Клинический анализ крови методика проведения
Общий клинический анализ крови (ОАК) (развернутый клинический анализ крови[источник не указан 528 дней]) — врачебный [источник не указан 528 дней] анализ, позволяющий оценить содержание гемоглобина в системе красной крови, количество эритроцитов, цветовой показатель, количество лейкоцитов, тромбоцитов. Клинический анализ крови позволяет рассмотреть лейкограмму и скорость оседания эритроцитов (СОЭ).
С помощью данного анализа можно выявить анемии (снижение гемоглобина — лейкоцитарная формула), воспалительные процессы (лейкоциты, лейкоцитарная формула) и т. д. Чаще всего проводится как один из диагностических общеклинических обследований пациента (больного)[1].
Проведение анализа[править | править код]
Одноразовые медицинские скарификаторы для прокола кожи перед забором на анализ периферической крови
Прокол кожи пальца одноразовым автоматическим скарификатором в пластиковом корпусе
Забор крови для проведения анализа необходимо производить натощак, и производится он двумя способами:
- из пальца (как правило — безымянного);
- из вены.
В целях мониторинга состояния здоровья пациента во времени результаты общего анализа крови целесообразнее сравнивать по одинаковым типам биоматериала, либо с учетом отклонений результатов капиллярной крови относительно аналогичных показателей венозной.[2]
Методы исследования[править | править код]
Сегодня для проведения анализа чаще всего используют автоматические анализаторы или используют методы микроскопических исследований.
Показатели крови[править | править код]
Подсчёт форменных элементов крови лаборантом. Слева от руки счётчик для учёта форменных элементов в процессе подсчёта при микроскопии
В настоящее время большинство показателей выполняют на автоматических гематологических анализаторах, которые в состоянии одновременно определять от 5 до 24 параметров. Из них основными являются количество лейкоцитов, концентрация гемоглобина, гематокрит, количество эритроцитов, средний объём эритроцита, средняя концентрация гемоглобина в эритроците, среднее содержание гемоглобина в эритроците, полуширина распределения эритроцитов по размерам, количество тромбоцитов, средний объём тромбоцита.
- WBC (white blood cells — белые кровяные тельца) — абсолютное содержание лейкоцитов (норма 4—9 кл/л) — форменных элементов крови — отвечающих за распознавание и обезвреживание чужеродных компонентов, иммунную защиту организма от вирусов и бактерий, устранение отмирающих клеток собственного организма.
- RBC (red blood cells — красные кровяные тельца) — абсолютное содержание эритроцитов (норма 4,3—5,5 кл/л) — форменных элементов крови — содержащих гемоглобин, транспортирующих кислород и углекислый газ.
- HGB (Hb, hemoglobin) — концентрация гемоглобина в цельной крови (норма 120—140 г/л). Для анализа используют цианидный комплекс или бесцианидные реактивы (как замена токсичному цианиду). Измеряется в молях или граммах на литр или децилитр.
- HCT (hematocrit) — гематокрит (норма 0,39—0,49), часть (% = л/л) от общего объёма крови, приходящаяся на форменные элементы крови. Кровь на 40—45 % состоит из форменных элементов (эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов) и на 60—55 % из плазмы. Гематокрит это соотношение объёма форменных элементов к плазме крови. Считается, что гематокрит отражает соотношение объёма эритроцитов к объёму плазмы крови, так как в основном эритроциты составляют объём форменных элементов крови. Гематокрит зависит от количества RBC и значения MCV и соответствует произведению RBC*MCV.
- PLT (platelets — кровяные пластинки) — абсолютное содержание тромбоцитов (норма 150—400 кл/л) — форменных элементов крови — участвующих в гемостазе.
Эритроцитарные индексы (MCV, MCH, MCHC):
- MCV — средний объём эритроцита в кубических микрометрах (мкм) или фемтолитрах (фл)(норма 80—95 фл). В старых анализах указывали: микроцитоз, нормоцитоз, макроцитоз.
