Иммуноферментный анализ крови у коров
Коварство такого заболевания как лейкоз заключается в его скрытости. Иногда больное животное годами является вирусоносителем, но при этом не проявляет никаких симптомов. Инфекция передается взрослым особям и молодняку КРС, у которых также медленно поражает организм. Регулярное обследование крупного рогатого скота помогает рачительным животноводам вовремя определить опасный недуг. Единственным эффективным для этого путем является взятие анализа крови.
Загрузка …
Вирусоносительство лейкоза
Онкогенный лейкозный вирус РНК вызывает хроническое инфекционное заболевание у КРС под названием лейкоз. Он поражает кроветворные органы и возбуждает начало опухолевого процесса. Если разрезать тушу убитой коровы, можно заметить, что все органы внутри покрыты опухолями.
Течение заболевания проходит три этапа, каждый из которых имеет определённые временные промежутки:
- инфекционная стадия является начальной, без проявления внешних симптомов, продуктивность и здоровье животного кажутся в норме, но в это время зараженные головы уже вирусоносители и передают белокровие сородичам. До первых признаков может пройти несколько лет;
- патологическая стадия начинается с проявления внешних признаков: угнетенного состояния, выпучивания глаз, увеличения лимфатических узлов и ряда других. В данный период болезнь можно спутать с другими (туберкулез, мастит и прочие);
- опухолевая стадия отмечается абортами стельных животных, невозможностью забеременеть, проблемами с пищеварением (понос, запор), потерей веса и снижением продуктивности. После обнаружения явных симптомов и до момента гибели взрослой особи КРС может пройти всего несколько часов, максимум дней. Телятам часто удается растянуть этот интервал до двух месяцев.
Взятие анализа крови
Поскольку лейкемия протекает незаметно, очень важно своевременно диагностировать ее для недопущения распространения. Для этого необходимо использовать достоверные способы обследования на вирусоносительство лейкоза у коров. На сегодняшний день выбор специалистов ложится на серологический метод:
- реакция иммунодиффузии в геле агара (РИД);
- иммуноферментный анализ (ИФА).
Антитела с реакцией осаждения взаимодействуют с растворимыми антигенами вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС). Их находят в срок от четырнадцати до шестидесяти дней после момента инфицирования. Также после этого они могут обнаруживаться на протяжении всего существования коровы.
Ученые уверяют, что ИФА более точный метод, чем РИД. Более верно он работает на первых порах. Но предпочтительнее использовать результаты от двух тестов, чтобы не оставлять сомнения.
Исследование крови на лейкоз у коров по методу РИД начинается с взятия сыворотки крови больного животного:
- на пластинку наносят капельку сыворотки и каплю реактива. Помутнение жидкости укажет на вирусоносительство лейкоза у коров до выявления клинических показателей;
- проба покажет, был ли у организма указанной особи контакт с вирусом лейкоза;
- в таком состоянии животное может оставаться до конца жизни, но не болеть и не давать клиники белокровия;
- при положительных результатах РИД убирают сомнительных коров в стадах, где их процент не превышает десять процентов. Когда «инфицированных» свыше половины, ликвидируются только клинические зараженные головы.
Иммуноферментный анализ допускает исследование не только крови, но и молока. Большая чувствительность ИФА дает шанс более оперативно и широко изучать сыворотки крови. Метод показывает поголовье, в которых степень заразности не больше процента.
Оба указанных метод не могут различить материнские антитела у молодняка от активных. Поэтому телята проверяются, начиная с шестимесячного возраста, когда перестают обнаруживать материнские антитела, не являющиеся показательными при диагностике.
Чтобы не допустить неправильный результат, нужно соблюдать условия проведения исследования крови на лейкоз у коров:
- у беременных буренок кровь берется за месяц до родов или после;
- выявление других возможных инфекционных заболеваний;
- обнаружение паразитов, избавление от них. После этого ИФА разрешается через месяц, а РИД через два месяца по завершению обработки;
- любые вакцины применяют после взятия анализов на пробы. Либо по прошествии двух месяцев;
- гематологическое обследование учитывает подсчет лимфоцитов в крови. Его можно инициировать телятам с полутора лет, если до этого методом РИД и ИФА были найдены антитела ВЛКСР.
Последний гематологический способ также позволяет развеять сомнения при тесте РИД.
Если по РИД результат отрицательный, а по итогам гематологической процедуры положительный, то последнюю повторяют через шестьдесят дней.
При равно положительном выводе корову отправляют на убой. А если и после повторного обследования РИД остается отрицательным в отличие от гематологического метода, животное признается здоровым.
