Иммунохимический анализ белков сыворотки крови

Иммуноглобулины – белки, обладающие активностью антител (способностью специфично связывать определенные антигены). 

В отличие от большинства белков сыворотки крови, которые вырабатываются в печени, иммуноглобулины продуцируются плазматическими клетками – потомками стволовых клеток предшественников В-лимфоцитов в костном мозге. По структурным и функциональным различиям выделяют 5 классов иммуноглобулинов – IgG, IgA, IgM, IgD, IgE и ряд субклассов. Поликлональное увеличение количества иммуноглобулинов – нормальный ответ на инфекции.

Моноклональные гамммапатии – состояния, когда клоном плазматических клеток или В-лимфоцитов (популяцией клеток, берущих начало от одной В-клетки предшественника) продуцируется аномальное количество иммуноглобулина. Такие состояния могут быть доброкачественными или являться проявлением болезни. Моноклональные гаммапатии выявляют по появлению аномальной полосы белка при электрофорезе сыворотки или мочи. 

Молекулы иммуноглобулинов состоят из одной или более структурных единиц, построенных по единому принципу — из двух идентичных тяжелых цепей и двух идентичных легких пептидных цепей – каппа или лямбда. Разновидности тяжелых цепей являются основой деления иммуноглобулинов на классы. Цепи иммуноглобулинов имеют константные и вариабельные участки, последние связаны с антигенной специфичностью. 

Иммуноглобулин, продуцирующийся одним клоном клеток, имеет идентичную структуру — представляет один класс, подкласс, характеризуется идентичным составом тяжелых и легких цепей. Поэтому если в сыворотке присутствует аномально большое количество моноклонального иммуноглобулина, в процессе электрофоретического разделения белков сыворотки крови он мигрирует в виде компактной полосы, которая выделяется на фоне стандартной картины распределения белковых фракций сыворотки. При описании результатов электрофореза белков сыворотки его называют также парапротеином, М-пиком, М-компонентом, М-белком или М-градиентом. По структуре такой моноклональный иммуноглобулин может быть полимером, мономером или фрагментом молекулы иммуноглобулина (в случае фрагментов чаще это легкие цепи, реже – тяжелые). Легкие цепи способны проходить через почечный фильтр, и могут быть обнаружены при электрофорезе мочи. 

Выявление моноклональных парапротеинов основано на применении электрофореза белков. Иногда фибриноген и СРБ, которые мигрируют в бета или гамма-фракции, могут быть ошибочно расценены как парапротеины. Иммуноглобулиновую природу выявленного моноклонального компонента подтверждают с помощью иммунофиксации разделенных белков специфической поливалентной преципитирующей антисывороткой, направленной против иммуноглобулинов (тест № 4050). При подтверждении присутствия моноклонального иммуноглобулина проводится денситометрия и определяется его количественное содержание. Для полноценной идентификации (типирования) моноклонального компонента требуется развернутое исследование с помощью электрофореза и иммунофиксации с развернутой панелью антисывороток против IgG, IgA, IgM, каппа и лямбда цепей (тест № 4051). В диагностике и прогнозе учитывают класс выявленного парапротеина, его концентрацию в момент установления диагноза, скорость повышения его концентрации в динамике. Наличие парапротеина является маркером ряда гематоонкологических заболеваний. 

При обследовании пациентов, применяющих лекарственные препараты на основе моноклональных антител (могут использоваться в качестве противоопухолевой терапии, иммунодепрессантов и др.), следует учитывать, что на пиковых концентрациях после введения такие препараты иногда могут быть причиной выявления при электрофорезе малых аномальных полос белка иммуноглобулиновой природы. 

