Иммунохроматографический метод анализа кала на скрытую кровь
Назначение
Тест «РЭД скрытая кровь» предназначен для in vitro одноэтапного быстрого качественного выявления гемоглобина (скрытой крови) в кале.
Краткая информация
Анализ кала на скрытую кровь используют для выявления различных видов патологии нижних отделов желудочно-кишечного тракта, характеризующихся кровотечениями (полипы толстого кишечника, колоректальный рак, болезнь Крона, язвенный колит). Сосуды на поверхности колоректального полипа или злокачественного новообразования часто бывают хрупкими и легко повреждаются при прохождении каловых масс. При этом в фекалии выделяется небольшое количество крови, которое редко заметно на глаз.
Тест «РЭД скрытая кровь» проявляет высокую чувствительность и специфичность в выявлении кровотечений на уровне ободочной и прямой кишки, в то же время нечувствителен к скрытым кровотечениям в верхних отделах желудочно-кишечного тракта, где белковая часть гемоглобина подвергается перевариванию.
Принцип метода
Определение основано на принципе иммунохроматографического анализа. Анализируемый образец жидкого биологического материала абсорбируется поглощающим участком тест-полоски. При наличии в образце гемоглобина он вступает в реакцию с нанесенными на стартовую зону специфическими моноклональными антителами против гемоглобина, меченными окрашенными частицами, и продолжает движение с током жидкости. В аналитической зоне тест-полоски происходит взаимодействие со специфическими моноклональными антителами, иммобилизованными на поверхности мембраны, с образованием окрашенного иммунного комплекса.
В контрольной зоне тест-полоски специфический окрашенный иммунный комплекс образуется независимо от наличия в тестируемом биологическом материале гемоглобина.
В том случае, если в анализируемом образце присутствует гемоглобин, на тест-полоске образуются две параллельные окрашенные линии (красная аналитическая, обозначенная буквой Т, и зеленая контрольная, обозначенная буквой С), что указывает на положительный результат анализа. В случае отсутствия в анализируемом образце гемоглобина на тест-полоске образуется одна зеленая контрольная линия (С), что указывает на отрицательный результат анализа.
Состав
Один комплект тестов «РЭД скрытая кровь» включает:
- тест-полоски иммунохроматографические «РЭД скрытая кровь» в кассетах из пластика белого цвета – 5, 10 или 20 шт.;
- пробирки с крышкой-капельницей и стержнем для забора образца кала, содержащие буфер для растворения образца – 5, 10 или 20 шт., соответственно;
- этикетки на клеевой основе для маркировки пробирок пользователем – 5, 10 или 20 шт., соответственно;
- инструкцию по применению теста «РЭД скрытая кровь» – 1 шт.
Кассеты с тест-полосками упакованы в индивидуальные вакуумные упаковки из фольги алюминиевой, содержащие пакетики с силикагелем.
Комплект тестов «РЭД скрытая кровь» упакован в картонную коробку.
Необходимые оборудование и материалы, не входящие в состав набора
- контейнеры для сбора образцов кала;
- одноразовые резиновые или пластиковые перчатки;
- часы или таймер.
Аналитические характеристики
- Чувствительность теста «РЭД скрытая кровь» составляет >99%.
- Специфичность теста «РЭД скрытая кровь» составляет >99%.
- Время проведения анализа – 10 мин.
Тест «РЭД скрытая кровь» специфичен по отношению к гемоглобину человека и не дает перекрестных реакций с гемоглобином и миоглобином животного происхождения, поступающими с пищей.
Каждый тест «РЭД скрытая кровь» предназначен для одного определения наличия гемоглобина (скрытой крови) в кале человека.
Меры предосторожности
Тест «РЭД скрытая кровь» предназначен только для in vitro диагностики.
Все компоненты теста «РЭД скрытая кровь» в используемых концентрациях являются нетоксичными.
Не следует использовать тесты «РЭД скрытая кровь» после истечения срока годности.
При проведении определения следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. исследуемые образцы биологического материала следует рассматривать как потенциально инфицированные.
Использованные тесты и остатки биологического материала должны быть помещены в специальный контейнер для санитарных отходов.
Анализируемые образцы
Свежесобранный биологический материал (кал), не содержащий консерванты.
Образцы кала должны быть собраны в чистый контейнер.
Образцы кала до определения можно хранить при температуре 2–4°С не более 2 сут., при необходимости более длительного (до 1 года) хранения – при температуре –20°С и ниже.
Перед анализом образцы кала должны быть полностью разморожены и доведены до комнатной температуры.
Повторное замораживание и оттаивание образцов недопустимо.
