Пцр анализ крови на хламидиоз отрицательный
От точности и скорости диагностики напрямую зависит, как быстро можно будет начать лечение хламидиоза. Это заболевание не дает специфичных симптомов, поэтому лабораторные методы диагностики выходят на первый план для определения возбудителя.
Метод полимеразной цепной реакции — один из самых современных методов диагностирования. Врачи оценили его точность и скорость получения результатов, поэтому часто назначают этот тип анализа в ходе детального обследования и выявления хламидиоза.
Что представляет собой анализ
Данный тип исследования используют для всех возрастных категорий, его можно назначать даже новорожденным детям, не говоря о взрослых мужчинах и женщинах.
Объектом исследования при анализе является хламидия трахоматис — патогенный микроорганизм, присутствие которого в организме вызывает развитие хламидиоза.
По международной системе классификации заболеваний МКБ-10, которую используют медики всего мира, хламидийной инфекции присвоен код А74.
Болезнь может давать различные симптомы, а может протекать абсолютно бессимптомно, но ПЦР-исследование способно выявить бактерию даже в этом случае, чем не могут похвастаться остальные инструментально-клинические методы.
Суть анализа заключается в том, чтобы точно скопировать и быстро размножить фрагменты цепочки ДНК того микроорганизма, который стал причиной заболевания. Чтобы ускорить этот процесс, в лаборатории применяют специальные ферменты, способные активизировать постройку новых генетических цепочек.
Результатом таких воспроизведений становится увеличение генетического материала в пробе, доходящее до миллиона раз, что значительно облегчает его выявление. После того, как ДНК микроорганизма обнаружено, его тщательно исследуют под микроскопом и безошибочно определяют. Определение выполняет лаборант, сравнивая полученный образец с эталонными, имеющимися в лаборатории, которые заказывают в исследовательских институтах.
Нередко ПЦР используется при поиске причин бесплодия или неспособности к вынашиванию плода или осложнениях в ходе беременности. Также человек может пожелать провести диагностику после незащищенного полового акта с партнером, в здоровье которого не уверен.
Плюсы и минусы метода ПЦР
Среди неоспоримых преимуществ анализа выделяются такие:
- высокая чувствительность методики (не менее 95%);
- возможность применения в инкубационном, латентном или хроническом периоде хламидиоза, а также при носительстве;
- перечень материала для исследования строго не определяется, поэтому при невозможности использовать, к примеру, кровь можно легко заменить ее мокротой или слизью с половых органов;
- скорость получения данных после анализа (в среднем протокол выдают на руки на следующий день, но при острой необходимости возможно получить его и в день взятия пробы);
- анализ является прямым и позволяет выявить саму бактерию хламидии трахоматис, а не косвенные показатели ее присутствия — антитела.
Немаловажным фактором является то что полимеразная цепная реакция во время обследования позволяет одновременно выявлять некоторые сопутствующие заболевания, имеющие общую симптоматику с хламидиозом. Такими инфекциями являются практически все урогенитальные инфекции, многие вирусные и бактериальные болезни (уреаплазмоз, кандидоз, микоплазмоз, цитомегалия и пр.).
К недостаткам относятся:
- высокие требования по санитарным нормам к лаборатории паолимеразной цепной реакции, которые необходимо соблюдать, чтобы не получить ложноположительных результатов из-за загрязнения пробы;
- незначительная вероятность ложноотрицательного результата (для того, чтобы избежать этого явления необходимо тестирование сразу нескольких видов биоматериала);
- сложность интерпретации результатов, которые должен оценивать квалифицированный специалист, учитывая динамику хламидиоза и обладая достаточными знаниями в сфере иммунологии и инфекционных болезней;
- высокая стоимость исследования, что объясняется особыми требованиями к оснащению лаборатории и квалификацией персонала.
Несмотря на наличие недостатков, в настоящее время ПЦР признан самым удачным в плане диагностики хламидиоза.