Множественная миелома — классическое гематологическое заболевание, обусловленное злокачественной пролиферацией плазмацитов, секретирующих моноклональный иммуноглобулин (парапротеин) или его фрагменты. Плазматические клетки чаще пролиферируют диффузно в костном мозге, заболевание приводит к остеолитическим поражениям костей, редукции других клеток костного мозга, что ведет к анемии, тромбоцитопении, лейкопении, ингибирует развитие нормальных клонов плазматических клеток. Пациенты могут обращаться с локальными симптомами патологии костей (боли, переломы) или неспецифичными симптомами (потеря веса, анемия, кровотечения, повторные инфекции или почечная недостаточность). У большинства больных на момент установления диагноза концентрация парапротеина превышает 25 г/л. При миеломе парапротеин в сыворотке крови чаще всего представлен IgG (60%), реже IgA (20%) и около 20% случаев приходятся на миелому Бенс-Джонса, связанную с продукцией свободных легких цепей каппа или лямбда (20%), которые могут быть обнаружены в моче. Иногда при миеломе может отмечаться биклональный парапротеин, представленный иммуноглобулинами разных классов или одного класса, но содержащий легкие цепи разных классов. Редко отмечается IgD и IgE миелома. Определение концентрации парапротеина используют для контроля эффективности лечения миеломы, такой мониторинг при миеломе на фоне терапии должен осуществляться каждые 3 месяца. Если содержание парапротеина снизилось ниже детектируемого, повторное измерение целесообразно проводить через 6 или 12 месяцев. 

Макроглобулинемия Вальденстрема представляет собой лимфому с гиперпродукцией моноклонального IgM. Лимфоплазмацитарные опухолевые клетки с характерным иммунофенотипом диффузно распределены в лимфатических узлах, селезенке и костном мозге. Высокая концентрация моноклонального IgM часто превышает 30 г/л и приводит к увеличению вязкости крови и ряду клинических проявлений, включающих спутанность сознания, слепоту, склонность к кровоточивости, сердечную недостаточность и гипертензию. При макроглобулинемии часто отмечается парапротеинемическая полинейропатия, холодовая гемолитическая анемия и криоглобулины. При других разновидностях лимфом и хроническом лимфолейкозе парапротеины класса IgM отмечается у 20% больных, однако концентрация парапротеина обычно ниже, чем 30 г/л. 

Болезнь тяжелых цепей (болезнь Франклина) сопровождается синтезом только тяжелой цепи IgG-гамма, без сопутствующей легкой цепи. Это крайне редкое заболевание проявляется отеком мягкого неба и лимфоидной инфильтрацией. Также редко отмечается болезнь тяжелых цепей альфа, при которой возникает хроническая диарея, нарушение всасывания, обусловленные лимфоидной инфильтрацией стенки кишки. 

Моноклональный парапротеин может быть обнаружен при ряде неопухолевых заболеваний, в частности, при эссенциальной криоглобулинемии (чаще IgM), парапротеинемической хронической полинейропатии, холодовой гемолитической анемии, АL-амилоидозе почек (свободные цепи лямбда), и внутренних органов, болезни отложения легких цепей. Парапротеин в сыворотке крови отмечается также при болезни Кастелмана (IgM/лямбда), POEMS-синдроме (полинейропатия с органной мегалией) и микседематозном лишае (IgG/каппа). 

При скрининговых обследованиях частота выявления парапротеинемии резко увеличивается в популяции после достижения 50 лет и достигает 4–10% у лиц старше 65 лет. Однако большинство впервые выявленных парапротеинемий в общей популяции представляют собой бессимптомные моноклональные гаммапатии невыясненного значения (МГНЗ). Концентрация парапротеина при МГНЗ существенно ниже 30 г/л и обычно не превышает 10–15 г/л. Кроме того, при МГНЗ парапротеин выявляется на фоне поликлональных иммуноглобулинов, т. е. угнетения нормального синтеза других иммуноглобулинов не происходит. Термин «МГНЗ» указывает на случаи парапротеинемии без других признаков онкогематологического заболевания, которые требуют ежегодного мониторинга, чтобы не пропустить момента озлакачествления процесса. При выявлении парапротеинов у обследованных моложе 50 лет необходимы еще более частые повторные обследования, поскольку у них отмечается высокий риск развития множественной миеломы. Если концентрация М-белка составляет более 15 г/л, вне зависимости от возраста рекомендуется проводить расширенное обследование, включающее электрофорез 24-часового образца мочи и иммунофиксацию каждые 3–6 месяцев, поскольку риск злокачественной трансформации очень высок. Выделяют доброкачественную парапротеинемияю, которая характеризуется сохранением парапротеина без прогрессирования в множественную миелому или другое заболевание в течение 5 лет наблюдения. При транзиторной парапротеинемии концентрация парапротеина обычно ниже 3 г/л. 

