Что такое серологический анализ крови у животных

Методика взятия проб крови. Кровь для серологических исследований берут из крупных кровеносных сосудов. Перед массовым взятием проб крови из лаборатории завозят необходимое количество стерильных пробирок с ватными пробками. Пробирок заказывают на 5–10 % больше количества животных. На все пробирки для закрепления бирок с надписями надевают резиновые кольца, которые настригают из резиновых трубок нужного диаметра. Бирки должны быть одинакового размера. Для описи проб крови готовят форму в двух экземплярах. Форма описи животных, от которых взята кровь, является единой и изменять ее нельзя. Готовят необходимые инструменты: острые ножницы Купера для выстригания волос, несколько штук в зависимости от размера стада, но не меньше двух; прямые ножницы; иглы для взятия крови. По возможности, игл должно быть столько, сколько животных в стаде, но не менее десяти. Все иглы должны быть острыми, без ржавчины. Перед работой их проверяют, промывают и обязательно стерилизуют кипячением. На тупой конец надевают резиновую трубку длиной 7–10 см.

Кроме указанных инструментов, нужно иметь стерилизатор электрический или простой, в зависимости от условий; шприц Жанэ или резиновую спринцовку (грушу) для промывания игл после взятия крови; посуду для воды (ведра, тазы); обогревательный прибор для стерилизатора – примус, газовую плиту и т. п., если нет электричества. Из медикаментов необходимы: спиртовой раствор йода, вата, бинты, 3 %-й раствор фенола, 70°-й этиловый. спирт (можно гидролизный). При взятии проб нужно следить, чтобы капли крови не попадали во внешнюю среду. Струю крови следует направлять по стенке пробирки, не допуская вспенивания. Пробирка должна быть теплой, что особенно важно зимой. Не следует набирать кровь каплями; такая кровь, как правило, гемолизируется и для исследования непригодна.

После взятия крови и закрепления этикетки пробирку ставят в водяную баню при температуре 30…35 °С на 30 мин. Особенно это важно в прохладное и холодное время года. При извлечении из водяной бани пробирки просматривают для определения характера свертывания крови и отделения сыворотки. Если сгусток плотно прилип к стенке пробирки, его отделяют от стекла, делая обводку тонкой стеклянной палочкой или проволокой. Затем пробирки с кровью помещают в прохладное место для отстаивания сыворотки. После каждой обводки проволоку обтирают ватой и прокаливают на спиртовке. Если в пробирке обнаружен гемолиз, то проба бракуется. Особенно быстро происходит гемолиз в крови свиней, поэтому пробирки с их кровью необходимо особенно тщательно оберегать от действия неблагоприятных факторов (высоких температур, встряхивания и т. п.).

На бирках лучше всего писать простым карандашом. Запись делают в виде простой дроби, в числителе которой помещают порядковый номер, а в знаменателе – кличку (бирку) животного.

В зависимости от вида животных, условий содержания, времени года, типа помещений, где содержатся животные, массовые взятия проб организуются по-разному.

Взятие проб крови у крупного рогатого скота. Кровь берут из яремной вены, желательно утром до кормления животных. Волосы на месте взятия крови выстригают, операционное поле протирают 3 %-м раствором фенола. У каждого животного кровь берут стерильной иглой.

Если на ферме есть раскол или станок, то лучше кровь брать там. Это более удобно, и после работы легче обезвредить место взятия крови. Однако при такой системе работы, даже при привязном содержании животных, требуются большие затраты труда. Поэтому в практике у животных, содержащихся на привязи, кровь чаще берут непосредственно в стойлах. Вену пережимают с помощью жгута. Чтобы капли крови не попадали на пол и в кормушку, резиновую трубку, надетую на конец иглы, перед введением иглы в вену опускают в пробирку.

Молодняк при беспривязном содержании, а также буйных животных при отсутствии станков и расколов для взятия крови фиксируют у столбов. Столб должен быть крепким и гладким. Иногда пользуются коновязями.

При фиксации вокруг столба исключается возможность травмы людей и животных, один человек свободно справляется с животным и, фиксируя, пережимает вену.

