Как сдается анализ крови пцр

Полимеразная цепная реакция известна уже 30 лет. Ее широко используют во многих областях, начиная с археологии и заканчивая генетикой.

Именно метод пцр помогает установить отцовство, но наиболее часто его используют для выявления различных инфекционных болезней в организме человека.

Как проводят анализ методом пцр, и что это такое? На эти вопросы мы постараемся детально ответить.

Анализ ПЦР — что это такое?

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – высокоточный метод молекулярно-генетической диагностики, который позволяет выявить у человека различные инфекционные и наследственные заболевания, как в острой и хронической стадии, так и задолго до того, как заболевание может себя проявить.

Метод ПЦР — абсолютно специфичен и выполненный правильно не может дать ложноположительный результат. То есть, если инфекции нет, то анализ никогда не покажет, что она есть. Поэтому сейчас очень часто для утверждения диагноза дополнительно сдают анализ ПЦР, чтобы определить возбудителя и его природу.

Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) в 1983 году разработал Кэри Мюллис (США), за что в 1993 году он удостоен Нобелевской премии в области химии.

В чем преимущество данного метода?

Диагностика этим методом позволяет найти возбудителя непосредственно в гене, который содержится в исследуемых материалах. Это самый точный анализ на половые инфекции, скрытые инфекции, различные венерические заболевания.

Отличия ПЦР-диагностики от других методов лабораторного исследования заключаются в следующем:

метод нацелен на выявление самого возбудителя;
диагностика методом ПЦР отличается универсальностью: для обнаружения возбудителей нескольких;
заболеваний достаточно только одного биологического образца больного;
метод обладает высокой чувствительностью и не сопровождается другими перекрестными реакциями.

Кроме этого, преимуществом ПЦР-диагностики является то, что для анализа пригоден любой биологический материал пациента: кровь, выделения из половых органов, моча, сперма.

Какие инфекции позволяет выявить мазок на ПЦР?

В организме может присутствовать большое количество возбудителей инфекций, сюда относятся и «скрытые», которые длительное время никак себя не проявляют.

Анализ мазка на ПЦР позволяет выявить такие инфекции:

гепатит;
уреплазмоз половых органов;
кандидоз (молочница);
хламидиоз половых путей;
папиллома вирусная инфекция;
герпес;
наличие раковых клеток;
микоплазмоз;
бактериальный вагиноз;
инфекционный мононуклеоз;
трихомониаз;
оценить гормональное состояние;
СПИД (ВИЧ).

Исследуемым материалом для ПЦР обычно являются мокрота, слюна, моча, кровь. Перед проведением анализа необходимо тщательно подготовиться к нему, получив предварительную консультацию у врача.

Кровь для ПЦР обычно сдается натощак. Хорошие результаты показывает проведение анализа, когда материал для исследования взят из цервикального канала или уретры. В этом случае лучше всего провести ПЦР-диагностику не позже, чем через сутки после полового акта.

Разновидности ПЦР

ПЦР используется во многих областях для проведения анализов и в научных экспериментах. Существуют разные методики проведения анализа:

ПЦР с обратной транскрипцией (Reverse Transcription PCR, RT-PCR (англ.)) — используется для амплификации, выделения или идентификации известной последовательности из библиотеки РНК.
Инвертированная ПЦР (Inverse PCR (англ.)) — используется в том случае, если известен лишь небольшой участок внутри нужной последовательности. Этот метод особенно полезен, когда нужно определить соседние последовательности после вставки ДНК в геном.
Вложенная ПЦР (Nested PCR (англ.)) — применяется для уменьшения числа побочных продуктов реакции. Используют две пары праймеров и проводят две последовательные реакции.
Асимметричная ПЦР (англ. Asymmetric PCR) — проводится тогда, когда нужно амплифицировать преимущественно одну из цепей исходной ДНК. Используется в некоторых методиках секвенирования и гибридизационного анализа.
Количественная ПЦР (Quantitative PCR, Q-PCR (англ.)) или ПЦР в реальном времени — используется для непосредственного наблюдения за измерением количества конкретного ПЦР продукта в каждом цикле реакции.
Ступенчатая ПЦР (Touchdown PCR (англ.)) — с помощью этого подхода уменьшают влияние неспецифического связывания праймеров.
Групп-специфическая ПЦР (англ. group-specific PCR) — ПЦР для родственных последовательностях внутри одного или между разными видами, используя консервативные праймеры к этим последовательностям.

