Pai анализ крови что это

Проблема синдрома привычной потери плода при-  стально изучается исследователями и не теряет акту-  альности в течение нескольких десятилетий. Особое   внимание уделяется клеточно-молекулярным взаимо-  действиям в тканях эндометрия и плаценты. Течение   беременности и ее исход зависят от условий, в которых   происходили имплантация и дальнейшее формирова-  ние плаценты. Иммуно-эндокринные взаимодействия   и ангиогенез непосредственно влияют на локальный   эндометриальный гемостаз. В результате в физиологи-  ческих условиях внутрисосудистый кровоток сохраня-  ется за счет повышенной коагуляционной активности   в периваскулярных областях и высокой фибринолити-  ческой активности в просвете эндометриальных сосу-  дах. В создании такого равновесия принимает участие   весь комплекс плазменных факторов: активаторов   и ингибиторов коагуляции и фибринолиза. В настоя-  щее время известна роль генетически обусловленных   дефектов гемостаза, приводящих к тромбозам, тром-  боэмболиям, а также акушерским осложнениям, таким,   как привычное невынашивание, неудачные попытки   ЭКО, гестоз, преждевременная отслойка нормально   расположенной плаценты и т.д.  Целью нашего исследования явилась попытка   определить роль полиморфизма гена PAI-1 в аку-  шерской патологии у женщин с привычной поте-  рей плода. Было обследовано 90 женщин в возрас-  те от 20 до 39 лет с привычным невынашиванием.   В ходе обследования сформировано 3 группы: 1 ос-  новную группу составили 30 женщин с гомозигот-  ным генотипом 4G/4G (PAI-1), во 2 основную груп-  пу вошли 30 женщин с гетерозиготным генотипом   гена PAI-1, 3 — группа сравнения была представле-  на 30 пациентками, не имевшими полиморфизма   в гене PAI-1. Определение аллельного полиморфизма   4G/5G в гене PAI-1 проводили методом полимераз-  ной цепной реакции (ПЦР). Изучение тромбоцитар-  ного звена свертывающей системы крови состояло   из определения числа тромбоцитов в венозной крови,   морфологической оценки внутрисосудистой актива-  ции тромбоцитов по методу А.С. Шитиковой (1992).   Комплексное исследование плазменно-коагуляцион-  ного звена гемостаза включало такие методы, как:   время свертывания венозной крови, активирован-  ное время рекальцификации плазмы, протромбино-  вый индекс, концентрация фибриногена, активность   фактора VIII. Для оценки фибринолитической актив-  ностикрови использовали метод определения лизиса   эуглобулиновой фракции плазмы и фибринолитиче-  скую активность цельной крови. Определение уров-  ня гомоцистеина в плазме крови проводили методом   иммуноферментного анализа.  При анализе анамнестических данных было вы-  явлено, что у 28 (31,1   %) женщин репродуктивным   неудачам предшествовало прерывание первой бере-  менности путем медицинского аборта, у 56,0 (62,2   %)   пациенток произошли самопроизвольные выкидыши,   начиная с первой беременности, у 63,0 (70,0   %) об-  следованных была выявлена неразвивающаяся бере-  менность. Среди инфекций половых путей чаще всего   встречалась кандидозная (23,3   %), уреаплазменная   (18,8   %), микоплазменная (6,6   %). Отмечались еди-  ничные случаи генитального герпеса и хламидиоза.   У 46,6   % женщин был выявлен хронический эндо-  метрит, в 35,5   % визуализировалась эктопия шейки 8  матки, у 16,6   % пациенток обнаружены признаки   хронического сальпингооофорита и миомы матки.   Исследование параметров гемостаза проводилось   в условиях отсутствия обострения бактериально-ви-  русной инфекции в период с 15 дня менструального   цикла до наступления менструации. До беременности   в показателях гемостаза достоверных различий между   группами не обнаружено. При беременности в I три-  местре в группе женщин с гомозиготным состоянием   гена PAI-1 были выявлены признаки гиперкоагуля-  ции, в группе с гетерозиготным состоянием гена PAI-1   и группе сравнения отмечались нормальные параме-  тры гемостаза. Во II и III триместрах гиперкоагуляция   сохранялась в 16,6   % наблюдений у пациенток 1 основ-  ной группы и в 10,0   % у пациенток 2 основной группы   (p<0,05). Было проанализировано течение настоящей   беременности у обследованных женщин. Следует от-  метить, что отслойки хориона до 8 недель беременно-  сти с последующим образованием ретрохориальной   гематомы встречались в группе женщин с гомозигот-  ным состоянием гена PAI-1 в 23,3   % случаев и сопро-  вождались низкой плацентацией в I–II триместрах   в 20,0   % наблюдений. В III триместре у 3 (10,0   %) па-  циенток данной группы выявлено предлежание пла-  центы. Признаки фето-плацентарной недостаточно-  сти обнаружены в 16,6   % случаев (p<0,05) у женщин   из 1 и 2 основных групп. Отеки беременных достовер-  но чаще (p=0,05) встречались у женщин с наличием   полиморфизма гена PAI-1, чем в группе сравнения.  В настоящее время варианты полиморфизмов гена   PAI-1 связывают с повышением концентрации PAI-1   в плазме. Наиболее частый полиморфизм 4G/5G ас-  социируют с повышенной PAI-1 активностью, при   гомозиготном носительстве 4G аллеля активность   PAI-1 еще выше, что приводит к нарушению контро-  ля за фибринолитической активностью, гиперкоагу-  ляции и последующему тромбозу. Более углубленное   изучение системы фибринолиза представляет собой   научно-практический интерес и раскрывает возмож-  ности для дальнейшего установления причин син-  дрома привычной потери плода.

