Как провести ифа анализ крови
Иммуноферментный анализ (ИФА) — метод лабораторной диагностики, позволяющий обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях.
Где можно сдать анализ?
ИФА — один из самых распространенных и точных методов для выявления инфекций, передающихся половым путем, в частности ВИЧ, ВПЧ, гепатита В.
Узнать больше…
Для того чтобы результаты анализов были максимально достоверными, необходимо правильно подготовиться к их сдаче.
Как подготовиться?
Современная диагностика в медицине немыслима без высокочувствительных лабораторных анализов. Прежде для установления причин тех или иных симптомов врачи были вынуждены ориентироваться на косвенные признаки болезни, а также проводить многоступенчатые микроскопические исследования в попытке обнаружить возбудителя инфекции. Сегодня достаточно одного-единственного теста — такого как иммуноферментный анализ — чтобы подтвердить или опровергнуть первоначальный диагноз.
Основные понятия и принцип метода иммуноферментного анализа
Иммуноферментный анализ (ИФА) — это метод лабораторной диагностики, основанный на реакции «антиген-антитело», который позволяет выявить вещества белковой природы (в том числе ферменты, вирусы, фрагменты бактерий и другие компоненты биологических жидкостей).
Чтобы понять, как устроен иммуноферментный анализ, попробуем разобраться в сути реакции «антиген-антитело». Антиген — это чужеродная для организма молекула, как правило, белкового происхождения, которая может попасть в тело человека вместе с инфекционным агентом. Частицы чужой крови (если она не совпадает с нашей по группе) также являются антигенами. В организме антигены способны вызывать иммунную реакцию, направленную на защиту целостности внутренней среды от чужеродных веществ. Поэтому наше тело синтезирует особые вещества — антитела (иммуноглобулины), способные по принципу «ключ к замку» соединяться с антигенами, связывая их в иммунный комплекс (этот процесс как раз называется реакцией «антиген-антитело»). Такие иммунные комплексы легче распознаются и уничтожаются клетками иммунитета.
Существует несколько разновидностей антител, каждая из которых вступает в действие на определенном этапе иммунного ответа. Так, первыми в ответ на проникновение антигена в организм синтезируются иммуноглобулины класса М (IgM). Содержание этих антител наиболее высоко в первые дни инфекционного процесса.
Следом за ними иммунная система выбрасывает в кровь иммуноглобулины класса G (IgG), которые помогают уничтожать антигены до полной победы над инфекцией, а также продолжают циркулировать по сосудам в дальнейшем, обеспечивая иммунитет к повторному заражению. На этом явлении основана вакцинация: благодаря прививкам, содержащим ослабленные антигены микробов и вирусов, в нашей крови появляется большое количество IgG, которые при контакте с реальной угрозой быстро подавляют инфекцию — до того, как она нанесет вред здоровью.
Также существуют иммуноглобулины класса А (они в большом количестве содержатся в слизистых оболочках, защищая «подступы» к организму), Е (борются с паразитарными инфекциями) и другие. В лабораторной диагностике объектами интереса чаще всего являются IgM, IgG и IgA: по их концентрации можно оценить, на какой стадии находится инфекционный процесс, а также узнать, болел ли когда-либо человек тем или иным недугом (например, краснухой или ветряной оспой).
Как узнать, какие именно антигены или антитела присутствуют в организме человека? Когда врач предполагает, что причиной заболевания является определенная инфекция, или желает измерить концентрацию определенного гормона, он назначает пациенту иммуноферментный анализ.
Реакцию «антиген-антитело» можно воспроизвести в лабораторных условиях: использовать уже готовые антитела или антигены, чтобы определить, есть ли в исследуемом образце соответствующее им соединение.
Для начала необходимо получить образец биологической жидкости — обычно, это сыворотка крови. Лаборатория использует пластиковые планшеты с лунками, в которых уже содержатся очищенные антигены предполагаемого возбудителя (или — антитела, в случае если задачей является поиск антигена). Образцы вносятся в лунки, где происходит — или не происходит — образование иммунных комплексов. Если «встреча» состоялась, особое красящее вещество вступает в ферментную реакцию с объединенной молекулой, что позволяет с помощью инструментальной оценки оптической плотности сделать выводе о результатах анализа.
ИФА бывает качественным и количественным. В первом случае подразумевается однозначный ответ: искомое вещество или найдено, или не найдено в образце. В случае с количественным анализом более сложная цепь реакций дает возможность оценить концентрацию антител в крови человека, что в сравнении с результатами предыдущих тестов даст ответ на вопрос о том, как развивается инфекционный процесс.