Если нуклеотидная последовательность матрицы известна частично или неизвестна вовсе, можно использовать вырожденные праймеры, последовательность которых содержит вырожденные позиции, в которых могут располагаться любые основания. Например, последовательность праймера может быть такой: …ATH…, где Н — А, Т или С.

Какие биологические материалы исследуются?

Материалом для ПЦР-исследования, в котором можно выявить чужеродную ДНК бактерии или ДНК или РНК вируса могут служить различные биологические среды и жидкости человека:

Моча. Может использоваться при инфекционном поражении мочеполового тракта у мужчин и мочевыделительных органов у женщин (у мужчин использование в качестве материала мочи заменяет эпителиальный соскоб).
Мокрота. Применяется для диагностики туберкулеза и реже для диагностики респираторных форм хламидиоза и микоплазмоза. Мокроту в количестве 15-20 мл собирают в стерильный (одноразовый) флакон.
Биологические жидкости. Сок простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж, слюна забираются по показаниям.
Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек. Обычно используются для диагностики заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП), таких как гонорея, хламидиоз, микоплазмоз, уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез, герпетическая и другие инфекции, поражающие слизистые оболочки.
Биоптаты. Чаще всего используют биоптаты желудка и двенадцатиперстной кишки для выявления хеликобактерной инфекции.
Кровь, плазма, сыворотка. Используются для ПЦР анализа вирусов гепатитов B, C, D, G, герпеса, ЦМВ, ВИЧ, исследования генов человека.

Как подготовиться к сдаче анализа?

Достоверность результата ПЦР напрямую зависит от правильности сдачи материала на обследование. Материал не должен быть загрязнен, иначе результат исследования не будет объективен. К наиболее важным рекомендациям перед сдачей анализа ПЦР относятся следующие требования:

Моча сдается утром в стерильный контейнер.
Анализ крови на инфекции необходимо сдавать на голодный желудок в утреннее время.
Не стоит проявлять половую активность за сутки до проведения анализа.

Результат анализа будет готов через 1,5-2 суток после проведения рассматриваемой процедуры. Встречаются такие ситуации, когда результат может быть подготовлен в тот же день.

Расшифровка анализа ПРЦ

Процесс интерпретации представленного исследования отличается своей простотой. Результаты пцр анализа можно получить через 1,5-2х суток после сдачи материала. В некоторых случаях результат готов в первый же день, и вот что они могут означать:

Отрицательный результат показывает, что в диагностируемом материале отсутствует искомый инфекционный возбудитель.
Пцр положительный обозначает, что в организме человека присутствует ДНК или РНК возбудителя.

В некоторых случаях производят количественное определение микроорганизмов. Это особенно актуально при заболеваниях, вызванных условно-патогенными микроорганизмами. Так как данные бактерии проявляют свое негативное воздействие лишь при избыточном количестве.

Также количественный анализ ПЦР важен для выбора терапевтической тактики и с целью контроля над лечением таких вирусных инфекций, как ВИЧ и вирусы гепатита.

Насколько точна ПЦР диагностика инфекций?

Метод ПЦР отличается высокой точностью, специфичностью и чувствительностью. Это означает, что данный анализ способен:

точно определить наличие или отсутствие инфекции;
точно указать, что именно это за инфекция (специфичность);
обнаружить инфекцию даже при очень низком содержании ДНК микробов в биологическом материале,
который был подвергнут исследованию (чувствительность).

ПЦР анализ: цена и сроки

Цена конкретного анализа будет зависеть от того, на какую инфекцию вы будете проверяться. Примерные цены и сроки:

ИППП: 300-500 руб, сроки – 1 день;
Вирус Эпштейна-Барра, вирус папилломы человека, герпеса, цитомегаловирус: 300-500 руб, сроки – 1 день;
Гепатит A, B, C, D, G: качественный анализ 650 руб, количественный анализ 2000 руб. Сроки – до 5 дней;
Антитела к вирусу гепатита С, суммарные ( Anti-HCV ) – 420 руб;
Антитела к вирусу гепатита C, IgM ( Anti-HCV IgM ) – 420 руб;
Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori): 300-400 руб, сроки – 1 день;
ВИЧ (антитела и антигены) – 380 руб;
РНК ВИЧ, качественно – 3 500 руб;
РНК ВИЧ, количественно – 11 000 руб.

