Проведение анализа крови ручным методом
Министерство здравоохранения
Амурской области
Государственное автономное учреждение
амурской области профессиональная
образовательная организация
«амурский медицинский колледж»
методическая
разработка практического занятия
для студентов
ПМ.02 Проведение лабораторных
гематологических исследований
МДК 02.01. Теория и практика
лабораторных гематологических
исследований
специальность
31.02.03 Лабораторная диагностика
квалификация
Медицинский технолог
Занятие №1
Тема:
Взятие крови из пальца для выполнения
клинического анализа ручным методом.
Благовещенск -2014
Рассмотрено на заседании ЦМК спец. дисциплин «Лабораторная диагностика» Протокол №________ «_____»___________________2014 г. Председатель ЦМК Маятникова Н.И. _______________ | Утверждаю Зам. директора по НМР М.А. Сидоренко___________________ «_____»____________________2014 |
Методическая разработка
практического занятия для студентов
разработана в соответствии с Рабочей
программой профессионального модуля
ПМ.02 Проведение лабораторных
гематологических исследований
междисциплинарного курса
МДК 02.01. Теория и практика лабораторных
гематологических исследований и
требованиям ФГОСпоспециальности
31.02.03 Лабораторная диагностика по
профессии «Медицинский
технолог».
Организация-разработчик: ГАУ АО
ПОО «Амурский медицинский колледж».
Разработчик:
Стринадко Татьяна Валерьевна,
кандидат биологических наук, преподаватель
ГАУ АО ПОО «Амурский медицинский колледж»
I квалификационной категории.
Методическая разработка цикла
практических занятий для преподавателя
рассмотрена на заседании ЦМК специальных
дисциплин, и рекомендована к использованию
при обучении студентов медицинского
колледжа.
Список используемой литературы.
Г.Е. Ройтберг, А.В. Струтынский
Лабораторная и инструментальная
диагностика заболеваний внутренних
органов. On-lain
медицинский справочник.Методы клинических лабораторных
исследований / под ред. проф. В.С.
Камышникова. – 4-изд. – М.: МЕДпресс-информ,
2011. – 752 с.:ил.
Занятие № 1.
Тема: Взятие
крови из пальца для выполнения клинического
анализа ручным методом.
Цель: Научиться брать кровь
из пальца.
Задачи:
Студенты должны знать:
Как готовить реактивы для взятия
крови из пальца.Правила подготовки больного к
взятию крови из пальца.Порядок взятия крови на
исследования.Какие могут возникнуть ошибки
при взятии крови из пальца.
Студенты должны уметь:
Готовить оборудование и реактивы
для взятия крови из пальца.Готовить укладку лаборанта.
Брать
кровь из пальца на различные исследования.
Оснащение занятия:
Наглядные пособия:
объемные пособия (коллекция
препаратов крови);печатные пособия (методическая
разработка практического занятия для
преподавателя, методическая разработка
практического занятия для студентов);проекционный материал
(презентация).
Технические средства обучения:
Мультимедиа
3. Специальное оборудование:
Лабораторная посуда
Аппарат Панченкова
Реактивы:
Набор реактивов для определения
гемоглобина5% цитрат натрия
Физиологический раствор
3% уксусная кислота
Место проведения занятия:
Кабинет МКЛИ
Рекомендуемая литература:
Основная:
конспект лекций.
Методы клинических лабораторных
исследований / под ред. проф. В.С.
Камышникова. – 4-изд. – М.: МЕДпресс-информ,
2011. – 752 с.:ил.
Дополнительная:
Методики клинических лабораторных
исследований. Справочное пособие. В
3-х т. Под ред. В.В. Меньшикова. – М.,
Лабора. 2008. – 448 с.Г.Е. Ройтберг, А.В. Струтынский
Лабораторная и инструментальная
диагностика заболеваний внутренних
органов. On-lain
медицинский справочник.
Задание №1.
Прочтите и законспектируйте:
Правила взятия крови.
Исследование рекомендуется
проводить утром натощак или через 1 час
после легкого завтрака. Кровь для
проведения общего клинического анализа
берут у пациента из обычно из мякоти IV
пальца руки, вены или из мочки уха, а у
новорожденных — из пятки. Не рекомендуется
брать кровь после физической и умственной
нагрузки, применения медикаментов,
особенно при внутривенном или
внутримышечном их введении, воздействия
рентгеновских лучей и после
физиотерапевтических процедур. В
экстренных случаях этими правилами
пренебрегают. Оптимальной является
следующая последовательность взятия
крови для исследования:
кровь для определения СОЭ;
кровь
для определения концентрации гемоглобина;кровь
для подсчета эритроцитов;кровь
для подсчета общего количества
лейкоцитов;кровь
для приготовления мазка и исследования
лейкоцитарной формулы.
