Цитохимический анализ крови у детей
Наш эксперт – старший научный сотрудник лаборатории цитохимии Научного центра здоровья детей РАМН, кандидат медицинских наук Татьяна Измайлова.
Все дело в энергообмене
| Любопытно | |
|---|---|
От 0 до 22–25 лет – период взросления. Энергетический обмен постепенно увеличивается. От 22–25 лет до 40–45 лет – период зрелости. Стабильное состояние энергообмена. От 40–45 лет – старение. Начинается угасание всех функций, вместе с ними снижается и энергообмен. | |
Цитохимический анализ крови разработан еще несколько десятков лет назад, однако широко не применяется. Между тем цитохимия – исследование очень информативное и одновременно простое в исполнении. В основе метода лежит свойство клетки изменять свою функциональную активность. Клетка содержит множество ферментов, благодаря которым происходит энергетический обмен. Этот показатель не постоянный, а меняется в зависимости от различных факторов. Закономерность обнаружили, проводя эксперименты на мышах. Ученые выяснили, что в разное время суток у животных энергообмен то повышался, то ослабевал, и колебания эти носили достаточно регулярный характер.
Более того, степень активности клетки зависела и от внешних воздействий. Когда на мышей оказывалась дополнительная нагрузка (физическая или эмоциональная), энергообмен у них сначала усиливался, клетка функционировала на пределе, а затем начиналось ее истощение.
Именно так и действует защитный механизм нашего организма. Высокий энергообмен все равно как пожар – он быстрее ведет к гибели клетки. А чем быстрее клетка гибнет, тем раньше мы стареем.
В ходе исследований была обнаружена и другая интересная закономерность: энергообмен клетки подчиняется биоритмам и дается человеку с рождения. То есть человек уже появляется на свет с генетически обусловленной программой, согласно которой энергообмен будет то повышаться, то снижаться. И если ее просчитать, то можно спрогнозировать плановое ухудшение самочувствия и плановые подъемы.
Возможно, в том числе и в этом кроется причина того, что ребенок, блестяще учившийся, вдруг показывает слабый результат на экзамене. Или, напротив, не самый сильный спортсмен выходит в лидеры. Просто один выступал, когда волнообразная кривая его энергообмена была внизу, а другой – когда она взлетела вверх.
Таким образом, люди, рожденные в один день, имеют схожие графики изменения активности клетки, но не на сто процентов – ведь на программу влияет и индивидуальная генетика. Зато вот объяснение тому удивительному факту, когда близнецы, даже находясь на разных концах света, заболевают примерно в одно и то же время. У них может лишь различаться заболевание – в зависимости от эпидемической обстановки в месте пребывания.
Математика плюс медицина
| На заметку | |
|---|---|
| В первый год жизни ребенка перед вакцинацией можно сделать малышу цитохимический анализ. Он покажет, насколько различаются календарный возраст ребенка и биологический. На основе этих показателей можно составить индивидуальный календарь прививок. Например, трехмесячный малыш по своему биологическому развитию может соответствовать двухмесячному, а значит, прививку АКДС, которую начинают делать с трех месяцев, стоит временно отложить. | |
Результаты этих исследований позволили создать специальную компьютерную программу, которая рассчитывает индивидуальный график изменения энергообмена клетки пациента. Этот график накладывается на результат, полученный при исследовании крови. И врач сравнивает данные: активность клетки снижена, но и в плановом графике сейчас провал – значит, все идет своим чередом. Если же фактический уровень энергообмена намного ниже планового, требуется метаболитная терапия, когда пациенту назначают витамины и витаминоподобные вещества.
Впрочем, слишком высокий уровень энергообмена клетки – это так же плохо, как и слишком низкий, поскольку ведет к быстрому истощению.
Кроме того, при некоторых заболеваниях, например, при повышенной функции щитовидной железы, энергообмен всегда будет чуть выше нормы.
Болезнь по плану
На биохимические процессы в клетке влияют любые нагрузки: физические, эмоциональные, инфекционные. При неблагоприятном внешнем воздействии изменяется степень активности внутриклеточных ферментов, причем происходит это задолго до проявления клинических симптомов заболевания. А значит, совершенно реально заранее узнать – заболеете ли вы в этот сезон, скажем, гриппом или удастся устоять.