Сроки исследования крови
Для проведения исследований в хозяйствах без карантина существуют благоприятные периоды. Владельцы крупного рогатого скота должны их учитывать, чтобы не допускать заболевания лейкемией:
| № | Полезная информация |
|---|---|
| 1 | перед стойловым периодом в середине или поздней осенью коров обрабатывают от паразитов, через пятьдесят дней можно организовать серологические и гематологические процедуры |
| 2 | перед выгоном стада после завершения зимнего сезона повторяют осенние манипуляции |
Под сомнение ставится поголовье, в котором у некоторых голов РИД и ИФА показали положительный результат, подкрепленный гематологическим. Такое хозяйство называют неблагополучным, в нем проводят противолейкозные мероприятия. Коровы считаются больные лейкозом. Когда в определенном хозяйстве положительные РИД и ИФА, но без гематологических изменений и проявления симптомов, животные лишь инфицированы вирусом.
Что делать, если анализ на лейкоз положительный?
Лейкемия считается заболеванием, при возникновении которых чудес не бывает. Самоизлечиться животное не способно, а действенных лекарств еще не разработали.
Поэтому если анализы на лейкоз у коровы положительные, приходится избавляться от буренки.
Ветеринарные службы, Россельхознадзор решают, когда и на какой срок устанавливать карантин при положительных анализах. Как правило, ограничения снимаются лишь спустя год после убоя последней зараженной особи. В руках владельца хозяйства судьба всего стада, если ему удастся оперативно изолировать заразную голову и провести обследование. Так можно избежать серьезного материального ущерба.
Технические регламенты не разрешают употреблять мясо лейкозного животного и молоко.
Продукция не может реализовываться, из нее нельзя приготовить сыры и кефир. Поэтому созданы специальные пункты убоя крупного рогатого скота, где туши тщательно утилизируются.
В личных целях можно давать пить молоко молодняку после обязательной обработки, потому что вирус гибнет при ста градусах. Также если опухоли успели поразить только лимфоузлы и не развиться по всем органам, можно подвергать здоровые части высоким температурам и употреблять.
Что делать, если анализ на лейкоз положительный? Иногда экономически выгодно ликвидировать все стадо и заменить животных здоровыми. До этого помещения для скота убирают и дезинфицируют трехпроцентным раствором едкого натра. Пока результаты анализов не известны, нельзя ввозить в хозяйство новое поголовье.
После выявления в стаде лейкемии и в профилактических целях животновод организует ежегодное обследование с взятием анализа крови у коров. Для быков сроки составляют раз в полгода.
YouTube responded with an error: Bad Request
Список используемой литературы:
- Животноводство — Википедия
- Животноводство // Энциклопедический словарь Брокгауза и Ефрона : в 86 т. (82 т. и 4 доп.). — СПб., 1890—1907.
- Животноводство // Большая российская энциклопедия : [в 35 т.] / гл. ред. Ю. С. Осипов. — М. : Большая российская энциклопедия, 2004—2017.
Источник
ИФА — это современное лабораторное исследование, в ходе которого ведется поиск специфических антител в крови (либо антигенов) к конкретным заболеваниям с целью выявления не только этиологии, но и стадии болезни.
В рутинной ветеринарной практике ИФА рекомендован в следующих случаях:
- поиск специфических антител к любому инфекционному заболеванию;
- поиск антигенов каких-либо инфекционных заболеваний;
- исследование гормонального статуса пациента;
- обследование на предмет наличия аутоиммунных заболеваний.
Как и у любого метода лабораторной диагностики ИФА имеет свои преимущества и свои недостатки. К преимуществам метода относятся:
- высокая специфичность и чувствительность метода (более 90%);
- возможность определения заболевания и отслеживания динамики процесса, то есть сравнение количества антител в разных временных промежутках;
- доступность и скорость данного исследования;
- не инвазивный способ забора материала не исследование;
Недостатком метода является тот факт, что в ходе анализа удается выявить не самого возбудителя заболевания, а только иммунный ответ на него (антитела).
Суть метода ИФА
Выделяют несколько разновидностей ИФА: прямой, непрямой, метод блокирования, конкурентный. Однако на практике чаще всего используется гетерогенный твердофазный иммунный анализ или ELISA.
Основу иммуноферментного анализа составляет иммунная реакция антигена и антитела с образованием иммунного комплекса, в результате чего происходит изменение ферментативной активности специфических меток на поверхности антител.
