Иммуноферментный анализ крови с аллергенами

Одним из методов, применяющихся при диагностике аллергических заболеваний, являются специфические анализы крови на аллергены, которые позволяют не только определить степень сенсибилизации и тип чужеродного для организма вещества, но и установить его роль в развитии данного аллергического заболевания.

Что собой представляет анализ крови на аллергены?

Определение аллергена по крови – это высокоинформативная, абсолютно безопасная диагностическая методика, которая проводится in vitro, то есть не требует непосредственного участия человека. При однократном применении данное лабораторное исследование позволяет выявить в сыворотке, плазме или цельной крови больного наличие специфических антител к неограниченному количеству аллергенов. В том случае, когда при проведении кожных аллергопроб существует вероятность развития сильной аллергической реакции, подобный анализ является единственно возможным способом диагностики.

Все лабораторные тесты, предусматривающие использование крови, условно подразделяются на специфические и неспецифические. В качестве исследований второго вида, направленных на выявление общих изменений в иммунной системе пациента, применяется клинический анализ крови, определение уровня С-реактивного белка, характеристика иммунокомпетентных клеток и пр.

Специфическая диагностика аллергенов включает в себя определение и измерение уровня аллергенспецифических иммуноглобулинов IgG/IgG4, являющихся биомаркерами гиперчувствительности к чужеродным белкам.

Методы специфической аллергодиагностики

Иммуноферментный анализ на определение аллергена. Данное исследование назначается для измерения количества специфических иммуноглобулинов IgE в крови больного. В норме показатель общего иммуноглобулина находится в пределах 20–120 ед./мл. При наличии аллергии этот порог значительно повышен.
Комплексный анализ пищевых аллергенов – определение специфических иммуноглобулинов IgG4, сгруппированных в так называемые аллергопанели (пищевые группы), оптимально подобранные по перекрестным реакциям.
RAST-тест (радиоаллергосорбент). Данный анализ используется для определения концентрации в крови иммуноглобулинов IgE и IgG. С его помощью обнаруживается аллергия, однако не определяется степень чувствительности к вызывающему ее чужеродному белку.
Иммунофлюоресцентный анализ на аллергены на сегодняшний день считается «золотым стандартом» в диагностике аллергических патологий. При помощи метода ImmunoCap, являющегося истинным количественным тестом, производится оценка концентрации IgE в сыворотке крови и определяется функциональное состояние организма. При проведении исследования используются индивидуальные аллергены (около 280 шт.), панели пищевых и ингаляционных аллергенов, панели для определения аллергенов животных, пылевых клещей, трав, грибков и пр.
MAST-тест позволяет выявить изменения функциональной активности фагоцитов при их взаимодействии со специфическими агентами.
Иммуноблот является высокоспецифичной и высокочувствительной референтной методикой, подтверждающей диагноз при положительном или неопределенном результате ИФА.
Иммунохроматографический анализ – это пробы на аллергены, предусматривающие использование специальных экспресс-тестов. Данный метод применяется при исследовании сыворотки, плазмы или цельной крови.

Показания к проведению лабораторного исследования

Атопический дерматит, экзема, нейродермит и другие патологические состояния, сопровождающиеся значительным поражением кожных покровов.
Повышенная кожная чувствительность, способная спровоцировать ложноположительные или ложноотрицательные результаты.
Дискомфорт при проведении кожных тестов.
Выраженный дермографизм (кожная реакция на механическое раздражение).
Необходимость постоянного приема противоаллергических препаратов, снижающих чувствительность к аллергенам при проведении кожных тестов.
Грудной возраст.
Наличие в анамнезе анафилаксии или вероятность ее развития.

В клинике АВС-МЕДИЦИНА в Москве, предоставляющей широкий спектр амбулаторно-поликлинических услуг, реализован комплексный подход к проблеме диагностики и лечения аллергопатологий. У нас Вы сможете сдать анализ крови на аллергены, цена которого зависит от метода диагностики, а также при необходимости пройти полноценный курс лечения, разработанный в соответствии с мировыми стандартами терапии гистаминзависимых аллергических заболеваний.

Источник

Аллергия представляет собой одну из наиболее актуальных проблем медицины из-за широкого распространения аллергических реакций среди населения, ежегодного прироста заболеваемости и существенного увеличения числа аллергенов, которые способны привести к тяжелым клиническим последствиям. При системной аллергической реакции может проявиться тяжёлая, угрожающая жизни реакция (анафилаксия).

Появление клинических симптомов после контакта с аллергеном наступает очень быстро — от 5- 15 минут до 2 часов. Аллергены могут попадать на слизистые оболочки воздушным путем (ингаляционная аллергия) или с приёмом пищи (пищевая аллергия).