Цитохимическое исследование очень актуально для часто болеющих детей. График «плановых» ухудшений здоровья поможет скорректировать жизнь ребенка и не планировать больших нагрузок в дни, когда организм и так ослаблен.
Это относится и к взрослым. Зная свои «сильные» и «слабые» периоды, можно планировать работу и отдых.
Смотрите также:
- Дефицит гормонов: как заместительная терапия отдаляет наступление старости →
- 39 лет — самый «умный» возраст! После 40 мы начинаем глупеть →
- Стволовые клетки помогут вернуть молодость →
Источник
| Код услуги | Код по Номенклатуре | Наименование услуги | Цена (руб.) |
| 07.030 | A08.05.014 | Иммуноцитохимическое исследование с моноклональными антителами материала на антигены дифференцировки лимфоидных клеток (CD) | 3600 |
| 07.053 | A08.05.013.012 | Исследование функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов крови (НСТ-тест) | 500 |
| 07.037 | A08.05.013.013 | Количественное цитохимическое определение активности β-оксибутиратдегидрогеназы лимфоцитов (периферическая кровь, костный мозг) | 700 |
| 07.033 | A08.05.013.014 | Количественное цитохимическое определение активности дигидрооротатдегидрогеназы лимфоцитов (периферическая кровь, костный мозг) | 700 |
| 07.035 | A08.05.013.015 | Количественное цитохимическое определение активности инозин-5-монофосфатдегидрогеназы лимфоцитов (периферическая кровь, костный мозг) | 650 |
| 07.029 | A08.05.013.004 | Определение активности глутаматдегидрогеназы лимфоцитов в периферической крови | 750 |
| 07.034 | A08.05.013.005 | Определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы лимфоцитов в периферической крови | 750 |
| 07.031 | A08.05.013.002 | Определение активности малатдегидрогеназы лимфоцитов в периферической крови | 700 |
| 07.020 | A08.05.013.003 | Определение активности глицерол-3-фосфатдегидрогеназы лимфоцитов в периферической крови | 650 |
| 07.023 | A08.05.013.008 | Определение активности НАДН-дегидрогеназы лимфоцитов в периферической крови | 900 |
| 07.019 | A08.05.013.007 | Определение активности сукцинатдегидрогеназы лимфоцитов в периферической крови | 700 |
| 07.032 | A08.05.013.003.001 | Определение активности цитоплазматической глицерол-3-фосфатдегидрогеназы лимфоцитов (периферическая кровь, костный мозг) | 750 |
| 07.036 | A08.05.013.011 | Определение активности системы пероксидаза-пероксид водорода нейтрофилов периферической крови | 700 |
| 07.049 | A12.06.050.001 | Определение активности сукцинатдегидрогеназы в B1 /B2 популяциях лимфоцитов | 900 |
| 07.041 | A12.06.050.003 | Определение активности сукцинатдегидрогеназы в CD16+/CD56+лимфоцитах | 800 |
| 07.042 | A12.06.050.004 | Определение активности сукцинатдегидрогеназы в CD19+лимфоцитах | 750 |
| 07.038 | A12.06.050.005 | Определение активности сукцинатдегидрогеназы в CD3+лимфоцитах | 700 |
| 07.046 | A12.06.050.006 | Определение активности сукцинатдегидрогеназы в CD3±HLADR±лимфоцитов | 700 |
| 07.039 | A12.06.050.007 | Определение активности сукцинатдегидрогеназы в CD4+лимфоцитах | 700 |
| 07.045 | A12.06.050.008 | Определение активности сукцинатдегидрогеназы в CD45+лимфоцитах | 800 |
| 07.040 | A12.06.050.009 | Определение активности сукцинатдегидрогеназы в CD8+лимфоцитах | 700 |
| 07.048 | A12.06.050.010 | Определение активности сукцинатдегидрогеназы в TH2 лимфоцитах | 800 |
| 07.047 | A12.06.050.011 | Определение активности сукцинатдегидрогеназы в Treg лимфоцитах | 900 |
| 07.028 | A08.05.013.001 | Определение активности лактатдегидрогеназы лимфоцитов в периферической крови | 1800 |
| 07.027 | A08.05.013.008.001 | Определение активности НАДН-дегидрогеназы лимфоцитов в периферической крови (цитоморфоденситометрическое исследование) | 1800 |
| 07.026 | A08.05.013.007.001 | Определение активности сукцинатдегидрогеназы лимфоцитов в периферической крови (цитоморфоденситометрическое исследование) | 1700 |
| 07.022 | A12.06.050.014 | Определение активности внутриклеточных ферментов (сукцинатдегидрогеназы, глицерол-3-фосфатдегидрогеназы и кислой фосфатазы) лимфоцитов с компьютерной обработкой и расчетом производных характеристик (цитохимическая экспертиза) | 1900 |
| 07.008 | A08.05.013.006 | Определение активности кислой фосфатазы лимфоцитов в периферической крови | 700 |
| 07.005 | A08.05.013.010 | Определение активности щелочной фосфатаза нейтрофилов периферической крови | 700 |
| 07.025 | A08.05.013.009 | Определение содержания гликогена в лейкоцитах | 600 |
Источник
Выезд врача
на дом со скидкой 15%!
