Как лаборант проводит анализ крови

Дмитрий Кандинский / vtomske.ru

Всем нам с детства знакома такая процедура, как анализ крови. Кровь необходима как для простых исследований, так и высокотехнологичных генетических тестов. Человек приходит с утра в больницу, врач забирает небольшое количество биоматериала в пробирку, и через какое-то время мы получаем результат. Что же происходит между этим? Как нам удалось выяснить — много интересного!

***

Чтобы посмотреть за тем, как кровь исследуется и какие тесты с ней можно провести, мы отправились в «Инвитро». 4 октября медицинская компания открыла в Новосибирске новый большой лабораторный комплекс, где будут выполняться более двух тысяч видов тестов для пациентов со всей Сибири и Дальнего Востока. Здесь и прошла наша экскурсия.

Цель материала — показать, что происходит с пробирками крови и другими биоматериалами, когда они отправляются на исследования. Ведь мы, обычные люди, достаточно регулярно обращаемся в лаборатории к специалистам, в чьих руках оказывается наше здоровье. И от того, как проходит процесс исследования, зависит и результат, который мы получим.

По словам экспертов, лабораторные исследования включают три основных этапа: преаналитический, аналитический и постаналитический. Заместитель заведующего клинико-диагностической лабораторией ООО «Инвитро-Сибирь» Валентина Андрушкевич рассказала, что первый этап начинается, как ни странно, с мысли: у человека, который решил что-то у себя проверить, или у врача, принимающего пациента. Важную роль играет подготовка к анализам, это влияет на конечный результат. Так, общий анализ крови нужно сдавать натощак, но нельзя голодать свыше 14 часов. Перед каждым исследованием следует внимательно ознакомиться с подготовкой к нему.

И вот, за мыслью следует действие — человек идет в медицинский офис (перед сдачей анализов проконсультируйтесь с врачом). В новом медцентре для клиентов сделали индивидуальные кабинки, чтобы сохранить приватность разговора со специалистом. Также работает электронная очередь.

Сегодня многие медицинские центры при регистрации пациентов используют программу, создающую индивидуальные баркоды, также именуемые штрихкодами. В дальнейшем это позволяет упростить процесс идентификации пациента для приборов, которые проводят распределение пробирок и продолжают исследование. Кроме того, такая процедура необходима для исключения подмены, потери пробирок и быстрого выполнения исследований. После регистрации пациент отправляет в процедурный кабинет.

— Люди по-разному переносят процедуру взятия крови, поэтому в процедурных кабинетах есть как кресло, так и кушетка, — поясняет Валентина Андрушкевич. — Для взятия биоматериала мы используем только одноразовые расходные материалы, для нас это не просто государственный стандарт, это жизненно необходимый момент для наших пациентов. Вакуумные пробирки безопасны для сдающего кровь и позволяют сохранять аналиты (так еще называют биоматериалы) необходимое время для проведения основных и дополнительных тестов.

После того, как кровь оказалась в пробирке, ее отправят дальше — в регистратуру. В данном случае регистратурой называется лаборатория преаналитической подготовки. Здесь отмечают прибывший биоматериал в специальной программе, после чего приборы видят задание на исследование.

Биоматериалы поступают в лабораторию двумя большими потоками. Тот, который берут в процедурном кабинете, уже зарегистрирован и первично обработан. В программе регистратуры фиксируется прибытие аналита, лабораторная информационная система (ЛИС) уже видит задание на исследование. Второй поток — то, что приходит от других медучреждений — партнеров «Инвитро». Сначала происходит регистрация пробирок и баркодирование, присваивается индивидуальный код заказа. Данные с ручного бланка, где врач отметил, какие нужны анализы, переносятся в программу.

— Пробы поступают в лабораторию круглосуточно. Перевозка биоматерила осуществляется всеми доступными видами транспорта. Используются разные температурные режимы доставки, в частности, режим от +2°С до +8°С и режим -20°С. Необходимая температура для сохранности проб обеспечивается специальными сертифицированными термоконтейнерами. Выбор режима хранения и транспортировки каждого биоматериала происходит в соответствии с ГОСТом, — рассказывает Валентина Андрушкевич.