Какой материал необходимо сдать для анализа
Для того, чтобы успешно провести тестирование образца при помощи полимеразной цепной реакции на хламидии, достаточно небольшого объема материала, что является еще одним преимуществом. Для диагностики подходит большинство биологических жидкостей, кровь и образцы мягких тканей.
У мужчин для определения хламидий берут:
- мазок из уретры;
- мазок из конъюнктивы;
- сперму;
- мочу;
- жидкость из предстательной железы;
- синовиальную жидкость.
Материалом, который берут для исследования у женщин, является:
- соскоб из уретры;
- эпителий из цервикального канала;
- моча;
- мазок из конъюнктивы;
- синовиальная жидкость.
Кровь берется из локтевой вены на руке, достаточно 10-15 мл. В современных лабораториях для этого используют специальные вакуумные системы, которые предотвращают попадание посторонних микробов в образец, увеличивая тем самым точность результатов.
Если необходим образец синовиальной жидкости, то делают пункцию суставного аппарата специальной толстой иглой с диаметром 0,8 мм. Введение этой иглы проходит болезненно, поэтому иногда перед введением применяют местное обезболивание.
Биоматериал могут отобрать в лаборатории, а могут делать отбор проб непосредственно в поликлинике или больнице, после чего направлять его на тестирование в ПЦР лабораторию. Некоторые частные диагностические центры за дополнительную плату берут образцы для исследования на дому у пациента.
Для оценки заражения околоплодных вод хламидиями во время беременности отбирают небольшое количество амниотической жидкости. Делают это только при острой необходимости, так как методика несет небольшую опасность для протекания беременности. Для этого производят прокол брюшной полости и под контролем УЗИ отбирают необходимое количество околоплодных вод.
Для всех беременных при постановке на учет в женскую консультацию назначают обследование на наличие хламидий в крови, для чего проводят ПЦР-тестирование, поскольку хламидиоз является тяжелой TORCH-инфекцией, способной нарушить ход беременности и осложнить развитие плода. Для такого типа обследования всегда используют кровь из вены.
Подготовка к анализу ПЦР
Правильная подготовка к обследованию на хламидии — одно из основных требований для получения корректных и точных результатов.
Для каждого типа биоматериала предусматривается специфичная подготовка. О всех требованиях, необходимых в процессе подготовки к ПЦР тестированию, пациенту должен подробно рассказать специалист, который выдает направление.
Перед сдачей мазков или мочи женщинам запрещено:
- на протяжении 3 суток пользоваться внутривагинальными свечами;
- применять вагинальные спринцевания, орошения или тампоны, пропитанные любыми настоями или отварами трав.
Сдавать мазок для ПЦР анализа на хламидиоз во время месячных нельзя.
Перед сдачей мазков или мочи как мужчинам, так и женщинам запрещается:
- ходить в туалет меньше, чем за 3 часа до отбора;
- выполнять гигиенические процедуры с применением дезинфицирующих или антибактериальных средств;
- заниматься сексом на протяжении 3-х предшествующих суток.
Для девочек возрастом до 14 лет мазок могут брать не из влагалища, а из слизистой оболочки преддверия влагалища, чтобы не повредить девственную плеву.
Перед сдачей крови для ПЦР на хламидии нужно не употреблять спиртные напитки, несколько дней не есть жирную пищу и жареные блюда, а также не курить за несколько часов до манипуляции.
Сдавая мочу, необходимо помнить, что показательнее всего — первая утренняя порция, первые и последние капли отбрасываются. Контейнер обязательно должен быть стерильным. Для исследования нужно предоставить около 50 миллилитров мочи.
Перед отбором материала любого типа для определения хламидий нельзя принимать антибиотики или уросептики. Это возможно только в том случае, если исследование проводится для определения эффективности лечения, в остальных случаях применять такие препараты на протяжении двух недель перед ПЦР-диагностикой запрещено.