Чтобы сэкономить средства, можно выбирать фиксированный пакет анализов. Такую услугу предоставляет большинство клиник где можно сдать анализ методом ПРЦ (инвитро, онклиник и т.д).

Источник

Анализы на ПЦР назначаются во многих случаях. Очевидно, что в современных условиях ПЦР диагностика способна дать самый точный ответ – имеет ли пациент инфекционную составляющую в организме, или нет. Для использования ПЦР методики необходим биологический материал, который и забирается у пациента по назначению лечащего врача.

Как правильно сдавать мазок, анализы на ПЦР? Перед мазком нельзя подмываться, надо сходить в туалет за 3 часа до процедуры. Есть и другие тонкости.

Инфекционные ЗППП, гепатиты, мононуклеоз – все мы стараемся избегать этих заболеваний. Если появились сомнения, например, после незащищенного полового акта, не стоит «прятать голову в песок», лучше сходить к врачу и провериться. Скорее всего, доктор вас попросит сдать анализы на ПЦР.

Анализы на ПЦР – что это

Если расшифровать аббревиатуру ПЦР, то получится «полимерная цепная реакция». Это самый простой способ обнаружить инфекцию. Для анализов берут различные биологические материалы и проверяют их на наличие чужеродных ДНК, которые принадлежат возбудителям болезни. Благодаря этому анализу можно определить, что за болезнь у пациента, а также узнать количество вредных микроорганизмов, находящихся в организме человека.

Что показывают анализы на ПЦР? Результат анализа ПЦР может быть или отрицательным, т.е. никаких инфекций в организме нет, или положительным. Если он подтверждает наличие инфекции, то врач сможет точно сказать, какая именно инфекция присутствует и в каком количестве.

Какой именно биологический материал берут на анализ? Все зависит от того, какой диагноз хочет опровергнуть или подтвердить специалист. Если нужно диагностировать гепатит или ВИЧ, то берут анализ крови. При подозрении на мононуклеоз – мазок из зева. Чаще всего проверяют наличие половых инфекций, а для этого делается мазок из шейки матки, исследуются выделения из половых органов у женщин, берется мазок из мочеиспускательного канала у мужчин. Или же пациент сдает мочу.

Поговорим более подробно о том, как получить достоверный анализ ПЦР, как сдавать его.

Как сдавать анализы

Как мы уже говорили, врач может попросить сдать для исследования различный биологический материал, поэтому подготовка к процедуре зависит от того, на что именно вы проверяетесь.

Сдача слюны, мочи, спермы

Если специалист берет на анализ слюну, то перед процедурой нельзя есть и принимать лекарства как минимум 4 часа. Перед тем, как сдать анализ, наберите в рот кипяченой воды, чтобы прополоскать его.

Если доктор попросил сдать мочу, то нужно брать только утреннюю. Перед тем, как собрать мочу на анализ, необходимо тщательно подмыться. Чтобы материал был чистым, без посторонних примесей, женщинам во влагалище лучше вставить тампон, а мужчинам постараться оттянуть кожную складку. В контейнере должно быть не менее 50-60 мл мочи.

Если берут на анализ сперму у мужчин, то перед ее сдачей он должен воздерживаться от половых контактов как минимум 3 дня. Также в это время не стоит посещать сауну, принимать горячую ванну, употреблять спиртные напитки, есть острую пищу. Важно перед тем, как сдать анализ, как минимум 3 часа не ходить в туалет, т.е. воздержаться от мочеиспускания.

Если врач попросил сдать кровь, то это делается утром, натощак. Перед этим не стоит увлекаться жирной пищей и пить алкогольные напитки.

Мазок у женщин

Чаще всего врачи все же просят сдать мазок на ПЦР, чтобы определить наличие половых инфекций. В разных лабораториях может быть свой список исследуемых заболеваний. Что именно нужно проверять в каждом конкретном случае, решает врач.