Литература

1. Андреева Н.Е, Балакирева Т.В. Парапротеинемические гемобластозы // Руководство по гематологии / под ред. А. И. Воробьева. 3-е изд., М., 2003.Т. 2, с. 151-184. 

2. Berenson J.R Monoclonal gammopathy of undetermined significance: a consensus statement. Br.J.Haematol., 2010, 150(1): 28-38.

Иммунохимический анализ — это диагностическое исследование комплексного направления, необходимое для определения популяции клеток, белков сыворотки А, 6, М, циркулирующих иммунных комплексов, количества лейкоцитов, которые участвуют в фагоцитозе.

Зачем назначают иммунохимический анализ (ИХА)?

Проводится иммунохимический анализ для решения следующих вопросов:

1. Определение соотношения между течением заболевания и иммунными нарушениями.
2. При отклонении показателей от нормы.
3. Чтобы собрать данные на начальном этапе болезни.
4. Получить сведения о терапии и количестве принимаемых препаратов.

Показаниями для проведения данного вида диагностики могут стать такие нарушения:

1. Частые инфекции.
2. Инфекционные заболевания, протекающие в тяжелой форме.
3. Врожденный или приобретенный иммунодефицит.
4. Если у человека имеется аутоиммунная патология.
5. Присутствие аллергии.
6. Необходимость хирургического вмешательства.
7. Осложнения после операции.
8. Анорексия.
9. Различные интоксикации.
10. Наличие опухолей.
11. Сахарный диабет.
12. Развитие побочных реакций на медикаменты.

Справка! Во время приема иммуномодуляторов в динамике проводится контроль в виде иммунохимического анализа.

Полученную иммунограмму расшифровывает лечащий врач.

Что из себя представляет иммунохроматография рассказывается на видео:

Подготовка и проведение процедуры

Забор крови на анализ проводится по стандартной схеме. Для анализа понадобится венозная кровь, которая в дальнейшем отправляется в лабораторию и исследуется при помощи анализатора.

Важно! Благодаря новейшей медицинской технике результаты можно узнать через считанные минуты. Но многие лаборатории имеют возможность выдавать данные только через 1-2 дня.

Стандартизованная операционная процедура (СОП) определяет порядок выполнения иммунохимического анализа крови.

Особой подготовки к проведению процедуры не нужно, но имеется ряд правил, благодаря которым можно получить наиболее достоверный результат:

1. Сдавать кровь нужно утром натощак.
2. Допустимо выпить стакан негазированной воды, но есть запрещено.
3. Крайний прием пищи осуществляется вечером, до 21 часа.
4. За двое суток до обследования стоит ограничить себя в употреблении жирной и белковой пищи. Эти вещества (жир и белок) увеличивают свертываемость крови, и она становится мутной. А это обстоятельство искажает правильность результатов обследования.
5. За 2-3 дня до сдачи анализа также запрещено употреблять алкогольные напитки, они влияют на большинство показателей исследования, в том числе на гормоны.
6. За день до иммунохимического анализа нельзя курить. Если человеку трудно это сделать заранее, то нужно отказаться от сигарет хотя бы за два часа до похода в лабораторию.
7. Женщинам стоит знать, что уровень половых гормонов в различные фазы цикла меняется, поэтому обязательно следует сообщить врачу о том, когда в последний раз была менструация. При беременности учитывается срок и триместр.
8. Врачи рекомендуют временно приостановить прием лекарственных средств. Обычно это делается за неделю-полторы до сдачи анализа. Если такой возможности нет, то при расшифровке анализа стоит учитывать наличие в крови какого-либо лекарства.
9. Кровь нельзя сдавать сразу после физической активности или психологического напряжения. Уже с вечера до анализа следует воздержаться от физического и эмоционального напряжения. Перед прохождением исследования стоит успокоиться, привести себя в норму, обычно на это уходит 20-25 минут, и только потом можно отправляться в кабинет врача.

