Пцр анализ крови при туберкулезе легких
Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.
ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.
Суть метода
С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:
- Кровь.
- Слюна.
- Мокрота.
- Выделения из половых органов.
- Смывная жидкость бронхов.
- Желудочный сок.
Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.
ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.
Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:
- Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
- Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
- Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.
Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.
ПЦР-исследование туберкулеза
ПЦР-анализ на туберкулез является самым информативным методом диагностирования этого заболевания. Относительно туберкулеза этот метод позволяет не только установить наличие микобактерий в организме, но и определить к какому виду они принадлежат.
Результат ПЦР диагностики может быть простой и расширенный. В простом результате указывается только наличие/отсутствие микобактерии. Расширенный результат дает представление о дополнительных параметрах протекания заболевания. Правильно понять, что написано в результате анализа ПЦР может только фтизиатр.
Показания для проведения ПЦР-исследования туберкулеза
ПЦР-диагностика туберкулеза не проводится всем без исключения. Это объясняется дороговизной реактивов и недоступностью проведения исследования в некоторых отдалённых районах (в таких местах пользуются другими методами диагностики).
Показаниями для проведения ПЦР-исследования являются:
- Длительный контакт с больным туберкулезом.
- Беременность. ПЦР крови на туберкулез является самым быстрым и безопасным методом для беременной женщины.
- Экстренная ситуация. Например, необходимость срочного оперативного вмешательства, при котором нужно точно установить наличие/отсутствие туберкулеза в организме.
- Аллергическая реакция на туберкулиновые пробы.
- ВИЧ-инфекция.
- Невозможность диагностирования заболевания другими способами, при наличии явных признаков туберкулеза.
- Неоднозначные симптомы, которые не позволяют создать четкую клиническую картину заболевания (болезни верхних дыхательных путей, сопровождающиеся большим количеством мокроты, кровохарканьем и пр.).
Метод ПЦР, при всей своей сложности и дороговизне, проводится и расшифровывается в течение нескольких часов. Что делает этот метод золотым стандартом при диагностике туберкулезной инфекции.
Забор материала
Забор материала — это первый этап при выполнении ПЦР-исследования. Для того, чтобы выполнить качественный анализ, нужно соблюдать определенные правила по сбору материла:
- Для ПЦР мокроты на туберкулез нужно тщательно провести туалет полости рта. Делать это нужно вечером и утром перед анализом. Все это время не есть. Вечером выпить муколитическое средство для лучшего отхождения мокроты.
- Перед сдачей крови на ПЦР нужно не употреблять пищу в течение 8 часов. Лучше всего производить забор крови утором натощак. Курить перед забором крови также нельзя. Кровь берется из вены на локтевом сгибе руки в стерильную пробирку. В эту же емкость добавляется антикоагулянт, чтобы кровь оставалась жидкой. Смешивать антикоагулянт с кровью нужно очень аккуратно, не делая резких движений. Если кровь была взята не в лабораторных условиях, то она должна быть предоставлена лаборанту до истечения пятичасового срока. Иначе результат может быть не точным.
- Моча собирается в стерильную емкость утром, до приема пищи. Перед сбором мочи необходим тщательный туалет промежности.
- Остальные виды жидкостей (смывы с бронхов, спинномозговая жидкость) может собрать только специалист в условиях стационара.
- Перед забором жидкостей на ПЦР-исследование запрещено принимать некоторые препараты (например, прием некоторых антибиотиков нужно прекратить за две недели до забора материала).
- Требования к лаборатории, в которой проводится забор анализов на ПЦР очень строгие. Лаборатория должна быть стерильна, чтобы не произошло перекрестное загрязнение материала. В этом случае результаты могут быть ложноположительными.
ПЦР-тест на туберкулез — высокоточный информативный анализ. И требования к его проведению крайне строгие. Чтобы анализ получился, нужно соблюдать регламент.
Требования к ПЦР-лаборатории
Для работы в ПЦР-лаборатории приглашаются специально обученные врачи: бактериологи, вирусологи, микробиологи. Все они прошли дополнительное обучение для работы на сложном оборудовании.
Лаборатория должна иметь лицензию на выполнение работ связанных с бактериологически-опасными вирусами и бактериями.