Подготовка образцов
1. Снять крышку-капельницу с пробирки и с помощью стержня на крышке взять небольшое количество анализируемого образца. Для этого ввести стержень в образец 3 раза, собрав примерно 100 мг кала (рис. 1-1). Если образец жидкий, пипеткой отобрать 100 мкл.
2. Ввести стержень с образцом в пробирку с буфером для растворения образца и плотно завинтить крышку-капельницу (рис. 1-2).
3. Несколько раз встряхнуть пробирку, чтобы облегчить растворение образца (рис. 2-1).
Проведение анализа
Анализируемые образцы кала и тесты «РЭД скрытая кровь» перед проведением анализа должны быть доведены до комнатной температуры (15–25°С).
4. Встряхнуть пробирку с раствором образца (рис. 2-1). Отрезать или отломить кончик крышки-капельницы.
5. Непосредственно перед началом анализа вскрыть упаковку теста «РЭД скрытая кровь», разрывая ее вдоль прорези. Извлечь кассету с тест-полоской и положить ее на ровную горизонтальную поверхность.
6. 4 капли (примерно 100 мкл) жидкого образца внести в круглое окошко кассеты, обозначенное буквой S, избегая попадания твердых частиц образца вместе с жидкостью (рис. 2-2). Для каждого образца или контроля необходимо использовать отдельную пробирку с буфером для растворения образца и отдельный тест «РЭД скрытая кровь».
7. Через 10 мин визуально оценить результат реакции.
Интерпретация результатов
Выявление в тестовом окошке кассеты одной зеленой контрольной линии (С) свидетельствует об отрицательном результате анализа, т.е. указывает на отсутствие в анализируемом образце кала гемоглобина (рис. 3-1).
Выявление в тестовом окошке кассеты двух параллельных окрашенных линий (С и Т) свидетельствует о положительном результате анализа, т.е. указывает на наличие в анализируемом образце кала гемоглобина (рис. 3-2). Интенсивность красной аналитической линии (Т) в тестовом окошке кассеты может меняться в зависимости от концентрации гемоглобина в образце.
В тех случаях, когда в тестовом окошке кассеты не образуется ни одной окрашенной линии или образуется только красная аналитическая линия (Т), результат анализа признается недействительным (рис. 3-3). При этом анализ следует повторить с использованием другого теста «РЭД скрытая кровь».
Избыточное количество образца кала может привести к появлению в тестовом окошке кассеты нечетких линий темного цвета, которые не имеют диагностического значения. В этом случае следует добавить в образец кала бoльшее количество растворителя и повторить анализ с использование другого теста «РЭД скрытая кровь».
Образцы кала, забранные у пациентов с кровоточащим геммороем, запорами, а также в период менструации, могут показать ложноположительные результаты.
Результаты, полученные с использованием теста «РЭД скрытая кровь», являются предварительными. Для их подтверждения необходимо проведение дополнительных исследований образцов кала с использованием альтернативных методов.
Условия хранения и эксплуатации
Тесты «РЭД скрытая кровь» должны храниться при температуре от 2 до 25°С в упаковке предприятия-изготовителя в сухом месте в течение всего срока годности. Замораживание тестов «РЭД скрытая кровь» не допускается.
Срок годности тестов «РЭД скрытая кровь» – 24 мес. с даты изготовления.
После вскрытия упаковки тесты «РЭД скрытая кровь» должны быть использованы в течение 2 ч при хранении в сухом месте при комнатной температуре.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение Инструкции по применению теста «РЭД скрытая кровь».
Источник
Кровь в опорожнении может находиться в скрытой форме и быть совершенно невидимой для глаз. Для ее распознания потребуется иммунохимический анализ кала на скрытую кровь и гемотест. Наличие в кале скрытой крови говорит о медленном и необильном кровотечении в пищеварительном тракте, появляющемся периодически. Чаще всего потеря крови такого типа протекает без неприятных симптомов, что не дает выявить характер и локализацию кровотечения. Каждый отдел пищеварительной системы может являться участком скрытого кровотечения. В этом случае врач может диагностировать как доброкачественные неопасные для организма образования (к примеру, геморрой), так и серьезные – опухолевые.
Особенности процедуры
Анализ кала иммунохимическим методом назначается пациенту при подозрении на скрытую форму кровотечения в органах пищеварительной системы. По медицинским нормам в 1 грамме кала здорового человека находится не больше 2 мг гемоглобина, то есть на протяжении одного дня с калом выходит не меньше 2 мл крови. При наличии в желудочно-кишечном тракте кровотечений разной интенсивности оттенок фекалий сильно меняется.