- MCH — среднее содержание гемоглобина в отдельном эритроците в абсолютных единицах (норма 27—31 пг), пропорциональное отношению «гемоглобин/количество эритроцитов». Цветной показатель крови в старых анализах. ЦП=MCH*0.03
- MCHC — средняя концентрация гемоглобина в эритроцитарной массе, а не в цельной крови (см. выше HGB) (норма 320—360 г/л) , отражает степень насыщения эритроцита гемоглобином. Снижение MCHC наблюдается при заболеваниях с нарушением синтеза гемоглобина. Тем не менее, это наиболее стабильный гематологический показатель. Любая неточность, связанная с определением гемоглобина, гематокрита, MCV, приводит к увеличению MCHC, поэтому этот параметр используется как индикатор ошибки прибора или ошибки, допущенной при подготовке пробы к исследованию.
Тромбоцитарные индексы (MPV, PDW, PCT):
- MPV (mean platelet volume) — средний объём тромбоцитов (норма 7—10 фл).
- PDW — относительная ширина распределения тромбоцитов по объёму, показатель гетерогенности тромбоцитов.
- PCT (platelet crit) — тромбокрит (норма 0,108—0,282), доля (%) объёма цельной крови, занимаемую тромбоцитами.
Лейкоцитарные индексы:
- LYM% (LY%) (lymphocyte) — относительное (%) содержание (норма 25—40 %) лимфоцитов.
- LYM# (LY#) (lymphocyte) — абсолютное содержание (норма 1,2—3,0х/л (или 1,2—3,0 х /мкл)) лимфоцитов.
- MXD% (MID%) — относительное (%) содержание смеси (норма 5—10 %) моноцитов, базофилов и эозинофилов.
- MXD# (MID#) — абсолютное содержание смеси (норма 0,2—0,8 x /л) моноцитов, базофилов и эозинофилов.
- NEUT% (NE%) (neutrophils) — относительное (%) содержание нейтрофилов.
- NEUT# (NE#) (neutrophils) — абсолютное содержание нейтрофилов.
- MON% (MO%) (monocyte) — относительное (%) содержание моноцитов (норма 4—11 %).
- MON# (MO#) (monocyte) — абсолютное содержание моноцитов (норма 0,1—0,6 кл/л).
- EO% — относительное (%) содержание эозинофилов.
- EO# — абсолютное содержание эозинофилов.
- BA% — относительное (%) содержание базофилов.
- BA# — абсолютное содержание базофилов.
- IMM% — относительное (%) содержание незрелых гранулоцитов.
- IMM# — абсолютное содержание незрелых гранулоцитов.
- ATL% — относительное (%) содержание атипичных лимфоцитов.
- ATL# — абсолютное содержание атипичных лимфоцитов.
- GR% (GRAN%) — относительное (%) содержание (норма 47—72 %) гранулоцитов.
- GR# (GRAN#) — абсолютное содержание (норма 1,2—6,8 х /л (или 1,2—6,8 х /мкл)) гранулоцитов.
Эритроцитарные индексы:
- HCT/RBC — средний объём эритроцитов.
- HGB/RBC — среднее содержание гемоглобина в эритроците.
- HGB/HCT — средняя концентрация гемоглобина в эритроците.
- RDW — Red cell Distribution Width — «ширина распределения эритроцитов» так называемый «анизоцитоз эритроцитов» — показатель гетерогенности эритроцитов, рассчитывается как коэффициент вариации среднего объёма эритроцитов.
- RDW-SD — относительная ширина распределения эритроцитов по объёму, стандартное отклонение.
- RDW-CV — относительная ширина распределения эритроцитов по объёму, коэффициент вариации.
- P-LCR — коэффициент больших тромбоцитов.
- ESR (СОЭ) (скорость оседания эритроцитов) — неспецифический индикатор патологического состояния организма.
Как правило, автоматические гематологические анализаторы строят также гистограммы для эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов.
Гемоглобин[править | править код]
Гемоглобин (Hb, Hgb) в анализе крови — это основной компонент эритроцитов, который транспортирует кислород к органам и тканям. Для анализа используют цианидный комплекс или бесциандидные реактивы (как замена токсичному цианиду). Измеряется в молях или граммах на литр или децилитр. Его определение имеет не только диагностическое, но и прогностическое значение, так как патологические состояния, приводящие к уменьшению содержания гемоглобина, ведут к кислородному голоданию тканей.
