораторно определяемого уровня. На данном этапе возможно проведение качественного анализа. Однако после сложных подсчетов (обычно для этих целей используют компьютерные программы) устанавливают количественный показатель содержания HCV. После этого полученный результат переводят в Международные Единицы и фиксируют в лабораторном бланке.

В некоторых случаях вместо ПЦР используют другие методики – разветвленной ДНК и транскрипционной амплификации. Но из-за сложности выполнения и более низкой чувствительности большинство специалистов предпочитают выявлять количественные нормы гепатита С именно при помощи ПЦР.

Показания

Сейчас практически в любой частной лаборатории пациент может пройти обследования без каких-либо бумаг и направлений от терапевта. Количественное определение вируса гепатита С в крови не является исключением. Вопрос в том, когда целесообразна сдача теста?

Гепатологи рекомендуют проведение исследования в таких случаях:

позитивный ИФА + положительная ПЦР;
негативный ИФА + положительная ПЦР.

Кроме того, количественное определение HCV показано и в ходе противовирусной терапии. Врач сравнивает результаты виремии, полученные до начала курса приема медикаментов, с результатами тестирования, проведенного уже во время лечения. Нормой считается негативная ПЦР к 12 неделе применения препаратов. А предиктором 100% выздоровления считают отсутствие виремии уже через месяц терапии.

Кровь для анализа

Тестирование продолжают и после окончания лечения для исключения риска рецидива. Пациент должен сдавать такой тест на протяжении еще 2 лет. При отрицательном результате говорят о выздоровлении. Больного снимают с учета у гепатолога или инфекциониста и дают общие рекомендации относительно восстановления состояния печени.

Если спустя 2 года количественный тест на HCV вновь положителен, все исследования повторяют заново. В таком случае предполагают повторное инфицирование и, возможно, другой генотип вируса. Но требуется новая схема лечения, а вероятность благополучного исхода существенно ниже.

Когда информативно проведение теста

Сроки выполнения количественного определения вирусной нагрузки при подтвержденной HCV-инфекции указаны в таблице.

Особенности течения заболевания и лечения	Этапы сдачи количественной анализа
Этап первичной диагностики	Виремия перед началом приема противовирусных средств – важный параметр определения лечения и контроля эффективности терапии
4 неделя	Анализ делают вне зависимости от схемы лечения и применяемых препаратов
12 неделя	Исследование выполняется также в любом случае
24 неделя	Тестирование делают в том случае, если курс терапии продолжается 24 недели
48 неделя	Выполняют при 48-недельном курсе лечения (как правило, при применении интерферонов) и как контрольный тест после 12-недельной терапии
После завершения курса терапии	С интервалом в 24 недели на протяжении 2 лет

Как подготовиться

Сама методика постановки ПЦР менее чувствительна к особенностям функционирования внутренних органов, иммунной системы. Однако это не исключает соблюдения правил подготовки к проведению теста. В большинстве случаев количественный тест проводится при уже подтвержденном диагнозе гепатита С.

Это подразумевает как минимум отказ от алкоголя и соблюдение строгой диеты (по столу №5 или №5а в зависимости от тяжести состояния больного). Лечащий врач уже ознакомлен с анамнезом, знает, какие лекарственные средства принимает пациент и от каких патологий страдает. Это облегчает расшифровку анализа ПЦР и снижает вероятность постановки ошибочного диагноза.

Но чтобы получить максимально точный результат необходимо:

сдавать кровь натощак (после ужина должно пройти не менее 12 часов, завтрак противопоказан);
посещать лабораторию следует в первой половине дня;
до сдачи крови нельзя есть и пить что-либо кроме воды;
нельзя курить за 8–10 часов до исследования.

Перечисленные правила нужно соблюдать перед каждой проверкой на количественное содержащие патогена. Если исследование проводят после лечения и врач разрешил ослабления в диете, за 7–10 дней до проведения тестирования необходимо вновь вернуться к строгому режиму питания. Что касается спиртного, ограничения сохраняются на протяжении всей жизни.

Расшифровка количественного анализа крови на гепатит С

Ранее отечественные специалисты делили виремию на несколько групп: очень низкую, низкую, умеренную, высокую и очень высокую. Но в настоящее время расшифровка анализа крови на гепатит С проводится в соответствии с международными нормами. Сейчас виремию делят только на 2 группы. В таблице указаны вероятные данные количественного анализа на гепатит С (окончательная расшифровка вне зависимости от показателей должна проводиться врачом).

Результаты анализов	Уровень вирусной нагрузки
7,9×105 МЕ/мл и ниже	Низкая виремия
7,9×105 МЕ/мл и выше	Высокая вирусная нагрузка
HCV не обнаружен	Уровень РНК патогена ниже определяемого тест-системой порога (как правило, 5–10 МЕ/мл) либо полностью отсутствует. Виремия отрицательна

Но только специалист может грамотно расшифровать количественное исследование на HCV и отличить показатели нормы от критических, свидетельствующих об отсутствии результата от противовирусной терапии либо о рецидиве инфекции. Все анализы должны быть подшиты в амбулаторную карту, чтобы у доктора была полная информация об активности вирусной инфекции и ответной реакции на прием таргетных медикаментов.

Проведение анализа

Показатели нормы

Показатели нормы при расшифровке количественного анализа на гепатит С бывают только тогда, когда результат ПЦР отрицателен, то есть РНК вируса во взятом образце крови отсутствует. В остальных случаях наличие патогена свидетельствует о заражении.