Существует заблуждение, что кровь возить нельзя, но на самом деле это не так. Биоматериал можно перевозить в большинстве случаев. Если анализы не подлежат длительному хранению, то их и не перевозят. Например, материал для спермограммы принимается только в медицинском офисе при лаборатории.

Многие лаборатории на сегодняшний день практикуют выполнение срочных исследований, которые называются cito. По своему опыту могу сказать, что цена на тесты такого формата выше, но результат пациент получит в течение двух-четырех часов. В новой лаборатории пробирки для cito-анализов из процедурного кабинета в регистратуру отправляются пневмопочтой (система перемещения грузов под действием сжатого или, наоборот, разреженного воздуха). Такая посылка прибывает в место назначения меньше чем за десять секунд. Мы сами смогли в этом убедиться.

После всех регистрационных процедур для пробирки наступает аналитический этап исследований, который проходит в разных подразделениях.

Наша первая остановка — лаборатория общеклинических, биохимических и иммунохимических исследований. Помещения и оборудование лаборатории — настоящие роботизированные комплексы. Высокотехнологичное оборудование проводит анализ и выводит результаты в онлайн-режиме в лабораторную информационную систему.

— В зоне гематологии находятся гематологические анализаторы для выявления количественных показателей клеток крови, — показывает Валентина Андрушкевич. — Для точности результата кровь предварительно нужно перемешать, так как она оседает. Этим процессом заведует отдельное вспомогательное оборудование. Перемешивание пробирок происходит перед любыми тестами.

Пробирки с сиреневыми крышечками отправляются на общий анализ крови. Он выполняется в гематологическим анализаторе Sysmex. В данном случае перемешивание пробирок на отдельном оборудование не требуется, анализатор делает все сам. Результаты анализов сбрасываются в систему, их можно увидеть на мониторе. Но никаких фамилий там нет, только баркоды пациентов и итоги тестов.

Программа сама оценивает итоги согласно заложенным в нее правилам — нормам, которые должны быть. Если анализ нормальный, он автоматически подтверждается системой и сбрасывается дальше в ЛИС. Если образец имеет патологические отклонения, система дает сигнал, и пробирка пойдет на микроскопию.

— В случае выявления патологии готовится мазок крови, и врач будет смотреть его в микроскоп. Специалист скорректирует результат анализа и внесет его в систему, — добавила эксперт.

Напротив гематологических анализаторов располагается оборудование для автоматизированного исследования мочи. Что касается данного исследования, он в целом предусматривает микроскопию осадка мочи. На отдельном аппарате в лаборатории проводится химические исследование биоматериала, а на отдельном оборудовании — именно микроскопия.

— Это высокопроизводительное оборудование, которое позволяет быстро микроскопировать осадки мочи и описывать их — сколько солей, лейкоцитов, эритроцитов. Экспертная оценка здесь присутствует: специалист смотрит на итоги исследований и при наличии патологии будет выполнена дополнительная микроскопия, но уже врачом. Несмотря на технологии, специалист все равно остается во главе угла, — подчеркивает Андрушкевич.

Иногда пациенту требуется сдать кровь на несколько исследований. Конечно, в этом случае его не будут колоть несколько раз и заполнять множество пробирок, хватит одной. Но разные анализы выполняют разные группы приборов. Чтобы пробирка прошла по всем аппаратам, работает специальная программа и робот-сортировщик. К нему пробирки поступают из регистратуры, робот снимает с них крышечку и расставляет по штативам, куда должен пойти образец крови. Когда штатив будет заполнен, он выскочит, и специалист заберет его.

Сортировщик работает очень плавно — на данном этапе кровь встряхивать и перемешивать нельзя — и при этом быстро. Робот помогает как ускорить работу без потери качества, так и обеспечить биобезопасность для медперсонала.

Кстати, для приготовления реагентов в лаборатории используют ионизированную воду — кроме молекул воды в ней больше ничего нет. Пить такую воду нельзя, но она позволяет добиться точного результата при проведении тестов. К каждому прибору вода подводится индивидуально, по трубкам, что позволяет сохранить ее чистоту.