В норме содержание гемоглобина в крови[3]:
- мужчины — 135—160 г/л (граммов на литр);
- женщины — 120—140 г/л.
Повышение гемоглобина отмечается при:
- первичной и вторичной эритремии;
- обезвоживании (ложный эффект за счёт гемоконцентрации);
- чрезмерном курении (образование функционально неактивного HbСО).
Снижение гемоглобина выявляется при:
- анемии;
- гипергидратации (ложный эффект за счёт гемодилюции — «разбавления» крови, увеличения объёма плазмы относительно объёма совокупности форменных элементов).
Эритроциты[править | править код]
Эритроциты (Э) в анализе крови — красные кровяные клетки, которые участвуют в транспорте кислорода в ткани и поддерживают в организме процессы биологического окисления.
В норме содержание эритроцитов в крови[4]:
Увеличение (эритроцитоз) количества эритроцитов бывает при:
- новообразованиях;
- водянке почечных лоханок;
- влиянии кортикостероидов;
- болезни и синдроме Кушинга;
- болезни Истинной полицитемии;
- лечении стероидами.
Небольшое относительное увеличение количества эритроцитов может быть связано со сгущением крови вследствие ожога, диареи, приема диуретиков.
Уменьшение содержания эритроцитов в крови наблюдается при:
- кровопотере;
- анемии;
- беременности;
- гидремия(внутривенное введение большого количества жидкости, то есть инфузионная терапия)
- при оттоке тканевой жидкости в кровеносное русло при уменьшении отеков(терапия мочегонными препаратами).
- снижении интенсивности образования эритроцитов в костном мозге;
- ускоренном разрушении эритроцитов;
Лейкоциты[править | править код]
Лейкоциты (L) — клетки крови, образующиеся в костном мозге и лимфатических узлах. Различают 5 видов лейкоцитов: гранулоциты (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы), моноциты и лимфоциты. Основной функцией лейкоцитов является защита организма от чужих для него антигенов (в том числе, микроорганизмов, опухолевых клеток; эффект проявляется и в направлении клеток трансплантата).
В норме содержание лейкоцитов в крови: (4—9) х /л
Увеличение (лейкоцитоз) бывает при:
- острых воспалительных процессах;
- гнойных процессах, сепсисе;
- многих инфекционных заболеваниях вирусной, бактериальной, грибковой и другой этиологии;
- злокачественных новообразованиях;
- травмах тканей;
- инфаркте миокарда;
- при беременности (последний триместр);
- после родов — в период кормления ребёнка грудным молоком;
- после больших физических нагрузок (физиологический лейкоцитоз).
К снижению (лейкопения) приводит:
- аплазия, гипоплазия костного мозга;
- воздействие ионизирующего излучения, лучевая болезнь;
- брюшной тиф;
- вирусные заболевания;
- анафилактический шок;
- болезнь Аддисона — Бирмера;
- коллагенозы;
- под влиянием некоторых лекарственных препаратов (сульфаниламиды и некоторые антибиотики, нестероидные противовоспалительные препараты, тиреостатики, противоэпилептические препараты, антиспазматические пероральные препараты);
- повреждение костного мозга химическими средствами, лекарствами;
- гиперспленизм (первичный, вторичный);
- острые лейкозы;
- миелофиброз;
- миелодиспластические синдромы;
- плазмоцитома;
- метастазы новообразований в костный мозг;
- пернициозная анемия;
- тиф и паратиф;
- коллагенозы.
Лейкоцитарная формула[править | править код]
Лейкоцитарная формула (лейкограмма) — процентное соотношение различных видов лейкоцитов, определяемое при подсчёте их в окрашенном мазке крови под микроскопом.
Кроме перечисленных выше лейкоцитарных индексов, предложены также лейкоцитарные, или гематологические, индексы, рассчитываемые как соотношение процентного содержания различных видов лейкоцитов, например, индекс соотношения лимфоцитов и моноцитов, индекс соотношения эозинофилов и лимфоцитов, и т. д.