Оплата онлайн на сайте 
Оплачивайте услуги сразу на сайте онлайн!
2017-03-09
Цитохимия — раздел цитологии, изучающий биохимическими методами строение и функции клеток, внутриклеточных структур и продуктов их жизнедеятельности.
Стоимость экспертизы
| Цитохимическая экспертиза (СДГ, ГФДГ, КФ) с расчетом производных характеристик | 4 000 |
Количественный цитохимический анализ лимфоцитов периферической крови с успехом применяетсяв клинике Доктор АННА на Миклухо-Маклая (м. Беляево) в различных областях медицины — акушерстве, гинекологии, педиатрии, хирургии и других областях, поскольку позволяет обоснованно корректировать нарушения энергообмена клеток, которые неизбежно сопровождают любой патологический процесс.
Использование данного метода диагностики в программе подготовки супружеских пар к беременности позволяет проводить терапию препаратами-метаболитами, оптимизировать энергообмен у будущих родителей и, таким образом, проводить профилактику развития патологии у будущего ребенка.
Контроль за состоянием энергетического обмена у беременной женщины позволяет своевременно выявлять тканевую гипоксию плода и вовремя принимать меры по ее коррекции.
Не менее важно и динамическое наблюдение за состоянием энергетического обмена у детей различного возраста, особенно у новорожденных и детей первого года жизни.
Также существует целый ряд состояний, связанных с наличием астенического синдрома, чрезмерными физическими, психоэмоциональными или интеллектуальными нагрузками, при которых развивается глубокий энергодефицит, обусловленный недостаточным поступлением субстратов энергетического обмена в клетку. Для таких пациентов показана цитохимическая экспертиза.
По результатам исследования функциональной активности ферментов лимфоцитов периферической крови и с учетом возраста, пола и веса пациента, выдается заключение о состоянии энергетического обмена, прогноз изменения адаптационных возможностей организма на ближайшие полгода и индивидуально составленный перечень витаминов и витаминоподобных веществ для метаболитной терапии. Метаболитная терапия проводится, как правило, 10 дней каждого месяца в течение 3-4 месяцев, затем необходимо повторить анализ для коррекции курса.
Назначение метаболитной терапии по данным цитохимической экспертизы приводит к нормализации энергетического обмена в клетках, что влечет за собой восстановление функции иммунной системы.
Таким образом, у практикующих врачей имеется реальная возможность использовать количественный цитохимический анализ лимфоцитов периферической крови как неспецифический метод диагностики состояния энергообеспечивающих систем организма и обоснованно назначать своим пациентам ту метаболитную терапию, которая объективно показана им в связи с выявляемыми у них изменениями.
Записаться на прием
Введите пожалуйста свои данные
Как к нам добраться?
г. Москва, Ленинский проспект, д.111, к.1
Мы находимся всего в 2,6 км от метро Юго-Западная. Запоминайте адрес — Ленинский проспект, д.111, к.1. Ждем вас!
г. Москва, Ленинский проспект, д.111, к.1
Источник
Забор анализов у ребенка может быть сделан медицинским работником на дому или в процедурном кабинете нашего детского медицинского центра.
Сотрудничество с ведущими лабораториями города Москвы позволяет производить широкий спектр лабораторных исследований. Это биохимические и клинические анализы крови и мочи, коагулограмма, кардиомаркеры, диагностика анемий, крови на иммунологию, маркеры аутоиммунных заболеваний, онкомаркеры, гормоны, инфекции, лекарственный мониторинг, аллергология, ПЦР-диагностика, исследования кала на дисбактериоз, кишечную группу, копрологию, углеводы, яйца глист, проводятся посевы различных материалов на флору и чувствительность к антибиотикам.