Поступая в организм человека, аллергены приводят к повышенной выработке антител- иммуноглобулинов класса Е. С каждым последующим контактом с аллергеном аллергические реакции могут становиться тяжелее.

В лабораторной диагностике аллергических заболеваний определяют:

уровень общих иммуноглобулинов класса Е,

уровни специфических иммуноглобулинов Е к отдельным аллергенам или группам аллергенов природного и искусственного происхождения.

О тяжести аллергии судят по уровню иммуноглобулинов класса Е (IgE) в сыворотке крови.

Необходимо исследование крови на общий анализ с подсчетом количества эозинофилов — клеток, которые первыми реагируют на аллерген.

Почему это стоит сделать в нашей клинике

Для аллергодиагностики используется автоматический анализатор и реагенты немецких компаний Dr.Fooke и EUROIMMUN, разработанные в соответствии со стандартами ВОЗ, имеющие знак качества Евросоюза СЕ, зарегистрированные в МЗ РФ. Клинико-диагностическая лаборатория является участником внешнго контроля качества исследований EQAS BIO – RAD, что обеспечивает и подтверждает надежность и качество результатов.

Показания:

Бронхиальная астма

Поллинозы (заболевания, возникающие в результате аллергии на пыльцу растений). К их числу относятся: сенная лихорадка, конъюнктивит, ринит и другие.

Атопический дерматит (хроническое рецидивирующее воспалительное заболевание кожи, проявляющееся интенсивным зудом), экзема

Пищевая и лекарственная аллергия

Оценка риска развития аллергических заболеваний у детей, чьи родственники имеют аллергопатологию.

Методика:

— метод иммуноферментного анализа (ИФА) – специфические иммуноглобулины Е (IgE)

— метод иммунохемилюминисцентного анализа (ИХМ) – общий иммуноглобулин Е (IgE)

— метод иммуноблоттинга (ИБ) – спектр специфических иммуноглобулинов Е:

1) Аллергены пищевые, 10 показателей в тесте:

Яичный белок –f1

Коровье молоко – f2

Пшеничная мука – f4

Арахис – f13

Соевые бобы – f14

Орехи – смесь (арахис, фундук, треска, миндаль) – fs36

Треска – f3

Морепродукты – смесь (треска, креветки, голубая мидия, тунец, лосось) – fs12

Пищевая смесь (пшеничная мука, овсяная мука, рис, кунжут, кукуруза) – fs58

Мясо – смесь (свинина, говядина, курица, баранина) – fs53

2) Аллергены ингаляционные, 20 показателей в тесте:

Тимофеевка луговая – g6

Рожь посевная – g12

Ольха – t2

Береза – t3

Лещина – t4

Полынь – w6

Подорожник – w9

Dermatophagoides pteronyssinus (клещ домашней пыли) – d1

Dermatophagoides farinaе (клещ домашней пыли) – d2

Кошка – e1

Собака – e2

Лошадь – e3

Морская свинка – e6

Кролик – e82

Золотистый хомячок – e84

Птицы клеточного содержания, смесь (перья волнистого попугайчика, курицы, канарейки и гуся) – es4

Penicillium notatum – m1

Cladosporium herbarum – m2

Aspergillus fumigatus – m3

Alternaria alternate – m6

Интерпретация результатов:

При определении общего иммуноглобулина Е (IgE) результат представлен в единицах концентрации с указанием значения нормы, а для специфических иммуноглобулинов Е (IgE), кроме того, в стандартных классах аллергореактивности – от 0 до 6.

Отрицательные результаты на IgE специфические могут быть получены, если:
— симптомы не IgE-опосредованы;
— кровь на исследование взята до того, как организм стал способен продуцировать антитела к аллергенам;
— в течение длительного времени после сенсибилизации концентрация IgE достигла своего минимума;
— симптомы связаны с другими аллергенами, не входящими в исследование.

Положительные результаты на специфические IgE не обязательно должны сопровождаться клиническими проявлениями.

Многие IgЕ, направленные против ингаляционных аллергенов, могут вызвать пищевую аллергию через перекрестные реакции с компонентами растительной пищи. Это явление перекрестной реактивности основано на значительном структурном сходстве аллергенов, например, у химических веществ или родственных видов растений.

