Клинический анализ крови автоматический подсчет

Общий клинический анализ крови (ОАК) (развернутый клинический анализ крови[источник не указан 502 дня]) — врачебный [источник не указан 502 дня] анализ, позволяющий оценить содержание гемоглобина в системе красной крови, количество эритроцитов, цветовой показатель, количество лейкоцитов, тромбоцитов. Клинический анализ крови позволяет рассмотреть лейкограмму и скорость оседания эритроцитов (СОЭ).

С помощью данного анализа можно выявить анемии (снижение гемоглобина — лейкоцитарная формула), воспалительные процессы (лейкоциты, лейкоцитарная формула) и т. д. Чаще всего проводится как один из диагностических общеклинических обследований пациента (больного)[1].

Проведение анализа[править | править код]

Одноразовые медицинские скарификаторы для прокола кожи перед забором на анализ периферической крови

Прокол кожи пальца одноразовым автоматическим скарификатором в пластиковом корпусе

Забор крови для проведения анализа необходимо производить натощак, и производится он двумя способами:

из пальца (как правило — безымянного);
из вены.

В целях мониторинга состояния здоровья пациента во времени результаты общего анализа крови целесообразнее сравнивать по одинаковым типам биоматериала, либо с учетом отклонений результатов капиллярной крови относительно аналогичных показателей венозной.[2]

Методы исследования[править | править код]

Сегодня для проведения анализа чаще всего используют автоматические анализаторы или используют методы микроскопических исследований.

Показатели крови[править | править код]

Подсчёт форменных элементов крови лаборантом. Слева от руки счётчик для учёта форменных элементов в процессе подсчёта при микроскопии

В настоящее время большинство показателей выполняют на автоматических гематологических анализаторах, которые в состоянии одновременно определять от 5 до 24 параметров. Из них основными являются количество лейкоцитов, концентрация гемоглобина, гематокрит, количество эритроцитов, средний объём эритроцита, средняя концентрация гемоглобина в эритроците, среднее содержание гемоглобина в эритроците, полуширина распределения эритроцитов по размерам, количество тромбоцитов, средний объём тромбоцита.

WBC (white blood cells — белые кровяные тельца) — абсолютное содержание лейкоцитов (норма 4—9 кл/л) — форменных элементов крови — отвечающих за распознавание и обезвреживание чужеродных компонентов, иммунную защиту организма от вирусов и бактерий, устранение отмирающих клеток собственного организма.
RBC (red blood cells — красные кровяные тельца) — абсолютное содержание эритроцитов (норма 4,3—5,5 кл/л) — форменных элементов крови — содержащих гемоглобин, транспортирующих кислород и углекислый газ.
HGB (Hb, hemoglobin) — концентрация гемоглобина в цельной крови (норма 120—140 г/л). Для анализа используют цианидный комплекс или бесцианидные реактивы (как замена токсичному цианиду). Измеряется в молях или граммах на литр или децилитр.
HCT (hematocrit) — гематокрит (норма 0,39—0,49), часть (% = л/л) от общего объёма крови, приходящаяся на форменные элементы крови. Кровь на 40—45 % состоит из форменных элементов (эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов) и на 60—55 % из плазмы. Гематокрит это соотношение объёма форменных элементов к плазме крови. Считается, что гематокрит отражает соотношение объёма эритроцитов к объёму плазмы крови, так как в основном эритроциты составляют объём форменных элементов крови. Гематокрит зависит от количества RBC и значения MCV и соответствует произведению RBC*MCV.
PLT (platelets — кровяные пластинки) — абсолютное содержание тромбоцитов (норма 150—400 кл/л) — форменных элементов крови — участвующих в гемостазе.

Эритроцитарные индексы (MCV, MCH, MCHC):

MCV — средний объём эритроцита в кубических микрометрах (мкм) или фемтолитрах (фл)(норма 80—95 фл). В старых анализах указывали: микроцитоз, нормоцитоз, макроцитоз.
MCH — среднее содержание гемоглобина в отдельном эритроците в абсолютных единицах (норма 27—31 пг), пропорциональное отношению «гемоглобин/количество эритроцитов». Цветной показатель крови в старых анализах. ЦП=MCH*0.03
MCHC — средняя концентрация гемоглобина в эритроцитарной массе, а не в цельной крови (см. выше HGB) (норма 320—360 г/л) , отражает степень насыщения эритроцита гемоглобином. Снижение MCHC наблюдается при заболеваниях с нарушением синтеза гемоглобина. Тем не менее, это наиболее стабильный гематологический показатель. Любая неточность, связанная с определением гемоглобина, гематокрита, MCV, приводит к увеличению MCHC, поэтому этот параметр используется как индикатор ошибки прибора или ошибки, допущенной при подготовке пробы к исследованию.