Созданы все условия для проведения забора анализов у детей (кровь из вены, пальца, мазки…), как в поликлинических условиях процедурного кабинета, так и в домашней обстановке. Квалифицированные медицинские сестры обучены специфике забора анализов у детей, поэтому данная процедура не станет моральной травмой для вашего ребенка.
Совместно с лабораторией цитохимии научного центра детского здоровья РАМН используются программы цитохимической экспертизы качества жизни и прогностического сценария развития будущего ребенка, в основу которых положен цитохимический анализ лейкоцитов периферической крови. Этот высокоинформационный метод отражает состояние ферментного статуса клеток мозга, миокарда, печени, почек, селезенки, тимуса, мышц слизистой желудка и кишки (опосредованная биопсия); позволяет прогнозировать исход экспериментальной, бактериальной и вирусной инфекции; интоксикации, аллергической реакции и вакцинации.
Программа цитохимической экспертизы качества жизни позволяет оценить уровень состояния здоровья пациентов разного возраста и пола: биологический возраст, состояние энергетического обмена, психических функций, творческих способностей, показатели жизнестойкости.
Получить всю необходимую информацию, а также записаться на анализы Вы можете по телефону 8 (495) 374-79-43.
| Анализы. Общие исследования крови | Цена |
| Анализ крови на содержание сахара(экспрес) | 200 руб. |
| Время кровотечения | 200 руб. |
| Время свертываемости | 200 руб. |
| Гематокрит | 200 руб. |
| Гемоглобин | 200 руб. |
| Исследование на мононуклеары | 300 руб. |
| Общий анализ крови (клинический- L, Hb, СОЭ) | 300 руб. |
| Общий анализ крови (клинический- L,L-форм., Hb, Э, СОЭ) | 500 руб. |
| Общий анализ крови(L,L-форм.,Hb,Э,СОЭ,тромб.,ретик.,цв.пок. ) | 750 руб. |
| Определение группы крови | 300 руб. |
| Определение резус-фактора | 300 руб. |
| Резус — антитела | 500 руб. |
| Ретикулоциты | 200 руб. |
| Содержание гемоглобина в эритроците(цв. показ) | 200 руб. |
| СОЭ | 150 руб. |
| Тромбоциты | 200 руб. |
| Коагулограмма стандартн. (11 показ.) | 750 руб. |
| Цитохимический анализ крови | 2500 руб. |
Записаться на прием
Вопрос:
Добрый день! Вчера были на приеме. Дадыка Александра.сдали кровь и мочу. По моче все показатели в норме. Кровь: средний объём эритроцитов 71,7, эозинофилы 0,43, моноциты 9,8,моноциты # 0,93. Остальные показатели в норме. Можете дать рецензию?
Ответ:
Добрый день! Клинический анализ крови без значимых отклонений.
Задать вопрос и получить ответ можно здесь.
Детские программы медицинского наблюдения
Позаботьтесь о своем малыше! Выберите вашему ребёнку программу медицинского наблюдения!
Он только недавно появился в Вашей жизни? Или Вы уже давно вместе? Это не имеет значения. По настоящему важно, что вы любите друг друга! Позаботьтесь о Вашем малыше с первых дней его жизни. Пусть детские болезни не омрачают радости Вашего общения. Выберите для Вашего ребенка программу детского медицинского наблюдения!
Все должно происходить вовремя: наблюдение, лечение, прививки, анализы, массаж… Ребенок постоянно требует внимания, и маме с папой иногда просто не уследить за всеми мероприятиями и процедурами, которые необходимы малышу. Для каждого возраста и для каждого ребенка нужен индивидуальный подход и индивидуальный медицинский план. Поэтому мы создали Детские программы медицинского наблюдения для детей разных возрастов. Родители будут спокойны, а дети здоровы! Выберите для своего ребенка программу медицинского наблюдения и ни о чем больше не беспокойтесь! Узнайте подробности.
Уважаемые посетители! Если Вы не нашли ответа на свой вопрос, задайте его нашему доктору в разделе «Вопрос Врачу». На Ваши вопросы отвечают специалисты детской практики медицинского центра «Инпромед».