Цветовой показатель[править | править код]
Цветовой показатель (ЦП) — степень насыщенности эритроцитов гемоглобином:
- 0,85—1,05 — норма;
- меньше 0,80 — гипохромная анемия;
- 0,80—1,05 — эритроциты считаются нормохромными;
- больше 1,10 — гиперхромная анемия.
При патологических состояниях отмечается параллельное и примерно одинаковое уменьшение как количества эритроцитов, так и гемоглобина.
Уменьшение ЦП (0,50—0,70) бывает при:
- железодефицитной анемии;
- анемии, вызванной свинцовой интоксикацией.
Увеличение ЦП (1,10 и более) бывает при:
- недостаточности витамина В12 в организме;
- недостаточности фолиевой кислоты;
- раке;
- полипозе желудка.
Для правильной оценки цветового показателя нужно учитывать не только количество эритроцитов, но и их объём.
СОЭ[править | править код]
Штатив с капиллярными стеклянными трубками для определения скорости оседания эритроцитов. Из-за разной скорости оседания эритроцитов уровень эритроцитов (красный) различный в пробах крови от разных людей. Метод Панченкова
Наиболее частыми методами определения СОЭ являются:
- метод Панченкова
- метод Вестергрена[5]
Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) — неспецифический индикатор патологического состояния организма.
В норме:
- новорождённые — 0—2 мм/ч;
- дети до 6 лет — 12—17 мм/ч;
- мужчины до 60 лет — до 8 мм /ч;
- женщины до 60 лет — до 12 мм/ч;
- мужчины старше 60 лет — до 15 мм/ч;
- женщины старше 60 лет — до 20 мм/ч.
Увеличение СОЭ встречается при:
- инфекционно-воспалительном заболевании;
- коллагенозах;
- поражении почек, печени, эндокринных нарушениях;
- беременности, в послеродовом периоде, менструации;
- переломах костей;
- оперативных вмешательствах;
- анемиях;
- онкологических заболеваниях.
Оно может увеличиваться и при таких физиологических состояниях, как приём пищи (до 25 мм/ч), беременности (до 45 мм/ч).
Снижение СОЭ бывает при:
- гипербилирубинемии;
- повышении уровня желчных кислот;
- хронической недостаточности кровообращения;
- эритремии;
- гипофибриногенемии.
Сравнение результатов общего анализа капиллярной и венозной крови[править | править код]
Исследования крови из вены – признанный “золотой стандарт” лабораторной диагностики для многих показателей. Однако капиллярная кровь является часто используемым типом биоматериала для проведения общего анализа крови. В связи с этим встает вопрос о эквивалентности результатов, полученных при исследовании капиллярной (К) и венозной (В) крови.
Сравнительная оценка 25 показателей общего анализа крови для разных типов биоматериала представлена в таблице как среднее значение анализа, [95% ДИ]:[2]
Показатель, ед. | n пар | Кровь | Разность | Значимость различий | ||
В, ед. | К, ед. | (К-В), ед. | (К-В), % от В | |||
WBC, *109/л | 52 | 6,347 [5,93; 6,75] | 5,845 [5,42; 6,25] | -0,502 [-0,639; -0,353] | -7,901 [-10,07; -5,56] | W=1312 рMC<0,001 |
RBC, *1012/л | 52 | 4,684 [4,55; 4,82] | 4,647 [4,52; 4,77] | -0,5 [-0,6; -0,3] | -0,792 [-2,11; -0,75] | W=670 рMC=0,951 |
HGB, г/л | 52 | 135,346 [131,3; 139,3] | 136,154 [132,2; 140,1] | 0,808 [-0,865; 2,711] | 0,597 [-0,64; 2,00] | W=850,5 рMC=0,017 |
HCT, % | 52 | 41,215 [40,07; 42,31] | 39,763 [38,74; 40,76] | -1,452 [-1,96; -0,84] | -3,522 [-4,77; -2,04] | W=1254 pMC<0,001 |