Задание №2.
Приготовьте
реактивы, необходимые для взятия крови
из пальца:
Раствор натрия хлористого (готов
к использованию),Кислота уксусная 3
% (сделать навеску 3 гр. уксусной кислоты,
добавить дистиллированной воды до 100
мл),Цитрат натрия 5 % (сделать навеску
из 5 гр. лимонной кислоты, добавить
дистиллированной воды до 100 мл),Набор реагентов для определения
гемоглобина гемихромным методом
(Гемоглобин – Ново, Вектор Бест).
Содержимое флакона с реагентом
(100-кратный концентрат раствора натрия
додецилсульфата) количественно перенести
в мерную колбу вместимостью 1000 мл, объем
раствора довести до метки дистиллированной
водой, перемешать, избегая вспенивания.
Задание №3.
Организуйте рабочее место для взятия
крови из пальца:
На рабочем месте при взятии крови
выделяют 3 зоны:
чистую (стерильную),
рабочую
грязную.
В чистой зоне располагаются:
— стерильные инструменты,
стерильная вата, стерильный пинцет
— одноразовые скарификаторы
— стерильные предметные стекла
— стерильные капилляры Панченкова
— стерильный 5% раствор лимоннокислого
(цитрата) натрия
— стерильные резиновые перчатки
В грязной зоне располагаются:
— дезинфицирующие растворы для
обработки поверхностей (6% р-р перекиси
водорода, 0,6% р. гипохлорида кальция и
др.)
— емкость с ватными тампонами
для перчаток
— емкости накопители – контейнеры
для отходов: использованной ваты,
скарификаторов, капилляров
— контейнер для использованных
перчаток
В рабочей зоне располагаются:
— 70% р-р этилового спирта
— штатив с пробирками для взятия
крови на СОЭ, эритроциты, гемоглобин,
лейкоциты
— планшет для взятия крови — чашка
Петри со шлифованным стеклом для
изготовления мазка крови
— емкость для приготовленных
мазков крови.
Задание №4.
Приготовьте укладку для лаборанта:
рис. 1. укладка для лаборанта.
Укладка для лаборанта служит
для упрощения забора крови.
В
комплект входит:
Штатив
пластиковый на 40 гнезд; 1 шт.Пробирки
14х120 мм; 10 шт.Карандаш
по стеклу 1 шт.Капилляр
Сали 1 шт.Емкость
для отработанного материала 2 шт.Скарификатор
10 шт.Стекло
предметное с лункой 1 шт.Стекло
для растяжки мазков 1 шт.Стекло
предметное 10 шт.Баллон
— каплесчитатель № «0»; 1 шт.капилляр
Панченковаспирт
70ºстерильные
ватные шарикистерильные
пипетки вместимостью 0,02
дополнительно
приготовить:
аппарат
Панченкова
Задание
№5. Разлейте реактивы
по пробиркам:
Для
подсчета эритроцитов пробирку заполнить
4,0 мл раствора изотонического раствора
натрия хлорида.Для
подсчета числа лейкоцитов, пробирку
заполнить 0,4 мл 3–5%-ного раствора
уксусной кислоты;Для
определения количества гемоглобина
пробирку заполнить 5,0 мл рабочего
реагента.
Рис. 2. Схема разведения крови
для определения гемоглобина (а), подсчета
числа эритроцитов (б) и общего числа
лейкоцитов (в)
Задание
№6. Сделайте прокол
пальца и наберите кровь:
Не следует брать кровь из
воспаленных или поврежденных участков.
Если место предполагаемого прокола
холодное или цианотическое, его
предварительно согревают массированием.
В момент взятия крови из пальца пациент
должен сидеть или лежать. Кожу мякоти
ногтевой фаланги IV пальца левой руки
протирают ватным шариком, смоченным
спиртом и прокалывают индивидуальным
стерильным скарификатором. Укол следует
делать быстрым коротким движением до
упора, одновременно фиксируя пальцами
левой руки концевую фалангу IV пальца
пациента и слегка надавливая кожу.