Тромбоцитарные индексы (MPV, PDW, PCT):

MPV (mean platelet volume) — средний объём тромбоцитов (норма 7—10 фл).
PDW — относительная ширина распределения тромбоцитов по объёму, показатель гетерогенности тромбоцитов.
PCT (platelet crit) — тромбокрит (норма 0,108—0,282), доля (%) объёма цельной крови, занимаемую тромбоцитами.

Лейкоцитарные индексы:

LYM% (LY%) (lymphocyte) — относительное (%) содержание (норма 25—40 %) лимфоцитов.
LYM# (LY#) (lymphocyte) — абсолютное содержание (норма 1,2—3,0х/л (или 1,2—3,0 х /мкл)) лимфоцитов.
MXD% (MID%) — относительное (%) содержание смеси (норма 5—10 %) моноцитов, базофилов и эозинофилов.
MXD# (MID#) — абсолютное содержание смеси (норма 0,2—0,8 x /л) моноцитов, базофилов и эозинофилов.
NEUT% (NE%) (neutrophils) — относительное (%) содержание нейтрофилов.
NEUT# (NE#) (neutrophils) — абсолютное содержание нейтрофилов.
MON% (MO%) (monocyte) — относительное (%) содержание моноцитов (норма 4—11 %).
MON# (MO#) (monocyte) — абсолютное содержание моноцитов (норма 0,1—0,6 кл/л).
EO% — относительное (%) содержание эозинофилов.
EO# — абсолютное содержание эозинофилов.
BA% — относительное (%) содержание базофилов.
BA# — абсолютное содержание базофилов.
IMM% — относительное (%) содержание незрелых гранулоцитов.
IMM# — абсолютное содержание незрелых гранулоцитов.
ATL% — относительное (%) содержание атипичных лимфоцитов.
ATL# — абсолютное содержание атипичных лимфоцитов.
GR% (GRAN%) — относительное (%) содержание (норма 47—72 %) гранулоцитов.
GR# (GRAN#) — абсолютное содержание (норма 1,2—6,8 х /л (или 1,2—6,8 х /мкл)) гранулоцитов.

Эритроцитарные индексы:

HCT/RBC — средний объём эритроцитов.
HGB/RBC — среднее содержание гемоглобина в эритроците.
HGB/HCT — средняя концентрация гемоглобина в эритроците.
RDW — Red cell Distribution Width — «ширина распределения эритроцитов» так называемый «анизоцитоз эритроцитов» — показатель гетерогенности эритроцитов, рассчитывается как коэффициент вариации среднего объёма эритроцитов.
RDW-SD — относительная ширина распределения эритроцитов по объёму, стандартное отклонение.
RDW-CV — относительная ширина распределения эритроцитов по объёму, коэффициент вариации.
P-LCR — коэффициент больших тромбоцитов.
ESR (СОЭ) (скорость оседания эритроцитов) — неспецифический индикатор патологического состояния организма.

Как правило, автоматические гематологические анализаторы строят также гистограммы для эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов.

Гемоглобин[править | править код]

Гемоглобин (Hb, Hgb) в анализе крови — это основной компонент эритроцитов, который транспортирует кислород к органам и тканям. Для анализа используют цианидный комплекс или бесциандидные реактивы (как замена токсичному цианиду). Измеряется в молях или граммах на литр или децилитр. Его определение имеет не только диагностическое, но и прогностическое значение, так как патологические состояния, приводящие к уменьшению содержания гемоглобина, ведут к кислородному голоданию тканей.

В норме содержание гемоглобина в крови[3]:

мужчины — 135—160 г/л (граммов на литр);
женщины — 120—140 г/л.

Повышение гемоглобина отмечается при:

первичной и вторичной эритремии;
обезвоживании (ложный эффект за счёт гемоконцентрации);
чрезмерном курении (образование функционально неактивного HbСО).

Снижение гемоглобина выявляется при:

анемии;
гипергидратации (ложный эффект за счёт гемодилюции — «разбавления» крови, увеличения объёма плазмы относительно объёма совокупности форменных элементов).

Эритроциты[править | править код]

Эритроциты (Э) в анализе крови — красные кровяные клетки, которые участвуют в транспорте кислорода в ткани и поддерживают в организме процессы биологического окисления.

В норме содержание эритроцитов в крови[4]:

Увеличение (эритроцитоз) количества эритроцитов бывает при:

новообразованиях;
водянке почечных лоханок;
влиянии кортикостероидов;
болезни и синдроме Кушинга;
болезни Истинной полицитемии;
лечении стероидами.