MCV, фл | 52 | 88,115 [87,09; 89,17] | 85,663 [84,66; 86,68] | -2,452 [-2,71; -2,19] | -2,782 [-3,08; -2,49] | W=1378 pMC<0,001 |
MCH, пг | 52 | 28,911 [28,53; 29,32] | 29,306 [28,92; 29,71] | 0,394 [0,275; 0,511] | 1,363 [0,95; 1,77] | W=997 pMC<0,001 |
MCHC, г/л | 52 | 328,038 [325,7; 330,3] | 342,154 [339,6; 344,7] | 14,115 [12,63; 15,54] | 4,303 [3,85; 4,74] | W=1378 рMC<0,001 |
PLT, *109/л | 52 | 259,385 [242,1; 275,2] | 208,442 [191,8; 224,8] | -50,942 [-60; -41,31] | -19,639 [-23,1; -15,9] | W=1314 рMC<0,001 |
BA, *109/л | 52 | 0,041 [0,036; 0,045] | 0,026 [0,021; 0,029] | -0,015 [-0,02; -0,01] | -37,089 [-48,8; -24,4] | W=861 рMC<0,001 |
BA, % | 52 | 0,654 [0,577; 0,729] | 0,446 [0,373; 0,513] | -0,207 [-0,28; -0,14] | -31,764 [-42,3; -21,2] | W=865,5 рMC<0,001 |
P-LCR, % | 52 | 31,627 [29,38; 33,84] | 36,109 [33,95; 38,29] | 4,482 [3,51; 5,47] | 14,172 [11,09; 17,29] | W=1221 рMC<0,001 |
LY, *109/л | 52 | 2,270 [2,07; 2,45] | 2,049 [1,834; 2,224] | -0,221 [-0,29; -0,15] | -9,757 [-12,8; -6,63] | W=1203 pMC<0,001 |
LY, % | 52 | 35,836 [34,09; 37,56] | 35,12 [33,25; 36,86] | -0,715 [-1,23; -0,23] | -1,996 [-3,44; -0,64] | W=987,5 рMC=0,002 |
MO, *109/л | 52 | 0,519 [0,486; 0,551] | 0,521 [0,483; 0,555] | 0,002 [-0,02; 0,02] | 0,333 [-3,81; 4,44] | W=668,5 рMC=0,583 |
MO, % | 52 | 8,402 [7,88; 8,90] | 9,119 [8,59; 9,64] | 0,717 [0,502; 0,933] | 8,537 [5,97; 11,10] | W=1244 рMC<0,001 |
NE, *109/л | 52 | 3,378 [3,10; 3,65] | 3,118 [2,82; 3,38] | -0,259 [-0,33; -0,18] | -7,680 [-9,82; -5,39] | W=1264 рMC<0,001 |
NE, % | 52 | 52,925 [50,96; 54,86] | 52,981 [50,99; 54,99] | 0,056 [-0,44; 0,59] | 0,105 [-0,84; 1,12] | W=743 рMC=0,456 |
PDW | 52 | 12,968 [12,32; 13,57] | 14,549 [13,82; 15,24] | 1,580 [1,271; 1,859] | 12,186 [9,79; 14,33] | W=1315 рMC<0,001 |
RDW-CV | 52 | 12,731 [12,51; 12,94] | 13,185 [12,95; 13,4] | 0,454 [0,411; 0,496] | 3,565 [3,233; 3,897] | W=1378 рMC<0,001 |
RDW-SD | 52 | 40,967 [40,20; 41,71] | 40,471 [39,72; 41,19] | -0,496 [-0,73; -0,26] | -1,211 [-1,79; -0,63] | W=979 рMC<0,001 |
MPV, фл | 52 | 10,819 [10,54; 11,09] | 11,431 [11,15; 11,71] | 0,612 [0,486; 0,735] | 5,654 [4,494; 6,796] | W=1159 рMC<0,001 |
PCT, % | 52 | 0,283 [0,265; 0,3] | 0,240 [0,221; 0,259] | -0,042 [-0,06; -0,02] | -14,966 [-21,1; -8,85] | W=245 рMC<0,001 |
EO, *109/л | 52 | 0,139 [0,098; 0,175] | 0,131 [0,098; 0,160] | -0,007 [-0,02; 0,005] | -5,263 [-13,15; 4,01] | W=475 рMC=0,235 |
EO, % | 52 | 2,183 [1,604; 2,7] | 2,275 [1,74; 2,74] | 0,092 [-0,063; 0,269] | 4,229 [-2,91; 12,33] | W=621,5 рMC=0,074 |
ESR, мм/час | 52 | 7,529 [5,47; 9,44] | 7,117 [5,20; 8,79] | -0,412 [-1,03; 0,235] | -5,469 [-13,67; 3,12] | W=156,5 рMC=0,339 |
Все исследованные 25 показателей разделены на 3 группы: (1) статистически значимо снижающиеся в капиллярной крови относительно венозной, (2) значимо увеличивающиеся, и (3) не изменяющиеся:[2]
1) Показателей этой группы одиннадцать, 4 из которых находятся в пределах -5% (HCT, MCV, LY%, RDW-SD) – их ДИ находятся в пределах границ смещения в -5% и 0%, но не пересекают их. ДИ для WBC, LY, NE и PCT не вошли в границы смещения -5%. Наиболее сильно уменьшаются показатели PLT (-19,64%), BA (-37,09%) и BA% (-31,77%).
