3.3.16. Определение фагоцитарной активности клеток крови.

Метод основан на явлении фагоцитоза – реакции организма, проявля-ющейся в способности клеток-фагоцитов захватывать и переваривать чуже-родные микроорганизмы.

Реактивы: 1. Стабилизатор крови. 2. Взвесь суточной микробной культуры (0,5-1 млрд.м.к./мл) в физрастворе.

Ход определения. В стерильные центрифужные пробирки вносят по 0,5 мл исследуемой крови и 0,5 мл микробной взвеси, содержащей по оптиче-скому стандарту мутности 0,5-1 млрд. микробных клеток в 1 мл.

В зависимости от задач и целей исследований можно использовать лю-бой из видов живых или убитых микроорганизмов: кишечная палочка, ста-филококк, стрептококк и т.п.

Пробирку с приготовленной смесью осторожно встряхивают, помеща-ют на 30 мин в термостат или водяную баню при 37°С. По истечении указан-ного срока смесь центрифугируют при 2000-3000 оборотов в минуту до рас-слоения жидкости на верхний – соломенно-желтый прозрачный слой плазмы, нижний – слой эритроцитов и среднюю серебристую пленку между ними – слой лейкоцитов. Пастеровской пипеткой с тонко оттянутым капилляром удаляют вначале верхний слой, затем осторожно снимают средний, делают из него 3-5 мазков (по способу приготовления мазков крови), фиксируют ме-тиловым спиртом и окрашивают по методу Романовского-Гимзы.

Расчет результатов. Фагоцитарная активность лейкоцитов. Фа-гоцитарная активность лейкоцитов выражается процентом активных лейко-цитов (фагоцитов) в общем числе подсчитанных нейтрофильных лейкоцитов. Из 100 подсчитанных подряд клеток выводится их процентное соотношение, т. е. лейкограмма. По найденным 100 фагоцитам определяют число клеток, участвующих в фагоцитозе (захвативших определенное количество микро-бов). Полученный результат выражают в процентах.

Фагоцитарный индекс определяется средним числом фагоцитирован-ных микробов, приходящихся на один активный лейкоцит. Этот показатель характеризует интенсивность фагоцитоза. Для определения фагоцитарного индекса служат те же самые мазки, которые использовали для определения фагоцитарной активности лейкоцитов. В препаратах, приготовленных опи-санным выше способом, подсчитывают не менее 100 лейкоцитов и количе-ство поглощенных ими микробных тел. Вычисляется фагоцитарный индекс путем деления числа фагоцитированных бактерий на число активных лейко-цитов.

Фагоцитарное число является дополнительным показателем, характе-ризующим как агрессивность лейкоцитов, так и их активность. Вычисляется фагоцитарное число путем деления числа фагоцитированных бактерий на общее число подсчитанных лейкоцитов.

Фагоцитарная емкость определяется количеством микробных тел, фа-гоцитированных лейкоцитами в 1 мм3 крови. Этот показатель характеризует общую фагоцитарную активность крови и зависит от количества лейкоцитов, содержащихся в I мм3. Некоторые авторы этот показатель называют фагоци-тарной интенсивностью, абсолютным фагоцитозом или общим фагоцитозом. Вычисляется фагоцитарная емкость умножением фагоцитарного числа на ко-личество лейкоцитов в 1 мм3 крови.

При высокой функциональной активности фагоцитов процесс перевари-вания захваченных микробов начинается немедленно, и уже в первые 30 мин. отмечают не только визуальное изменение микробной клетки, но и преобра-зование некоторых нейтрофильных лейкоцитов (набухание, изменение очер-тания ядра, слабое прокрашивание и т.д.), т.е. появляются признаки, харак-теризующие автолиз (самораспад) и начало деструкции нейтрофила. В тече-ние 2 ч фагоцитарная реакция в норме заканчивается перевариванием захва-ченных микробов и разрушением полиморфноядерных фагоцитов.

Для количественной оценки переваривающей способности фагоцитов введено понятие индекса завершенности фагоцитоза (ИЗФ). Для этого определяют отношение процента фагоцитоза, полученного через 30 мин. ин-кубации, к проценту фагоцитоза, полученному через 2 ч, и отношение фаго-цитарного индекса. Среднее число из этих показателей и служит индексом завершенного фагоцитоза. Принято считать, что ИЗФ больше 1 — завершен-ный, меньше 1 — незавершенный.

У новорожденных животных при значительном различии содержания лейкоцитов целесообразно оценивать фагоцитарную активность клеток крови по элиминирующей ее способности (ЭСК), под которой понимается способ-ность клеток, содержащихся в 1 мкл крови, фагировать некоторое количе-ство антигенно-чужеродных частиц в течение 30 мин. ЭСК выражается коли-чеством поглощенных за 30 мин. частиц (микробов и др.).

Подробности
Раздел: Методические рекомендации по оценке и коррекции иммунного статуса животных

Источник: ZooVet.info

Читайте также

Вид:

grid

list