По сути, этот процесс можно разделить на несколько этапов:
- на поверхности лунок планшета тест-системы находится очищенный антиген определенного возбудителя. При добавлении сыворотки крови животного происходит специфическая реакция между этим антигеном и искомым антителом;
- далее, в лунку добавляется особый хромоген (конъюгат, меченный пероксидазой). Происходит ферментативная реакция, результатом которой является образование окрашенного вещества в лунке планшета. Интенсивность окраски его зависит от количества содержащихся в сыворотке животного иммуноглобулинов (антител);
- далее происходит оценка результата. С помощью многоканального спектрофотометра, происходит сравнение оптической плотности исследуемого материала с оптической плотностью контрольных проб и математическая обработка результатов. Количество антител у пациента напрямую зависит от высоты оптической плотности данной лунки.
Нужно помнить: для каждой тест-системы разрабатываются индивидуальные показатели для учета результатов, показатели нормы и патологии («референтные значения»). Это нужно учитывать при оценке результатов каждого конкретного исследования.
Некорректно интерпретировать результаты одной лаборатории по «референтным значениям» другой лаборатории. Также некорректно сравнивать результаты разных лабораторий между собой.
При оценке результатов на конкретные инфекции имеет значение класс обнаруженных антител и их количество. От этого зависит не только вопрос этиологии инфекции, но и предполагаемая стадия заболевания (острая, хроническая), а также наличие активной инфекции (острой или обострения хронической) на момент обследования.
Каковы приблизительные сроки появления антител?
Самыми ранними антителами являются IgM. Выявить их можно через 1-3 недели после возможного инфицирования, что характеризует острую фазу инфекционного процесса. Вторая ситуация появления антител IgM – обострение хронического процесса. IgM циркулируют в среднем около 3х месяцев, затем их количество постепенно исчезает. Однако у некоторых пациентов следовые количества IgM могут обнаруживаться в течение 1-2х лет с момента инфицирования.
С 4й недели после инфицирования начинают появляться антитела IgG. При большинстве инфекций титр их постепенно увеличивается с максимумом в разные сроки (в среднем через 1,5-2 мес), далее титр остается на невысоком уровне и указывает на иммунитет. При некоторых заболеваниях уровень IgG не бывает высоким.
Варианты обнаружения антител
- Изолированное обнаружение антител IgM предполагает наличие первичного инфицирования.
- Одновременное выявление в крови IgM и IgG характерно для первичного инфицирования в предыдущие 2-3 месяца, а также при обострении хронического заболевания.
- Выявление изолированно IgG может указывать как на иммунитет к данному заболеванию, так и на хроническую инфекцию. Во второй ситуации имеет значение и количество антител (титр), и изменение этого титра в динамике. Обычно исследования проводят с интервалом в 2-4-6 недель.
Корректное сравнение результатов ИФА, взятых в динамике, возможно только в случае их изготовления в одной и той же лаборатории.
Источник
Источник:
Виктор Боченков / milkfermer.ru
В статье про ярославскую породу коров я затронул такой ветеринарный термин, как «лейкоз». Лейкоз – это хроническое инфекционное заболевание, которое часто встречается в молочном скотоводстве. Поэтому предлагаю более детально изучить этот вопрос.
Для начала необходимо понять, чем же чем же так опасно данное заболевание? Какой приносится вред хозяйству?
Данная статья написана в соавторстве с Владимиром Новиковым, который с 2002 года является начальником Волотовской районной ветеринарной станции Новгородской области.
Я в свою очередь попытался дать зоотехническое обоснование данной темы, Владимир разложил по полочкам все ветеринарный термины.
ЧТО ТАКОЕ ЛЕЙКОЗ КОРОВ?
Лейкоз (хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы, гемобластоз, лейкемия.) — хроническое заболевание опухолевой природы протекающая бессимптомно, характеризующееся злокачественным разрастанием кроветворных и лимфоидных клеток в разных органах.
Эту болезнь в народе еще называют «рак крови».
В опухолевый процесс вовлекаются лимфоузлы, сычуг, селезенка, сердце, почки и другие органы.
Лейкоз КРС диагностируют практически во всех странах мира. Наиболее широко он распространен в США, в ряде стран Центральной Европы, Швеции, Странах Ближнего Востока, Африки, Австралии.
ВЛКРС (Вирус Лейкоза Крупного Рогатого Скота) был завезен из Германии с 1945—1947гг. В дальнейшем вирус лейкоза распростронялся практически во всех Субъектах РФ.
В ходе воспалительных процессов ухудшается общее состояние животного, снижается удой, нередко истощение. У больных коров снижается уровень иммунитета и, как следствие, увеличивается яловость, снижается выход телят, учащаются аборты.
Тем самым лейкоз причиняет огромный экономический ущерб, который вытекает из недополученного молока и приплода, преждевременной выбраковки скота, утилизации туш больных животных.
Гемобластоз (лейкоз) в настоящее время рассматривают как потенциальную опасность для генофонда племенного молочного скота и при отсутствии планомерной борьбы имеет к дальнейшей ликвидации маточного поголовья.