В самой лаборатории должны быть выделены такие рабочие зоны:
- Зона приемки и сортировки проб.
- Зона подготовки проб. В этом помещении выделяются нуклеиновые кислоты из образцов материала.
- Зона проведения реакционных проб.
- Зона для учета результатов и расшифровки анализов.
Все помещения располагают последовательно. Допуск в эти зоны разрешен только работающим там сотрудникам, которые при входе соблюдают правила личной защиты от бактерий и вирусов.
Лучше, если есть возможность расположить лабораторию в отдельно стоящем здании с собственной системой вентиляции.
В лаборатории соблюдаются стерильные условия работы, чтобы избежать перекрестного загрязнения проб. Даже если один фрагмент чужеродной ДНК попадет в исследуемый материал, ПЦР его размножит, и анализ получится ложноположительным.
В каждой зоне лаборатории имеется свой набор оборудования и посуды для проведения исследований. Также имеются свои холодильники, которые не могут быть использованы в других целях, кроме хранения материала конкретной зоны исследований.
Использованные расходные материалы и остатки биологического материала уничтожаются специальными способами, в соответствии с инструкциями.
Плюсы ПЦР-диагностики
ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:
- Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
- Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
- ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
- С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
- Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
- Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
- Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
- ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
- Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.
Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.
Минусы ПЦР-диагностики
Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:
- Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
- Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
- При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
- Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
- Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.
Где пройти ПЦР-исследование на туберкулез
ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.
Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями к содержанию лаборатории (реактивы, обработка).
Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).
Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.
В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.
Источник
Самыми опасными для самого больного и окружающих являются инфекционные заболевания, протекающие в скрытой форме. Отсутствие явных симптомов не позволяет начать своевременное лечение. При этом болезнь прогрессирует, а больной является заразным для окружающих. Из таких заболеваний самым распространенным является туберкулез. По статистике около трети людей даже в высокоразвитых странах инфицированы. Поэтому так важно проводить своевременную диагностику этого заболевания. Наряду с общеизвестными пробами Манту, диаскинтестом и флюорографией для выявления туберкулеза применяется клинический анализ крови.
Зачем делать этот тест
Туберкулез – это очень заразное инфекционное заболевание. Передается оно воздушно-капельным путем и вызывается палочкой Коха. Эти микобактерии очень устойчивы, они сохраняются во внешней среде несколько месяцев, а при попадании в организм человека начинают постепенно размножаться. Чаще всего туберкулез локализуется в легких, но может поражать другие органы.
Опасность этой болезни в ее хроническом течении, причем на начальном этапе, часто ничем не проявляет себя. Эта инфекция очень заразна, больной может не подозревать, что инфицирован, но для окружающих он будет опасен. А лечить туберкулез очень сложно, так как бактерии устойчивы к внешним воздействиям.
Вылечить туберкулез легче всего в том случае, когда он диагностирован на начальном этапе. Поэтому так важно вовремя выявить эту болезнь. Во всем мире обязательно проводят профилактические обследования на туберкулез.
Обычно диагностика у детей проводится с помощью туберкулиновой пробы – реакции Манту или диаскинтеста. Но не всегда эти исследования достоверны. Они не проводятся при обострении хронических заболеваний, при аллергических реакциях или кожных болезнях, а также при эпилепсии. После 14 лет и для взрослых основным методом выявления туберкулеза является флюорография грудной клетки. Если при этом обследовании выявлены какие-то отклонения или есть подозрение на инфицирование, врач назначает более тщательную диагностику.
Диагностика туберкулеза у детей чаще всего проводится с помощью реакции Манту
Это делается для того, чтобы вовремя начать лечение при выявлении инфекции, а также исключить риск заражения других людей, так как туберкулез очень заразен. Сдавать кровь рекомендуется при любом подозрении на эту болезнь, а также вместо проведения реакции Манту в том случае, когда к ней имеются противопоказания. Исследуется кровь также для контроля эффективности лечения при туберкулезе.
Показания
Анализ крови на туберкулез не требует специальной подготовки, не имеет противопоказаний. Результат можно получить уже на следующий день. Этот метод диагностики позволяет точнее всего выявить наличие инфекции в организме. Чаще всего проводят его при положительной реакции на туберкулиновую пробу. Но сдавать кровь на туберкулез требуется также после контакта с инфицированным человеком или при подозрении на внелегочный туберкулез.