При подтверждении диагноза количественные показатели крови при гепатите С служат основой для оценки степени активности вирусного процесса. Высокая виремия повышает вероятность осложнений и сокращает срок наступления необратимых изменений в печени.

Вирусологическая нагрузка, превышающая 800 000 МЕ/мл служит основанием для проведения ряда инструментальных обследований:

эластографии – диагностического метода для определения степени фиброза (разрастания и размеров очагов соединительной ткани);
томографии – подробное рентгенологическое исследование, позволяющее исключить либо подтвердить наличие злокачественных или доброкачественных новообразований;
биопсии печени, которая дает максимально полную информацию о структурных изменения в органе.

Низкая вирусная нагрузка говорит о медленно развивающейся вирусной инфекции. Такой процесс не исключает прогрессирования поражения печени, но вероятность возникновения тяжелого декомпенсированного цирроза или гепатоцеллюлярной карциномы низка. У такой категории пациентов редко возникают внепеченочные проявления гепатита С (кардиоваскулярные расстройства, аутоиммунные нарушения), что также повышает шансы не только успешной противовирусной терапии, но и быстрого общего восстановления.

Какие показатели крови указывают на инфицирование

При постановке диагноза назначают несколько исследований, таким образом ошибка в проведении тестирования исключается.

Основными маркерами при гепатите С служат:

Положительный результат иммуноферментного анализа. Но ИФА во многом зависит от состояния иммунной системы человека, поэтому на этапе первичной диагностики не исключают ложноположительный либо ложноотрицательный результат.
Коэффициент позитивности при гепатите С выше 1. Рассчитывается по титру антител. Иногда референсные значения могут отличаться в зависимости от используемой тест-системы, но физиологическая норма всегда указывается в бланке с результатами.
Положительный результат качественного теста ПЦР. Обнаружение РНК возбудителя патологии однозначно указывает на инфицирование.
Определяемая виремия методом количественной ПЦР.

Косвенными лабораторными признаками гепатита С служат:

повышение уровня печеночных ферментов, билирубина;
изменение уровня лимфоцитов, в некоторых случаях, лейкоцитов, ускорение СОЭ.

Пробирки с кровью

Но при ответе на вопрос, какие показатели крови указывают на гепатит С, доктора руководствуются результатами ПЦР, так как ИФА может быть непоказательным при наличии определенных заболеваний (ВИЧ, аутоиммунных расстройств). Также неверные результаты вероятны при беременности, приеме некоторых лекарств. Не последнюю роль играет и анамнез.

При гепатите С антитела, как и РНК обнаруживаются при помощи тест-систем не сразу, а спустя как минимум 10–14 дней. ИФА может дать достоверный результат позже – через 4–6 недель после инфицирования. Поэтому если есть серьезные основания предполагать контакт с кровью больного, при негативном результате все анализы имеет смысл повторить через 1–1,5 месяца.

Возможны ли ошибочные результаты

В современных лабораториях тестирование проводят с соблюдением всех норм (в соответствии с требованиями отечественного и зарубежного законодательства), но исключить вероятность ошибок и ложных результатов нельзя.

Если на выполнение ИФА оказывает влияние состояние иммунной системы человека, правильность выполнения ПЦР зависит от:

соблюдения стерильности при заборе, транспортировке и работе с образцами крови пациента, чтобы исключить возможный контакт с контаминированными образцами;
соблюдения температурного режима и других правил при хранении и перевозке пробирок с кровью;
правильности постановки ПЦР (начиная от работы лаборанта и заканчивая функционированием автоматических диагностических систем);
качества используемых лабораторных материалов.

Но количественный анализ проводится на основании уже выполненных исследований, которые однозначно указывают на наличие HCV (ИФА и качественная ПЦР). Поэтому при отрицательном результате на фоне подтвержденного диагноза исследование повторяют. Кроме того, обращают внимание, как обозначается гепатит С в анализах.

В некоторых клиниках могут пользоваться устаревшей системой, когда виремия указывается не в международных единицах, а в количестве копий. Иногда путаница возникает с подсчетом нулей в указанных цифрах. Именно поэтому расшифровкой обозначений в бланке результатов должен заниматься врач.

Преимущества количественного теста

Определение вирусной нагрузки возможно и с использованием других методик, включая серологические. Так, исследование на антиген core считают альтернативой количественной ПЦР.

Количественный анализ крови на гепатит

Но большинство врачей отдают предпочтение ПЦР благодаря:

доступности и качеству тест-систем: их производством занимаются ведущие мировые фармацевтические и медикотехнологические корпорации;
быстроте и простоте выполнения;
высокой чувствительности: современные методики ПЦР позволяют обнаружить РНК патогена в количестве 5 МЕ/мл;
универсальности: количественное определение проводится одинаковыми методиками вне зависимости от генотипа HCV;
объективности вне зависимости от состояния здоровья пациента (в отличие от ИФА), что позволяет проводить исследования на разных этапах диагностики и лечения;
отсутствию влияния на результаты принимаемых лекарств.

Сейчас ПЦР остается основным методом количественного определения виремии. Тест используется повсеместно практически во всех лабораториях и больницах. Но во избежание ошибок, перед сдачей анализа нужно поинтересоваться, по какой технологии будет проводиться исследование, чтобы соотнести результаты дальнейших анализов.

Источник