В некоторых случаях назначается иммунохимический анализ кала на скрытую кровь.

Она выделяется при некоторых патологиях, например, при диагностике рака прямой кишки, полипов или эрозии в слизистой кишечника. Подготовка в этом случае будет стандартная, как и при обычном анализе кала.

Если берется кровь на прогестерон, то ее сдают на 22-й или 23-й день после начала менструации.

При этом накануне анализа исключаются:

1. Стрессовые состояния.
2. Спиртные напитки.
3. Курение.
4. Жирные блюда.

Внимание! Также в некоторых лабораториях принимают мочу на анализ иммунитета. Он может выявить наличие паразитарной инфекции, наличие большого количества гормонов при беременности и т.д.

Расшифровка результатов исследования: норма и патология

Перед тем как направлять пациента на комплексный иммунохимический анализ, врач должен собрать некоторые сведения о пациенте, чтобы после исследования можно было провести соотношение его результатов и истории болезни человека.

К дополнительным сведениям можно отнести:

1. Определение связи между клинической картиной болезни и сдвигами в иммунной системе.
2. Определение отличия показателей в анализе от нормы.
3. Собирание данных о начале болезни.
4. Сведения о том, чем лечился больной и о количестве принимаемых препаратов.

Справка! Расшифровкой анализа занимается врач, стоит отметить, что это дело не простое и требует особых знаний.

Ниже представлены данные, разработанные учеными, в которых отражены данные значений основных показателей ИХА, которые могут быть допустимыми, и предполагаемые причины отклонений от нормы:

1. Иммуноглобулин А – норма составляет 17% от общего числа иммуноглобулина. Если норма превышена, то это может указывать на красную волчанку, печеночные и почечные патологии. Сниженные показатели бывают при циррозе и отравлении.
2. Иммуноглобулин Е – норма 0,2% от общего количества кровяного иммуноглобулина. Когда уровень его повышается, то это может говорить о заражении гельминтами. Проявляться они могут аллергическими реакциями: экземой, зудом, отечностью и т.д.
3. Иммуноглобулин М – показатель нормы – 5-5,2 процента от общего количества вещества. При повышении показателя диагностируются печеночные патологии, кандидозы, волчанка, инфекции в острой стадии.
4. Пролактин – у мужчин 103–535 мМЕ/л, у женщин 59–699 мМе/л. Повышенные показатели этого вещества могут говорить о наличии туберкулеза, либо новообразования в гипофизе, также повышается пролактин после приема некоторых медикаментов.
5. Лютеотропин – у мужчин – 1,15-8,9 мЕд/л., у женщин норма зависит от менструального цикла. У мужчин вызывает секрецию тестостерона, у женщин контролирует менструальный цикл. Снижение может быть при опухолях в гипофизе, ожирении или аменорее, повышение при проблемах в работе почек, поликистозе яичников, эндометриозе или голодании.

На видео доктор рассказывает о современных лабораторных методах исследования:

Цена проведения исследования крови

Иммунохимические анализы крови могут делиться на различные категории, а значит и ценовой диапазон будет разным:

1. Стандартное взятие венозной крови на иммунохимическое исследование обойдется человеку в пределах 170-200 рублей.
2. Если проводить посев мочи на чувствительность микроорганизмов к антибиотикам, то стоимость анализа будет дороже, примерно 900 рублей.

Важно! В некоторых лечебных центрах взятие биоматериала оплачивается отдельно от самого анализа.

Иммунная реакция организма и состояние гормонального фона крайне важны. В случае каких-либо нарушений в этой области показан иммунохимический анализ крови.

Это наиболее точный метод выявления многих нарушений, таких как наследственные проблемы с иммунитетом, наличие или предрасположенность к опухолям, аутоиммунные нарушения, проблемы с зачатием.