В каких случаях у женщин берут мазок на половые инфекции? Анализ назначается в том случае, если есть риск заражения инфекциями, передающимися половым путем:

Проводят обследования женщин, у которых в течение года был не один половой партнер, а несколько, или же появился новый партнер.
Берут анализ и у женщин, у которых до этого уже была выявлена инфекция, передающаяся половым путем.
Обязательно проводят обследование беременных женщин. Даже если болезнь не дает о себе знать, наличие инфекции в организме угрожает здоровью плода.

Не всегда ЗППП проявляют себя, иногда у зараженных женщин нет ярко выраженных симптомов, но они больны, поэтому могут заразить партнера, заработать себе бесплодие, воспаление органов малого таза и другие осложнения.

Как правильно это делать? У женщин берут мазок при помощи специальной щеточки, которая не впитывает слизь и не повреждает слизистую оболочку влагалища, мочевого канала или шейки матки. Как подготовиться к процедуре?

После последнего полового акта должно пройти не менее 36 часов.
Если вы лечились антибиотиками, сначала надо завершить курс лечения, после чего подождать не менее 3 недель до сдачи анализа.
Нельзя сдавать мазок, если у женщин менструация или маточное кровотечение.
Перед тем, как сдавать мазок, нельзя подмываться, тем более, использовать антибактериальное мыло.
Нельзя мочиться перед анализом, как минимум 3 часа. Правило действует и для женщин, и для мужчин.
Если у женщин еще не закончилось лечение, они принимает лекарства, вставляет вагинальные свечи, об этом надо сказать врачу, сдавать мазок тогда нельзя.

Мазок у мужчин

У мужчин берут мазок из мочеиспускательного канала. Как это происходит? Для забора материала у мужчин используется специальный зонд, который нужно ввести в него на глубину 3 см. Это не очень приятная процедура, может быть больно, появиться жжение, чувство дискомфорта. Чтобы уменьшить неприятные ощущения у мужчин, перед процедурой проводят массаж мочеиспускательного канала.

Подготовка к процедуре:

Несколько дней перед тем, как сдать анализ (1-3 дня) нельзя заниматься сексом.
Мазок обычно у мужчин берут утром. Перед этим не нужно проводить гигиену половых органов, это лучше сделать с вечера.
За 3 часа до того, как идти к врачу, нельзя мочиться.
Как и у женщин, у мужчин под запретом любые лекарственные препараты.

Как мы видим, подготовка к обследованию не сложная. Важно заранее проконсультироваться с врачом, задать ему вопросы, рассказать о принимаемых лекарствах, а уже потом идти на анализ.

Источник

ПЦР — метод лабораторной диагностики, позволяющий определить наличие возбудителя болезни, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул его ДНК.

Подробнее…

Для того чтобы результаты анализов были максимально достоверными, необходимо правильно подготовиться к их сдаче.

Как подготовиться?

Высокотехнологичные лабораторные методы диагностики дают возможность выявить множество заболеваний на самых ранних стадиях. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) — один из самых новых и точных способов диагностики. За его разработку ученый Кэри Муллис получил в 1993 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод хотя и считается экспериментальным, но уже широко и успешно применяется в медицине.

ПЦР-диагностика: суть подхода

Метод ПЦР использует принципы молекулярной биологии. Его суть заключается в применении особых ферментов, которые многократно копируют фрагменты РНК и ДНК возбудителей болезни, которые находятся в пробах биоматериала, например в крови.

После этого работники лаборатории сверяют полученные фрагменты с базой данных, выявляют тип возбудителя болезни и его концентрацию.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, охлаждающем и нагревающем пробирки с пробами биоматериала. Нагрев и охлаждение необходимы для проведения репликации. Точность температурного режима влияет на точность результата.

Сферы применения метода

Диагностические возможности метода ПЦР огромны, с его помощью можно выявить самые разные инфекции. Чаще всего ПЦР-метод применяют для диагностики:

ВИЧ;
герпеса;
различных половых инфекций, в частности хламидиоза, уреаплазмоза, гарднереллеза, микоплазмоза и трихомониаза;
кандидоза;
гепатитов;
мононуклеоза;
листериоза;
цитомегаловируса;
туберкулеза;
вируса папилломы человека;
клещевого энцефалита.

Это далеко не полный список, метод ПЦР-анализа используется в разных областях медицины.