Это интересно
Предшественником иммуноферментного анализа был радиоиммунный анализ, в котором для идентификации успешной реакции использовались меченые антитела и антигены. Поскольку проведение такой диагностики представляло потенциальную угрозу для здоровья сотрудников лаборатории, ученые озаботились поиском безопасной альтернативы по «окраске» образцов. Так в 1971 году был изобретен ИФА.
Преимущества метода
Бесспорные преимущества ИФА — высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность — это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.
ИФА во многом заменил «золотой стандарт» микробиологии — бактериологический метод диагностики, в ходе которого для идентификации возбудителя требовалось выделить его из организма, а затем в течение нескольких дней выращивать культуру на питательной среде в пробирке. Все то время, пока производился анализ, врачи были вынуждены лечить пациента «вслепую», догадываясь о происхождении микроорганизма по симптомам болезни. Определение IgM с помощью ИФА позволяет поставить точный диагноз уже в первые дни болезни.
Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.
Недостатки метода
К сожалению, для проведения ИФА нужно знать, что именно искать: методика анализа подразумевает, что врач заранее имеет предположение о природе заболевания. Поэтому нет смысла назначать такой тест в надежде случайно «угадать» диагноз.
В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека.
ИФА — крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.
Показания к назначению и выявляемые заболевания
Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА. Вот наиболее распространенные цели анализа:
- Диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний:
- IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С;
- IgG к ВИЧ;
- Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции;
- Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр;
- Ig M и IgG к герпетическим инфекциям;
- Ig M и IgG к токсоплазмозу;
- Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям;
- IgG к паразитарным заболеваниям;
- Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем;
- IgG к хеликобактерной инфекции.
Анализируемый биоматериал и особенности его забора
Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.
Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.
Сроки готовности результатов ИФА
При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.
Расшифровка иммуноферментного анализа
Результатом качественного ИФА будет однозначный вердикт: искомое вещество либо найдено, либо не найдено в образце. Если же речь о количественном анализе, то концентрация может выражаться числовым значением или определенным количеством знаков «+» (от одного до нескольких).
Анализируемые показатели
- IgM — наличие этого класса иммуноглобулинов говорит об остром инфекционном процессе в организме. Отсутствие IgM может говорить как об отсутствии конкретного возбудителя в организме, так и о переходе инфекции в хроническую стадию.
- IgA при отрицательном результате теста на IgM чаще всего свидетельствует о хронической или скрыто протекающей инфекции.
- IgM и IgA (совместное присутствие) — два положительных результата говорят о разгаре острой фазы заболевания.
- IgG говорит либо о хронизации заболевания, либо о выздоровлении и выработке иммунитета к инфекционному агенту.
Возможные результаты ИФА
В зависимости от содержания анализа в бланке могут быть представлены данные в виде таблицы с перечислением всех антител или антигенов с пометками об отрицательной или положительной реакции, либо будет указано количественное значение результата (отрицательный, слабоположительный, положительный или резко положительный). Последний вариант определяет, сколько антител содержится в анализируемом образце.
Еще один количественный показатель — индекс авидности антител, выраженный в процентах. Он указывает, сколько времени прошло от начала инфекционного процесса (чем выше индекс — тем больше).
Сегодня выпускаются тысячи видов тест-систем ИФА, позволяющих обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях. Поэтому этот анализ используется практически во всех медицинских отраслях. Диагноз, поставленный с помощью ИФА, — это гарантия назначения адекватной терапии и эффективного лечения заболевания.
Источник
При выявлении заболевания ВИЧ у человека проводят несколько последовательных диагностик, имеющих разный алгоритм действия. Метод, применяемый в самом начале диагностики – ИФА на ВИЧ. Это иммуноферментный анализ, с помощью которого в организме обнаруживается ответная реакция на вирус.
В первые четыре недели количество вируса в организме недостаточно, чтобы возник ответ. Поэтому, для получения достоверного результата первый ВИЧ анализ необходимо делать на шестой неделе после возможного заражения.
ИФА проводится тремя методами: прямой анализ крови, косвенный и метод «сэндвича». Вероятность такого определения СПИДа около 97%. Если в образце крови обнаруживается ответный белок на вирус иммунодефицита человека, значит заболевание есть. Данный метод позволяет увидеть разновидность вируса, благодаря чему можно подобрать более эффективное лечение и сохранить здоровье человека.
Содержание
ИФА метод диагностики ВИЧ
На фото – диагностический набор
С развитием науки методы анализа продолжают совершенствоваться. Крови требуется все меньше, а результат все точнее. В настоящее время используется анализ ИФА 4 поколения на ВИЧ. Достоверность такого метода значительно выше предыдущих вариантов.