МАТЬ И ДИТЯ, Москва
XII Всероссийский научный форум, 2011

Расширенное исследование генов системы гемостаза: F2, F5, MTHFR, MTR, MTRR, F13, FGB, ITGA2, ITGВ3, F7, PAI-1

Комплексное исследование генетических факторов риска развития нарушений в системе свертывания крови и фолатном цикле (без заключения врача-генетика).

Различные изменения в генах системы гемостаза и цикла обмена фолатов предрасполагают к развитию большого числа патологических состояний: инфаркты, инсульты, тромбоэмболии, кровотечения, патология беременности и родов, осложнения послеоперационного периода и т.д. Профиль включает в себя исследование основных полиморфизмов в генах системы гемостаза и фолатного цикла: 

Ген F2 кодирует аминокислотную последовательность белка протромбина. Полиморфизм F2 c.*97G>A приводит к повышенной экспрессии гена. Клинически неблагоприятный вариант полиморфизма (c.*97A) наследуется по аутосомно-доминантному типу. Наличие полиморфизма F2 c.*97G>A в гомозиготной или гетерозиготной форме значительно (в 3 и более раз, а на фоне курения — в 40 и более раз) увеличивает риск возникновения венозных тромбозов, в том числе тромбозов сосудов мозга и сердца, особенно в молодом возрасте. У пациентов-носителей данного полиморфизма повышен риск развития тромбоэмболий после хирургических вмешательств. Приём оральных контрацептивов у данной группы лиц также увеличивает риск тромбозов (относительный риск развития тромбофилии и венозной тромбоэмболии у гетерозиготных носительниц полиморфизма c.*97G>A возрастает в 16 раз).

Ген F5 кодирует аминокислотную последовательность белка проакцелерина — коагуляционного фактора 5. Нуклеотидная замена c.1601G>A («мутация Лейден») приводит к аминокислотной замене аргинина на глутамин в позиции 534, что придает устойчивость активной форме проакцелерина. Клинически это проявляется рецидивирующими венозными тромбозами и тромбоэмболиями. Наличие полиморфизма в гомозиготной или гетерозиготной форме значительно (в 3 и более раз, а на фоне заместительной гормонотерапии или приема оральных контрацептивов — в 30 и более раз) увеличивает риск венозных тромбозов. Риск инфаркта миокарда увеличивается в 2 и более раз, риск развития патологии беременности (прерывание беременности, преэклампсия, хроническая плацентарная недостаточность и синдром задержки роста плода) увеличивается в 3 и более раз.

Также, пациенты, являющиеся одновременно носителями полиморфизма c.*97G>A гена протромбина и «мутации Лейден», еще в большей степени подвержены риску развития тромбозов и тромбоэмболий.

Ген MTHFR кодирует аминокислотную последовательность фермента метилентетрагидрофолатредуктазы, играющего ключевую роль в метаболизме фолиевой кислоты. Полиморфизм c.665C>T гена MTHFR связан с заменой нуклеотида цитозина (С) на тимин (Т), что приводит к аминокислотной замене аланина на валин в позиции 222. Вариант c.665Т связан с четырьмя группами мультифакториальных заболеваний: сердечно-сосудистыми, дефектами развития плода, колоректальной аденомой и раком молочной железы и яичников. У женщин с генотипом c.665Т/Т дефицит фолиевой кислоты во время беременности может приводить к порокам развития плода, в том числе незаращению нервной трубки. Неблагоприятное воздействие варианта c.665Т- зависит от внешних факторов: низкого содержания в пище фолатов, курения, приема алкоголя. Сочетание генотипа c.665Т/Т и папилломавирусной инфекции увеличивает риск цервикальной дисплазии. Назначение препаратов фолиевой кислоты может значительно снизить негативное влияние данного варианта полиморфизма.