На отдельном этаже в лабораторном комплексе находится ПЦР-лаборатория, где выполняются генетические исследования (выявление предрасположенности к тем или иным заболеваниям, наследственность и так далее) и выявление инфекций. В ней — очень строгие санитарные правила, поскольку диагностика — очень точная и порой хватает несколько сторонних клеток, чтобы повлиять на результат. Поэтому сотрудники медцентра провели для нас виртуальный тур.

ПЦР-лаборатория выполняет от четырех до шести тысяч исследований, выявляет более 50 инфекционных маркеров и свыше 20 генетических маркеров патологии человека. Все помещения лаборатории находятся в особом режиме изоляции, оснащены предбоксами, имеют особый график кварцевая, три изолированные приточно-вытяжные системы. Все операции контролируются через программное обеспечение. Все это позволяет исключить погрешности в результатах.

Как рассказала врач группы по контролю качества лаборатории Екатерина Томзикова, для ряда тестов пока не существуют приборы, которые бы делали исследования автоматически, поэтому специалисты проводят их вручную. Последнее место в нашей экскурсии — лаборатория иммуноферментного анализа.

— В месяц в данной лаборатории выполняется порядка 40 тысяч тестов. Несмотря на то, что это ручные методики, на помощь специалистам приходит свой робот-сортировщик. Здесь мы смотрим гормоны, выполняем тесты на аллергию, большое число аутоиммунных маркеров, — уточнила Томзикова.

Вначале материала я упоминала про три этапа лабораторных исследований. Аналитический подошел к концу. Постаналитика включает в себя консультации пациентов врачами касательно результатов исследований: что они означают, нужно ли обращаться к специалисту.

P.S. Казалось бы, анализ крови, что может быть проще? Но за этими двумя словами скрывается масса операций которую стоит провести, чтобы пациент получил верный результат. Конечно, не стоит забывать и о подготовке к исследованию со стороны самого пациента. А вообще — будьте здоровы и болейте меньше!

Имеются противопоказания, необходимо проконсультироваться со специалистом.

Данный материал не носит коммерческий или заказной характер и выходит в рамках рубрики «Знай город»

Источник

Общий клинический анализ крови – это самый распространенный диагностический тест, который назначает пациенту врач. За последние десятилетия технология этого рутинного, но очень информативного исследования проделала колоссальный рывок – она стала автоматической. В помощь врачу лабораторной диагностики, орудием труда которого был обычный световой микроскоп, пришли высокотехнологичные автоматические гематологические анализаторы.

В этом посте мы расскажем, что именно происходит внутри «умной машины», видящей нашу кровь насквозь, и почему ей следует верить. Мы будем рассматривать физику процессов на примере гематологического анализатора UniCel DxH800 мирового бренда Beckman Coulter. Именно на этом оборудовании выполняются исследования, заказанные в сервисе лабораторной диагностики LAB4U.RU. Но для того, чтобы понять технологию автоматического анализа крови, мы разберемся с тем, что видели врачи-лаборанты под микроскопом и как они интерпретировали эту информацию.

Параметры анализа крови

Итак, в крови содержится три вида клеток:

лейкоциты, обеспечивающие иммунную защиту;
тромбоциты, отвечающие за свертываемость крови;
эритроциты, осуществляющие транспорт кислорода и углекислого газа.

Эти клетки находятся в крови в совершенно определенных количествах. Их обуславливают возраст человека и состояние его здоровья. В зависимости от условий, в которых находится организм, костный мозг производит столько клеток, сколько их требуется организму. Поэтому, зная количество определенного вида клеток крови и их форму, размер и другие качественные характеристики, можно уверенно судить о состоянии и текущих потребностях организма. Именно эти ключевые параметры – количество клеток каждого вида, их внешний вид и качественные характеристики – составляют общий клинический анализ крови.

При проведении общего анализа крови производят подсчет количества эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов. С лейкоцитами сложнее: их несколько видов, и каждый вид выполняет свою функцию. Выделяют 5 разных видов лейкоцитов:

нейтрофилы, нейтрализующие в основном бактерии;
эозинофилы, нейтрализующие иммунные комплексы антиген-антитело;
базофилы, участвующие в аллергических реакциях;
моноциты – главные макрофаги и утилизаторы;
лимфоциты, обеспечивающие общий и местный иммунитет.