Небольшое относительное увеличение количества эритроцитов может быть связано со сгущением крови вследствие ожога, диареи, приема диуретиков.

Уменьшение содержания эритроцитов в крови наблюдается при:

кровопотере;
анемии;
беременности;
гидремия(внутривенное введение большого количества жидкости, то есть инфузионная терапия)
при оттоке тканевой жидкости в кровеносное русло при уменьшении отеков(терапия мочегонными препаратами).
снижении интенсивности образования эритроцитов в костном мозге;
ускоренном разрушении эритроцитов;

Лейкоциты[править | править код]

Лейкоциты (L) — клетки крови, образующиеся в костном мозге и лимфатических узлах. Различают 5 видов лейкоцитов: гранулоциты (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы), моноциты и лимфоциты. Основной функцией лейкоцитов является защита организма от чужих для него антигенов (в том числе, микроорганизмов, опухолевых клеток; эффект проявляется и в направлении клеток трансплантата).

В норме содержание лейкоцитов в крови: (4—9) х /л

Увеличение (лейкоцитоз) бывает при:

острых воспалительных процессах;
гнойных процессах, сепсисе;
многих инфекционных заболеваниях вирусной, бактериальной, грибковой и другой этиологии;
злокачественных новообразованиях;
травмах тканей;
инфаркте миокарда;
при беременности (последний триместр);
после родов — в период кормления ребёнка грудным молоком;
после больших физических нагрузок (физиологический лейкоцитоз).

К снижению (лейкопения) приводит:

аплазия, гипоплазия костного мозга;
воздействие ионизирующего излучения, лучевая болезнь;
брюшной тиф;
вирусные заболевания;
анафилактический шок;
болезнь Аддисона — Бирмера;
коллагенозы;
под влиянием некоторых лекарственных препаратов (сульфаниламиды и некоторые антибиотики, нестероидные противовоспалительные препараты, тиреостатики, противоэпилептические препараты, антиспазматические пероральные препараты);
повреждение костного мозга химическими средствами, лекарствами;
гиперспленизм (первичный, вторичный);
острые лейкозы;
миелофиброз;
миелодиспластические синдромы;
плазмоцитома;
метастазы новообразований в костный мозг;
пернициозная анемия;
тиф и паратиф;
коллагенозы.

Лейкоцитарная формула[править | править код]

Лейкоцитарная формула (лейкограмма) — процентное соотношение различных видов лейкоцитов, определяемое при подсчёте их в окрашенном мазке крови под микроскопом.

Кроме перечисленных выше лейкоцитарных индексов, предложены также лейкоцитарные, или гематологические, индексы, рассчитываемые как соотношение процентного содержания различных видов лейкоцитов, например, индекс соотношения лимфоцитов и моноцитов, индекс соотношения эозинофилов и лимфоцитов, и т. д.

Цветовой показатель[править | править код]

Цветовой показатель (ЦП) — степень насыщенности эритроцитов гемоглобином:

0,85—1,05 — норма;
меньше 0,80 — гипохромная анемия;
0,80—1,05 — эритроциты считаются нормохромными;
больше 1,10 — гиперхромная анемия.

При патологических состояниях отмечается параллельное и примерно одинаковое уменьшение как количества эритроцитов, так и гемоглобина.

Уменьшение ЦП (0,50—0,70) бывает при:

железодефицитной анемии;
анемии, вызванной свинцовой интоксикацией.

Увеличение ЦП (1,10 и более) бывает при:

недостаточности витамина В12 в организме;
недостаточности фолиевой кислоты;
раке;
полипозе желудка.

Для правильной оценки цветового показателя нужно учитывать не только количество эритроцитов, но и их объём.

СОЭ[править | править код]

Штатив с капиллярными стеклянными трубками для определения скорости оседания эритроцитов. Из-за разной скорости оседания эритроцитов уровень эритроцитов (красный) различный в пробах крови от разных людей. Метод Панченкова

Наиболее частыми методами определения СОЭ являются:

метод Панченкова
метод Вестергрена[5]

Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) — неспецифический индикатор патологического состояния организма.
В норме:

новорождённые — 0—2 мм/ч;
дети до 6 лет — 12—17 мм/ч;
мужчины до 60 лет — до 8 мм /ч;
женщины до 60 лет — до 12 мм/ч;
мужчины старше 60 лет — до 15 мм/ч;
женщины старше 60 лет — до 20 мм/ч.

Увеличение СОЭ встречается при:

инфекционно-воспалительном заболевании;
коллагенозах;
поражении почек, печени, эндокринных нарушениях;
беременности, в послеродовом периоде, менструации;
переломах костей;
оперативных вмешательствах;
анемиях;
онкологических заболеваниях.