Тест на ВИЧ 4 поколения позволяет дифференцировать ответные белки на группы и определять специфику вируса.
Кроме ИФА применяется еще несколько вариантов тестирования:
- Качественный ПЦР;
- Количественный ПЦР;
- Иммуноблоттинг;
Однозначно сказать, что лучше ПЦР или ИФА нельзя, так как разные методы эффективны в разные периоды активности вируса. Для достоверного вердикта, как правило, проводятся все варианты тестов.
Важно! Если частные клиники предлагают провести дорогой, но очень точный анализ на ВИЧ пятого или шестого поколения, не стоит этому верить. В настоящее время разработан и активно используется только ИФА 4-го поколения. Анализ лучше проводить в государственном учреждении, имеющем лицензию.
Производителей реагентов для проведения Ифа достаточно много, как отечественных, так и зарубежных
Часто при обследовании у ВИЧ-положительных людей обнаруживают сопутствующие заболевания: хламидию цитомегаловирус, сифилис, трихомониаз и т.д. эти организмы могут способствовать неправильной диагностике, поэтому после лечения тест на ВИЧ повторяют.
Когда проводят ИФА
В цикле развития вируса можно выделить несколько стадий:
- Инкубационный период;
- Период острой инфекции;
- Латентный период;
- Стадия вторичных заболеваний.
На первом этапе ответная реакция не возникает, либо ее интенсивность настолько мала, что индикаторы ее не фиксируют. В это время проводить анализ нецелесообразно.
Второй период начинается примерно через 6 недель после заражения. Именно в этот срок проводят первичное обследование.
При проведении анализа важно учитывать индивидуальные особенности организма. Поэтому для получения достоверных результатов тест повторяют через 12 недель (через 3 месяца) и через 6 месяцев.
Если во все или часть указанных периодов анализ оказался положительных, назначают другой анализ на ВИЧ (иммуноблоттинг). Он должен показать степень развития заболевания и специфику его течения.
Диагностика проводится специалистами, которые знают не только как сделать забор крови для анализа, но и правильно провести диагностику, по которой потом можно сделать расшифровку
Важно! Если через несколько недель или месяцев анализ на ВИЧ оказался отрицательным, это не значит, что вируса больше нет. Анализ мог совпасть с периодом окна. В этом случае нельзя прекращать лечение и контроль за развитием заболевания.
Несмотря на высокую точность используемых методов, анализ может оказаться ошибочным из-за:
- Плохой дезинфекции медицинского инструмента;
- Ошибок персонала лаборатории;
- Неправильной подготовки пациента к сдаче крови;
- Неточная калибровка прибора и др.
Для правильного анализа важен правильно подобранный срок исследования.
Подготовка к ИФА
Приборы, работающие с кровью, чувствительны в различным сопутствующим компонентам. Определенные вещества в крови могут привести к сбою аппаратуры и неправильному результату. Поэтому перед тем как делать анализ на ВИЧ, необходимо подготовиться.
При проведении ИФА человек должен соблюдать все правила подготовки к обычной сдаче крови:
- Перед анализом не есть жирную, сладкую пищу;
- Не курить за 12 часов до теста;
- Не перегружать организм физическими нагрузками;
- Если работа предполагает химические факторы риска, стоит взять отгул;
- Не употреблять лекарственные препараты за два дня до анализа.
Где сдавать анализ на ВИЧ
В нашей стране практически все медицинские учреждения оснащены лабораторным оборудованием для анализа ВИЧ. Для того, чтобы проверить свой статус достаточно обратиться к терапевту и взять направление на обследование.
Существует программа всероссийской проверки на ВИЧ, когда диагностика ЗППП проводится в мобильных лабораториях. Чтобы провериться в них, достаточно иметь паспорт и желание.
Если человек стесняется обращаться в больницу, тест можно провести дома, но точность таких приборов очень низкая.
Схема проведения теста
При проведении анализа порцию крови помещают в специальный аппарат и обрабатывают иммуноферментными препаратами. Это должно способствовать выделению белков р15, р17, р24, р31. Через определенное время помещают сыворотку в прибор, фиксирующий наличие иммунных клеток.
Сдача анализа на ВИЧ проводится строго натощак.
При ИФА обнаруживают не антигены вируса, а наличие антител к вирусу. Этот метод является более точным, потому что в первом случае может пройти реакция с иными вирусами в организме.