Первую каплю крови вытирают сухим ватным
шариком. Из следующих капель крови при
легком надавливании быстро набирают
необходимое количество крови.
Взять
кровь для определения
СОЭ:
Капилляр Панченкова,
предварительно заполненный 5% раствором
натрия цитрата до метки “75”, промывают
этим реактивом, выдувая его на дно
пробирки Видаля. Затем тем же капилляром
насасывают кровь до метки “0” (100 мм).
Капилляр заполняют кровью постепенно,
по мере появления новых капель крови в
месте укола. После этого мякоть пальца
вытирают сухим ватным шариком, а кровь
из капилляра выдувают в пробирку с
цитратом и тщательно встряхивают ее.
Следует помнить, что соотношение натрия
цитрата и крови в пробирке должно быть
равным точно 1:4. Затем вновь насасывают
смесь натрия цитрата и крови в капилляр
Панченкова до метки “0” и устанавливают
его в специальный штатив, располагая
между двумя резиновыми прокладками.
Рис. 4. установка капилляров в
аппарат Панченкова.
Взять кровь для определения
содержания гемоглобина.
Берут сухую стерильную пипетку
вместимостью 0,02 мл и насасывают в нее
кровь до этой метки. Затем кровь выдувают
в пробирку с трансформирующим раствором
и несколько раз ополаскивают пипетку
этим раствором. Место укола снова
вытирают сухим ватным тампоном.
Взять кровь для подсчета
эритроцитов.
Кровь из пальца набирают в пипетку
до метки 0,02 мл и выдувают ее в пробирку
с 4,0 мл изотонического раствора натрия
хлорида, несколько раз промывая пипетку
этим раствором. Таким образом, получают
разведение крови в 200 раз.
Взять кровь для
подсчета общего числа лейкоцитов:
Снова набирают кровь в пипетку
до метки 0,02 мл и выдувают ее в пробирку
Видаля, заполненную 0,4 мл раствора
уксусной кислоты, гемолизирующей
эритроциты. Таким образом, получают
разведение крови в 20 раз.
Сделать мазки крови для
исследования лейкоцитарной формулы:
Каплю крови наносят
на сухое предметное стекло. Шлифовальное
стекло устанавливают под углом 45° к
предметному. Кровь при соприкосновении
со шлифовальным стеклом растекается
по его краю. После этого быстрым движением
шлифовальное стекло продвигают вперед,
скользя по поверхности предметного
стекла. При этом кровь тонким равномерным
слоем размазывается по предметному
стеклу. Мазок должен
занимать 2/3 поверхности предметного
стекла, иметь четкие границы и заканчиваться
«щеточкой» («метелочкой»).
Толщина мазка зависит от величины угла
между стеклами: чем острее угол, тем
тоньше мазок. Правильно приготовленный
мазок имеет желтоватый цвет и одинаковую
толщину по всей поверхности.
Нельзя сильно нажимать на стекло,
так как это может привести к повреждению
форменных элементов крови. Хорошо
приготовленный мазок крови выглядит
на просвет желтоватым, равномерным и
прозрачным. В этом случае форменные
элементы крови располагаются в нем в
один слой.
рис. 4. техника приготовления
мазка крови.
Задание №6.
ответьте на следующие вопросы для
контроля усвоения темы:
Какое оборудование требуется
для того, чтобы взять кровь из пальца?Что
такое укладка лаборанта?Что
входит в укладку лаборанта?Какие
существуют правила подготовки пациента
для взятия крови из пальца?Перечислите
последовательность взятия крови на
исследование.Как
правильно сделать прокол пальца?Как
взять кровь для определения СОЭ?Как
взять кровь для подсчета эритроцитов?Как
взять кровь для подсчета лейкоцитов?Как
взять кровь для определения гемоглобина?Как
сделать мазок крови?Назовите
признаки хорошо приготовленного мазка.
Задание на дом:
Выучить конспект лекции.
Методы клинических лабораторных
исследований / под ред. проф. В.С.
Камышникова. – 4-изд. – М.: МЕДпресс-информ,
2011. – 752 с.:ил.