В свою очередь, нейтрофилы по степени зрелости разделяют на:

палочкоядерные,
сегментоядерные,
миелоциты,
метамиелоциты.

Процент каждого вида лейкоцитов в их общем объеме называют лейкоцитарной формулой, которая имеет важное диагностическое значение. Например, чем более выражен бактериальный воспалительный процесс, тем больше нейтрофилов в лейкоцитарной формуле. Наличие нейтрофилов разной степени зрелости говорит о тяжести бактериальной инфекции. Чем острее процесс, тем больше в крови палочкоядерных нейтрофилов. Появление в крови метамиелоцитов и миелоцитов говорит о крайне тяжелой бактериальной инфекции. Для вирусных заболеваний характерно увеличение лимфоцитов, при аллергических реакциях – увеличение эозинофиллов.

Помимо количественных показателей, крайне важна морфология клеток. Изменение их обычной формы и размеров также свидетельствует о наличии определенных патологических процессов в организме.

Важный и наиболее известный показатель – количество в крови гемоглобина – сложного белка, обеспечивающего поступление кислорода к тканям и выведение углекислого газа. Концентрация гемоглобина в крови – главный показатель при диагностике анемий.

Еще один из важных параметров – это скорость оседания эритроцитов (СОЭ). При воспалительных процессах у эритроцитов появляется свойство слипаться друг с другом, образуя небольшие сгустки. Обладая большей массой, слипшиеся эритроциты под действием силы тяжести оседают быстрее, чем одиночные клетки. Изменение скорости их оседания в мм/ч является простым индикатором воспалительных процессов в организме.

Как было: скарификатор, пробирки и микроскоп

Забор крови

Вспомним, как раньше сдавали кровь: болезненный прокол подушечки скарификатором, бесконечные стеклянные трубочки, в которые собирали драгоценные капли выжатой крови. Как лаборант одним стёклышком проводил по другому, где находилась капля крови, царапая на стекле номер простым карандашом. И бесконечные пробирки с разными жидкостями. Сейчас это уже кажется какой-то алхимией.

Кровь брали именно из безымянного пальца, на что были вполне серьезные причины: анатомия этого пальца такова, что его травмирование дает минимальную угрозу сепсиса в случае инфицирования ранки. Забор крови из вены считался куда более опасным. Поэтому анализ венозной крови не был рутинным, а назначался по необходимости, и в основном в стационарах.

Стоит отметить, что уже на этапе забора начинались значительные погрешности. Например, разная толщина кожи дает разную глубину укола, вместе с кровью в пробирку попадала тканевая жидкость – отсюда изменение концентрации крови, кроме того, при давлении на палец клетки крови могли разрушаться.

Помните ряд пробирок, куда помещали собранную из пальца кровь? Для подсчета разных клеток действительно нужны были разные пробирки. Для эритроцитов – с физраствором, для лейкоцитов – с раствором уксусной кислоты, где эритроциты растворялись, для определения гемоглобина – с раствором соляной кислоты. Отдельный капилляр был для определения СОЭ. И на последнем этапе делался мазок на стекле для последующего подсчета лейкоцитарной формулы.

Анализ крови под микроскопом

Для подсчета клеток под микроскопом в лабораторной практике использовался специальный оптический прибор, предложенный еще в ХIX веке русским врачом, именем которого этот прибор и был назван – камера Горяева. Она позволяла определить количество клеток в заданном микрообъеме жидкости и представляла собой толстое предметное стекло с прямоугольным углублением (камерой). На нее была нанесена микроскопическая сетка. Сверху камера Горяева накрывалась тонким покровным стеклом.

Эта сетка состояла из 225 больших квадратов, 25 из которых были разделены на 16 малых квадратов. Эритроциты считались в маленьких исчерченных квадратах, расположенных по диагонали камеры Горяева. Причем существовало определенное правило подсчета клеток, которые лежат на границе квадрата. Расчет числа эритроцитов в литре крови осуществлялся по формуле, исходя из разведения крови и количества квадратов в сетке. После математических сокращений достаточно было посчитанное количество клеток в камере умножить на 10 в 12-й степени и внести в бланк анализа.