Важно: такую диагностику регулярно проходят больные с ВИЧ-инфекцией, сахарным диабетом, после пересадки органов.
После того, как ребенку сделали прививку БЦЖ, проводить Манту или диаскинтест нецелесообразно, так как они покажут ложноположительные результаты. При этом для диагностики рекомендуется делать анализы крови.
Рекомендуется сдать кровь на выявление палочки Коха также в том случае, когда появляются симптомы этого заболевания:
- кашель, не прекращающийся дольше 3 недель;
- постоянная субфебрильная температура;
- сильная слабость и снижение работоспособности;
- беспричинная потеря веса;
- повышенная потливость, особенно по ночам;
- черты лица заостряются;
- больной бледен, но на щеках неестественный румянец;
- увеличиваются лимфоузлы.
Когда пациент обращается к врачу с такими жалобами, его направляют к фтизиатру. Это врач, занимающийся лечением туберкулеза. Он назначает больному комплексное обследование, которое обязательно включает анализы крови.
Виды анализов
Для диагностики туберкулеза существует несколько видов анализов. Название каждого из них отражает суть исследования, но многим людям это ничего не говорит. Поэтому лучше выяснить у врача, с какой целью назначается тот или иной анализ и что он позволяет узнать. В зависимости от риска инфицирования, общего состояния здоровья больного и его возраста назначается один из анализов:
- общий или биохимический;
- квантифероновый тест;
- иммуноферментный или ИФА;
- ПЦР или полимеразная цепная реакция.
Все эти анализы разные, они могут выявить инфицирование на начальном этапе, скрытую форму туберкулеза, его активную стадию. Они применяются также при лечении уже диагностированной болезни. Но, какой анализ сделать в каждом конкретном случае, может решить только врач. Иногда требуется провести комплексную диагностику, только несколько методов совместно позволяют точно определить наличие инфекции и место ее локализации.
Для диагностики туберкулеза используются разные виды анализов
Общий анализ
Такое исследование проводится регулярно при туберкулезе легких и других органов. Общий анализ крови не может выявить наличие палочки Коха в организме, но он позволяет оценить состояние здоровья пациента. Такое исследование необходимо для того, чтобы отслеживать, как организм сопротивляется инфекции, эффективно ли проводимое лечение.
Оценивая общий анализ крови больного, врач прежде всего обращает внимание на количество лейкоцитов, лимфоцитов и скорость оседания эритроцитов. Уровень лейкоцитов обычно при туберкулезе повышается, а количество лимфоцитов уменьшается. При активной форме болезни в крови также будет повышенный уровень нейтрофилов. Но наиболее информативным является показатель СОЭ. В норме он не бывает выше 20-30 единиц. А при туберкулезе скорость оседания эритроцитов возрастает до 50 единиц и выше.
Кроме того, иногда врачи при подозрении на туберкулез назначают биохимический анализ крови. Он информативен для выявления острой формы заболевания. При этом будут повышены показатели белка, мочевины, холестерина и лизоцима. Такой анализ также применяется для выявления особых форм туберкулеза, например, при поражении печени. В крови при этом выявляется повышение количества билирубина, а также ферментов АЛАТ и АСАТ.
Квантифероновый тест
Особенность этого анализа в том, что он позволяет определить наличие в крови антител к микобактериям туберкулеза. Несмотря на то, что эта диагностика точно показывает, инфицирован больной или нет, она не позволяет узнать, какой орган поражен инфекцией. Кроме того, с помощью квантиферонового теста нельзя определить, находится болезнь в активной фазе или скрытой. Иногда у больного с уже пролеченным туберкулезом такой тест показывает положительный результат.
Когда необходимо сделать анализ крови на туберкулез вместо Манту, назначают чаще всего именно квантифероновый тест. Он не дает ложных результатов после прививки БЦЖ, так как эта вакцина не вызывает появление этих специфических интерферонов.
Важно: этот анализ не имеет противопоказаний и не вызывает негативных реакций у больного.