Полиморфизм MTHFR c.1286A>C связан с точечной заменой нуклеотида аденина (А) на цитозин (С), что приводит к замене аминокислотного остатка глутаминовой кислоты на аланин в позиции 429, относящейся к регулирующей области молекулы фермента. При наличии данного полиморфизма отмечается снижение активности фермента MTHFR. Это снижение обычно не сопровождается изменением уровня гомоцистеина в плазме крови у носителей дикого варианта полиморфизма c.665C>T, однако сочетание аллельного варианта* c.1286C с аллелем c.665T приводит к снижению уровня фолиевой кислоты и соответствует по своему эффекту гомозиготному состоянию MTHFR c.665Т/T. При этом риск развития дефектов нервной трубки повышается в 2 раза. Жизнеспособность плодов, имеющих одновременно оба полиморфных варианта, также снижена.

Ген MTR кодирует аминокислотную последовательность фермента метионин синтазы. Полиморфизм c.2756A>G связан с аминокислотной заменой (аспарагиновой кислоты на глицин) в молекуле фермента. В результате этой замены функциональная активность фермента изменяется, что приводит к повышению риска формирования пороков развития у плода. Влияние полиморфизма усугубляется повышенным уровнем гомоцистеина.

Ген MTRR кодирует аминокислотную последовательность фермента редуктазы метионинсинтазы. Полиморфизм c.66A>G связан с аминокислотной заменой в молекуле фермента. В результате этой замены функциональная активность фермента снижается, что приводит к повышению риска развития дефектов нервной трубки у плода. Влияние полиморфизма усугубляется дефицитом витамина В12. При сочетании полиморфизма c.66A>G гена MTRR с полиморфизмом c.665C>T в гене MTHFR риск spina bifida увеличивается. Полиморфизм c.66A>G гена MTRR усиливает гипергомоцистеинемию, вызываемую полиморфизмом c.665C>T в гене MTHFR.

Ген фибриназы (F13) кодирует синтез трансглютаминазы, участвующей в стабилизации фибринового сгустка и в формировании соединительной ткани. Аллельные варианты с.103G/Т и с.103Т/Т приводят к снижению уровня трансглютаминазы с образованием сетчатой структуры фибрина с более тонкими волокнами, меньшими порами, и изменением характеристик проникновения, которое в сочетании с другими факторами риска ассоциируется с возможным риском внутричерепных кровоизлияний и кровотечений из внутренних органов, а также привычным невынашиванием беременности. При этом аллельный вариант с.103Т может выступать в роли протективного фактора в отношении инфаркта миокарда и венозных тромбозов.

Ген FGB кодирует β-цепь фибриногена, являющегося предшественником фибрина. Аллельный вариант c.-467А обусловливает усиленную транскрипцию гена и может приводить к увеличению уровня фибриногена в крови и повышению вероятности образования тромбов при наличии дополнительных факторов риска. Гетерозиготный вариант c.-467G/А связывают с повышенным риском ишемического инсульта и лакунарными инфарктами церебральных сосудов. Гомозиготный вариант c.-467A/А связывают с повышенным риском инфаркта миокарда.

Ген гликопротеина Gp1a (ITGA2) кодирует синтез альфа-2-субъединицы интегринов – специализированных рецепторов тромбоцитов. Аллельный вариант c.759Т вызывает изменение первичной структуры субъединицы и свойств рецепторов. При гетерозиготном (c.759C/T) варианте отмечается увеличение скорости адгезии тромбоцитов к коллагену I типа, что может приводить к повышенному риску тромбофилии, инфаркта миокарда и других сердечно-сосудистых заболеваний. Аллельный вариант c.759Т связывают со случаями резистентности к аспирину. Помимо этого, при гомозиготном (c.759Т/T) варианте значительно увеличивается количество рецепторов на поверхности тромбоцитов. В совокупности, при гомозиготном варианте данного полиморфизма значительно повышен риск тромбофилии, инфаркта миокарда и развития других острых эпизодов тромбообразования в возрасте до 50 лет, даже по сравнению с гетерозиготным вариантом.