Источник
ЦИТОХИМИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ У ДЕТЕЙ, БОЛЬНЫХ АЦЕТОНЕМИЧЕСКОЙ РВОТОЙ, В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВОЗРАСТА
- Авторы
- Резюме
- Файлы
- Ключевые слова
- Литература
Демидов А.А.
1
Башкина О.А.
1
Демидов А.А.
1
1 ФГБОУ «Астраханский ГМУ» Минздрава России
Проводилось полное клинико-лабораторное обследования 50 детей с синдромом ацетонемической рвоты (АР) на базе отделения реанимации и интенсивной терапии № 2 ГУЗ «Областная клиническая больница им Н.Н. Силищевой» в возрасте от 1 года до 16 лет. На базе детской поликлиники МУЗ «ГБ № 5» были обследованы 58 здоровых детей, соответствующих по половому и возрастному составу основной группе. Эти дети составили контрольную группу. Все дети, как здоровые, так и больные АР, обследовались на активность цитохимических ферментов в нейтрофилах. В нейтрофилах крови определяли активность метаболических ферментов: сукцинатдегидрогеназы (СДГ), данный фермент отражает цикл Кребса; лактатдегидрогеназы (ЛДГ), отвечающей за анаэробный гликолиз; и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ), ответственной за активность пентозофосфатного шунта. В результате исследований было выяснено, что как количественная, так и качественная активность вышеуказанных ферментов имеет существенные отличия у здоровых детей и детей, больных АР. Также были выявлены отличия в данных группах по среднему цитохимическому показателю (СЦП) в зависимости от возраста детей. Отмечалось снижение активности СДГ, ЛДГ и Г-6-ФДГ у младшей и старшей возрастных групп, тогда как у детей средней возрастной группы этот показатель был повышен. Качественная активность метаболических ферментов различна у детей различных возрастных групп. В младшей и средней группе СЦП формируется за счет клеток низшей активности (степень «а»), в старшей преобладают клетки степени «в» (высшая степень активности).
ацетонемическая рвота
кетоацидоз
метаболические ферменты
нейтрофилы
1. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Мешкова Р.Я. Клиническая иммунология и аллергология с основами общей иммунологии. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. 640 с.
2. Маянская И.В., Шабунина Е.И., Ашкинази В.И. Лейкоцитмодулирующая активность сыворотки крови у детей с хроническими воспалительными заболеваниями органов пищеварения // Вопросы диагностики в педиатрии. 2009. Т. 1. № 1. С. 28-32.
3. Климова С.В. Клиническое значение активности митохондриальных ферментов лимфоцитов при воспалительных заболеваниях кишечника у детей: дис. … канд. мед. наук. Москва, 2010. 108 с.
4. Крылова Н.В. Клеточные и молекулярные механизмы противовирусной защиты при клещевом энцефалите: дис. … докт. биол. наук. Москва, 2014. 270 с.
5. Нарциссов Р.П. Цитохимия ферментов лейкоцитов в педиатрии: автореф. дис. … докт. мед. наук. Москва, 1970. 47 с.
6. Герасимов И.Г. Субпопуляции нейтрофилов периферической крови и возможности НСТ-теста в диагностике заболеваний новорожденных // Клиническая лабораторная диагностика. 2011. № 4. С. 42-44.
7. Алиева А.А., Галимзянов Х.М. Динамика цитохимической активности моноцитов крови у больных хроническим вирусным гепатитом с низкой степенью активности в зависимости от гендерных особенностей // Врач-аспирант. 2013. Т. 60. № 5(2). С. 293-298.
8. Долгушин И.И., Савочкина А.Ю. Секреторные функции нейтрофилов // Аллергология и иммунология. 2015. Т. 16. № 2. С. 209-212.
9. Алиева А.А. Ферментативная активность нейтрофилов крови у больных хроническим вирусным гепатитом С в зависимости от гендерных особенностей // Клиническая лабораторная диагностика. 2015. Т. 60. № 2. С. 33-36.
10. Самойленко В.А. Клинико-цитохимические особенности рецидивирующей герпетической инфекции у детей: автореф. дис. … канд. мед. наук. Ставрополь. 2009. 26 с.