2) Показателей в этой группе – 7. Для MO%, P-LCR, PDW и MPV смещение составляет более 5%, однако 95% ДИ MPV включает значение смещения 5%. Отклонения оставшихся 3 показателей данной группы (MCH, MCHC, RDW-CV) составляют менее 5%.
3) В данной группе 7 показателей: RBC, HGB, MO, NE%, EO, EO%, ESR. Для них не были обнаружены статистически значимые различия.
При сравнении результатов капиллярной и венозной крови, необходимо учитывать существенное снижение в капиллярной крови числа базофилов, тромбоцитов (приводит к увеличению коэффициента больших тромбоцитов, распределения тромбоцитов по объему, среднего объема тромбоцита и значительному снижению тромбокрита), а также менее значимое снижение числа лейкоцитов, лимфоцитов и нейтрофилов, что вызывает некоторое повышение относительного количества моноцитов.[2]
Показатели третьей группы (RBC, HGB, MO, NE%, EO, EO%, ESR), наряду с параметрами крови первой и второй групп, чьи 95% ДИ включали не более чем 5% отклонение (HCT, MCV, LY%, RDW-SD, MCH, MCHC, RDW-CV), можно определять в капиллярной крови при строгом соблюдении преаналитических правил без какого-либо ущерба для точности клинической оценки.
См. также[править | править код]
- Биохимический анализ крови
- Общий анализ мочи
- Свёртывание крови
Примечания[править | править код]
Литература[править | править код]
- Ольховик А. Ю., Садовников П. С., Васильев А. В., Денисов Д. Г. Сравнительная оценка показателей общеклинического исследования венозной и капиллярной крови // Medline.ru. — 11.06.2017. — Т. 18. — С. 113-122.
- Назаренко Г. И., Кишкун А. А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований // М.: Медицина — 2006. — 544 с. ISBN 5-225-04579-0.
- Татков О. В., Ступин Ф. П. Общий анализ крови. Информационный сборник // М.: Издательские решения. — 2016. — 72 с. ISBN 978-5-4474-7600-7.
- Кишкун А. А. Клиническая лабораторная диагностика. Учебное пособие (Глава 2. Гематологические исследования) // М.: ГЭОТАР-Медиа. — 2015. — 976 с. ISBN 978-5-9704-3518-2.
- Дядя Г. И. и др. Универсальный справочник практикующего врача (Раздел «Общий анализ крови») // Воронеж: Научная книга. — 2017. — 512 с. ISBN 978-5-521-05469-5.
Ссылки[править | править код]
- Что могут гематологические анализаторы, С. А. Луговская (Журнал «Лаборатория» № 5, 1997 г.)
- Статья «Клинический анализ крови» с толкованиями и объяснениями на сайте «Доктор Комаровский».