Оно может увеличиваться и при таких физиологических состояниях, как приём пищи (до 25 мм/ч), беременности (до 45 мм/ч).

Снижение СОЭ бывает при:

гипербилирубинемии;
повышении уровня желчных кислот;
хронической недостаточности кровообращения;
эритремии;
гипофибриногенемии.

Сравнение результатов общего анализа капиллярной и венозной крови[править | править код]

Исследования крови из вены – признанный “золотой стандарт” лабораторной диагностики для многих показателей. Однако капиллярная кровь является часто используемым типом биоматериала для проведения общего анализа крови. В связи с этим встает вопрос о эквивалентности результатов, полученных при исследовании капиллярной (К) и венозной (В) крови.

Сравнительная оценка 25 показателей общего анализа крови для разных типов биоматериала представлена в таблице как среднее значение анализа, [95% ДИ]:[2]

Показатель, ед.

пар

Кровь

Разность

Значимость

различий

В, ед.

К, ед.

(К-В), ед.

(К-В), % от В

WBC, *109/л

6,347

[5,93; 6,75]

5,845

[5,42; 6,25]

-0,502

[-0,639; -0,353]

-7,901

[-10,07; -5,56]

W=1312

рMC<0,001

RBC, *1012/л

4,684

[4,55; 4,82]

4,647

[4,52; 4,77]

-0,5

[-0,6; -0,3]

-0,792

[-2,11; -0,75]

W=670

рMC=0,951

HGB, г/л

135,346

[131,3; 139,3]

136,154

[132,2; 140,1]

0,808

[-0,865; 2,711]

0,597

[-0,64; 2,00]

W=850,5

рMC=0,017

HCT, %

41,215

[40,07; 42,31]

39,763

[38,74; 40,76]

-1,452

[-1,96; -0,84]

-3,522

[-4,77; -2,04]

W=1254

pMC<0,001

MCV, фл

88,115

[87,09; 89,17]

85,663

[84,66; 86,68]

-2,452

[-2,71; -2,19]

-2,782

[-3,08; -2,49]

W=1378

pMC<0,001

MCH, пг

28,911

[28,53; 29,32]

29,306

[28,92; 29,71]

0,394

[0,275; 0,511]

1,363

[0,95; 1,77]

W=997

pMC<0,001

MCHC, г/л

328,038

[325,7; 330,3]

342,154

[339,6; 344,7]

14,115

[12,63; 15,54]

4,303

[3,85; 4,74]

W=1378

рMC<0,001

PLT, *109/л

259,385

[242,1; 275,2]

208,442

[191,8; 224,8]

-50,942

[-60; -41,31]

-19,639

[-23,1; -15,9]

W=1314

рMC<0,001

BA, *109/л

0,041

[0,036; 0,045]

0,026

[0,021; 0,029]

-0,015

[-0,02; -0,01]

-37,089

[-48,8; -24,4]

W=861

рMC<0,001

BA, %

0,654

[0,577; 0,729]

0,446

[0,373; 0,513]

-0,207

[-0,28; -0,14]

-31,764

[-42,3; -21,2]

W=865,5

рMC<0,001

P-LCR, %

31,627

[29,38; 33,84]

36,109

[33,95; 38,29]

4,482

[3,51; 5,47]

14,172

[11,09; 17,29]

W=1221

рMC<0,001

LY, *109/л

2,270

[2,07; 2,45]

2,049

[1,834; 2,224]

-0,221

[-0,29; -0,15]

-9,757

[-12,8; -6,63]

W=1203

pMC<0,001

LY, %

35,836

[34,09; 37,56]

35,12

[33,25; 36,86]

-0,715

[-1,23; -0,23]

-1,996

[-3,44; -0,64]

W=987,5

рMC=0,002

MO, *109/л

0,519

[0,486; 0,551]

0,521

[0,483; 0,555]

0,002

[-0,02; 0,02]

0,333

[-3,81; 4,44]

W=668,5

рMC=0,583

MO, %

8,402

[7,88; 8,90]

9,119

[8,59; 9,64]

0,717

[0,502; 0,933]

8,537

[5,97; 11,10]

W=1244

рMC<0,001

NE, *109/л

3,378

[3,10; 3,65]

3,118

[2,82; 3,38]

-0,259

[-0,33; -0,18]

-7,680

[-9,82; -5,39]

W=1264

рMC<0,001

NE, %

52,925

[50,96; 54,86]

52,981

[50,99; 54,99]

0,056

[-0,44; 0,59]

0,105

[-0,84; 1,12]

