Ошибки в анализе крови соэ

В экспериментальном исследовании образцов крови, взятых от 10 здоровых пациентов и 10 пациентов с синдромом ускоренной скорости оседания эритроцитов (СОЭ), смоделированы основные ошибки, возникающие при определении СОЭ по методу Панченкова, и охарактеризовано их влияние на результаты исследования.

[…]На кафедре клинической лабораторной диагностики факультета дополнительного профессионального образования ГБОУ ВПО «Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера» Минздрава России (ГБОУ ВПО «ПГМУ им. академика Е.А. Вагнера»), в соответствии с требованиями федерального государственного образовательного стандарта, одним из этапов итоговой государственной аттестации является защита научно-практической работы. Интерны и ординаторы, проходящие подготовку по специальности «клиническая лабораторная диагностика», на практике осваивают различные методики исследования лейкоцитарной формулы крови и на собственном опыте убеждаются в важности соблюдения требований преаналитического этапа лабораторного исследования и необходимости тщательного выполнения условий методики на аналитическом этапе.

Одним из направлений таких работ является демонстрация влияния различных факторов на результаты лабораторных исследований, в т. ч. на результаты определения СОЭ. Материалом для исследований служили образцы крови, стабилизированной ЭДТА, оставшиеся в лаборатории после выполнения всех исследований и любезно предоставленные сотрудниками лаборатории ГБОУ ВПО «ПГМУ им. академика Е.А. Вагнера». Образцы венозной крови получали путем венепункции с применением вакуумных систем забора крови с К3ЭДТА. Оставшийся в пробирках после окончания исследований объем крови был достаточным для определения СОЭ в одном и том же образце, но в разных условиях. Общий анализ крови выполняли на гематологическом анализаторе Аdvia 2120 «Siemens». СОЭ определяли унифицированным методом в крови, стабилизированной ЭДТА, в течение 2 ч после забора крови по методике Панченкова [4]. Для этого после перемешивания проб из них отбирали 240 мкл цельной крови и переносили в пробирку с 60 мкл 5% трехзамещенного цитрата натрия, где перемешивали. Полученной смесью заполняли капилляры Панченкова до метки 0 и инкубировали в течение 60 мин, после чего оценивали результаты определения СОЭ.

Всего было исследовано 20 образцов крови. В первую группу вошли 10 образцов крови, полученные от лиц (5 мужчин и 5 женщин), проходивших периодическое медицинское обследование, во вторую – 10 образцов от пациентов с различными гнойно-септическими заболеваниями (5 мужчин и 5 женщин), находившихся на лечении в клиниках ГБОУ ВПО «ПГМУ им. академика Е.А. Вагнера». Средний возраст пациентов составил 45,1 ± 3,8 лет.

В выполненной работе смоделировано и изучено влияние следующих условий и методологических ошибок, которые могут возникать при определении СОЭ по Панченкову:

1) температура окружающей среды;

2) недостаточный объем крови для выполнения исследования;

3) наличие пузырьков воздуха в столбике крови, заполняющей капилляр;

4) отсутствие разведения крови, стабилизированной ЭДТА, раствором цитрата натрия;

5) наклонное положение капилляра Панченкова.

Статистическая обработка полученных результатов проведена с применением специализированного пакета программного обеспечения Statistica 7 («Dell»). Полученные результаты оценивали методами описательной статистики и представляли как среднее арифметическое значение (M), его стандартное отклонение (SD), а также в виде медианы (Me) и интерквантильного диапазона (25–75% квартиль). Анализ характера распределения полученных результатов оценивали с помощью критерия Шапиро-Уилка. Учитывая, что распределение полученных результатов отличалось от нормального, для дальнейшей статистической обработки применяли методы непараметрической статистики. Корреляционную связь оценивали с помощью коэффициентов корреляции Спирмена (R) и коэффициента детерминации (R2). Для оценки достоверности различий между результатами исследования СОЭ в одних и тех же образцах крови, но в различных условиях применяли коэффициент Вилкоксона. Достоверным считали различие при р < 0,05.

Влияние температуры

Для исследования влияния температурного режима кровь, стабилизированную К3ЭДТА, разводили раствором 5% трехзамещенного цитрата натрия в соотношении один (цитрат) к четырем (кровь). Для этого 500 мкл крови, стабилизированной ЭДТА, в отдельных пробирках смешивали со 125 мкл раствора цитрата натрия, перемешивали и заполняли капилляры Панченкова. Было подготовлено три штатива, содержавших одни и те же образцы. Один штатив после заполнения инкубировали в холодильнике (4–6 °С). Второй штатив инкубировали при комнатной температуре (22 °С). Третий штатив помещали в термостат при 37 °С. СОЭ оценивали через 1 ч. Результаты представлены в табл. 1.

Полученные результаты свидетельствуют о значительном влиянии температурного режима инкубации на результат определения СОЭ.

Рост температуры, при которой происходит измерение показателя, сопровождается увеличением СОЭ. При этом зависимость между увеличением СОЭ и ростом температуры имеет нелинейный характер. Различие между медианами СОЭ при температуре 4 и 22 °С составило 13 мм/ч, при температуре 22 и 37 °С отмечено увеличение этого показателя на 26,5 мм/ч.