Ген гликопротеина Gp3a (ITGB3) кодирует синтез бета-3 цепи интегринового комплекса GP2b3a, участвующего в разнообразных межклеточных взаимодействиях (адгезии и сигнализации). Аллельный вариант c.176С (гетерозигота c.176T/C) обусловливает повышенную адгезию тромбоцитов и может приводить к увеличению риска развития острого коронарного синдрома, а также связан с синдромом привычного невынашивания беременности. Гомозиготный вариант c.176С/C обусловливает повышенную адгезию тромбоцитов и может приводить к значительному увеличению риска развития острого коронарного синдрома в возрасте до 50 лет. У лиц с полиморфными аллельными вариантами часто отмечается пониженная эффективность аспирина.

Аллельный вариант c.1238A (гетерозигота c.1238G/A и гомозигота c.1238А/A) гена F7 приводит к понижению экспрессии гена и снижению уровня фактора 7 в крови, рассматривается как протективный маркёр в отношении развития тромбозов и инфаркта миокарда.

Ген ингибитора активатора плазминогена (PAI-1) кодирует белок-антагонист тканевого и урокиназного активатора плазминогена. Преобладающим в популяции вариантом исследуемого полиморфизма является гетерозиготный вариант -675 5G/4G. В связи с этим данный полиморфизм самостоятельного диагностического значения не имеет, эффект возможно оценить в сочетании с другими факторами предрасполагающими к развитию патологии (например в сочетании с FGB c.-467A). Аллельный вариант -675 4G сопровождается большей активностью гена, чем -675 5G, что обусловливает более высокую концентрацию PAI-1 и уменьшение активности противосвёртывающей системы. Гомозигота -675 4G/4G ассоциирована с повышением риска тромбообразования, преэклампсии, нарушением функции плаценты и самопроизвольного прерывания беременности. 

*Примечание: иногда в научной литературе при описании однонуклеотидных замен, характерных для генных полиморфизмов, встречается термин «мутантный аллель». Это терминологическая неточность, так как в классической генетике термин «мутантный аллель» традиционно рассматривается как синоним термина «мутация». При мутациях, как известно, изменение структуры гена приводит к образованию (экспрессии) нефункциональных белков и к неизбежному развитию наследственного заболевания. При полиморфизмах изменение в структуре гена приводит лишь к появлению белков с немного изменёнными физико-химическими свойствами. Такие изменения, как известно, проявляют себя при воздействии на организм различных факторов внешней среды или при изменении функционального состояния организма человека. И только в таких ситуациях функционирование белков со структурными особенностями может, либо способствовать ускорению развития заболевания, либо, напротив, тормозить формирование патологических процессов. Поэтому, на наш взгляд, для разграничения изменений в генах столь очень похожих структурно, но приводящих к несоизмеримо разным последствиям для организма, корректнее в отношении генных полиморфизмов применять понятие «аллельный вариант гена», а не «мутантный аллель».

Литература

1. Никитина Л.А. и др. Роль некоторых генетических полиморфизмов в невынашивании беременности // Проблемы репродукции, 2007, С.83-89. 
2. Güngör et al. The presence of PAI-1 4G/5G and ACE DD genotypes increases the risk of early-stage AVF thrombosis in hemodialysis patients. // Ren Fail. 2011;33(2):169-7 
3. Wei YS, et al. Association of the integrin gene polymorphisms with ischemic stroke and plasma lipid levels // Zhonghua Yi Xue Yi Chuan Xue Za Zhi. 2009;26(2):211-5
4. Gohil et al., The genetics of venous thromboembolism. A meta-analysis involving approximately 120,000 cases and 180,000 controls // Thromb Haemost, 2009. 102(2): 360-70 
5. Goodman et al., Which thrombophilic gene mutations are risk factors for recurrent pregnancy loss? // Am J Reprod Immunol, 2006. 56(4):230-6 
6. Gerhardt, A., et al. The polymorphism of platelet membrane integrin alpha2beta1 (alpha2807TT) is associated with premature onset of fetal loss // Thromb Haemost, 2005. 93(1):124-9. 
7. Ruzzi, L., et al., Association of PLA2 polymorphism of the ITGB3 gene with early fetal loss // Fertil Steril, 2005. 83(2): 511-2 
8. База OMIM: https://omim.org/entry/176930  
9. База OMIM: https://omim.org/entry/227400  
10. База OMIM +227400 https://omim.org/entry/607093  
11. База OMIM: https://omim.org/entry/602568  
12. База OMIM: https://omim.org/entry/156570 
13. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/clinvar/RCV000012861/