- Расшифровка анализа крови онлайн
- Лейкоцитарные индексы в прогнозировании исхода у хирургического больного
Источник
Методика исследований
Забор крови, с последующим её исследованием производился у мужчин в возрасте от 20-ти до 35-ти лет, до и после физической нагрузки. В исследовании приняла участие группа из тридцати трёх человек, каждый из которой, после взятия пробы до физической нагрузки, проходил стандартную тренировку в течение часа. В таблице 3 сведены типы и продолжительность упражнений, которым подвергались все испытуемые.
Таблица 3 — типы физической нагрузки, применяемой в исследовании
Тип физической нагрузки | Продолжительность, мин | Темп выполнения |
Бег | 15 | Средний |
Комплекс упражнений | 15 | Ускоренный |
Спарринг | 30 | Средний |
Тренировка включала в себя 15 минут бега в нормальном темпе (один тридцатиметровый круг в минуту); выполнение комплекса упражнений (подтягивания, отжимания от пола, приседания) в течение 15 минут в ускоренном темпе (20 подтягиваний в минуту, 50 приседаний в минуту, 30 отжиманий в минуту); 30 минутный спарринг в нормальном темпе (20-25 бросков в минуту). По окончанию тренировки вновь бралась проба такого же объёма, у тех же испытуемых, что и до тренировки.
Техника проведения общего анализа крови
Основные этапы выполнения общего анализа крови:
1 взятие материала;
2 приготовление мазков крови;
3 проведение анализов на гематологическом анализаторе;
4 фиксация мазков крови;
5 окраска мазков крови;
6 подсчёт лейкоцитарной формулы.
Взятие материала. Кровь для исследования получили путём прокола четвёртого пальца левой руки обследуемого слева от срединной линии на некотором расстоянии от ногтя. В зависимости от толщины кожи глубина прокола составляет 2-3 мм. Обработанная кожа пальца высыхает несколько секунд. Цель этого «высыхания» — исключить растекание крови по пальцу, а также гемолитического воздействия антисептика на эритроциты. Скарификатор одноразового использования плотно зажимается между указательным и большим пальцами правой руки; производится прокол. Прокол произвели перпендикулярно рисунку кожных покровов пальца, так как в этом случае происходит повреждение нескольких капилляров, ход которых совпадает с ходом линий кожного рисунка. Учитываем, что разрез произведённый параллельно кожным линиям, спадается, что затрудняет забор крови. Первую, выступившую каплю крови удалили ватным тампоном, а последующие были взяты на исследование. Взятую кровь поместили в пронумерованные и обработанные раствором антикоагулянта. Трилоном-Б, пластиковые микрокюветы. На следующем рисунке показаны одноразовые пластиковые микрокюветы, более удобные и безопасные в использовании, чем стеклянные пробирки.
Все манипуляции связанные с забором крови проводились используя стерильные комплекты инструментов для взятия крови (капилляры Панченкова, предметные стёкла, скарификаторы и микрокюветы). Для каждого обследуемого использовалась индивидуальная пара перчаток и стерильных ватных укладок. Все манипуляции проводились в соответствии с требованиями приказа №165 МЗ РБ от 25.11.2002 г «О методах стерилизации и дезинфекции в медицинских учреждениях» [21].
Рисунок 1 — Микрокюветы с раствором антикоагулянта
Приготовление мазков крови. Для изготовления мазка крови использовались тщательно обезжиренные предметные стёкла. Мазок крови готовился шлифованным стеклом с идеально ровным краем, ширина которого была приблизительно на 2-3 мм уже предметного стекла. К куполу свеже выпущенной из прокола капли было сделано прикосновение предметным стеклом на расстоянии 1,5-2 см от его края, не касаясь кожи в месте прокола. Размер капли на стекле не менее 2-3 мм в диаметре. Шлифованным стеклом, приставленным к предметному под углом 45°, быстрым движением справа налево был сделан мазок. Критерием правильности выполненного мазка является его полупрозрачность и желтоватый цвет. Техника приготовления мазка крови представлена на следующем рисунке.