Особенность квантиферонового анализа в том, что выявляются в крови особые интерфероны, которые вырабатываются только при наличии в организме микобактерий туберкулеза. Называется этот анализ тестом, так как является альтернативой диаскинтесту, но проводится не под кожей больного, а в пробирке. Суть его в том, что к исследуемой плазме крови добавляют антигены. Потом оценивается реакция иммунной системы организма, проявляющаяся в выработке интерферонов.
ИФА
Иммуноферментный анализ более точен. Это тоже исследование крови на антитела к туберкулезу. Но, кроме этого, с его помощью оценивается качество и количество различных элементов крови. Называют его еще серологическим исследованием крови. При этом определяется наличие определенных иммуноглобулинов, которые вырабатываются иммунной системой при инфицировании.
Но этот анализ может быть неточен, он не всегда позволяет выявить микобактерии туберкулеза. На начальном этапе болезни иммуноглобулины еще не вырабатываются, поэтому в крови не определяются. Не используют ИФА вместо реакции Манту после прививки БЦЖ, так как он тоже может показать ложный результат. Кроме того, недостоверным он будет при иммунодефиците.
Поэтому для диагностики его используют редко, чаще всего имунноферментный анализ применяется для оценки эффективности лечения туберкулеза. Часто назначают его при наличии положительной реакции на пробу Манту.
ПЦР
ПЦР, или полимеразная цепная реакция, – это сейчас самый точный метод диагностики туберкулеза. Поэтому его часто назначают при наличии спорных результатов диагностики или при подозрении на инфицирование. С помощью ПЦР можно со 100% уверенностью определить болезнь.
Это довольно сложное обследование, основанное на оценке различных фрагментов ДНК в крови. Он позволяет обнаружить даже малое количество бактерий в крови. Кроме того, исследуя методом ПЦР другие жидкости организма, например, мокроту, мочу, внутрисуставную жидкость, можно точно определить место локализации болезни.
Полимеразная цепная реакция проводится по сыворотке крови. Обычно анализ проходит в несколько этапов. Сначала исследуют плазму под микроскопом, пытаясь выявить палочку Коха. Потом с помощью разных реактивов и изменения температуры получают генетический материал. Исследуя ДНК, можно определить, присутствует ли бактерия в организме и в каких количествах.
Анализ с помощью ПЦР является самым сложным, но наиболее достоверным для диагностики туберкулеза
Благодаря высокой точности и безопасности этого исследования его проводят в любом возрасте. Именно ПЦР чаще всего назначается при невозможности проведения реакции Манту или при подозрении на туберкулез у взрослых людей. Этот анализ позволяет быстро диагностировать заболевание. С его помощью можно определить место локализации инфекции, а также вовремя выявить наличие рецидивов болезни. Метод полимеразной цепной реакции позволяет оценить эффективность проводимого лечения.
Особенности диагностики крови
Выявление туберкулеза по анализу крови имеет много преимуществ перед другими методами обследования. Прежде всего, он самый точный и достоверный. Вероятность ложных результатов и необходимость в повторном обследовании при такой диагностике очень низкая.
Внимание: проводиться они могут даже после прививки БЦЖ, при обострении хронических заболеваний или при наличии других противопоказаний к другим методам диагностики. Эти анализы не оказывают негативного воздействия на организм.
Но такие анализы сейчас делаются только платно, так как они не входят в перечень обязательных. Поэтому не всем они доступны. Например, кватифероновый тест в Москве можно сделать за 2000-3500 рублей. Поэтому чаще всего детям для профилактики инфицирования проводят тест Манту, а взрослым – флюорографию.
Расшифровка анализов крови должна проводиться врачом. Обязательно нужно при этом учитывать другие результаты диагностики, возраст больного, наличие хронических заболеваний и общее состояние его здоровья. Несмотря на это, подобные методы диагностики туберкулеза менее субъективны, чем реакция Манту и диаскинтест.
Выводы
Анализы крови на туберкулез являются самым достоверным и точным методом диагностики этого заболевания. Особенно информативны они для выявления латентной инфекции, при которой больной является бактерионосителем и может представлять опасность для окружающих. Подобная диагностика не имеет противопоказаний и не вызывает никаких негативных реакций организма. Но обязательно они назначаются только при подозрении на туберкулез или при положительных результатах распространенных тестов: Манту или флюорографии.
Источник