Наш организм состоит из отдельных клеток. Изучая отдельную клетку, можно понять, какие именно изменения предстоят на уровне целостного организма [1]. Многие ученые считают, что отдельная клетка или целый клеточный пул работают как открытая система. Необязательно, что изменения в структуре или функции клетки обязательно вызовут определенные заболевания, но можно говорить о снижении сопротивляемости целого организма и его резервных возможностей [2].
В чем же конкретно может выразиться снижение резервных возможностей макроорганизма? Во-первых, снижение реактивности. То есть макроорганизм неспособен адекватно отреагировать на внешнюю опасность. Следствием этого может являться гибель клетки и развитие болезни [3].
Достаточно часто задолго до проявления клинической симптоматики можно выявить различные изменения на клеточном уровне. Кроме того, при многих заболеваниях изменения в клеточной структуре сохраняются еще некоторое время после исчезновения клинических симптомов [4].
На современном этапе своевременно выявить патологию функционирования клетки дает возможность цитохимический анализ крови [5].
Цитохимию можно назвать особым разделом цитологии. Данная наука для изучения строения клетки, ее функциональной активности применяет биохимический метод. Если ферментативная активность в биохимии выражается исключительно в средних цифровых данных, то в цитохимическом анализе подсчитывается как качественный, так и количественный показатели активности фермента. Количественно подсчитывается число гранул активного вещества. Каждой клетке присуще свое количество активного вещества, что позволяет выделять их по степени активности. Здоровым людям в основном присущи клетки с низкой ферментативной активностью [6].
Роль местного иммунитета давно известна и во многом разработана. Такие факторы защиты, как лизоцим, лактоферрин, НСТ-тест, иммуноглобулин А, а также дефенсин и клетки эпителия, и их роль при различных заболеваниях освещены во многих научных трудах [7].
Нейтрофильные гранулоциты долгое время оставались на «задворках» местного иммунитета. Тем не менее исследования последних лет показали, что нейтрофильные гранулоциты выполняют массу полезных функций в деле поддержания местного иммунитета. Так, например, непрерывно мигрируя в полость рта, нейтрофилы создают надежный барьер для попадания возбудителей и проявления их патогенных реакций [8].
Изменения степени клеточной активности, различные вариации преобладания высшей, средней и низшей степеней активности нейтрофилов не носят специфического характера и могут отмечаться при самых различных заболеваниях [9].
Неравномерность распределения активного вещества в нейтрофилах позволяет судить о течении заболевания, способствовать правильному прогнозу и оптимизации лечения, в частности, применяя иммуномодулирующие препараты, позволяющие сбалансировать местный иммунитет при патологических процессах в пораженных органах и тканях [10].
Таким образом, информативность и простота в постановке реакций и подсчета результатов указывает на цитохимический анализ как на один из оптимальных методов изучения клетки, что делает актуальной тему нашего исследования.
Цель исследования: выявить изменения метаболической активности нейтрофилов крови у детей, больных ацетонемической рвотой, в зависимости от возраста.
Материалы и методы исследования. Проводилось полное клинико-лабораторное исследование 50 пациентов с кетоацидозом при ацетонемической рвоте (АР), находившихся на лечении в отделении реанимации и интенсивной терапии № 2 ГУЗ «Областная детская клиническая больница им. H.H. Силищевой» г. Астрахани. Обследовались дети различных возрастных групп: в младшую группу вошли пациенты от 3 до 6 лет. Среднюю группу составили дети в возрасте от 6 до 12 лет. Старшая группа состояла из детей в возрасте от 12 до 16 лет. В контрольную группу вошли 57 здоровых детей в возрасте от 1 года до 16 лет. Все здоровые дети проходили обследование на базе детской поликлиники МУЗ «ГБ № 5».
Диагноз ацетонемической рвоты ставился на основании анамнеза, выраженных клинических проявлений, лабораторных обследований. Критерии диагностики оценивались согласно действующим временным отраслевым стандартам. По данным существующей международной классификации болезней 10 пересмотра (МКБ 10) АС шифровался как R.11- «тошнота и рвота».
Для цитохимических исследований в нейтрофилах крови детей определяли активность метаболических ферментов: сукцинатдегидрогеназы (СДГ), данный фермент отражает цикл Кребса, лактатдегидрогеназы (ЛДГ), отвечающей за анаэробный гликолиз, и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ), ответственной за активность пентозофосфатного шунта.