Лейкоциты считали здесь же, но использовали уже большие квадраты сетки, поскольку лейкоциты в тысячу раз больше, чем эритроциты. После подсчета лейкоцитов их количество умножали на 10 в 9-й степени и вносили в бланк. У опытного лаборанта подсчет клеток занимал в среднем 3-5 мин.

Методы подсчета тромбоцитов в камере Горяева были очень трудоемки из-за малой величины этого вида клеток. Оценивать их количество приходилось только на основе окрашенного мазка крови, и сам процесс был тоже весьма трудоемким. Поэтому, как правило, количество тромбоцитов рассчитывали только по специальному запросу врача.

Лейкоцитарную формулу, то есть процентный состав лейкоцитов каждого вида в общем их количестве мог определять только врач – по результатам изучения мазков крови на стеклах.

Визуально определяя находящиеся в поле зрения различные виды лейкоцитов по форме их ядра, врач считал клетки каждого вида и общее их количество. Насчитав 100 в совокупности, он получал требуемое процентное соотношение каждого вида клеток. Для упрощения подсчета использовались специальные счетчики с отдельными клавишами для каждого вида клеток.

Примечательно, что такой важный параметр, как гемоглобин, определялся лаборантом визуально (!) по цвету гемолизированной крови в пробирке с соляной кислотой. Метод был основан на превращении гемоглобина в солянокислый гематин коричневого цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина. Полученный раствор солянокислого гематина разводили водой до цвета стандарта, соответствующего известной концентрации гемоглобина. В общем, прошлый век

Как стало: вакуумные контейнеры и гематологические анализаторы

Начнем с того, что сейчас полностью поменялась технология забора крови. На смену скарификаторам и стеклянным капиллярам с пробирками пришли вакуумные контейнеры. Использующиеся теперь системы забора крови малотравматичны, процесс полностью унифицирован, что значительно сократило процент погрешностей на этом этапе. Вакуумные пробирки, содержащие консерванты и антикоагулянты, позволяют сохранять и транспортировать кровь от точки забора до лаборатории. Именно благодаря появлению новой технологии стало возможным сдавать анализы максимально удобно – в любое время, в любом месте.

На первый взгляд, автоматизировать такой сложный процесс, как идентификация клеток крови и их подсчет, кажется невозможно. Но, как обычно, все гениальное просто. В основе автоматического анализа крови лежат фундаментальные физические законы. Технология автоматического подсчета клеток была запатентована в далеком 1953 году американцами Джозефом и Уолессом Культерами. Именно их имя стоит в название мирового бренда гематологического оборудования Bеckman&Coulter.

Подсчет клеток

Апертурно-импедансный метод (метод Культера или кондуктометрический метод) основан на подсчете количества и оценке характера импульсов, возникающих при прохождении клетки через отверстие малого диаметра (апертуру), по обе стороны которого расположены два электрода. При прохождении клетки через канал, заполненный электролитом, возрастает сопротивление электрическому току. Каждое прохождение клетки сопровождается появлением электрического импульса. Чтобы выяснить, какова концентрация клеток, необходимо пропустить через канал определенный объем пробы и сосчитать количество появившихся импульсов. Единственное ограничение – концентрация пробы должна обеспечивать прохождение через апертуру только одной клетки в каждый момент времени.

За прошедшие более 60 лет технология автоматического гематологического анализа прошла большой путь. Вначале это были простые счетчики клеток, определяющие 8-10 параметров: количество эритроцитов (RBC), количество лейкоцитов (WBC), гемоглобин (Hb) и несколько расчетных. Такими были анализаторы первого класса.

Второй класс анализаторов определял уже до 20 различных параметров крови. Они существенно выше по уровню в дифференциации лейкоцитов и способны выделять популяции гранулоцитов (эозинофилы + нейтрофилы + базофилы), лимфоцитов и интегральной популяции средних клеток, куда относились моноциты, эозинофилы, базофилы и плазматические клетки. Такая дифференциация лейкоцитов успешно использовалась при обследовании практически здоровых людей.