Вопросы для подготовки:
Ошибки, которые могут возникнуть
при взятии крови.Организация рабочего места
лаборанта, приготовление посуды,
оборудования, реактивов. Укладка
лаборанта.Правила подготовки пациента к
исследованию.Последовательность взятия крови
на различные исследования.Признаки хорошо приготовленного
мазка.Приказы и инструкции Министерства
здравоохранения РБ по профилактике
сывороточного гепатита и СПИД в ЛПУ, у
медицинского персонала, занятого
забором и исследованием крови.Утилизация капиллярной крови,
дезинфекция и стерилизация использованной
лабораторной посуды, инструментария,
средств защиты.
Источник
Методика исследований
Забор крови, с последующим её исследованием производился у мужчин в возрасте от 20-ти до 35-ти лет, до и после физической нагрузки. В исследовании приняла участие группа из тридцати трёх человек, каждый из которой, после взятия пробы до физической нагрузки, проходил стандартную тренировку в течение часа. В таблице 3 сведены типы и продолжительность упражнений, которым подвергались все испытуемые.
Таблица 3 — типы физической нагрузки, применяемой в исследовании
Тип физической нагрузки | Продолжительность, мин | Темп выполнения |
Бег | 15 | Средний |
Комплекс упражнений | 15 | Ускоренный |
Спарринг | 30 | Средний |
Тренировка включала в себя 15 минут бега в нормальном темпе (один тридцатиметровый круг в минуту); выполнение комплекса упражнений (подтягивания, отжимания от пола, приседания) в течение 15 минут в ускоренном темпе (20 подтягиваний в минуту, 50 приседаний в минуту, 30 отжиманий в минуту); 30 минутный спарринг в нормальном темпе (20-25 бросков в минуту). По окончанию тренировки вновь бралась проба такого же объёма, у тех же испытуемых, что и до тренировки.
Техника проведения общего анализа крови
Основные этапы выполнения общего анализа крови:
1 взятие материала;
2 приготовление мазков крови;
3 проведение анализов на гематологическом анализаторе;
4 фиксация мазков крови;
5 окраска мазков крови;
6 подсчёт лейкоцитарной формулы.
Взятие материала. Кровь для исследования получили путём прокола четвёртого пальца левой руки обследуемого слева от срединной линии на некотором расстоянии от ногтя. В зависимости от толщины кожи глубина прокола составляет 2-3 мм. Обработанная кожа пальца высыхает несколько секунд. Цель этого «высыхания» — исключить растекание крови по пальцу, а также гемолитического воздействия антисептика на эритроциты. Скарификатор одноразового использования плотно зажимается между указательным и большим пальцами правой руки; производится прокол. Прокол произвели перпендикулярно рисунку кожных покровов пальца, так как в этом случае происходит повреждение нескольких капилляров, ход которых совпадает с ходом линий кожного рисунка. Учитываем, что разрез произведённый параллельно кожным линиям, спадается, что затрудняет забор крови. Первую, выступившую каплю крови удалили ватным тампоном, а последующие были взяты на исследование. Взятую кровь поместили в пронумерованные и обработанные раствором антикоагулянта. Трилоном-Б, пластиковые микрокюветы. На следующем рисунке показаны одноразовые пластиковые микрокюветы, более удобные и безопасные в использовании, чем стеклянные пробирки.
Все манипуляции связанные с забором крови проводились используя стерильные комплекты инструментов для взятия крови (капилляры Панченкова, предметные стёкла, скарификаторы и микрокюветы). Для каждого обследуемого использовалась индивидуальная пара перчаток и стерильных ватных укладок. Все манипуляции проводились в соответствии с требованиями приказа №165 МЗ РБ от 25.11.2002 г «О методах стерилизации и дезинфекции в медицинских учреждениях» [21].
Рисунок 1 — Микрокюветы с раствором антикоагулянта
Приготовление мазков крови. Для изготовления мазка крови использовались тщательно обезжиренные предметные стёкла. Мазок крови готовился шлифованным стеклом с идеально ровным краем, ширина которого была приблизительно на 2-3 мм уже предметного стекла. К куполу свеже выпущенной из прокола капли было сделано прикосновение предметным стеклом на расстоянии 1,5-2 см от его края, не касаясь кожи в месте прокола. Размер капли на стекле не менее 2-3 мм в диаметре. Шлифованным стеклом, приставленным к предметному под углом 45°, быстрым движением справа налево был сделан мазок. Критерием правильности выполненного мазка является его полупрозрачность и желтоватый цвет. Техника приготовления мазка крови представлена на следующем рисунке.