Примеры перекрестной реактивности между ингаляционными и пищевыми аллергенами

Ингаляционный аллерген	Соответствующий пищевой аллерген
Травы	Томат, картофель, морковь, сельдерей, чеснок, лук, пшеница, рис, зеленый горошек, арахис, яблоко, персик, апельсин, арбуз, дыня, киви
Берёза	Фундук, грецкий орех, яблоко, груша, морковь, седьдерей, картофель, апельсин, киви
Полынь	Сельдерей, морковь, специи, зелёные бобы, горчица, орех
Амброзия полыннолистная	Арбуз, дыня, огурец, банан
Подорожник	Дыня
Латекс	Авокадо, картофель, бананы, томат, каштан, киви

Сильная перекрестная реактивность вызывается, в частности, благодаря сходству в структуре так называемых «перекрестных углеводных детерминант» (ССD-маркеров), найденных в большинстве аллергенов растительного и животного происхождения. У некоторых больных вырабатываются специфические иммуноглобулины класса Е против CCD. Их определение предоставляет дополнительную информацию для интерпретации результата, в частности, когда положительный результат по IgE не согласуется с клиническими симптомами.

Подготовка:

Забор крови осуществляется из вены натощак.

Источник

Иммуноферментный анализ (ИФА) — метод лабораторной диагностики, позволяющий обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях.

Где можно сдать анализ?

ИФА — один из самых распространенных и точных методов для выявления инфекций, передающихся половым путем, в частности ВИЧ, ВПЧ, гепатита В.

Узнать больше…

Для того чтобы результаты анализов были максимально достоверными, необходимо правильно подготовиться к их сдаче.

Как подготовиться?

Современная диагностика в медицине немыслима без высокочувствительных лабораторных анализов. Прежде для установления причин тех или иных симптомов врачи были вынуждены ориентироваться на косвенные признаки болезни, а также проводить многоступенчатые микроскопические исследования в попытке обнаружить возбудителя инфекции. Сегодня достаточно одного-единственного теста — такого как иммуноферментный анализ — чтобы подтвердить или опровергнуть первоначальный диагноз.

Основные понятия и принцип метода иммуноферментного анализа

Иммуноферментный анализ (ИФА) — это метод лабораторной диагностики, основанный на реакции «антиген-антитело», который позволяет выявить вещества белковой природы (в том числе ферменты, вирусы, фрагменты бактерий и другие компоненты биологических жидкостей).

Чтобы понять, как устроен иммуноферментный анализ, попробуем разобраться в сути реакции «антиген-антитело». Антиген — это чужеродная для организма молекула, как правило, белкового происхождения, которая может попасть в тело человека вместе с инфекционным агентом. Частицы чужой крови (если она не совпадает с нашей по группе) также являются антигенами. В организме антигены способны вызывать иммунную реакцию, направленную на защиту целостности внутренней среды от чужеродных веществ. Поэтому наше тело синтезирует особые вещества — антитела (иммуноглобулины), способные по принципу «ключ к замку» соединяться с антигенами, связывая их в иммунный комплекс (этот процесс как раз называется реакцией «антиген-антитело»). Такие иммунные комплексы легче распознаются и уничтожаются клетками иммунитета.

Существует несколько разновидностей антител, каждая из которых вступает в действие на определенном этапе иммунного ответа. Так, первыми в ответ на проникновение антигена в организм синтезируются иммуноглобулины класса М (IgM). Содержание этих антител наиболее высоко в первые дни инфекционного процесса.

Следом за ними иммунная система выбрасывает в кровь иммуноглобулины класса G (IgG), которые помогают уничтожать антигены до полной победы над инфекцией, а также продолжают циркулировать по сосудам в дальнейшем, обеспечивая иммунитет к повторному заражению. На этом явлении основана вакцинация: благодаря прививкам, содержащим ослабленные антигены микробов и вирусов, в нашей крови появляется большое количество IgG, которые при контакте с реальной угрозой быстро подавляют инфекцию — до того, как она нанесет вред здоровью.

Также существуют иммуноглобулины класса А (они в большом количестве содержатся в слизистых оболочках, защищая «подступы» к организму), Е (борются с паразитарными инфекциями) и другие. В лабораторной диагностике объектами интереса чаще всего являются IgM, IgG и IgA: по их концентрации можно оценить, на какой стадии находится инфекционный процесс, а также узнать, болел ли когда-либо человек тем или иным недугом (например, краснухой или ветряной оспой).

Как узнать, какие именно антигены или антитела присутствуют в организме человека? Когда врач предполагает, что причиной заболевания является определенная инфекция, или желает измерить концентрацию определенного гормона, он назначает пациенту иммуноферментный анализ.

Реакцию «антиген-антитело» можно воспроизвести в лабораторных условиях: использовать уже готовые антитела или антигены, чтобы определить, есть ли в исследуемом образце соответствующее им соединение.