Расшифровка результатов
Исследование на наличие хламидий при помощи полимеразной цепной реакции является качественным методом, то есть он показывает не количество бактерий в пробе, а их присутствие или отсутствие.
В протоколе ПЦР анализа указывается фамилия пациента, дата исследования, название бактерии (Chlamydia trachomatis) и полученный результат: положительный («обнаружено») или отрицательный («не обнаружено»). Иногда их описывают при помощи значков «+» или «-».
Если получен положительный результат, то это означает, что в организме присутствует острый процесс, или пациент является носителем заболевания.
В норме отрицательный результат означает, что в пробе не обнаружены такие бактерии, то есть, он здоров.
Если у взрослого человека обнаружена бактерия хламидия трахоматис, это означает, что половому партнеру обязательно нужно обследоваться даже в том случае, если клинических проявлений хламидиоза у него нет. Отсутствие симптомов не гарантирует отсутствие болезни, у него может быть бессимптомная форма, которая не исключает осложнений и возможности заразить других людей.
В завершение следует отметить, что ПЦР является одним из основных средств выявления хламидиоза в настоящее время, тогда как другие методы преимущественно используют в качестве дополнительных методов.
Об особенностях диагностики хламидиоза методом ПЦР на данном видео рассказывает врач-венеролог.
Источник
Анализ на хламидиоз требуется для подтверждения присутствия хламидий в организме человека.
После идентификации бактерий тем или иным способом может быть сразу же назначено лечение.
Какие анализы на хламидиоз бывают?
Есть несколько лабораторных исследований на хламидии.
Некоторые из них почти не используются.
Бывают такие анализы:
- микроскопия;
- прямая иммунофлюоресценция (ПИФ);
- ПЦР;
- бак посев;
- иммуноферментный анализ (ИФА).
Микроскопический метод предполагает изучение препарата с окраской по Романовскому-Гимзе.
Он часто дает ошибочные результаты.
Поэтому может использоваться разве что как скрининговое исследование.
Микроскопия не применяется как подтверждающий тест.
Почти не используется в клинической практике ПИФ.
Основной диагностики считается ПЦР.
Иногда применяется культуральный метод и анализ крови на антитела.
Откуда берут анализы на хламидиоз у женщин?
Всё зависит от проводимого исследования, клинических симптомов и анамнестических данных.
Берутся анализы их зоны предполагаемой локализации возбудителя.
В подавляющем большинстве случаев у женщин это шейка матки.
Чуть реже хламидии определяются в уретре.
Иногда берут:
- вагинальный мазок;
- отделяемое конъюнктивы;
- соскоб из прямой кишки;
- мазок из полости рта и горла.
Поводом для взятия материала из экстрагенитальных структур могут быть:
- признаки воспаления глотки, ануса, конъюнктивы;
- анамнестические данные, указывающие на анальный или оральный секс с носителем хламидиоза.
Для ПЦР может использоваться также моча или любой другой клинический материал.
Для ПИФ берут цервикальный или уретральный мазок.
Откуда берут анализы на хламидиоз у мужчин?
В большинстве случаев берут соскоб из уретры.
Реже в качестве клинического материала используется:
- моча;
- эякулят;
- секрет простаты;
- отделяемое конъюнктивы;
- соскоб слизистой ротовой полости и глотки.
Из ануса могут брать мазки у гомосексуалистов, если в анамнезе имеются указания на анальный секс.
Врач в процессе обследования пациента осматривает все органы, где может присутствовать инфекция.
Решение о взятии дополнительных мазков может быть принято, исходя из выявленных симптомов.
ПИФ на хламидиоз
Методика предполагает обработку биоматериала пациента моноклональными антителами.
Они помечены флюоресцеином.
Для визуализации препарата используется люминесцентный микроскоп.
При положительном результате хламидийные антигены обнаруживаются по характерному свечению.