Естественно экономический ущерб от данной болезни складывается из потерь в результате выбраковки инфицированных ВЛКРС и больных животных, утилизации либо уничтожении туш, сдачи на мясо молодняка от больных коров и расходов на проведение оздоровительных мероприятий.
ВОЗБУДИТЕЛЬ ЛЕЙКОЗА У КОРОВ
Возбудителем лейкоза является вирус семейства Retroviridae, который содержит в себе РНК. Животные заражаются этим вирусом путем проникновения в организм лимфоцитов через пищеварительный тракт, кровеносную систему, слизистые оболочку и мышечные ткани.
Лимфоциты — клетки иммунной системы, разновидность лейкоцитов (белые кровяные клетки крови).
Получается, что заразиться коровы могут через совместный выпас с зараженными животными, через использование зараженного семени быков-производителей, телята через зараженное молозиво.
Спектр заражение обширен. Контагионность лейкоза незначительна. Сезонность не проявляется. Природно-географические и климатические факторы не влияют на распространение болезни.
После заражения в организме образуются специфические антитела против вирусных антигенов. Животные, которые заразились, становятся пожизненно инфицированными.
ТРИ СТАДИИ ЛЕЙКОЗА
Заболевание характеризуется стадийностью. Различают три стадии развития инфекции:
- инкубационную (инфекционная)
- гематологическую (патологическая)
- опухолевую
Лечение больных коров лейкозом не проводят. Их подвергают вынужденному убою.
Первая стадия протекает без видимых клинических признаков, с сохранением продуктивности и воспроизводительных качеств. Диагностируется серологическими методами исследованиями (реакция иммунной диффузии)
ДИАГНОСТИКА ЛЕЙКОЗА КОРОВ. ИССЛЕДОВАНИЕ НА РИД
Ранее я писал про образование антител у животных заразившихся ВЛКРС и при помощи данного метода мы можем найти данные антитела у животного в чашке Петри.
Посередине размещаем Антиген (АГ) а по бокам сыворотка крови животных Антитела (АТ) и если будет реакция т.е РИД +, то между АГ И АТ будет линия преципитации как показана на рисунке.
Данный метод позволяет выявить лейкоз на ранних стадиях. Но Существует еще пару реакций которые позволяют на ранних стадиях обнаружить вирус лейкоза когда титр антител очень низкий и реакция имунодифузии не дает положительной реакции, к ним относят ИФА и ПЦР.
ИФА (Иммуноферментный анализ) гостированный метод. Чуствительность метода ИФА намного выше чем РИД, позволяет использовать другие биологические жидкости, например молоко.
ПЦР метод он не гостированный, но он самый точный из этих методов
Диагноз на лейкоз считают установленным, а хозяйство не благополучно по этой болезни, если серологическим методом выявлены антитела к ВЛКРС , а так же если клинические, гематологические, паталогоанатомические изменения, характерные для лейкоза, подтверждены гисталогическими исследованиями, а при жизни у этих животных специфические антитела к ВЛКРС
Ну и самое главное в чем особенно путаются владельцы животных
– Животные у которых в крови обнаружены специфические антитела к ВЛКРС (реакция РИД, ИФА), но отсутствуют гематологические изменения (реакция ГЕМ) и клинические признаки, оценивают как «ИНФИЦИРОВАННОЕ ВИРУСОМ ЛЕЙКОЗА»
— Животные, у которых в крови обнаружены специфические антитела к ВЛКРС (Реакция РИД, ИФА), а так же гематологические изменения или клинические признаки, характерные для лейкоза – ЖИВОТНОЕ БОЛЬНОЕ ЛЕЙКОЗОМ.
Стоит отметить, что прямой взаимосвязи между заболеванием лейкоза животных и естественным заражением человека не установлено. Хотя по своему строению и функциональным особенностям ВЛКРС очень схож с Т-клеточным вирусом лейкоза человека.
Однако существуют определенные ветеринарно-санитарные требования к ограничению порядка использования молока и мяса животных, которые являются вирусоносителями либо ГЕМ больные.
— молоко от инфицированных животных не устойчиво к высоким температурам, обычный режим пастеризации убивает вирус за пару десятков секунд.
— мясо ГЕМ больных животных рекомендуется уничтожить
— весь КРС начиная с 6 мес. Возраста исследуется на лейкоз.
Поводя итог можно смело утверждать, что лейкоз коров остается крупной социально-биологической проблемой, потенциально опасным заболеванием для человека.
И очень важно выявлять его в стаде на ранних стадиях развития во избежание огромных экономических потерь.
Источник