Все реакции проводились согласно методике Нарциссова Р.П. (1970). Мы несколько усовершенствовали методику, заменив рекомендуемый Р.П. Нарциссовым тетразолий фиолетовый на тетразолий нитро-синий 4-Nitroblautetrazoliumchlorid (Nitro BT) фирмы Serva (Германия).
Данный выбор был осуществлен по следующим причинам. Р.П. Нарциссов и его ученики применяли методику определения ферментативной активности только в лимфоцитах. Все, весьма редко встречающиеся в литературе, работы по исследованию ферментов в нейтрофилах выполнялись авторами с применениями нитро-ВТ.
В пробирку с 1 мл гепарина, разведенного в 0,9% растворе хлорида натрия (10 Ед в 1 мл), у каждого пациента забирали по 5 мл крови, из которой готовили мазки для подсчета нейтрофилов.
Оценку результатов цитохимических реакций проводили полуколичественным методом Kaplow.
В 100 нейтрофилах подсчитывали количество гранул выпавшего в осадок цитохимически активного вещества. В зависимости от количества гранул определяли качественную степень реакции клетки. Если гранулы цитохимически активного вещества занимали до 25% цитоплазмы, данная клетка классифицировалась как низшая степень активности и получала степень «а». Если гранулы цитохимически активного вещества занимали от 30 до 70% цитоплазмы, то активность клетки определялась как средняя и получала степень «б». К высшей степени активности относили клетки, цитоплазма которых была заполнена цитохимически активным веществом на 70-100%. Такие клетки определялись как степень «в». Клетки без гранул определялись как нулевая степень активности.
Определяли, сколько активных клеток среди 100 подсчитанных, а также степень активности каждой клетки. Следующим шагом был подсчет среднего цитохимического показателя (СЦП), который определяли по формуле: СЦП= а + 2б +3в.
Статистическую обработку данных проводили при помощи программы Statistica 12.0 (StatSoft, Inc., США). Для каждого показателя и групп наблюдений вычисляли медиану, 5 и 95 процентили. Поскольку в большинстве групп признаки имели отличное от нормального распределение, то для проверки статистических гипотез при сравнении числовых данных двух несвязанных групп использовали U-критерий Манна-Уитни. За критический уровень статистической значимости принимали 5% (р = 0,05).
Результаты исследования и их обсуждение. У детей, больных АР с кетоацидозом, в возрасте от 3 до 6 лет (младшая группа) метаболическая ферментативная активность в нейтрофилах значительно отличалась от таковой в норме у этой же возрастной группы (таблица 1). Так, активность СДГ в нейтрофилах при кетоацидозе составляла 11,11 ЕД [0,55; 10,55], что в 5,8 раза меньше таковой в норме.
Активность лактатдегидрогеназы в исследуемой группе также отличалась от аналогичных показателей здоровых детей. Так, если СЦП ЛДГ у здоровых детей составляла72,02 [3,60; 68,41] УЕ, то у детей, больных АР с кетоацидозом, данный показатель составлял 21,01 21,01 [1,05; 19,95] УЕ, что в 3,4 раза ниже нормы для данной группы.
Таблица 1
Активность метаболических ферментов в нейтрофилах детей, больных АР с кетоацидозом, 3-6 лет (младшая группа), усл. ед.
ФЕРМЕНТ | Время обследования | % реагир. клеток | Степени реакции | СЦП | ||
а | б | в | ||||
С Д Г | норма | 32,03 [1,60; 30,42 ] | 32 [1,60;30,40] | 64,14 [3,20; 60,93 ] | ||
кетоацидоз | 11,11 [0,55; 10,55] | 11,11 [0,55;10,55] | 11,11* [0,55; 10,55] | |||
Л Д Г | норма | 36,01 [1,80; 34,20] | 36,01 [1,80; 4,20] | 72,02 [3,60; 68,41] | ||
кетоацидоз | 21,01 [1,05; 19,95] | 21,01 [1,05;19,95] | 21,01* [1,05; 19,95] | |||
Г-6-ФДГ | норма | 43,01 [2,15; 40,85] | 43,01 [2,15; 40,85] | 86,14 [4,30; 81,83] | ||
кетоацидоз | 27,01 [1,35; 25,65] | 27,01 [1,35;25,65] | 27,01* [1,35; 25,65] | |||
*р<0,05 при сравнении с нормой.