Они выглядят как ярко-зеленые тельца.
Антигены хорошо заметны, так как цитоплазма окрашивается в оранжевый цвет.
Просматривают минимум десять полей зрения.
В каждом поле должно обнаруживаться не меньше 5 эпителиальных клеток.
Критерии диагноза:
- размер внутриклеточных включений – от 200 до 300 нм;
- зеленый цвет;
- форма правильного круга;
- выявлено больше 5 телец.
Препарат считается непригодным к исследованию, если в нем мало цилиндрических клеток.
В плоском эпителии хламидии не выявляют.
Также поле зрения может быть закрыто эритроцитами, слизью, из-за чего невозможно визуализировать включения.
В некоторых случаях возможна неспецифическая флюоресценция.
Диагноз не ставят, если форма, цвет и размеры хламидийных включений не соответствуют вышеописанным критериям.
Преимущества ПИФ:
- быстрый;
- простой;
- высокоспецифичный (98% относительно бак посева).
Недостатки:
- субъективная оценка результатов, как следствие возможность ошибки из-за человеческого фактора;
- низкая чувствительность – от 55 до 75%;
- невозможность автоматизации;
- может исследоваться материал, полученный только из уретры или цервикса.
На практике это означает, что:
- результат зависит во многом от способа приготовления препарата и учета количества выявленных элементарных телец;
- нельзя обнаружить хламидий в моче, эякуляте, отделяемом глаза и т.д.;
- не выявляются хламидии при их небольшом количестве;
- сложно диагностировать хроническую форму заболевания.
Методика почти не применяется в силу перечисленных недостатков.
Она уступает ПЦР по всем параметрам, кроме скорости получения результатов.
Хламидиоз: посев на чувствительность
Посев остается самым специфичным тестом на хламидиоз.
Он никогда не дает ложноположительных результатов.
Метод хорош тем, что в процессе исследования выявляются живые хламидии.
Это 100% подтверждения присутствия данной инфекции в организме.
Но при этом чувствительность диагностического теста оставляет желать лучшего.
По оценкам разных авторов она составляет от 40 до 70%.
Это означает, что в 30-60% случаев пациенты с хламидиозом получат «чистые» результаты анализа.
Связано это с тем, что хламидия – внутриклеточный паразит.
Её относительно сложно культивировать.
Для этого требуется предварительно подготовленная клеточная культура.
Хламидии очень чувствительны к условиям транспортировки и хранения биоматериала.
Они неустойчивы во внешней среде.
Транспортироваться должны быстро и в холоде, при температуре от 2 до 6 градусов.
Нарушение правил подготовки тоже часто влечет за собой ложноотрицательный результат.
Убить хламидий могут:
- антибиотики;
- лубриканты;
- компоненты тампонов;
- спринцевания;
- спермициды и т.д.
Поэтому в рутинной практике посев на хламидии не делают.
Эту методику используют в таких случаях:
- судебно-медицинская экспертиза;
- сексуальное насилие;
- исследовательские цели;
- необходимость оценки чувствительности бактерий к антибиотикам.
В ходе культивирования получают жизнеспособную культуру хламидий.
Полученным от больного материалом заражают клеточную культуру.
Через 2-3 суток из неё делают препарат, который рассматривают под микроскопом.
Предварительно обрабатывают раствором флюоресцирующих антител.
Выявление хотя бы одного хламидийного внутриклеточного включения дает основание считать результат культурального исследования положительным.
Мазок анализ на хламидиоз ПЦР
Основным методом диагностики хламидийной инфекции остается ПЦР.
Это исследование обладает массой достоинств и почти лишено недостатков.
Преимущества теста:
- быстрый результат (проведение исследования занимает несколько часов);
- автоматизация (возможность обследования большого количества пациентов);
- отсутствие человеческого фактора в процессе проведения анализа;
- высокая чувствительность исследования – оно дает положительный результат даже при минимальном количестве хламидий в материале;
- можно диагностировать хронические формы хламидиоза;
- исследуется любой клинический материал, где может находиться возбудитель;
- высокая специфичность теста (очень редко встречаются ложноположительные результаты).