Расшифровка результатов ИФА
После анализа крови на ВИЧ может получиться несколько вариантов результатов:
- Положительный;
- Отрицательный;
- Ложноположительный;
- Ложноотрицательный;
- Сомнительный.
Если иммуноферментный тест на ВИЧ положительный, значит у человека есть заболевание. Все остальные значения результатов исследования означают, что анализ необходимо повторить или переделать, так как результат неточный.
Точность иммунодефицитного результата зависит от:
- Правильности калибровки прибора;
- Правильной дезинфекции оборудования;
- Подготовки пациента к анализу;
- Соответствии действий персонала технике проведения анализа.
При слабом иммунном ответе результат выдается сомнительный. Это значит, что вирус есть, но его количество слишком мало, что может быть следствием плохой очистки прибора от предыдущего исследования. В этом случае тест проводится повторно.
Важно! Только метод ИФА может показать причину смерти от ВИЧ, так как белок еще находится в организме. Сам вирус быстро погибает при гибели носителя, поэтому другие методы диагностики не работают.
Если анализ ИФА положительный
Когда человек получает положительный анализ ИФА на ВИЧ, необходимо сразу обратиться к лечащему врачу. Поставить окончательный вердикт о наличии или отсутствии ВИЧ инфекции может только врач специалист на основании точного исследования. Во всех случаях, когда ИФА положительный, назначают повторный анализ ПЦР на определение количества вируса. По комплексу данных врач делает вывод о скорости течения заболевания и особенностях развития вируса.
Совет! Нельзя забрасывать дальнейшее обследование при первом положительном результате. Иногда такой результат дает неправильная подготовка и проведение теста.
Что делать при положительном ИФА
Если анализ показал наличие вируса, то рекомендуется сделать второй анализ
Результаты ИФА считаются достоверными только после повторного проведения анализа и подтверждении результата.
При получении положительного теста необходимо проконсультироваться в врачом. Если из ряда тестов положительным оказался только один, анализ стоит повторить через несколько недель для получения достоверных данных.
Причиной ошибочного результата могут быть следы крови от предыдущего анализа.
Осложнения при анализах
Многие заболевания могут способствовать получению недостоверных данных:
- Заболевания щитовидной железы;
- Хронические простудные заболевания;
- Наличие паразитов.
Такие отклонения в здоровье не позволяют обнаружить вирусный след методом ИФА. Пациентам назначаются другие виды диагностики.
Что делать если показал отрицательный результат
Не стоит забывать, что срок сдачи анализа может попасть на время серонегативного окна, когда активность вируса снижена и он не определяется. Для того чтобы получить достоверный результат, необходимо провести повторный анализ через несколько недель.
Для анализа нельзя приносить кровь с собой, так как белок, который выявляют при ИФА быстро денатурирует, что поспособствует получению отрицательного результата.
Один из способов обнаружения клеток вируса в период окна это ПЦР. Перед этим анализом проводится полимеразно-цепная реакция, увеличивающая количество РНК-отрезков, что позволит сделать препарат более доступным для анализа.
Беременность и ИФА
Для медицинских работников анализ крови беременных является не только очень сложным, но и самым ответственным
Чтобы избежать вертикальное заражение плода от инфицированной матери, всем женщинам во время беременности назначается ИФА-анализ на ВИЧ. Кровь берется в начале беременности вместе с другими анализами. В некоторых случаях, при сомнительном результате, или если женщина находится в постоянном контакте с ВИЧ-положительным партнером, наблюдение ведется в течении всей беременности.
Если с помощью тестов у женщины выявляется ВИЧ, в лаборатории проводится повторный анализ.
При достоверном положительном результате женщине назначается легкая антиретровирусная терапия с целью предотвращения возможного заражения плода.
Важно! Если во время беременности выявляется ВИЧ у женщины, это не значит, что ребенок будет гарантировано ВИЧ-положительным. При своевременном обращении к врачу, грамотном применении препаратом и постоянном наблюдении ребенок родится здоровым. Здоровье ребенка во многом зависит от грамотного поведения мамы!
Лечение
Человеку с ВИЧ-положительным статусом нельзя заниматься самолечением. Это заболевание всегда индивидуально и зависит от способа заражения, активности вируса, иммунной системы человека и множества других факторов. Лечение зависит от протекания ВИЧ. Только врач может назначить грамотное лечение.
Течение заболевания и степень отклика на медицинские препараты проверяется при проведении повторных анализов. Такие анализы важно сдавать, так как в силу индивидуальных особенностей, лечение может оказаться неэффективным, что поспособствует развитию болезни и ухудшению самочувствия пациента.
Источник