Кстати
Метод ПЦР применяется не только в медицинских целях. В наши дни он используется и в иных сферах, например в криминалистике, в тех случаях, когда требуется определить, кому принадлежит найденный на месте преступления биоматериал. ПЦР иногда используется также при установлении отцовства.

Преимущества и недостатки подхода

У диагностики методом ПЦР много плюсов:

Высокая чувствительность. Метод позволяет выявить возбудителя болезни даже при наличии нескольких молекул его ДНК, то есть на очень ранних стадиях, при хронической форме заболевания, а так же в случаях, когда болезнь никак себя не проявляет, протекая латентно.

Универсальность. Для проведения ПЦР анализа подходит почти любой биоматериал — от крови и слюны до клеток кожи.

Широкий охват. Исследование одного образца может выявить сразу нескольких возбудителей болезни.

Оперативность. Результат, как правило, готов через 5–7 часов, то есть получить заключение можно уже на следующий день после забора биоматериала.

Точность. Метод ПЦР практически никогда не дает ложноположительных или ложноотрицательных результатов, если была соблюдена технология проведения этого анализа.

Невысокая стоимость. По цене ПЦР-анализ сравним с любыми другими лабораторными анализами крови.

Однако следует понимать, что совершенных методов анализа не бывает. У ПЦР есть и минус — высокие требования к соблюдению технологии и к профессионализму лаборантов. Если образец был загрязнен, анализ может дать ложный результат. Поэтому проводить ПЦР-диагностику лучше только в самых лучших лабораториях, где внедрены системы контроля качества работы.

Исследуемый биоматериал

Для ПЦР-диагностики заболеваний на анализ берут разные виды биоматериала. Выбор зависит от типа инфекции. При анализе на ЗППП методом ПЦР берут соскоб или мазок из шейки матки или уретры, а также мочу. Для выявления герпеса, цитомегаловируса, гепатита, токсоплазмоза и ВИЧ на анализ берут кровь. При анализе на мононуклеоз и цитомегаловирус берут мазок из зева. Спинномозговая жидкость используется для анализа при поражениях нервной системы, для диагностики внутриутробных инфекций исследуются ткани плаценты, для выявления легочных инфекций — мокрота или плевральная жидкость.

Подготовка к исследованию

Подготовка к ПЦР-диагностике напрямую зависит от типа биоматериала. Кровь сдается натощак утром. Моча также сдается утром, в лабораторных условиях, в стерильный контейнер. Перед сдачей мазка или соскоба из урогенитальной области нельзя вступать в половые контакты за несколько дней до исследования, не следует проводить спринцевания. Мазок или соскоб нельзя сдавать во время менструации и в течение 2-х дней после ее окончания.

Методы ПЦР-диагностики заболеваний

Существует немало различных методик ПЦР-диагностики: ПЦР в реальном времени, секвенирование, пиросеквенирование, микрофлюидные технологии. Сейчас наиболее распространенным способом проведения анализа является ПЦР в реальном времени — этот метод практически не допускает ложноположительных результатов, к тому же срок обработки образцов при исследовании таким способом сокращается — результат можно получить уже через час.

Расшифровка результатов

Для пациента результат ПЦР-анализа может быть либо положительным, либо отрицательным. Отрицательный означает, что следов враждебной ДНК не обнаружено и человек здоров. Положительный подразумевает наличие фрагментов ДНК возбудителя болезни — это значит, что человек заражен и ему требуется лечение.

Нередко ПЦР-диагностика дает положительный результат, но пациент не чувствует никакого недомогания, а признаки болезни отсутствуют. Однако это означает не ошибку, а очень раннюю стадию заболевания. В этом случае необходимы дополнительные исследования и лечение. Если заболевание было диагностировано на столь ранней стадии, следует начинать терапию как можно скорее, ведь чем дальше зайдет болезнь, тем сложнее будет ее вылечить.

ПЦР-диагностика инфекций невероятно точна — она позволяет обнаружить возбудителя болезни, даже если в пробе находится всего одна-единственная молекула его ДНК. Именно это качество сделало ПЦР-анализ одним из эффективнейших диагностических инструментов как для определения наличия инфекции, так и для контроля за ходом лечения.

Источник