Методика основана на определении ДНК возбудителя.
Происходит множественное удвоение генетического материала.
Фрагмент ДНК сравнивается с эталоном.
Возможно проведение количественного и качественного теста.
При количественном исследовании определяется не только факт присутствия ДНК хламидий.
Оценивается также количество копий генетического материала.
Но практического значения количественная ПЦР почти не имеет.
Ведь хламидии относятся к патогенным микроорганизмам.
Соответственно, их выявление даже в минимальном количестве – это повод для установления диагноза.
После лечения обнаружение бактерий, вне зависимости от количественных показателей, является показанием к назначению повторного курса терапии.
Анализ крови на хламидиоз
Серологические исследования применяются нечасто.
Они не всегда дают точные результаты.
Хотя некоторые преимущества у этого вида диагностики хламидиоза имеются.
Поэтому методика иногда используется.
Но она может применяться лишь как дополнение к прямым методам обнаружения хламидии:
- ПИФ;
- ПЦР;
- или культуральному исследованию.
Потому что ИФА часто дает ложноположительные результаты.
Серологические тесты считаются непрямыми, потому что они основаны на выявлении не самих хламидий, а антител.
Они вырабатываются иммунной системой.
Это факторы специфического иммунитета.
К отдельным микроорганизмам выявляются отдельные антитела.
Они способны взаимодействовать с их антигенами.
Этот принцип используется для диагностики.
Берется кровь пациента и смешивается с антигенами хламидий.
Затем оценивается реакция.
В ходе исследования определяется три типа иммуноглобулинов.
По их наличию и титру оценивается стадия инфекционного процесса.
Наибольшее клиническое значение имеет определение иммуноглобулинов М и G.
IgG появляются позже, и долго присутствуют в крови даже после излечения заболевания.
IgМ появляются рано, но через 2 месяца после инфицирования хламидиозом уже перестают определяться в сыворотке крови.
При активной инфекции титр антител нарастает в динамике.
При успешном лечении он снижается в 4 и более раза за 2 недели.
Анализ крови на иммуноглобулины используется в таких случаях:
- скрининговое исследование (например, при обследовании беременных);
- подозрение на развитие осложнений (для установления роли хламидий в прогрессировании воспалительных процессов тазовых органов);
- с целью установления стадии инфекции;
- для определения источника инфицирования (давность заражения можно сопоставить со временем проведения полового контакта с определенным партнером);
- с целью оценки результативности лечения;
- для оценки клинического течения хламидийной инфекции.
Ложноположительный анализ на хламидиоз
Такими анализами считаются те, что дают положительный результат у пациентов, не страдающих хламидийной инфекцией.
Они возможны при любых диагностических тестах, за исключением бак посева.
Но встречаются очень редко.
При проведении ПЦР частота ложноположительных реакций не превышает 1%.
При использовании ПИФ она составляет 2%.
ПЦР может быть ложноположительным, если:
- произошла контаминация биоматериала (загрязнение);
- выявлен фрагмент ДНК, являющийся общим для нескольких видов хламидий.
Чаще всего ошибочно показывает хламидиоз ИФА.
Наличие в крови IgG говорит не только о существующей, но и перенесенной в прошлом инфекции.
Ложноотрицательный анализ на хламидиоз
Таким считается анализ, который дает отрицательный результат у человека, зараженного хламидиями.
Вероятность его высокая при любых диагностических тестах, за исключением ПЦР.
Она составляет 25-50% при использовании ПИФ или бактериологического посева.
Возможные причины:
- материал получен из участка тела, где нет возбудителя;
- слишком маленькое количество хламидий в мазке;
- неправильный забор биоматериала;
- неправильная подготовка к анализам;
- человеческий фактор.