Для начала необходимо получить образец биологической жидкости — обычно, это сыворотка крови. Лаборатория использует пластиковые планшеты с лунками, в которых уже содержатся очищенные антигены предполагаемого возбудителя (или — антитела, в случае если задачей является поиск антигена). Образцы вносятся в лунки, где происходит — или не происходит — образование иммунных комплексов. Если «встреча» состоялась, особое красящее вещество вступает в ферментную реакцию с объединенной молекулой, что позволяет с помощью инструментальной оценки оптической плотности сделать выводе о результатах анализа.

ИФА бывает качественным и количественным. В первом случае подразумевается однозначный ответ: искомое вещество или найдено, или не найдено в образце. В случае с количественным анализом более сложная цепь реакций дает возможность оценить концентрацию антител в крови человека, что в сравнении с результатами предыдущих тестов даст ответ на вопрос о том, как развивается инфекционный процесс.

Это интересно
Предшественником иммуноферментного анализа был радиоиммунный анализ, в котором для идентификации успешной реакции использовались меченые антитела и антигены. Поскольку проведение такой диагностики представляло потенциальную угрозу для здоровья сотрудников лаборатории, ученые озаботились поиском безопасной альтернативы по «окраске» образцов. Так в 1971 году был изобретен ИФА.

Преимущества метода

Бесспорные преимущества ИФА — высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность — это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.

ИФА во многом заменил «золотой стандарт» микробиологии — бактериологический метод диагностики, в ходе которого для идентификации возбудителя требовалось выделить его из организма, а затем в течение нескольких дней выращивать культуру на питательной среде в пробирке. Все то время, пока производился анализ, врачи были вынуждены лечить пациента «вслепую», догадываясь о происхождении микроорганизма по симптомам болезни. Определение IgM с помощью ИФА позволяет поставить точный диагноз уже в первые дни болезни.

Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.

Недостатки метода

К сожалению, для проведения ИФА нужно знать, что именно искать: методика анализа подразумевает, что врач заранее имеет предположение о природе заболевания. Поэтому нет смысла назначать такой тест в надежде случайно «угадать» диагноз.

В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека.

ИФА — крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.

Показания к назначению и выявляемые заболевания

Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА. Вот наиболее распространенные цели анализа:

Диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний:

IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С;
IgG к ВИЧ;
Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции;
Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр;
Ig M и IgG к герпетическим инфекциям;
Ig M и IgG к токсоплазмозу;
Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям;
IgG к паразитарным заболеваниям;
Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем;
IgG к хеликобактерной инфекции.

Общая оценка показателей иммунитета человека и маркёров некоторых аутоиммунных заболеваний.

Выявление онкологических маркёров (фактора некроза опухоли, простатспецифического антигена, раково-эмбрионального антигена и других).

Определение содержания гормонов в сыворотке крови (прогестерона, пролактина, тестостерона, тиреотропного гормона и других).

Анализируемый биоматериал и особенности его забора

Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.

Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.

Сроки готовности результатов ИФА

При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.

Расшифровка иммуноферментного анализа

Результатом качественного ИФА будет однозначный вердикт: искомое вещество либо найдено, либо не найдено в образце. Если же речь о количественном анализе, то концентрация может выражаться числовым значением или определенным количеством знаков «+» (от одного до нескольких).

Анализируемые показатели

IgM — наличие этого класса иммуноглобулинов говорит об остром инфекционном процессе в организме. Отсутствие IgM может говорить как об отсутствии конкретного возбудителя в организме, так и о переходе инфекции в хроническую стадию.
IgA при отрицательном результате теста на IgM чаще всего свидетельствует о хронической или скрыто протекающей инфекции.
IgM и IgA (совместное присутствие) — два положительных результата говорят о разгаре острой фазы заболевания.
IgG говорит либо о хронизации заболевания, либо о выздоровлении и выработке иммунитета к инфекционному агенту.

Возможные результаты ИФА

В зависимости от содержания анализа в бланке могут быть представлены данные в виде таблицы с перечислением всех антител или антигенов с пометками об отрицательной или положительной реакции, либо будет указано количественное значение результата (отрицательный, слабоположительный, положительный или резко положительный). Последний вариант определяет, сколько антител содержится в анализируемом образце.

Еще один количественный показатель — индекс авидности антител, выраженный в процентах. Он указывает, сколько времени прошло от начала инфекционного процесса (чем выше индекс — тем больше).

Сегодня выпускаются тысячи видов тест-систем ИФА, позволяющих обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях. Поэтому этот анализ используется практически во всех медицинских отраслях. Диагноз, поставленный с помощью ИФА, — это гарантия назначения адекватной терапии и эффективного лечения заболевания.

Источник