Рисунок 2 — Техника приготовления мазка крови
Проведение анализов на гематологическом анализаторе. Для исследований использовался гематологический анализатор SISMYX-500. Взятую кровь в миниёмкастях тщательно перемешали и поместили в загрузочную часть аппарата. Предварительно была проведена калибровка данного аппарата, которая заключалась в проведении полного анализа микрокюветы с дистиллированной водой. Определение параметров исследуемой крови протекает в автономном режиме, без непосредственного участия человека. По завершению цикла исследования сняли выданные аппаратом результаты [22].
Изображение аппарата SISMYX-500, и момента отбора пробы для анализа, представлены на рисунке 3.
Фиксация мазков крови. Данный этап предохраняет форменные элементы от содержащейся в красителях воды, под влиянием которой в не фиксированных мазках происходит гемолиз эритроцитов и изменяется морфология лейкоцитов.
Фиксатор также вызывает коагуляцию белков и тем самым закрепляет препарат на стекле. В качестве фиксирующей жидкости использовали раствор эозинметиленового синего по Май-Грюнвальду. Высушенные мазки опускались в широкогорлую банку с фиксатором на 3-5 минут. Далее пинцетом мазки были извлечены и высушены на воздухе.
Рисунок 3 — Гематологический анализатор SISMYX-500
Окраска мазков крови. Фиксированные сухие мазки поместили в контейнер, который опустили в кювету с рабочим раствором красителя и выдержали в нём экспозицию в 30 минут.
Затем, контейнер был перенесён в кювету с водопроводной водой, а затем в вертикальный штатив для сушки. В качестве красящего раствора был использован краситель по прописи Романовского-Гимзы. В состав красителя входят: азур-2 (смесь равных количеств азура-1 и метиленового синего) и эозин. Критериями правильности данной окраски являются розово-оранжевые гранулы эозинофилов, светло-розовый цвет эритроцитов, нейтрофильная зернистость фиолетового цвета.
Подсчёт лейкоцитарной формулы производят с помощью иммерсионной системы микроскопа с увеличением Ч630. Для работы используется специальное иммерсионное масло, каплю которого наносят на препарат. Удобный обзор препарата настраивают с помощью микро- и макровинтов. Для регистрации клеток при подсчёте лейкоцитарной формулы использовался счётчик лабораторный СЛ-1.
Это простейший арифмометр снабжённый клавишами, обозначенными буквами для подсчёта соответствующих видов лейкоцитов, изображён на рисунке 4.
Рисунок 4 — Счётчик лабораторный СЛ-1
Подсчёт лейкоцитов производился в тонкой части мазка, где эритроциты располагаются одиночно. Препарат просматривают по зигзагообразной линии («линии Меандра») в количестве 3-5 полей зрения. Когда сосчитано 100 клеток, счётчик издаёт характерный сигнал, что означает окончание подсчёта лейкограммы данного препарата. Подсчитывались только целые, не разрушенные клетки.
Статистическая обработка результатов исследования
Для оценки влияния физической нагрузки на состояние показателей периферической крови использовались результаты общего анализа крови до и после физической нагрузки.
В ходе исследования нами были вычислены среднее арифметическое, стандартное отклонение, стандартная ошибка, коэффициент вариации по продуктивности и устойчивости внимания, а также по показателям темпа выполнения.
Средняя арифметическая вычисляется по формуле:
, (4)
где Xi — значение признака, варианта;
n — число значений.
Стандартное отклонение:
, (5)
где x2 — сумма квадратов центральных отклонений, т. е. квадратов разностей между каждым значением и средней арифметической;
n — 1 — число степеней свободы, равное числу объектов в группе без одного.
Ошибка стандартного отклонения:
(6)
где — дисперсия;
n — объём выборки.
Коэффициента вариации:
, (7)
где у — стандартное отклонение;
м — средняя арифметическая.
В результате обработки полученного материала, был проведён статистический анализ, построены графики зависимости показателей концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, от воздействующего на них фактора физической нагрузки, а также таблицы результатов дисперсионного анализа, для каждого из исследуемых показателей.
Статистическая обработка результатов исследований выполнена с использованием прикладных программ MS Excel 2007 и Statistica for Windows 6.0. Оценка достоверности различий осуществлялась на основе критерия Фишера. Влияние физической нагрузки на показатели крови оценено методом однофакторного дисперсионного [23].
Источник