W=743

рMC=0,456

PDW

12,968

[12,32; 13,57]

14,549

[13,82; 15,24]

1,580

[1,271; 1,859]

12,186

[9,79; 14,33]

W=1315

рMC<0,001

RDW-CV

12,731

[12,51; 12,94]

13,185

[12,95; 13,4]

0,454

[0,411; 0,496]

3,565

[3,233; 3,897]

W=1378

рMC<0,001

RDW-SD

40,967

[40,20; 41,71]

40,471

[39,72; 41,19]

-0,496

[-0,73; -0,26]

-1,211

[-1,79; -0,63]

W=979

рMC<0,001

MPV, фл

10,819

[10,54; 11,09]

11,431

[11,15; 11,71]

0,612

[0,486; 0,735]

5,654

[4,494; 6,796]

W=1159

рMC<0,001

PCT, %

0,283

[0,265; 0,3]

0,240

[0,221; 0,259]

-0,042

[-0,06; -0,02]

-14,966

[-21,1; -8,85]

W=245

рMC<0,001

EO, *109/л

0,139

[0,098; 0,175]

0,131

[0,098; 0,160]

-0,007

[-0,02; 0,005]

-5,263

[-13,15; 4,01]

W=475

рMC=0,235

EO, %

2,183

[1,604; 2,7]

2,275

[1,74; 2,74]

0,092

[-0,063; 0,269]

4,229

[-2,91; 12,33]

W=621,5

рMC=0,074

ESR, мм/час

7,529

[5,47; 9,44]

7,117

[5,20; 8,79]

-0,412

[-1,03; 0,235]

-5,469

[-13,67; 3,12]

W=156,5

рMC=0,339

Все исследованные 25 показателей разделены на 3 группы: (1) статистически значимо снижающиеся в капиллярной крови относительно венозной, (2) значимо увеличивающиеся, и (3) не изменяющиеся:[2]

1) Показателей этой группы одиннадцать, 4 из которых находятся в пределах -5% (HCT, MCV, LY%, RDW-SD) – их ДИ находятся в пределах границ смещения в -5% и 0%, но не пересекают их. ДИ для WBC, LY, NE и PCT не вошли в границы смещения -5%. Наиболее сильно уменьшаются показатели PLT (-19,64%), BA (-37,09%) и BA% (-31,77%).

2) Показателей в этой группе – 7. Для MO%, P-LCR, PDW и MPV смещение составляет более 5%, однако 95% ДИ MPV включает значение смещения 5%. Отклонения оставшихся 3 показателей данной группы (MCH, MCHC, RDW-CV) составляют менее 5%.

3) В данной группе 7 показателей: RBC, HGB, MO, NE%, EO, EO%, ESR. Для них не были обнаружены статистически значимые различия.

При сравнении результатов капиллярной и венозной крови, необходимо учитывать существенное снижение в капиллярной крови числа базофилов, тромбоцитов (приводит к увеличению коэффициента больших тромбоцитов, распределения тромбоцитов по объему, среднего объема тромбоцита и значительному снижению тромбокрита), а также менее значимое снижение числа лейкоцитов, лимфоцитов и нейтрофилов, что вызывает некоторое повышение относительного количества моноцитов.[2]

Показатели третьей группы (RBC, HGB, MO, NE%, EO, EO%, ESR), наряду с параметрами крови первой и второй групп, чьи 95% ДИ включали не более чем 5% отклонение (HCT, MCV, LY%, RDW-SD, MCH, MCHC, RDW-CV), можно определять в капиллярной крови при строгом соблюдении преаналитических правил без какого-либо ущерба для точности клинической оценки.

См. также[править | править код]

Биохимический анализ крови
Общий анализ мочи
Свёртывание крови

Примечания[править | править код]

Литература[править | править код]

Ольховик А. Ю., Садовников П. С., Васильев А. В., Денисов Д. Г. Сравнительная оценка показателей общеклинического исследования венозной и капиллярной крови // Medline.ru. — 11.06.2017. — Т. 18. — С. 113-122.
Назаренко Г. И., Кишкун А. А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований // М.: Медицина — 2006. — 544 с. ISBN 5-225-04579-0.
Татков О. В., Ступин Ф. П. Общий анализ крови. Информационный сборник // М.: Издательские решения. — 2016. — 72 с. ISBN 978-5-4474-7600-7.
Кишкун А. А. Клиническая лабораторная диагностика. Учебное пособие (Глава 2. Гематологические исследования) // М.: ГЭОТАР-Медиа. — 2015. — 976 с. ISBN 978-5-9704-3518-2.
Дядя Г. И. и др. Универсальный справочник практикующего врача (Раздел «Общий анализ крови») // Воронеж: Научная книга. — 2017. — 512 с. ISBN 978-5-521-05469-5.