Для облегчения работы по взятию проб крови у крупного рогатого скота предложены различные приспособления, однако в производственной практике широкого применения они пока не нашли, так как имеют существенные недостатки. Пробы крови у крупного рогатого скота в комплексах берут в специальных расколах, заканчивающихся фиксационным станком.

Взятие проб крови у овец. Овец для взятия крови прогоняют через раскол, рядом с которым выкапывают траншею глубиной около 1 м (до пояса человека). Ветеринарный специалист находится в этой траншее, и к нему по очереди подводят овец. Яремная вена у овец легко пережимается пальцем. Иногда вместо траншеи делают специальный стол высотой 60–90 см. Овец через раскол загоняют на стол и фиксируют, ветеринарный врач стоит рядом и берет кровь.

Взятие проб крови у свиней. Для взятия проб крови у свиней используют разные методы. Фиксируют животных за верхнюю челюсть с помощью веревочной или кожаной петли. Кровь берут из сосудов уха или хвоста путем прокола или надреза сосуда. В практике чаще всего кровь берут из хвоста, причем в некоторых случаях вместо прокола сосуда отрубают кончик хвоста секачом (ножом для вскрытий) или рассекают его вдоль ножницами. В последнее время нашел применение новый способ взятия крови из хвоста. У фиксированного обычным способом животного левой рукой берут хвост и поворачивают его с таким расчетом, чтобы вентральная поверхность хвоста была обращена направо или кверху. На границе средней и нижней трети хвоста строго посередине остроконечным скальпелем делают прокол всех мягких тканей до позвонка. При этом рассекают кожу, подкожную клетчатку, мышцы и вентральную артерию поперек. После прокола тканей придают хвосту естественное положение и приподнимают нижнюю его треть для того, чтобы операционная рана была открыта. Кровь выделяется равномерной струей. После взятия нужного количества крови место прокола смазывают 5 %-м раствором йода и хвост опускают. В результате сокращения мышц хвоста происходит закрытие просвета прокола и кровотечение за 3–5 мин полностью прекращается.

Свиней при этом способе взятия крови можно фиксировать в расколе, в результате чего значительно повышается производительность труда.

Можно брать кровь и из орбитального венозного сплетения. Этот способ применяется при работе с лабораторными животными, молодняком и свиньями. Он прост, удобен, дает возможность получить нужное количество крови при минимальной затрате времени.

Глубокая лицевая вена в области периорбиты формирует венозный синус, который легко доступен для введения иглы. Для взятия крови можно использовать иглы № 2055, 2079, 2540, 2260, Ананьева или Каспера.

Зафиксированному животному иглу вводят в область наружного (латерального) угла глаза по направлению к противоположной ветви нижней челюсти (угол 40–45°) до упора в кость орбиты. Скос иглы должен быть направлен к орбите (в противоположную сторону от глазного яблока). Затем иглу слегка оттягивают обратно, и кровь обычно идет сразу. Если кровь не пошла, иглу слегка смещают влево или вправо.

Можно вводить иглу и со стороны медиального угла глаза. При этом укол иглы делают через третье веко. Направляют иглу к основанию противоположного уха (к носовой перегородке) сверху вниз. Иглу вводят до упора, затем слегка оттягивают.

После извлечения иглы иногда может появиться несколько капель крови, которые следует убрать тампоном.

При необходимости через сутки взятие крови можно повторить. При таком взятии крови почти никогда не бывает гемолиза. У животных никаких осложнений не наблюдается.

При необходимости получения большого количества крови (10 мл и больше) ее берут непосредственно из полои вены. При этом животное фиксируют за верхнюю челюсть обычным способом и применяют длинную иглу (10–15 см) и шприц. Иглу вводят в вену со стороны подгрудка.

Взятие проб крови у птиц. Кровь у птиц берут при массовых их обработках. Подробно этот вопрос рассматривается при описании болезней птиц.(???)