Если источник кровотечения находится высоко (двенадцатиперстная кишка, тонкий кишечник) испражнения становятся темного, дегтеобразного цвета, а при низкой локализации кровь в кале можно увидеть на первый взгляд. Если кровяные выделения в опорожнении имеются, но не заметны визуально, то такое состояние и относят к скрытому. В этом случае определить недомогание можно лишь в лаборатории иммунохимическим методом анализом кала на скрытую кровь:
- проба с бензидином (по-другому реакция Грегерсена) либо гваяковой смолой;
- количественный иммунохимический способ.
Выявление в кале крови говорит о наличии у больного болезней кишечника и желудка, которые приводят к нарушению целостности слизистой оболочки органов.
Причины развития кровотечений в ЖКТ
Появлению кровотечений из органов желудочно-кишечного тракта способствуют такие заболевания, как:
- язвенное заболевание двенадцатиперстной кишки и желудка;
- полипы, наличие в органах ЖКТ образований злокачественного и доброкачественного характера;
- неспецифический язвенный колит;
- заболевание Крона;
- наличие в заднем проходе трещин;
- геморрой;
- диффузный семейный полипоз.
Больным, у которых есть одно из перечисленных недомоганий, важно регулярно сдавать анализ для проверки наличия скрытой крови в испражнениях.
Как часто следует сдавать анализ?
Анализ кала на скрытую кровь иммунохимическим методом людям старше возраста 50 лет назначается ежегодно, он входит в список ранней диагностики злокачественных новообразований кишечника, частота поражений которыми именно в этот отрезок времени значительно повышается.
При обнаружении скрытой крови у людей старше 50 лет врачи назначают им ряд дополнительных диагностик и последующее лечение.
Бензидиновая проба
Расшифровкой иммунохимического анализа скрытой крови в кале является бензидиновая проба (по-другому, реакция Грегерсена-Адлера). Такая реакция применяется для определения в любом биологическом материале человека (желудочный сок, кал либо моча) примеси крови. При наличии в исследуемом материале крови, при внесении соответствующего реактива его цвет меняется до ярко-зеленого либо синего оттенка.
Анализ такого типа должен проводиться лишь после предварительной подготовки пациента, так как из-за большого количества гемоглобина в мясной пище, некоторых витаминов и других компонентов может получиться ложный результат.
Диетическое питание
Чтобы избежать подобных результатов и дальнейших проблем нужно придерживаться специальной диеты. За 72 часа до проведения лабораторного обследования, из питания следует убрать пищу животного происхождения (мясо, птица и рыба), а также некоторые овощи (кабачки, хрен, огурцы, капусту, брокколи и помидоры).
У новорожденного ребенка к неправильным результатам исследования могут привести трещины сосков у матери. В момент кормления грудным молоком трещины кровоточат, а ребенок проглатывает выделяемую кровь вместе с молоком.
Перед проведением анализа следует включить в свой режим питания следующие продукты:
- молочные продукты (кефир, творог, молоко, сыр, брынза и ряженка);
- из каш разрешена рисовая, овсяная и пшеничная;
- овощи (морковь, белокочанная капуста и картофель);
- фрукты;
- чай слабой заварки, минералка без газа;
- сладкая кондитерская продукция.
Особенности анализа на скрытую кровь
Старые методики обнаружения скрытой крови в каловых выделениях, включая бензидиновую пробу, дают реакцию не только на гемоглобин человека, но и на гемоглобин животных, находящийся в мясных продуктах. В результате таких обследований не во всех случаях получается определить, что указывает на положительный результат – скрытое кровотечение либо много мяса в питании.
Иммунохимический анализ крови исключает такое развитие событий и дает реакцию исключительно на кровь человека. Это говорит о том, что перед проведением процедуры пациенту не требуется следовать диете.
Как собирать материал для анализа?
Подготовка к иммунохимическому анализу кала на скрытую кровь заключается в понимании основных правил сборки материала. За 3 дня до проведения процедуры следует перестать принимать лекарственные средства с железом и висмутом в составе, а за день до сдачи материала – витамин С (аскорбиновая кислота) и Аспирин (ацетилсалициловая кислота).
За 72 часа до проведения обследования нужно прекратить любое лечение и диагностические процедуры, которые хоть как-то затрагивают органы желудочно-кишечного тракта, то есть не следует проводить колоноскопию, ректороманоскопию, рентгеноконтрастное обследование пищеварения.
За сутки до сдачи каловых масс на проверку скрытой крови больному не следует чистить зубы, так как щетка, в особенности с жесткой щетиной, может случайно поранить десны и спровоцировать кровотечение, которое и даст ложные результаты.
Испражнение для проведения обследования следует брать лишь после проведения самостоятельной дефекации. Запрещено перед обследованием употреблять слабительные лекарства либо ставить клизму, так как это исказит результат.