В связи с недостаточной чувствительностью большинства анализов, методикой выбора для диагностики хламидийной инфекции остается ПЦР.
Противоречивые результаты анализа на хламидиоз
Бывает так, что серологические тесты вступают в противоречие с результатами прямых диагностических исследований на хламидиоз.
Рассмотрим подобные ситуации на примере ПЦР.
Вариантов противоречия бывает два:
- ПЦР положительная, ИФА отрицательный;
- ИФА положительный, ПЦР отрицательная.
В первом случае причины могут заключаться в том, что заражение произошло слишком рано.
ПЦР обладает очень высокой чувствительностью.
Поэтому может определять хламидиоз даже в начальной стадии, когда хламидий в уретре очень мало.
В то же время ИФА ещё будет отрицательным.
Потому что иммунной системе нужно время, чтобы выработать антитела.
В первую неделю после полового контакта они ещё могут не определяться.
Затем появляются IgM.
Только через 2 недели начинают определяться IgG.
Бывает и обратная ситуация.
ИФА может быть положительным, а ПЦР показывает отрицательный результат.
Причин тому может быть несколько.
Наиболее вероятная – перенесенная в прошлом инфекция.
К примеру, если через 2 недели после лечения сделать ПЦР на хламидии, в случае успешной терапии результат будет отрицательным.
Но ИФА покажет наличие IgG.
Возможно, IgM тоже будут присутствовать в небольших титрах, если лечение было проведено в острую стадию.
Потому что организму нужно время, чтобы избавиться от циркулирующих в крови антител.
IgG может определяться месяцами после элиминации хламидий.
Вторая вероятная причина – неправильный забор мазка.
Если хламидия поразила прямую кишку, а мазок взят из уретры, то ПЦР не определит инфекцию.
Но в крови антитела появляются, вне зависимости от локализации возбудителя.
Что делать при положительных анализах на хламидиоз?
В случае положительного результата теста устанавливается диагноз хламидийной инфекции.
Уточняется локализация воспалительного процесса.
От этого зависит схема лечения.
Лечат заболевание антибактериальными препаратами.
Это основа терапии, ведь для излечения необходимо уничтожить бактерий, являющихся возбудителями воспалительного процесса.
Чаще всего врачи назначают доксициклин или джозамицин.
Реже используются азитромицин или левофлоксацин.
Выбор препаратов и дозировок индивидуален.
Курс лечения продолжается около 2 недель.
Для беременных и детей препаратом выбора остается джозамицин.
Допускается применение азитромицина.
Контрольные анализы на хламидиоз
После завершения терапии назначается лабораторный контроль излеченности.
Он проводится при помощи ПЦР.
Другие методы использовать нецелесообразно по причине недостаточно высокой чувствительности.
Культуральное исследование может применяться:
- в сочетании с другими методами;
- с целью выяснения чувствительности хламидий к антибиотикам.
Если окажется, что хламидиоз не излечен полностью, назначается повторный курс терапии.
Выбор препарата может быть сделан на основании данных антибиотикограммы.
Где лучше сдать анализ на хламидиоз?
Обследование на половые инфекции можно пройти в нашей клинике.
Мы используем ПЦР для диагностики хламидиоза.
Анализы мы берем не только на хламидии, но одновременно и на другие ЗППП.
Потому что у одного пациента часто обнаруживается несколько возбудителей.
Мы сотрудничаем с несколькими лабораториями Москвы.
Это обеспечивает широкий выбор диагностических методов и их высокую информативность.
Наши преимущества:
- высокоточная диагностика;
- безболезненное взятие мазков;
- быстрые результаты.
В случае подтверждения диагноза у нас можно пройти лечение.
Оно проводится без госпитализации.
При необходимости обследование и лечение можно пройти анонимно.
Для сдачи анализов на хламидиоз обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.
Источник