Ссылки[править | править код]

Что могут гематологические анализаторы, С. А. Луговская (Журнал «Лаборатория» № 5, 1997 г.)
Статья «Клинический анализ крови» с толкованиями и объяснениями на сайте «Доктор Комаровский».
Расшифровка анализа крови онлайн
Лейкоцитарные индексы в прогнозировании исхода у хирургического больного

Источник

Общий клинический анализ крови – это самый распространенный диагностический тест, который назначает пациенту врач. За последние десятилетия технология этого рутинного, но очень информативного исследования проделала колоссальный рывок – она стала автоматической. В помощь врачу лабораторной диагностики, орудием труда которого был обычный световой микроскоп, пришли высокотехнологичные автоматические гематологические анализаторы.

В этом посте мы расскажем, что именно происходит внутри «умной машины», видящей нашу кровь насквозь, и почему ей следует верить. Мы будем рассматривать физику процессов на примере гематологического анализатора UniCel DxH800 мирового бренда Beckman Coulter. Именно на этом оборудовании выполняются исследования, заказанные в сервисе лабораторной диагностики LAB4U.RU. Но для того, чтобы понять технологию автоматического анализа крови, мы разберемся с тем, что видели врачи-лаборанты под микроскопом и как они интерпретировали эту информацию.

Параметры анализа крови

Итак, в крови содержится три вида клеток:

лейкоциты, обеспечивающие иммунную защиту;
тромбоциты, отвечающие за свертываемость крови;
эритроциты, осуществляющие транспорт кислорода и углекислого газа.

Эти клетки находятся в крови в совершенно определенных количествах. Их обуславливают возраст человека и состояние его здоровья. В зависимости от условий, в которых находится организм, костный мозг производит столько клеток, сколько их требуется организму. Поэтому, зная количество определенного вида клеток крови и их форму, размер и другие качественные характеристики, можно уверенно судить о состоянии и текущих потребностях организма. Именно эти ключевые параметры – количество клеток каждого вида, их внешний вид и качественные характеристики – составляют общий клинический анализ крови.

При проведении общего анализа крови производят подсчет количества эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов. С лейкоцитами сложнее: их несколько видов, и каждый вид выполняет свою функцию. Выделяют 5 разных видов лейкоцитов:

нейтрофилы, нейтрализующие в основном бактерии;
эозинофилы, нейтрализующие иммунные комплексы антиген-антитело;
базофилы, участвующие в аллергических реакциях;
моноциты – главные макрофаги и утилизаторы;
лимфоциты, обеспечивающие общий и местный иммунитет.

В свою очередь, нейтрофилы по степени зрелости разделяют на:

палочкоядерные,
сегментоядерные,
миелоциты,
метамиелоциты.

Процент каждого вида лейкоцитов в их общем объеме называют лейкоцитарной формулой, которая имеет важное диагностическое значение. Например, чем более выражен бактериальный воспалительный процесс, тем больше нейтрофилов в лейкоцитарной формуле. Наличие нейтрофилов разной степени зрелости говорит о тяжести бактериальной инфекции. Чем острее процесс, тем больше в крови палочкоядерных нейтрофилов. Появление в крови метамиелоцитов и миелоцитов говорит о крайне тяжелой бактериальной инфекции. Для вирусных заболеваний характерно увеличение лимфоцитов, при аллергических реакциях – увеличение эозинофиллов.

Помимо количественных показателей, крайне важна морфология клеток. Изменение их обычной формы и размеров также свидетельствует о наличии определенных патологических процессов в организме.

Важный и наиболее известный показатель – количество в крови гемоглобина – сложного белка, обеспечивающего поступление кислорода к тканям и выведение углекислого газа. Концентрация гемоглобина в крови – главный показатель при диагностике анемий.

Еще один из важных параметров – это скорость оседания эритроцитов (СОЭ). При воспалительных процессах у эритроцитов появляется свойство слипаться друг с другом, образуя небольшие сгустки. Обладая большей массой, слипшиеся эритроциты под действием силы тяжести оседают быстрее, чем одиночные клетки. Изменение скорости их оседания в мм/ч является простым индикатором воспалительных процессов в организме.

Как было: скарификатор, пробирки и микроскоп

Забор крови

Вспомним, как раньше сдавали кровь: болезненный прокол подушечки скарификатором, бесконечные стеклянные трубочки, в которые собирали драгоценные капли выжатой крови. Как лаборант одним стёклышком проводил по другому, где находилась капля крови, царапая на стекле номер простым карандашом. И бесконечные пробирки с разными жидкостями. Сейчас это уже кажется какой-то алхимией.