Также важно убедиться в том, что в собранный материал случайно не попала моча либо влагалищные выделения. Для этого перед дефекацией рекомендуется помочиться, а после подмыться и высушить промежность простым полотенцем. При дефекации натуживаться слишком сильно не рекомендовано.
Сразу после дефекации следует собрать материал из 3-4 участков каловых масс и переместить их в одноразовый контейнер с крышкой и шпателем, который можно взять в лаборатории либо приобрести в аптеке. Для обследования хватит всего 1/3 объема контейнера. Собранный материал как можно скорее доставляется в лабораторию.
Расшифровка результатов исследования
В расшифровке иммунохимического анализа на скрытую кровь в норме не должно находиться крови. Неправильные показания могут получиться в следующих случаях:
- неследование диете (при использовании бензидиновой пробы);
- сбор анализа во время менструации;
- кровотечения из носа;
- сильная кровоточивость десен.
Иммунохимический способ может привести и к ложноотрицательному результату. Чаще всего это происходит тогда, когда в кале находятся неизменные эритроциты, к примеру, при кровоточащих трещинах на анальном отверстии либо из-за геморроя.
На какие заболевания указывает кровь в кале?
Если пациент тщательно подготовился к процедуре и выполнил все правила, а также исключил все факторы, которые бы могли отрицательно сказаться на достоверности биохимического анализа, то обнаружение в кале крови может говорить о наличии у пациента болезней желудочно-кишечного тракта, которые привели к деформации целостности слизистых оболочек:
Если врач сомневается в достоверности полученных после процедуры результатов, то назначает повторный анализ. Можно провести иммунохимический анализ кала на скрытую кровь в Воронеже.
Дополнительные правила сбора кала
Лишь соблюдение этих правил гарантирует пациенту точный результата анализа каловых масс:
- Собирается биоматериал в утреннее время.
- Сбор следует проводить так, чтобы кал случайно не попал в воду. Лучше всего собирать его в чистую и сухую емкость либо закрыть унитаз пленкой, чтобы испражнения оказались прямо на ней.
- Материал для анализа запрещено собирать в течение 3-5 дней после окончания месячных, при геморроидальном кровотечении. Аспирин, алкогольные напитки и некоторые противовоспалительные средства могут привести к сильному раздражению кишечника (включая толстую кишку) и спровоцировать скрытое кровотечение. Сбор образца следует проводить с использованием специальной банки и шпателя, с 3-4 разных точек кала.
- Если диагностика требует сразу три образца кала, то их следует собирать из трех дефекаций, пусть даже в один день.
- Собранный материал нужно доставить в клинику в течение следующих трех часов.
- При необходимости предоставить три образца, каждый образец нужно поместить на хранение в холодильник, а после за один раз отвезти в лабораторию.
- После сбора каловая масса на скрытую кровь может проверяться в следующие 7 дней. При этом важно помнить про требования медицинского учреждения.
Тест на скрытую кровь в каловых массаж считается основным при скрининге колоректального рака по той причине, что опухолевое образование развивается без выраженных симптомов, но может быть выявлено и своевременно вылечено даже при минимальных и периодических кровотечениях.
Чаще всего скрытая кровь в испражнениях является клинической картиной анемии (микроцитарная анемия). Именно по этой причине при наличии симптомов анемии человеку придется пройти целый комплекс обследований (гастроскопия, колоноскопия). Провести иммунохимический анализ кала на скрытую кровь в «Инвитро» проще и быстрее всего.
Лечение заболеваний органов ЖКТ
Лечение желудочно-кишечного тракта будет включать в себя следование строгому постельному режиму, исключение физической активности и эмоциональных всплесков. Это поможет предотвратить усиление кровотечения и его возобновления. По возможности на участок тела, возле которого расположен больной орган, нужно положить пузырь со льдом (при кровотечении из язвы желудка – на верхнюю часть живота, из язвы двенадцатиперстной кишки – на правую боковую область живота).
Если кровь выходит из варикозно-расширенных вен пищевода эндоскопическая коагуляция (прижигание источника кровотечения) запрещена, для лечения используют зонд Блекмора (резиновая труба, проводящаяся в пищевод и желудок). На ней установлены специальные балонообразные расширения, которые после вставки в орган зонда наполняются воздухом и пережимают расширенные вены, из которых исходит кровь.
Потерянную во время заболевания кровь можно восстановить посредством внутривенного введения кровезамещающих растворов. При слишком сильной потере крови нужно провести переливание компонентов донорской крови. Внутривенное и внутримышечное введение медикаментов с железом требуется для избавления от анемии (недостатка крови в организме).
Источник