Самыми технологичными и инновационными анализаторами на сегодняшний день являются машины третьего класса, определяющие до сотни различных параметров, проводящие развернутое дифференцирование клеток, в том числе по степени зрелости, анализирующие их морфологию и сигнализирующие врачу-лаборанту об обнаружении патологии. Машины третьего класса, как правило, снабжены еще и автоматическими системами приготовления мазков (включая их окраску) и вывода изображения на экран монитора. К таким передовым гематологическим системам относятся оборудование BeckmanCoulter, в частности система клеточного анализа UniCel DxH 800.

Современные аппараты BeckmanCoulter используют метод многопараметрической проточной цитометрии на основе запатентованной технологии VCS (Volume-Conductivity-Scatter). VCS-технология подразумевает оценку объема клетки, ее электропроводимость и светорассеяние.

Первый параметр – объем клетки – измеряется с использованием принципа Культера на основе оценки сопротивления при прохождении клеткой апертуры при постоянном токе. Величину и плотность клеточного ядра, а также ее внутренний состав определяют с помощью измерения ее электропроводности в переменном токе высокой частоты. Рассеяние лазерного света под разными углами позволяет получить информацию о структуре клеточной поверхности, гранулярности цитоплазмы и морфологии ядра клетки.

Полученные по трем каналам данные комбинируются и анализируются. В результате клетки распределяются по кластерам, включая разделение по степени зрелости эритроцитов и лейкоцитов (нейтрофилов). На основе полученных измерений этих трех размерностей определяется множество гематологических параметров – до 30 в диагностических целях, более 20 в исследовательских целях и более ста специфичных расчетных параметров для узкоспециализированных цитологических исследований. Данные визуализируются в 2D- и 3D-форматах. Врач-лаборант, работающий с гематологическим анализатором BackmanCoulter, видит результаты анализа на мониторе примерно в таком виде:

А далее принимает решение – надо ли их верифицировать или нет.

Стоит ли говорить, что информативность и точность современного автоматического анализа во много раз выше мануального? Производительность машин подобного класса – порядка сотни образцов в час при анализе тысяч клеток в образце. Вспомним, что при микроскопии мазка врачом анализировалось только 100 клеток!

Однако несмотря на эти впечатляющие результаты, именно микроскопия до сих пор пока остается «золотым стандартом» диагностики. В частности, при выявлении аппаратом патологической морфологии клеток образец анализируется под микроскопом вручную. При обследовании больных с гематологическими заболеваниями микроскопия окрашенного мазка крови проводится только вручную опытным врачом-гематологом. Именно так, вручную, дополнительно к автоматическому подсчету клеток, выполняется оценка лейкоцитарной формулы во всех детских анализах крови по заказам, сделанным с помощью лабораторного онлайн-сервиса LAB4U.RU.

Вместо резюме

Технологии автоматизированного гематологического анализа продолжают активно развиваться. По существу они уже заменили микроскопию при выполнении рутинных профилактических анализов, оставив ее для особо значимых ситуаций. Мы имеем в виду детские анализы, анализы людей, имеющих подтвержденные заболевания, особенно гематологические. Однако в обозримом будущем и на этом участке лабораторной диагностики врачи получат аппараты, способные самостоятельно выполнять морфологический анализ клеток с использованием нейронных сетей. Снизив нагрузку на врачей, они в то же время повысят требования к их квалификации, поскольку в зоне принятия решений человеком останутся только нетипичные и патологические состояния клеток.

Количество информативных параметров анализа крови, увеличившиеся многократно, поднимает требования к профессиональной квалификации и врача-клинициста, которому необходимо анализировать сочетания значений массы параметров в диагностических целях. На помощь врачам этого фронта идут экспертные системы, которые, используя данные анализатора, предоставляют рекомендации по дальнейшему обследованию пациента и выдают возможный диагноз. Такие системы уже представлены на лабораторном рынке. Но это уже тема отдельной статьи.

Источник