Кровь брали именно из безымянного пальца, на что были вполне серьезные причины: анатомия этого пальца такова, что его травмирование дает минимальную угрозу сепсиса в случае инфицирования ранки. Забор крови из вены считался куда более опасным. Поэтому анализ венозной крови не был рутинным, а назначался по необходимости, и в основном в стационарах.

Стоит отметить, что уже на этапе забора начинались значительные погрешности. Например, разная толщина кожи дает разную глубину укола, вместе с кровью в пробирку попадала тканевая жидкость – отсюда изменение концентрации крови, кроме того, при давлении на палец клетки крови могли разрушаться.

Помните ряд пробирок, куда помещали собранную из пальца кровь? Для подсчета разных клеток действительно нужны были разные пробирки. Для эритроцитов – с физраствором, для лейкоцитов – с раствором уксусной кислоты, где эритроциты растворялись, для определения гемоглобина – с раствором соляной кислоты. Отдельный капилляр был для определения СОЭ. И на последнем этапе делался мазок на стекле для последующего подсчета лейкоцитарной формулы.

Анализ крови под микроскопом

Для подсчета клеток под микроскопом в лабораторной практике использовался специальный оптический прибор, предложенный еще в ХIX веке русским врачом, именем которого этот прибор и был назван – камера Горяева. Она позволяла определить количество клеток в заданном микрообъеме жидкости и представляла собой толстое предметное стекло с прямоугольным углублением (камерой). На нее была нанесена микроскопическая сетка. Сверху камера Горяева накрывалась тонким покровным стеклом.

Эта сетка состояла из 225 больших квадратов, 25 из которых были разделены на 16 малых квадратов. Эритроциты считались в маленьких исчерченных квадратах, расположенных по диагонали камеры Горяева. Причем существовало определенное правило подсчета клеток, которые лежат на границе квадрата. Расчет числа эритроцитов в литре крови осуществлялся по формуле, исходя из разведения крови и количества квадратов в сетке. После математических сокращений достаточно было посчитанное количество клеток в камере умножить на 10 в 12-й степени и внести в бланк анализа.

Лейкоциты считали здесь же, но использовали уже большие квадраты сетки, поскольку лейкоциты в тысячу раз больше, чем эритроциты. После подсчета лейкоцитов их количество умножали на 10 в 9-й степени и вносили в бланк. У опытного лаборанта подсчет клеток занимал в среднем 3-5 мин.

Методы подсчета тромбоцитов в камере Горяева были очень трудоемки из-за малой величины этого вида клеток. Оценивать их количество приходилось только на основе окрашенного мазка крови, и сам процесс был тоже весьма трудоемким. Поэтому, как правило, количество тромбоцитов рассчитывали только по специальному запросу врача.

Лейкоцитарную формулу, то есть процентный состав лейкоцитов каждого вида в общем их количестве мог определять только врач – по результатам изучения мазков крови на стеклах.

Визуально определяя находящиеся в поле зрения различные виды лейкоцитов по форме их ядра, врач считал клетки каждого вида и общее их количество. Насчитав 100 в совокупности, он получал требуемое процентное соотношение каждого вида клеток. Для упрощения подсчета использовались специальные счетчики с отдельными клавишами для каждого вида клеток.

Примечательно, что такой важный параметр, как гемоглобин, определялся лаборантом визуально (!) по цвету гемолизированной крови в пробирке с соляной кислотой. Метод был основан на превращении гемоглобина в солянокислый гематин коричневого цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина. Полученный раствор солянокислого гематина разводили водой до цвета стандарта, соответствующего известной концентрации гемоглобина. В общем, прошлый век

Как стало: вакуумные контейнеры и гематологические анализаторы

Начнем с того, что сейчас полностью поменялась технология забора крови. На смену скарификаторам и стеклянным капиллярам с пробирками пришли вакуумные контейнеры. Использующиеся теперь системы забора крови малотравматичны, процесс полностью унифицирован, что значительно сократило процент погрешностей на этом этапе. Вакуумные пробирки, содержащие консерванты и антикоагулянты, позволяют сохранять и транспортировать кровь от точки забора до лаборатории. Именно благодаря появлению новой технологии стало возможным сдавать анализы максимально удобно – в любое время, в любом месте.

На первый взгляд, автоматизировать такой сложный процесс, как идентификация клеток крови и их подсчет, кажется невозможно. Но, как обычно, все гениальное просто. В основе автоматического анализа крови лежат фундаментальные физические законы. Технология автоматического подсчета клеток была запатентована в далеком 1953 году американцами Джозефом и Уолессом Культерами. Именно их имя стоит в название мирового бренда гематологического оборудования Bеckman&Coulter.