Рисунок 2 — Техника приготовления мазка крови
Проведение анализов на гематологическом анализаторе. Для исследований использовался гематологический анализатор SISMYX-500. Взятую кровь в миниёмкастях тщательно перемешали и поместили в загрузочную часть аппарата. Предварительно была проведена калибровка данного аппарата, которая заключалась в проведении полного анализа микрокюветы с дистиллированной водой. Определение параметров исследуемой крови протекает в автономном режиме, без непосредственного участия человека. По завершению цикла исследования сняли выданные аппаратом результаты [22].
Изображение аппарата SISMYX-500, и момента отбора пробы для анализа, представлены на рисунке 3.
Фиксация мазков крови. Данный этап предохраняет форменные элементы от содержащейся в красителях воды, под влиянием которой в не фиксированных мазках происходит гемолиз эритроцитов и изменяется морфология лейкоцитов.
Фиксатор также вызывает коагуляцию белков и тем самым закрепляет препарат на стекле. В качестве фиксирующей жидкости использовали раствор эозинметиленового синего по Май-Грюнвальду. Высушенные мазки опускались в широкогорлую банку с фиксатором на 3-5 минут. Далее пинцетом мазки были извлечены и высушены на воздухе.
Рисунок 3 — Гематологический анализатор SISMYX-500
Окраска мазков крови. Фиксированные сухие мазки поместили в контейнер, который опустили в кювету с рабочим раствором красителя и выдержали в нём экспозицию в 30 минут.
Затем, контейнер был перенесён в кювету с водопроводной водой, а затем в вертикальный штатив для сушки. В качестве красящего раствора был использован краситель по прописи Романовского-Гимзы. В состав красителя входят: азур-2 (смесь равных количеств азура-1 и метиленового синего) и эозин. Критериями правильности данной окраски являются розово-оранжевые гранулы эозинофилов, светло-розовый цвет эритроцитов, нейтрофильная зернистость фиолетового цвета.
Подсчёт лейкоцитарной формулы производят с помощью иммерсионной системы микроскопа с увеличением Ч630. Для работы используется специальное иммерсионное масло, каплю которого наносят на препарат. Удобный обзор препарата настраивают с помощью микро- и макровинтов. Для регистрации клеток при подсчёте лейкоцитарной формулы использовался счётчик лабораторный СЛ-1.
Это простейший арифмометр снабжённый клавишами, обозначенными буквами для подсчёта соответствующих видов лейкоцитов, изображён на рисунке 4.
Рисунок 4 — Счётчик лабораторный СЛ-1
Подсчёт лейкоцитов производился в тонкой части мазка, где эритроциты располагаются одиночно. Препарат просматривают по зигзагообразной линии («линии Меандра») в количестве 3-5 полей зрения. Когда сосчитано 100 клеток, счётчик издаёт характерный сигнал, что означает окончание подсчёта лейкограммы данного препарата. Подсчитывались только целые, не разрушенные клетки.
Статистическая обработка результатов исследования
Для оценки влияния физической нагрузки на состояние показателей периферической крови использовались результаты общего анализа крови до и после физической нагрузки.
В ходе исследования нами были вычислены среднее арифметическое, стандартное отклонение, стандартная ошибка, коэффициент вариации по продуктивности и устойчивости внимания, а также по показателям темпа выполнения.
Средняя арифметическая вычисляется по формуле:
, (4)
где Xi — значение признака, варианта;
n — число значений.
Стандартное отклонение:
, (5)
где x2 — сумма квадратов центральных отклонений, т. е. квадратов разностей между каждым значением и средней арифметической;
n — 1 — число степеней свободы, равное числу объектов в группе без одного.
Ошибка стандартного отклонения:
(6)
где — дисперсия;
n — объём выборки.
Коэффициента вариации:
, (7)
где у — стандартное отклонение;
м — средняя арифметическая.
В результате обработки полученного материала, был проведён статистический анализ, построены графики зависимости показателей концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, от воздействующего на них фактора физической нагрузки, а также таблицы результатов дисперсионного анализа, для каждого из исследуемых показателей.
Статистическая обработка результатов исследований выполнена с использованием прикладных программ MS Excel 2007 и Statistica for Windows 6.0. Оценка достоверности различий осуществлялась на основе критерия Фишера. Влияние физической нагрузки на показатели крови оценено методом однофакторного дисперсионного [23].
Источник