Взятие проб крови у лошадей. Кровь у лошадей берут из яремной вены. Обычно вену пережимают пальцем, а голову поднимают. При массовых исследованиях для пережатия вены можно пользоваться резиновым жгутом. При работе с табунными лошадьми обязательно строят расколы или станки, так как эти животные могут нанести людям и себе травмы.

Консервирование сыворотки крови. При невозможности сразу отправить кровь в лабораторию сыворотку сливают. В теплое время года сыворотку для лучшей сохранности необходимо законсервировать. Для этого можно использовать 5 %-й раствор фенола на изотоническом растворе натрия хлорида из расчета 1 мл раствора на 9 мл сыворотки (две капли на 1 мл). Можно консервировать сыворотку борной кислотой по 0,05–0,07 г на одну пробирку с пробой (на кончике скальпеля).

Серологические реакции и их роль в постановке диагноза.

Важнейшим достижением иммунологии является внедрение в широкую практику различных иммунологических методов для диагностики инфекционных болезней. Эти методы, получившие название реакций иммунитета, высокоспецифичны, однако следует иметь в виду, что в отдельных случаях могут наблюдаться и групповые неспецифические реакции. Большинство серологических исследований основано на комплементарном, строго специфическом взаимодействии антигена и антитела; они позволяют быстро обнаруживать антигены (в том числе и вирусные) и антитела к ним в жидкостях организма.

Используя серологические реакции, определяют с помощью известного антигена наличие специфических антител и, наоборот, с помощью известного антитела выявляют неизвестный антиген.

Серологические массовые исследования животных дают возможность определить степень распространения зараженности животных, выявить животных с латентной формой инфекции, предупредить ввод в благополучное стадо зараженных животных. Большая роль принадлежит серологическим исследованиям в системе оздоровительных мероприятий при многих инфекционных болезнях.

В последнее десятилетие резко возросла роль серологических исследований в постановке диагноза, особенно при вирусных болезнях. Появилось много новых методов серологических исследований, которые дают возможность получить результат очень быстро (через несколько минут, часов), исключая необходимость выделения возбудителя при высокой специфичности и чувствительности.

Серологический диагноз устанавливают на основании выявления и нарастания титра антител в парных сыворотках. Первый раз для постановки диагноза кровь берут в острой фазе болезни, второй раз через 10–20 дней. Четырехкратное и большее нарастание титра антител при одновременном исследовании парных сывороток считают достаточным для постановки серологического диагноза. Такое исследование особенно важно для эпизоотологии при расшифровке эпизоотических вспышек при многих болезнях (лептоспироз, вирусные болезни, особенно ОРЗ у крупного рогатого скота и свиней). При хронических инфекциях заключение делают по результатам однократного исследования.

Изучение классов 1д позволило установить закономерность их распределения в динамике инфекционного процесса. Установлено, что в первоначальной стадии болезни формируются связанные антитела. Обнаружение их дает возможность ставить диагноз на ранних стадиях болезни.

В эпизоотологии в настоящее время разработаны и находят все более широкое применение иммунологические реакции.

К числу отработанных и широко внедренных в производство относятся реакции: агглютинации (РА), связывания комплемента (РСК), длительного связывания комплемента (РДСК), реакция преципитации (РП), реакция флокуляции (РФ), реакция нейтрализации (РН). В настоящее время разработаны и постепенно внедряются в производство: иммуноферментный метод (ИФМ), метод флюоресцирующих антител (МФА), реакция агглютинации латекса (РАЛ), реакция гемагглютинации (РГА), реакция задержки гемадсорбции (РЗГад), радиоиммунологический анализ (РИА), реакция иммунодиффузии (РИД), радиоиммунологический метод (РИМ), реакция ингибиции нейраминидазной активности (РИНА), реакция иммунной сорбции антител, меченных ферментом (РИСАФ), реакция ингибиции элюции (РИЭ), реакция коагглютинации (РКОА), реакция непрямой гемагглютинации (РНГА), реакция обратной непрямой гемагглютинации (РОНГА), реакция радиального гемолиза (РРГ), реакция торможения агглютинации латекса (РТАЛ), реакция торможения гемагглютинации (РТГА), реакция торможения непрямой геммагглютинации (РТНГА).