Таким образом, увеличение СОЭ при росте температуры на примерно одинаковую величину (18 и 15 °С) отличалось почти в два раза. Влияние температуры было по-разному выражено в группах: в первой группе увеличение СОЭ было менее выражено, чем во второй (табл. 1).

Таблица 1. Влияние температуры на результаты исследования СОЭ по Панченкову

Примечание: в числителе среднее арифметическое и стандартное отклонение (М ± SD), в знаменателе медиана и интерквартильный диапазон (Me; (25–75% квартиль))

В литературе имеются публикации, посвященные исследованию влияния температуры на СОЭ и разработке методологических приемов, позволяющих стандартизировать результаты независимо от температуры [5, 8]. В частности, используется перерасчет с применением номограммы Manley [8]. Однако данная зависимость была выведена для расчета показателей определения СОЭ по Вестергрену и не может автоматически использоваться в отношении результатов измерения СОЭ по Панченкову. Другим решением является внедрение в практику лабораторий автоматических анализаторов СОЭ. Данные приборы стандартизированы в соответствии с рекомендациями Международного комитета стандартизации в гематологии (ISCH) [6, 7]. В них выполняется автоматическая коррекция результатов определения СОЭ в зависимости от температурного режима измерения.

Таким образом, исследования подтвердили, что одним из факторов, влияющих на различие результатов определения СОЭ, является температура окружающей среды. Рост температуры сопровождается увеличением СОЭ, однако данная зависимость носит нелинейный характер, что затрудняет стандартизацию СОЭ при ручном измерении СОЭ по методике Панченкова.

Неполный объем капилляра […]

Наличие пузырьков воздуха

В некоторых случаях при заполнении капилляра Панченкова в столбик крови может попасть пузырек воздуха. Чаще всего это наблюдается при малом количестве набранной крови, а также при недостаточных практических навыках сотрудников КДЛ, выполняющих исследование. В таких случаях происходит разделение столбика крови на две части и эритроциты оседают раздельно в верхней и нижней части капилляра. Некоторые сотрудники КДЛ в этом случае оценивают результат, суммируя величину СОЭ в различных участках капилляра.

Для изучения влияния на результат определения СОЭ пузырька воздуха внутри капилляра были выполнены дополнительные исследования. Образцы крови, стабилизированной ЭДТА, смешивали с раствором цитрата натрия, как было описано выше. Капилляры Панченкова заполняли лишь до метки (примерно 50), формировали пузырек воздуха (1 деление капилляра) и затем снова набирали кровь. Параллельно исследовали СОЭ унифицированным методом в полностью заполненном капилляре. Образцы инкубировали 1 ч при температуре 22 °С. Результаты исследования СОЭ представлены на рис. 2.

Рис. 2. Влияние пузырька
воздуха на результаты
определения СОЭ
по Панченкову

Исследование не выявило достоверных различий в величине СОЭ в участках, расположенных выше и ниже пузырька воздуха (p = 0,4691). В то же время результаты определения СОЭ в образце одной и той же крови, исследованной унифицированным методом и в присутствии пузырька воздуха, были достоверно различны. Результат анализа унифицированным методом был примерно на треть ниже, чем результат определения СОЭ, полученный путем сложения результатов измерения СОЭ в различных участках столбика крови (выше и ниже пузырька воздуха) (p = 0,000132).

Таким образом, появление пузырька воздуха в столбике крови, помещенной в капилляр Панченкова, влияет на результаты измерения СОЭ. Суммирование результатов определения СОЭ в различных участках капилляра (выше и ниже пузырька воздуха) ведет к завышению результатов исследования.

Влияние добавления цитрата натрия к крови, стабилизированной ЭДТА […]

Влияние наклона капилляра при исследовании СОЭ

Изменение наклона капилляра при исследовании СОЭ редко встречается в лаборатории. Такие ошибки могут появляться при неправильной установке стола, когда столешница расположена не горизонтально, а под углом, или при косом положении капилляра в штативе. Причинами косого положения капилляра могут быть сколы, укорачивающие длину капилляра, или его дефекты. В таких случаях возникает необходимость в дополнительном закреплении капилляра в штативе с помощью подручных средств, что иногда ведет к отклонению положения капилляра от строго вертикального.

Для исследования влияния наклона капилляра на результаты определения СОЭ было подготовлено два штатива с образцами крови одних и тех же пациентов. Один штатив с образцами крови инкубировали на строго горизонтальной поверхности (группа сравнения), второй – наклоняли под углом 25° (опытная группа). СОЭ оценивали через 1 ч инкубации, при температуре 22 °С. Результаты представлены на рис. 4.

Рис. 4. Влияние положения
капилляра на результаты
определения СОЭ
по Панченкову

Так же, как и в предыдущих экспериментах, изменение методики определения СОЭ отразилось на полученных результатах. Наклонное положение капилляров при выполнении теста привело к достоверному ускорению СОЭ (p = 0,000089). Медианы и интерквартильные диапазоны в опытной группе и в группе сравнения различались более чем в 2,5 раза, составив, соответственно, 33 мм/ч (23–47 мм/ч) и 14 мм/ч (3,5–29,5 мм/ч).

При этом между результатами опытной группы и группы сравнения наблюдалась корреляционная связь (коэффициент Спирмена 0,949).

Таким образом, нарушение техники анализа, в частности наклон капилляра при исследовании, ведет к значительному ускорению СОЭ […]

Материал проверен экспертами Актион Медицина