Подсчет клеток

Апертурно-импедансный метод (метод Культера или кондуктометрический метод) основан на подсчете количества и оценке характера импульсов, возникающих при прохождении клетки через отверстие малого диаметра (апертуру), по обе стороны которого расположены два электрода. При прохождении клетки через канал, заполненный электролитом, возрастает сопротивление электрическому току. Каждое прохождение клетки сопровождается появлением электрического импульса. Чтобы выяснить, какова концентрация клеток, необходимо пропустить через канал определенный объем пробы и сосчитать количество появившихся импульсов. Единственное ограничение – концентрация пробы должна обеспечивать прохождение через апертуру только одной клетки в каждый момент времени.

За прошедшие более 60 лет технология автоматического гематологического анализа прошла большой путь. Вначале это были простые счетчики клеток, определяющие 8-10 параметров: количество эритроцитов (RBC), количество лейкоцитов (WBC), гемоглобин (Hb) и несколько расчетных. Такими были анализаторы первого класса.

Второй класс анализаторов определял уже до 20 различных параметров крови. Они существенно выше по уровню в дифференциации лейкоцитов и способны выделять популяции гранулоцитов (эозинофилы + нейтрофилы + базофилы), лимфоцитов и интегральной популяции средних клеток, куда относились моноциты, эозинофилы, базофилы и плазматические клетки. Такая дифференциация лейкоцитов успешно использовалась при обследовании практически здоровых людей.

Самыми технологичными и инновационными анализаторами на сегодняшний день являются машины третьего класса, определяющие до сотни различных параметров, проводящие развернутое дифференцирование клеток, в том числе по степени зрелости, анализирующие их морфологию и сигнализирующие врачу-лаборанту об обнаружении патологии. Машины третьего класса, как правило, снабжены еще и автоматическими системами приготовления мазков (включая их окраску) и вывода изображения на экран монитора. К таким передовым гематологическим системам относятся оборудование BeckmanCoulter, в частности система клеточного анализа UniCel DxH 800.

Современные аппараты BeckmanCoulter используют метод многопараметрической проточной цитометрии на основе запатентованной технологии VCS (Volume-Conductivity-Scatter). VCS-технология подразумевает оценку объема клетки, ее электропроводимость и светорассеяние.

Первый параметр – объем клетки – измеряется с использованием принципа Культера на основе оценки сопротивления при прохождении клеткой апертуры при постоянном токе. Величину и плотность клеточного ядра, а также ее внутренний состав определяют с помощью измерения ее электропроводности в переменном токе высокой частоты. Рассеяние лазерного света под разными углами позволяет получить информацию о структуре клеточной поверхности, гранулярности цитоплазмы и морфологии ядра клетки.

Полученные по трем каналам данные комбинируются и анализируются. В результате клетки распределяются по кластерам, включая разделение по степени зрелости эритроцитов и лейкоцитов (нейтрофилов). На основе полученных измерений этих трех размерностей определяется множество гематологических параметров – до 30 в диагностических целях, более 20 в исследовательских целях и более ста специфичных расчетных параметров для узкоспециализированных цитологических исследований. Данные визуализируются в 2D- и 3D-форматах. Врач-лаборант, работающий с гематологическим анализатором BackmanCoulter, видит результаты анализа на мониторе примерно в таком виде:

А далее принимает решение – надо ли их верифицировать или нет.

Стоит ли говорить, что информативность и точность современного автоматического анализа во много раз выше мануального? Производительность машин подобного класса – порядка сотни образцов в час при анализе тысяч клеток в образце. Вспомним, что при микроскопии мазка врачом анализировалось только 100 клеток!

Однако несмотря на эти впечатляющие результаты, именно микроскопия до сих пор пока остается «золотым стандартом» диагностики. В частности, при выявлении аппаратом патологической морфологии клеток образец анализируется под микроскопом вручную. При обследовании больных с гематологическими заболеваниями микроскопия окрашенного мазка крови проводится только вручную опытным врачом-гематологом. Именно так, вручную, дополнительно к автоматическому подсчету клеток, выполняется оценка лейкоцитарной формулы во всех детских анализах крови по заказам, сделанным с помощью лабораторного онлайн-сервиса LAB4U.RU.

Вместо резюме

Технологии автоматизированного гематологического анализа продолжают активно развиваться. По существу они уже заменили микроскопию при выполнении рутинных профилактических анализов, оставив ее для особо значимых ситуаций. Мы имеем в виду детские анализы, анализы людей, имеющих подтвержденные заболевания, особенно гематологические. Однако в о?