Активность пентозофосфатного шунта у детей младшей возрастной группы также намного снижалась по сравнению с нормальными показателями. У здоровых детей СЦП активности Г-6-ФДГ составил 86,14 [4,30; 81,83] УЕ, тогда как у детей с кетоацидозом СЦП данного фермента равнялся 27,01 [1,35; 25,65] УЕ, что в 3,2 раза меньше такового в норме.
Мы изучили не только количественные, но и качественные изменения активности реагирующих клеток. Цитохимический анализ активности нейтрофилов в данной группе показал, что у больных АР с кетоацидозом количественное изменение активности всех трех изучаемых ферментов сопровождалось качественным изменением реагирующих клеток.
Так, основное количество клеток, формировавших средний цитохимический показатель активности исследуемых нами ферментов детей контрольной группы младшего возраста, было клетками средней степени активности. У детей, больных АР с кетоацидозом, СЦП активности ферментов был обусловлен клетками с низшей степенью активности. Ни у тех, ни у других клетки, реагирующие по степеням «б» и «в», не отмечались.
Результаты исследования ферментативной активности нейтрофилов крови детей с кетоацидозом в возрасте от 6 до 11 лет (средняя группа) также отличались от таковых у здоровых детей данного возраста (таблица 2).
Таблица 2
Активность метаболических ферментов в нейтрофилах детей, больных АР с кетоацидозом, 6-11 лет (средняя группа), усл. ед.
ФЕРМЕНТ | Время обследования | % реагир. клеток | Степени реакции | СЦП | ||
а | б | в | ||||
С Д Г | норма | 16,03 [0,80; 15,22] | 16,11 [0,80; 5,30] | 32,14 [1,60; 30,53] | ||
кетоацидоз | 45,71 [2,28; 43,42] | 45,71 [2,28;43,42] | 45,71* [2,28; 43,42] | |||
Л Д Г | норма | 24,01 [1,20; 22,80] | 23,15 [1,15; 1,99] | 46,30 [2,31; 43,98] | ||
кетоацидоз | 54,51 [2,72; 51,78] | 54,51 [2,72;51,78] | 54,51* [2,72; 51,78] | |||
Г-6-ФДГ | норма | 22,01 [1,10; 20,90] | 21,11 [1,05; 20,05] | 42,22 [2,11; 40,10] | ||
кетоацидоз | 64,12 [3,20; 60,91] | 64,12 [3,20; 0,91] | 64,12* [3,20; 60,91] | |||
*р<0,05 при сравнении с нормой.
У детей средней возрастной группы средний цитохимический показатель активности цикла Кребса в нейтрофилах составлял 45,71 [2,28; 43,42] УЕ, что в 1,7 раза выше, чем в контрольной группе детей данного возраста (СЦПN= 32,14 [1,60; 30,53] УЕ). Отмечалось повышение активности ЛДГ (СЦПЛДГ=54,51 [2,72; 51,78] УЕ) в 2,3 раза по сравнению с таковой у здоровых детей данной возрастной групп (СЦПN=46,30 [2,31; 43,98] УЕ). Наибольшее снижение ферментативной активности было отмечено при исследовании Г-6-ФДГ. У больных кетоацидозом активность данного фермента повышалась в 2,4 раза (СЦПГ-6-ФДГ=64,12 [3,20; 60,91] УЕ при норме 42,22 [2,11; 40,10] УЕ.
Результаты изучения качественной активности нейтрофилов крови детей с кетоацидозом средней группы значительно отличались от таковых у больных младшей группы. Если в младшей группе СЦП у больных кетоацидозом был сформирован клетками низшей степени активности, то у больных средней группы все реагирующие клетки классифицировались как степень «б», так же как и у здоровых детей. Однако у больных кетоацидозом в данной группе процент реагирующих клеток был значительно меньше.
У детей, больных АР с кетоацидозом, старшей возрастной группы (12-16 лет) ферментативная активность существенно отличалась от таковой у здоровых детей (таблица 3).
Таблица 3
Активность метаболических ферментов в нейтрофилах детей, больных АР с кетоацидозом, 12-16 лет (старшая группа), усл. ед.
ФЕРМЕНТ | Время обследования | % реагир. клеток | Степени реакции | СЦП | ||
а | б | в | ||||
С Д Г | норма | 18,02 [0,90;17,11] | 18,02 [0,90;17,11] | 18,02 [0,90; 17,11 | ||